UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICS

DEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045

REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO

Trabalho realizado pelo Acadêmico de Medicina Veterinária da UFBA José Tadeu Raynal, sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia

Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.

CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

• As reações de aglutinação decorrem da ligação entre o Ac e Ag particulado.

• É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac, que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes.

• Agregação visível de partículasEritrócitosBactériasFungosLátex

CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

o Fatores que influenciam a formação dos agregados

• Classe do anticorpo envolvido.• Concentração iônica e pH do meio.• Presença de macromoléculas, íons, enzimas e

conservantes.• Tempo e temperatura.• Padronização adequada da suspensão de micropartículas

ou células.• Concentração ótima de antígeno ou Ac a ser fixado nas

micropartículas ou células.• Estabilidade da ligação do Ag/Ac e acessibilidade dessa

molécula nas micropartículas ou células.

CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

o Vantagens:• Baixo custo.• Boa especificidade. • Leitura visual.• Facilidade de execução.

o Desvantagens:• Baixa sensibilidade. • Reprodutibilidade dos lotes de reagentes.• Acessibilidade molecular para interação Ag-Ac.• Estabilidade da ligação do Ag/Ac no suporte.

CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

TIPOS DE REAÇÃO

• Neste teste, o antígeno faz parte naturalmente da célula, e haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpo contra esses antígenos (antígeno é naturalmente insolúvel).

Anticorpo Antígeno Complexo precipitado

Ex: Identificação de antígenos eritrocitários na tipagem sanguínea, reação de Widal (febre tifóide).

AGLUTINAÇÃO DIRETA

• Na reação de aglutinação direta utilizam-se partículas antigênicas insolúveis em sua forma íntegra ou fragmentada. Hemácias, bactérias, fungos, protozoários podem ser aglutinados diretamente por anticorpo. Os testes para detectar anticorpos específicos são realizados empregando-se diluições em série do anticorpo, frente a uma quantidade constante de antígeno. Após um período de incubação, a aglutinação se completa e o resultado é geralmente expresso como o título do anti-soro, isto é, a máxima diluição em que ocorre a aglutinação.

Tipagem ABOTestes confirmatórios para sífilisAglutinação bacteriana

Presença de infecção Diferenciação de espécies

Salmonelose aviária Coriza infecciosa das galinhasMicoplasmoseBrucelose

AGLUTINAÇÃO DIRETA

• Tipagem ABO

AGLUTINAÇÃO DIRETA

• Esse método emprega a adsorção de anticorpos ou antígenos protéicos solúveis na superfície de micropartículas inertes (suporte).

• Para o teste, as hemácias e as partículas inertes (látex, leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por adsorção passiva, devida ao contato direto com os antígenos solúveis, por adsorção via agentes químicos, como ácido tânico, cloreto de cromo e por conjugação do antígeno, por meio de ligações químicas covalentes, fornecendo reagentes estáveis. Devido à grande diversidade de antígenos que podem se ligar às células ou partículas, a aplicação dos testes de aglutinação passiva é muito variada.

+

AGLUTINAÇÃO INDIRETA (PASSIVA)

• Teste de gravidez

+

Incubados e colocados em

placa

Particulas revestidas com hCG

Ac

Positivo não aglutina, pois os Ac se ligaram ao hCG da urina na incubação

UrinaSoro anti hCG

+

POSITIVO

hCG

+Soro anti hCG

NEGATIVO

Urina

+Incubados e

colocados em placa

Ac

Negativo aglutina

INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO

• Ac antiimunoglobulinas (Robert Coombs).

• Doença Hemolítica do Recém Nato – mãe produz IgG anti-Rh (DHRN)

• Não aglutinam os eritrócitos.• Direto: Ac ligados aos

eritrócitos fetais.• Indireto: Ac anti-Rh não

aglutinantes no soro materno. • Permite detectar

incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.

TESTE DE COOMBS

O efeito PRÓ-ZONA ocorredevido ao excesso de anticorposna amostra, que ocorre nossoros fortemente reagentes.Pode ocasionar resultadosFALSO-NEGATIVOS.Para evitar o efeito pró-zona,emprega-se soro diluído.

Ocorre FALSO-POSITIVOS

RELAÇÃO ANTÍGENO X ANTICORPO