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Anais da VIII Oficina de Neurociência

VIII Oficina de

Neurociências

Vale dos Vinhedos, Bento

Gonçalves, RS

18 e 19 de outubro de 2014

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Comissão Organizadora

Carla Dalmaz

Jorge Alberto Quillfeldt

Luiza D. Fitarelli

Mirna Bainy Leal

Patrícia Pelufo Silveira

Raquel D. Fitarelli

Tadeu Mello e Souza

Comitê científico para avaliação dos trabalhos

André Krumel Portella

Grasielle C. Kincheski

Lucas de Oliveira Alvares

Maria Elisa Calcagnotto

Mirna Bainy Leal

Rachel Krolow Santos Silva Bast

Simone Nardin Weis

Promoção

Programa de Pós-Graduação em Neurociências, UFRGS

Apoio

FAPERGS, IBRO, CAPES, PROPESQ-UFRGS

PROGRAMA

Sábado, 18 de Outubro de 2014

8h00 – Credenciamento

9h00 – Abertura

Prof .Dr. Jorge A Quillfeldt (PPG-Neurociências, UFRGS e

SBNeC) e Dr Alexandre Marafon Favero (CAPES)

9h10 – Conferência de Abertura

Apresentação: Profa.Dra. Lisiane Porciúncula (Dep.

Bioquímica. UFRGS)

Prof. Dr. Rodrigo Cunha, Caffeine and the adenosine

receptors fine-tune neuronal circuits and control

neurodegeneration. Universidade de Coimbra, Portugal.

10h00-12h00 – Mesa redonda I: Reconsolidação da memória

Coordenador: Prof. Dr. Jorge A Quillfeldt, Dep Biofísica e

PPG Neurociências, UFRGS, Brazil

Prof. Dr. Jorge A Quillfeldt. Os limites dos modelos

experimentais no estudo de funções cognitivas complexas: o

caso da reconsolidação. Dep Biofísica, UFRGS.

Prof. Dr. Victor A Molina, The influence of stress upon a fear

memory labilization/ reconsolidation. Universidad Nacional de

Cordoba, Argentina

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Profa. Dra. Maria Eugénia Pedreira, Reconsolidation: its role

in the destiny of a declarative memory in humans.

Universidad Nacional de Cordoba, Argentina

12h00-13h30 - Almoço

13h30-15h30 – Mesa redonda II: Estudando a consciência:

implicações clínicas e teóricas.

Coordenador: Prof. Dr. Tadeu Mello e Souza, Depto. de

Bioquímica, UFRGS

Prof. Dr. Dráulio B. de Araújo, Mudanças no sistema visual e

introspecção induzidas pela Ayahuasca, Instituto do Cérebro,

Universidade Federal do Rio Grande do Norte

Prof. Dr. Adenauer Girardi Casali, Medindo a consciência por

meio da complexidade espaço-temporal de sinais neurais,

Universidade de São Paulo

Prof Dr. Marino Muxfeldt Bianchin, Alterações da consciência

na neurologia, Dep Medicina Interna, UFRGS.

15h30-17h00 – Café com cartazes

17h00-19h00- Mesa redonda III: Programas de Pós-

Graduação no Brasil – Avaliação dos Programas de Pós-

Graduação em Neurociências

Coordenador: Prof. Dr. Jorge Quillfeldt,

Programa de Pós-Graduação em Neurociências, UFRGS.

Dr. Alexandre Marafon Favero, CAPES

Prof. Dr. Maria Elena Crespo,

Programa of Neurociências e Biologia Celular, Universidade

Federal do Pará

Prof. Dr. Rodrigo Bainy Leal,

Programa de Pós-Graduação em Neurociências,

Universidade Federal de Santa Catarina

Prof. Dr. Pablo Pandolfo


Universidade Federal Fluminense

Prof. Dr. Draulio B. de Araújo


Universidade Federal do Rio Grande do Norte.

Domingo, 19 de Outubro de 2014

8h30-10h30 – Mesa redonda IV: Neurobiologia do

desenvolvimento – efeitos a longo prazo de eventos precoces

Coordenadora: Profa. Dra. Patrícia Pelufo Silveira, Dep

Pediatria e Puericultura, UFRGS

Prof. Dr. Aldo B Lucion, Estresse precoce e o

desenvolvimento de comportamentos sociais.

Dep Fisiologia, UFRGS.

Dra. Rachel Krolow, Isolamento social durante a pré-

puberdade leva a alterações de longa duração na função

mitocondrial no encéfalo. Dep Bioquímica, UFRGS.

Prof. Dr. Pablo Pandolfo, Papel de receptores

adenosinérgicos em um modelo animal de TDAH, UFF.

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10h30 – Intervalo para o café

10h45-12h45 – Mesa redonda V: Fatores ambientais e

neurotoxicologia: aspectos relacionados à exposição a metais

Coordenadora: Profa. Dra. Mirna Bainy Leal, Dep.

Farmacologia e PPG Neurosciences, UFRGS.

Profa. Dra. Solange C Garcia. Metais em amostras biológicas

e associação com déficits cognitivos em crianças. Dep

Análises, Faculdade de Farmácia, UFRGS.

Profa. Dra. Maria Elena Crespo, Envenenamento por

mercúrio: Considerações críticas e mecanismos moleculares.

Instituto de Ciências Biológicas, UFPA.

Prof. Dr. Rodrigo B. Leal, Mecanismos moleculares

envolvidos na neurotoxicidade pelo manganês. Dep.

Bioquímica, UFSC.

13h – Sessão de Encerramento

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RESUMOS DOS TRABALHOS APRESENTADOS NA

FORMA DE PAINEIS

01. AUMENTO DA ATIVIDADE DA ECTO-5’-

NUCLEOTIDASE EM UM MODELO DE SÍNDROME

ALCOÓLICA EM LARVAS DE ZEBRAFISH ( Danio rerio )

Aline Haab Lutte**1, Katiucia Marques Capiotti**1, Nicole

Luize Garcia da Silva*1, Luiza Wilges Kist**2, Maurício Reis

Bogo2,3, Rosane Souza Da Silva1,3

1 Laboratório de Neuroquímica e Psicofarmacologia, 2

Laboratório de Biologia Genômica e Molecular, Departamento

de Biologia Celular e Molecular, Faculdade de Biociências,

PUCRS, Porto Alegre, RS, Brazil.3 Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia Translacional em

Medicina (INCT-TM), Porto Alegre, RS, Brazil.

Objetivos: O Zebrafish (Danio rerio) tem sido usado como

modelo para síndrome alcoólica fetal (SAF). O aumento dos

níveis de adenosina após a exposição ao etanol tem sido

relacionado com a inibição da recaptação por

transportadores. Nosso objetivo foi investigar os efeitos da

exposição aguda e crônica ao etanol nas vias enzimáticas

extracelulares de produção de adenosina, controladas pela

enzima ecto-5’-nucleotidase. Métodos: No tratamento agudo,

os embriões foram expostos ao etanol 2% no dia 1 pós-

fertilização (dpf) (de 5 a 24 horas pós-fertilização (hpf)) e no

tratamento crônico no dia 1 pós-fertilização (de 5 a 24 hpf)

acompanhados pela exposição ao etanol de forma

intermitente de 2 horas por dia até o 6º dpf. As larvas de 7 dpf

foram avaliadas quanto à taxa relativa de mortalidade, a taxa

de eclosão, parâmetros morfológicos, atividade enzimática e

expressão gênica da ecto-5’-nucleotidase. A exposição a um

inibidor da ecto-5’-nucleotidase, o AOPCP, foi realizada nas

concentrações de 5 a 500 nM através de injeções intra-ovo a

1 hpf. A taxa de sobrevivência foi estimada de acordo com o

método Kaplan–Méier. Morfologia, locomoção, expressão

gênica e atividade enzimática foram analisadas pelo Teste T

de Student quando comparado controle com animais tratados

com etanol e Anova de uma via quando comparado controle

e animais tratados com etanol e AOPCP. As análises post-

hoc foram realizadas pelo teste de Tukey quando necessário.

O nível de significância foi de p<0.05. Resultados: A taxa de

sobrevivência no tratamento agudo e crônico foi de 65.4% e

59% respectivamente em comparação aos controles de

85.2% e 80.6% [p<0.0001]. A exposição aguda e crônica

promoveu um aumento da atividade da ecto-5’-nucleotidase

(Agudo: 28%; Crônico: 58%, em relação ao controle)

[p<0.01], não alterou a expressão gênica da ecto-5’-

nucleotidase, causou prejuízo na locomoção [p<0.0001],

aumentou distância ocular média (Agudo: 20.9%; Crônico:

31.9% em relação ao controle) [p<0.0001], diminuiu a

circunferência ocular média (Agudo: 20.3%; Crônico: 22.1%

em relação ao controle) [p<0.0001] e diminuiu o comprimento

corporal médio (Agudo: 14.9%; Crônico: 17% em relação ao

controle) [p<0.0001]. Ciclopia foi encontrada em 5% dos

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animais, edema pericardial em 81% e má-formação axial em

36%. O tratamento com AOPCP nas concentrações de 50 e

200 nM foi capaz de reduzir as alterações morfológicas,

embora não o suficiente para retornar a situação controle

[p<0.0001]. Conclusão: Estes resultados mostram que os

defeitos morfológicos produzidos pelo etanol em Zebrafish,

são consistentes com os da SAF em humanos e podem ser

associados com o aumento dos níveis de adenosina com

contribuição do aumento da atividade da ecto-5’-nucleotidase

independente do controle da expressão gênica.

Procedimentos aprovados pelo Comitê de Ética para Uso de

Animais (CEUA/PUCRS) (número de registro 13/00347).

PROPESQ/PUCRS - CNPq.

02. EPIGENÉTICA DOS TRANSTORNOS DE ANSIEDADE

EM ADOLESCENTES: ANÁLISE LONGITUDINAL

Andressa Bortoluzzi**; Giovanni Abrahão Salum Júnior**;

Eduarda Dias da Rosa*; Mauro Antônio Alves Castro**; Gisele

Gus Manfro**

Introdução: Os transtornos de ansiedade (TA) geralmente se

manifestam na infância e adolescência e, não raro,

comprometem a vida adulta. Interações com o ambiente

possibilitam mudanças epigenéticas (incluindo a metilação)

que podem contribuir para o fenótipo desse transtorno

psiquiátrico. A neurobiologia dos TA carece de investigações

que considerem essas possíveis alterações químicas no DNA

que vão além da análise na sequência nucleotídica.

Objetivos: Investigar, longitudinalmente, as diferenças nos

padrões de metilação e as suas possíveis associações com

os TA em uma amostra comunitária de adolescentes.

Materiais e Métodos: O trabalho foi aprovado pelo Comitê

de Ética do HCPA (n° 12.0254). Em 2013, foram reava liados,

através de entrevistas psiquiátricas e extração de DNA

salivar, 47 adolescentes que foram previamente estudados

em 2008 Os participantes responderam à escala auto-

aplicativa SCARED (Screen for Children Anxiety Related

Emotional Disorder – Children rated) e realizaram entrevistas

semi-estruturadas para avaliação diagnóstica utilizando o K-

SADS-PL (Schedule for Affective Disorders and

Schizophrenia for School-Age Children-Present and Lifetime)

ou MINI (Mini International Neuropsychiatric Interview). A

extração de DNA salivar, em diferentes momentos,

possibilitou a comparação do metiloma entre os anos de

2008 e 2013. Para isso, a amostra foi organizada em 4

grupos, conforme o diagnóstico do TA e tempo de realização

da coleta (anos de 2008 ou 2013): “CONTROLE 2008-

CONTROLE 2013” (n = 14); “CONTROLE 2008-CASO 2013”

(n = 11); “CASO 2008-CASO 2013” (n =14) e “CASO 2008-

CONTROLE 2013” (n = 08). Para essa análise epigenética,

utilizamos o Infinium HumanMethylation 450 BeadChip da

Illumina. O pré-processamento dos dados brutos e o controle

de qualidade do experimento foram avaliados em R package.

Os probes diferentemente metilados, representando as

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regiões nos genes, serão validados, por pirosequenciamento,

para encaminharmos nossas análises futuras. Resultados

parciais: Encontramos diferenças de metilação em 692

genes de maneira longitudinal. Após correção de lote,

concentramo-nos em 4 genes (RALGDS, ANGPTL5,

PEX11G e MNS1) que se mostraram hipermetilados, no

grupo “caso 2008- caso 2013”. Os resultados são parciais

porque exigem validações que comprovem a direção da

metilação. Conclusão: Até o momento, nossos dados

sugerem que há diferença nos padrões de metilação em

indivíduos que persistiram com o diagnóstico de TA em 5

anos.

Apoio Financeiro: CNPq (483032/2007-7, 305524/2009-7,

476366/2009-7), CAPES, FIPE-HCPA (12-0254),

FAPERGS/PRONEX (10/0018-3) e FAPERGS/PRONEM

(11/2043-0).

03. EFEITO DE INIBIDORES DE PROTEÍNAS CINASES

SOBRE A RESPOSTA FEBRIL E A EXPRESSÃO DE

PROTEÍNAS HIPOTALÂMICAS EM RATOS

Lima de Oliveira, Marina F. a**, Gomes, Bruna R.B. a,b*,

Weis, Simone N. a, Mortari, Márcia R. c, Veiga-Souza,

Fabiane H. a,b e Sousa, Marcelo V. a

aLaboratório de Bioquímica e Química de Proteínas,

Departamento de Biologia Celular, Instituto de Biologia,

Universidade de Brasília, DF, Brasil.

bCurso de Farmácia, Faculdade de Ceilândia, Universidade

de Brasília, DF, Brasil.cLaboratório de Neurofarmacologia, Departamento de

Ciências Fisiológicas, Instituto de Biologia, Universidade de

Brasília, DF, Brasil.

Introdução: A febre é definida como o aumento da

temperatura corporal que ocorre como parte da resposta de

fase aguda desencadeada após a invasão de um organismo

por agentes estranhos. Um modelo amplamente empregado

para o estudo da febre em diferentes espécies envolve a

utilização do lipopolissacarídeo (LPS) de bactérias Gram-

negativas. Dados da literatura têm sugerido a participação de

vias de sinalização dependentes de proteína cinase A (PKA)

e proteína cinase C (PKC) no desenvolvimento da febre.

Objetivo: Avaliar o efeito de inibidores de PKA (H-89) e PKC

(celeritrina) sobre a resposta febril induzida por LPS.

Analisamos também alterações da expressão e atividade

destas cinases em resposta aos diferentes tratamentos, 6h

após a injeção do estímulo pirogênico. Metodologia: Foram

utilizados ratos Wistar machos (180 a 200g/peso corporal),

com aproximadamente 60 dias de vida (CEUA, UnBDoc nº

119943/2011). Os animais (n=6/grupo) foram submetidos ao

procedimento cirúrgico para implantação de transmissores de

temperatura na cavidade peritoneal e de cânulas no

ventrículo lateral direito. Após uma semana de recuperação,

os animais receberam injeções i.c.v. de diferentes doses dos

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inibidores celeritrina (1, 3 ou 10 µg/rato), H-89 (3, 10 ou 30

µg/rato) ou a mistura de ambos (3 e 10 µg/rato,

respectivamente), 30 min antes da injeção i.v. de LPS (5

µg/Kg). Os animais controle foram submetidos aos mesmos

procedimentos cirúrgicos e receberam injeções i.v. e i.c.v. de

solução salina (0,9%). Após 6h, os animais foram

eutanaziados para obtenção dos hipotálamos, que foram

posteriormente analisados para detecção da expressão das

proteínas PKCε e PKA (n=4/grupo) por western blotting. A

análise da atividade específica das cinases foi realizada por

meio de kits comerciais de ELISA para medir a fosforilação

do substrato pelas enzimas (n=3/grupo). Resultados: Os

resultados demonstraram que a celeritrina (3 µg/rato) e o H-

89 (10 µg/rato) reduziram a resposta febril induzida por LPS

em 36% e 33%, respectivamente. A administração conjunta

dos inibidores reduziu a resposta febril induzida por LPS;

entretanto, o efeito inibitório verificado (31%) não foi maior do

que o observado após a administração isolada de cada

droga. A expressão de PKCε, 6h após a injeção do estímulo

pirogênico, apresentou-se aumentada nos animais tratados

com H-89, sugerindo que, na ausência da ativação de PKA,

vias dependentes de PKCε sejam ativadas como um possível

mecanismo compensatório. Apesar do aumento da

expressão da PKCε, não foram encontradas mudanças

significativas nos padrões de atividade enzimática específica

de ambas proteínas. Conclusão: Os dados desse trabalho

sugerem que vias de sinalização dependentes de PKA e PKC

parecem estar envolvidas na resposta febril induzida por

LPS. Mais ensaios farmacológicos e enzimáticos, assim

como análises proteômicas de hipotálamos, estão em curso

para colaborar na elucidação dos mecanismos moleculares

envolvidos. Apoio Financeiro: CAPES e CNPq.

04. INVESTIGAÇÃO DO PAPEL DOS RECEPTORES µ

OPIÓIDES NA RESPOSTA HEDÔNICA A UMA SOLUÇÃO

DOCE EM ANIMAIS SUBMETIDOS A UM PROTOCOLO DE

RESTRIÇÃO DE CRESCIMENTO INTRAUTERINO (IUGR)

DP LAUREANO1**, R DALLE MOLLE2**, MB ALVES1**, TM

REIS3*, M DESAI4, MG ROSS4, PP SILVEIRA1, 2

1PPG Neurociências UFRGS, Porto Alegre, Brasil/2PPGSCA-

HCPA-FAMED UFRGS, Porto Alegre, Brasil/3Universidade

Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, Brasil

/4Dept of Ob/Gyn, Harbor-UCLA Med Ctr, Torrance, CA,

Estados Unidos

Introdução: Mais de 20 milhões de crianças nascem

anualmente com baixo peso no mundo (10-15%). Fatores

ambientais, principalmente relacionados à nutrição, atuam

nas fases iniciais da vida programando o risco para doenças

crônicas na idade adulta. A IUGR pode mudar

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persistentemente a preferência do indivíduo à dieta palatável.

Possivelmente, a resposta alterada dos animais submetidos à

IUGR pode levar ao aumento do consumo de alimento

palatável, contribuindo assim para o desenvolvimento de

obesidade na vida adulta. Objetivo: Investigar possíveis

alterações na resposta hedônica à sacarose na idade adulta

em animais submetidos à IUGR. Métodos: A partir do dia 10

de gestação até o nascimento, ratas Sprague-Dawley de

aproximadamente 70 dias de vida receberam dieta ad libitum

(AdLib), ou dieta com restrição calórica de 50% (FR). No

nascimento, os filhotes foram submetidos à adoção cruzada,

gerando os grupos AdLib/AdLib e FR/AdLib

(gestação/lactação). Aos 90 dias de vida foi avaliada a

resposta hedônica, os animais Adlib/Adlib (n= 32) e FR/Adlib

(n=35) receberam 200 µL de sacarose (1 M) ou água

destilada via oral. Respostas hedônicas faciais dentro de 60

segundos foram filmadas e analisadas por um observador

cego. Foi realizado western blotting da porção fosforilada dos

receptores µ opióides (Ser375) no accumbens nos grupos

Adlib/Adlib (machos n= 6; fêmeas n= 7) e FR/Adlib (machos

n= 8; fêmeas n= 7). Projeto aprovado pelo CEP/HCPA: nº

120353. Resultados: Analisando a frequência das respostas

hedônicas no período de zero a 8 segundos, houve efeito da

solução (Adlib/Adlib sacarose: 28,43+3,05 e água: 6,5+2,19;

FR/Adlib sacarose: 23,84+2,73 e água: 6,43+2,01, p>0,001).

Dos 8 aos 20 segundos também houve efeito da solução

(Adlib/Adlib sacarose: 23,43+ 2,96 e água: 11,18+ 2,54;

FR/Adlib sacarose: 24,52+ 2,85 e água: 18,07+ 2,00,

p=0,001) e efeito marginal do grupo (p=0,076). Dos 20 aos 40

segundos não houve efeitos significativos (grupo p= 0,132 e

solução p= 0,791). Do período de 40 a 60 segundos houve

interação grupo e solução (Adlib/Adlib sacarose: 4,43+ 1,27 e

água: 8,43+ 1,64; FR/Adlib sacarose: 7,15+1,07 e água:

6,16+ 1,27, p=0,026), Equações de Estimativas

Generalizadas (GEE). Não houve diferenças significativas na

porção fosforilada dos receptores µ opióides (Ser375) no

núcleo accumbens dos grupos Adlib/Adlib (machos:

100,00+10,60; fêmeas: 100,06+7,65) e FR/Adlib (machos

88,28+8,95; fêmeas 98,82+4,54), (grupo p=0,437 e sexo

p=0,524), ANOVA de 2 vias. Conclusões: A fosforilação

diferencial dos µ opióides no sítio Ser375 parece não estar

envolvida em alterações na resposta hedônica em animais

submetidos ao protocolo de IUGR na idade adulta, no entanto

não podemos excluir a existência de diferenças no número

de receptores ou na sua atividade intrínseca. Mais estudos

são necessários para a melhor compreensão acerca desse

comportamento. (Apoio financeiro: CAPES, FIPE-HCPA).

05. AVALIAÇÃO DO COMPORTAMENTO DO TIPO

IMPULSIVO EM RATOS MACHOS ADULTOS

SUBMETIDOS AO ISOLAMENTO SOCIAL NO PERÍODO

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PRÉ-PUBERE COM ACESSO A UMA DIETA

HIPERLIPÍDICA CRÔNICA

Danusa Mar Arcego**; Camilla Lazzaretti***, Carine

Lampert**; Rachel Krolow**; Ana Paula Toniazzo**; Carolina

Berlitz*; Carla Dalmaz**.

* Universidade Federal do Rio Grande do Sul/UFRGS, Porto

Alegre-RS.

** Departamento de Bioquímica, ICBS, UFRGS, Porto Alegre-

RS.

*** Programa de Pós-graduação em Neurociências, ICBS,

UFRGS, Porto Alegre-RS.

Objetivo: Fatores ambientais, como o estresse em fases de

desenvolvimento e o tipo de dieta, podem afetar o

desenvolvimento cognitivo e emocional via alterações

neuroquímicas, desencadeando mudanças comportamentais,

doenças e distúrbios que podem perdurar até a idade adulta.

Além disso, sabe-se que a exposição ao estresse pode levar

a um aumento na ingestão de alimentos palatáveis. A partir

disso, o objetivo do nosso trabalho foi investigar os efeitos da

exposição a um estressor ao longo do desenvolvimento

(período pré-pubere) associado à exposição crônica a uma

dieta rica em gordura sobre alterações comportamentais

relacionadas à impulsividade em ratos machos na idade

adulta. Métodos: Foram utilizados 35 ratos Wistar machos

de 21 dias, que foram divididos em 2 grupos: controle (C) e

estressados (E) (isolamento social entre os dias 21-28 pós-

natal). Esses grupos foram subdivididos de acordo com a

dieta: um grupo recebeu somente ração (CR e ER) e os

demais animais receberam ração + dieta hiperlipídica (CD e

ED). As dietas foram oferecidas cronicamente, do desmame

até a idade adulta. Após os 60 dias, avaliou-se

comportamento do tipo impulsivo pela tarefa da tolerância ao

atraso da recompensa (N=8-10/grupo). Durante a tarefa os

animais permaneceram sob uma dieta restrita (15-20g/dia de

alimento/animal) durante todo o comportamento. A tarefa foi

dividida em quatro fases diferentes: habituação, pré-treino,

treino e teste. Os animais foram treinados de forma a

poderem optar entre uma recompensa pequena mas imediata

ou uma recompensa maior porém acessível somente com um

tempo de espera. As recompensas eram colocadas em

diferentes braços em um labirinto em forma de T. A análise

estatística foi feita por ANOVA de medidas repetidas para

pré-treino e treino e ANOVA duas vias para o teste (sendo

fatores estresse e dieta). Este projeto foi aprovado pelo

Comitê de Ética da nossa Universidade (nº 25488).

Resultados: Na tarefa da tolerância ao atraso da

recompensa, os animais que receberam a dieta hiperlipídica

tiveram um menor número de escolhas do lado com maior

recompensa com o passar do tempo (interação dieta x

tempo, P<0,05) durante o pré-treino. Sendo que nesta etapa

não havia tempo de espera para a recompensa (média dos

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primeiros 4 dias de pré-treino: CR: 63,75 +29,26; CD:

55,50+20,59; ER: 60,00+20,89; ED: 45,00+24,34). Durante o

treino e teste não houve diferença significativa entre os

grupos (P>0,05). Conclusão: A partir dos resultados,

observou-se que o isolamento social durante o período pré-

pubere e a dieta hiperlipídica crônica não causaram

alterações no comportamento do tipo impulsivo em ratos

machos adultos. Porém a dieta hiperlipídica parece afetar a

seleção do lado com maior recompensa quando não há

intervalo, sugerindo prejuízo na memória ou na motivação

para tal recompensa.

Apoio financeiro: CNPq.

06. ESTABELECIMENTO DE MODELO DE

NEURODEGENERAÇÃO ATRAVÉS DO KNOCK-DOWN

DO GENE PSEN1

Raphaela Soares Fonseca*, Natália Eltz Silva*, Laura

Roesler Nery**, Monica Ryff MoreiraVianna**

Faculdade de Biociências, Pontifícia Universidade Católica do

Rio Grande do Sul, Porto Alegre.

Objetivos. Diferentes animais modelos estão sendo

adaptados para estudos que possam manter uma

complexidade de sistemas que permita a extrapolação das

pesquisas realizadas com outros animais e humanos. O uso

de embriões e larvas de zebrafish (Danio rerio) em técnicas

de microinjeção de DNA, RNA e outras proteínas, permite o

estabelecimento de recursos de pesquisa inovadores e

vantajosos. A técnica de injeção de oligonucleotídeos

morfolinos (MOs) representa uma estratégia competitiva para

o estudo da relevância de proteínas especificas através de

seu knock-down (KD) temporário. Neste trabalho

estabelecemos a técnica de injeção de MO para o

estabelecimento de modelos para o estudo de doenças

neurodegenerativas através do KD da expressão do gene

psen1, uma vez que sua mutação é a causa mais comum da

forma familiar da Doença de Alzheimer (DA) e o ganho ou

perda de função do produto do gene psen1 ainda é uma

questão controversa. Métodos. O número do protocolo da

seguinte pesquisa, já submetida e aprovada pelo CEUA, é

0107/12. Os embriões utilizados no experimento foram

obtidos através do acasalamento de matrizes wild-type de

nosso biotério. Após a coleta dos embriões, estes foram

destinados à injeção de 5 nl com 12,5 ng de MO contra o

produto do gene psen1 (MO-PSEN) ou do controle MO

scramble (SCRAM). Dado o ineditismo da técnica foi incluído

um grupo controle não injetado (CTL). Após a injeção, os

embriões foram mantidos em placas de 6 poços em uma

estufa (BOD) e tiveram sua sobrevivência e embriotoxicidade

monitoradas diariamente até os 5 dias pós-fertilização

quando foram realizados testes comportamentais para

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avaliação de locomoção e cognição. A análise das taxas de

sobrevivência foi feita através do Estimador de Kaplan-Meier

e os parâmetros comportamentais foram avaliados por

ANOVA e post-hoc Tukey.. Resultados. Quando a

sobrevivência dos animais foi avaliada e observada diferença

significativa entre os grupos injetados (SCRAM e MO-PSEN)

e CTL (Log-rank (Mantel-Cox) test, p = < 0.0001). Com

relação ao comportamento exploratório, os grupos não

apresentaram alteração significativa nos parâmetros de

distância percorrida, rotação, velocidade média ou tempo

móvel. Já o comportamento aversivo das larvas demonstrou

uma variação na tarefa cognitiva dos animais injetados com

MO-PSEN (ANOVA de uma via, p < 0.0001) comparado ao

grupo CTL e SCRAM, o que sugere uma possível relação

com a perda progressiva da capacidade cognitiva observada

em pacientes com DA. Conclusões. A proposta destes

experimentos foi a validação da técnica de microinjeção de

morfolinos, a qual é uma importante ferramenta para o KD de

genes em embriões de zebrafish, possibilitando o

estabelecimento de modelos para estudos de doenças

neurodegenerativas, como a DA. Quanto aos resultados

relacionados a sobrevivência, é possível que a mortalidade

dos animais injetados possa ser atribuída ao procedimento

da injeção. Porém, a diferença significativa na tarefa aversiva

do grupo MO-PSEN indica o potencial uso da técnica para

estudos dos aspectos celulares e comportamentais da DA.

Apoio Financeiro : CAPES, CNPq, FAPERGS.

07. EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE GENES

RELACIONADOS COM A DOENÇA DE ALZHEIMER NO

CEREBELO DE PACIENTES AUTISTAS: UMA PROPOSTA

DE CONECTOMA CEREBRAL

Moara R. Mingori1*, Fares Zeidán-Chuliá1**, Ben-Hur Neves

de Oliveira1*, Alla B. Salmina2**, Manuel F. Casanova3**,

Daniel P. Gelain1**, Mami Noda3**, Alexei Verkhratsky4**, José

Cláudio F. Moreira1**.1Centro de Estudos em Estresse Oxidativo, Departamento de

Bioquímica, Instituto de Ciências Básicas da Saúde,

Universidade Federal do Rio Grande do Sul-Porto

Alegre. 2Departamento de Bioquímica, Química Médica,

Farmacêutica e Toxicológica, Universidade de Medicina do

Estado do Krasnoyarsk, Krasnoyarsk, Rússia. 3Laboratório

de Pato-fisiologia, Escola de Graduação em Ciências

Farmacêuticas, Universidade de Kyushu, Fukuoka, Japão.4Universidade de Manchester, Manchester, UK.

A desordem do aspectro autista refere-se à heterogeneidade

de sintomas e deficiências que se manifestam no início do

desenvolvimento. A ocorrência é caracterizada por prejuízos

na comunicação e interação social. Doença de Alzheimer

(AD) é uma doença neurodegenerativa que leva ao

comprometimento da memória. A doença é caracterizada

pelo acúmulo extracelular do peptídio β-amiloide (Aβ) em

placas senis. A perpetuação do ciclo envolvendo o

25


metabolismo de Aβ entre amiloidogênese e neuroinflamação

leva a morte neuronal. O produto neuroprotetor no

processamento (APPα) tem sido encontrado em níveis

elevados em autismo. Objetivo: Avaliar a expressão

diferencial de genes relacionados à doença de Alzheimer

pertencente à NOTCH, WNT, AD e vias de apoptose em

cerebelo de pacientes autistas. Materiais e métodos:

Desenvolvimento de modelos de rede de genes/proteínas:

NOTCH, WNT, AD, e modelos de apoptose de sub-rede

foram extraídas do banco de dados: KEGG Pathway

database, o estabelecimento das interações genes/proteína

foi obtido com o recurso do banco de dados: Search Tool for

the Retrieval of Interacting Genes/Proteins STRING version

9.05 (http://string-db.org/). A ligação entre os diferentes Nós

(genes/proteínas) fornecidos pelo banco de dados STRING

Database, foram salvos em arquivos de dados Medusa

interface e visualizados como sub-redes (NOTCH, WNT, AD,

or apoptosis). Para as análises de expressão diferencial,

dados normalizados de amostras cerebelares de pacientes

foram confrontadas com amostras de pacientes controles e

analizadas por limma package from R e controle de falsos

positivos (“False Discovery Rate”, FDR) para a avaliação

estatística dos dados de microarray (P-valor <0.05=

significativos). O diagrama de Venn foi construído usando o

Software R http://www.r-project.org). Resultados: Dentre os

resultados foi realizada uma análise de microarray focado em

genes pertencentes à cascata de sinalização NOTCH e WNT,

bem como genes relacionados com as vias de AD e apoptose

em amostras de cerebelo de indivíduos autistas, fornecendo

provas da relevância patológica dessas vias também em

autismo. Foi demonstrado que a 31% (116 de 374) dos genes

pertencentes a estas vias exibiu alterações significativas na

expressão, com genes relacionados com a mitocôndria

regulados negativamente. Também descobrimos a regulação

positiva de GRIN1, a subunidade formadora de canal de

receptores NMDA de glutamato, e MAP3K1, activador

conhecido das vias anti-apoptóticas JNK e ERK. Conclusão:

Com base nesses resultados, propomos um modelo de

ativação de ERK mediada pelo receptor glutamato NMDA da

atividade da α-secretase e adaptação mitocondrial a

apoptose que pode explicar o supercrescimento cerebral e

ruptura da plasticidade sináptica e conectoma no autismo.

Suporte financeiro: FAPERGS, CAPES, CNPq, Propesq-

UFRGS.

08. A VARIAÇÃO GENÉTICA NO GENE DO RECEPTOR

DE ADENOSINA A 2A (RS2298383) ESTÁ ASSOCIADA

COM ELEVADOS NÍVEIS DE TNF-� E DEPRESSÃO

MAIOR EM MULHERES

Fernanda Neutzling Kaufmann**1, Clarissa Bastos**1, Marta

Gazal1, Jean Oses1, Luciano Souza1, Ricardo Silva1, Diogo

Lara2, Manuella Kaster3, Gabriele Ghisleni1

27


1 Laboratório de Neurociências Clínicas, Programa de Pós

Graduação em saúde e Comportamento Universidade

Católica de Pelotas, RS, Brasil2 Departamento de Ciências Fisiológicas, Pontifícia

Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre,

RS, Brasil3 Departamento de Bioquímica, Universidade Federal de

Santa Catarina, Florianópolis, SC, Brasil

Introdução: O transtorno depressivo maior (TDM) tem sido

uma preocupação crescente para a saúde pública, estimando

se tornar a segunda maior causa de incapacidade em 2020.

Recentemente, polimorfismos em genes envolvidos no

metabolismo da adenosina e em seus receptores foram

associados com a vulnerabilidade a transtornos psiquiátricos,

incluindo a depressão. Objetivo: Identificar uma possível

associação entre o polimorfismo rs2298383 no gene do

receptor de adenosina A2A (C/T), os níveis periféricos das

citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1β e IL-6) e o TDM em

uma população do sul do Brasil. Métodos: Este trabalho é

parte de um estudo de base populacional, incluindo 750

indivíduos (18 a 24 anos) residentes em Pelotas-RS e foi

aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da Universidade

Católica de Pelotas sob o protocolo número 2010/15. O

diagnóstico de TDM foi feito com o Mini International

Neuropsychiatric Interview 5.0, o DNA foi extraído de

leucócitos periféricos e a genotipagem foi realizada utilizando

PCR em Tempo Real. As citocinas séricas foram avaliadas

por ELISA. Resultados: Dos indivíduos estudados, 256

apresentaram TDM, sendo 54% mulheres, 78,9% brancos e

8,3% faziam uso de medicação psiquiátrica. Não foram

detectadas diferenças de acordo com diagnóstico,

distribuição genotípica (x²=0,211), níveis de TNF-α (p=0,278),

IL-1β (p=0,14) e IL-6 (p=0,45). No entanto, após

estratificação por sexo, observamos um fator de proteção

entre os portadores do alelo T (C/T heterozigotos e T/T

homozigotos) e o TDM em mulheres (p<0,05). Identificamos

uma tendência ao aumento dos níveis de TNF-α em mulheres

com TDM comparados ao controle (p=0,08), esta tendência

não foi observada com as interleucinas IL-1β e IL-6. O estudo

revelou ainda diferenças significativas entre a interação do

genótipo e diagnóstico clínico de TDM nos níveis de TNF-α

(p<0,05). A análise post-hoc indicou que em mulheres

saudáveis os níveis de TNF-α foram semelhantes de acordo

com o genótipo, já em mulheres com TDM os níveis de TNF-

α foram maiores nos portadores do genótipo CC

(241,32±50,15 pg/mL), quando comparados aos portadores

do alelo T (91,95±30,52 pg/ml). Conclusão: Concluímos que

existe associação entre o alelo T do SNP ADORA2A,

menores níveis de TNF-α e diminuição do risco de TDM em

mulheres. Apoio Financeiro: Fundação de Amparo à

Pesquisa do Rio Grande do Sul (Fapergs) e Conselho

29


Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

(CNPQ).

09. A EXPLORAÇÃO POR BIOLOGIA DE SISTEMAS DA

INTERAÇÃO GENE-AMBIENTE NA DESORDEM AUTISTA

APONTA AO CÁLCIO COMO MOLÉCULA CENTRAL E

RHO GTPASES COMO CRÍTICAS NO SEU

DESENVOLVIMENTO

Sabrina Roncato1*, Fares Zeidán-Chuliá1**, José Luiz

Rybarczyk-Filho1**, Alla B. Salmina2**, Ben-Hur Neves de

Oliveira1*, Mami Noda3**, José Cláudio F. Moreira1**

1Centro de Estudos em Estresse Oxidativo, Departamento de

Bioquímica, Instituto de Ciências Básicas da Saúde,

Universidade Federal do Rio Grande do Sul-Porto

Alegre. 2Departamento de Bioquímica, Química Médica,

Farmacêutica e Toxicológica, Universidade de Medicina do

Estado do Krasnoyarsk, Krasnoyarsk, Rússia. 3Laboratório

de Pato-fisiologia, Escola de Graduação em Ciências

Farmacêuticas, Universidade de Kyushu, Fukuoka, Japão.

Autismo é uma desordem neural do desenvolvimento

caracterizado pela falha na interação social e comunicação

acompanhada de padrões de comportamento restritos e

interesses estereotipados. Considera-se uma desordem

altamente heterogênea com diversas causas potenciais e

fatores dando lugar a uma gama variável de sintomatologia.

A sua incidência parece estar incrementando-se com o

passar do tempo e os mecanismos patológicos associados

ao mesmo são ainda virtualmente desconhecidos. Objetivo:

Após revisão sistemática da literatura e uma análise baseada

na ferramenta de biologia de sistemas, nosso objetivo era

examinar a natureza multifatorial do autismo em sua ampla

gama de severidade, determinar quais são os processos

biológicos predominantes, componentes celulares, e funções

moleculares que caracterizam a desordem, e finalmente,

elucidar as contribuições (genética e/ou meio-ambiental) in

silico. Materiais e métodos: Bases de dados como STRING

9.0, STITCH 3.0, DAVID v6.7, Gene Ontology, KEGG

Compound, e KEGG Drug foram utilizadas. Resultados:

Com esse objetivo, nos conseguimos gerar um modelo

integrativo de rede de interação gene-ambiente (modelo

GENVI) com 122 proteína/genes e 191 fatores meio-

ambientais nos quais o cálcio demonstrou ser o nó mais

central e relevante entre outros genes/fatores nunca descritos

até agora nesse contexto do autismo, como gene que

codifica para a Rho GTPase RAC1. Em total, 16 processos

biológicos diferentes encontravam-se afetados por genes

integrando o modelo, majoritariamente sendo a comunicação

intra e intercelular rota da via WNT, transmissão do impulso

nervoso, diferenciação celular, desenvolvimento neuronal,

neurogênese, comportamento, e locomoção. Alem disso,

análise da expressão diferencial dos genes em biopsias

cerebelares de pacientes autistas mediante uso do pacote de

dados limma do R e FDR (“False Discovery Rate”)

31


demonstraram que 15 genes da família das Rho GTPases

estavam diferencialmente expressos. Conclusão: O nosso

modelo salienta a importância critica do cálcio e as Rho

GTPases nos eventos neuropatológicos associados ao

autismo. Acreditamos também que a nossa metodologia

(combinação de revisão sistemática da literatura com biologia

de sistemas e análises de microarranjo) oferece uma opção

atrativa para o auxilio de pesquisadores na área de

neuropsiquiatria para encontrar genes, fatores e interações

gene-ambiente que poderão ser confirmadas mais tarde com

ferramentas adicionais de pesquisa básica.

Suporte financeiro: FAPERGS, CAPES, CNPq, Propesq-

UFRGS.

10. INJEÇÃO INTRAVENTRICULAR DE AMILOIDE- β (Aβ1-

42) EM EMBRIÕES DE ZEBRAFISH COMPROMETE A

COGNIÇÃO E AUMENTA A FOSFORILAÇÃO DE TAU:

EFEITOS REVERTIDOS PELO LÍTIO.

¹Laura R. Nery**, ¹Natália Eltz *, ¹Cristiana Hackm ann*,

¹Raphaela Fonseca*, ²Stefani Altenhofen**, ³Heydi G uerra**,

³Vanessa Freitas**, ²Carla Bonan e ¹Monica Vianna

1ZebLab & Laboratório de Biologia e Desenvolvimento do

Sistema Nervoso, Faculdade de Biociências, Pontifícia

Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre,

RS, Brasil

2ZebLab & Laboratório de Neuroquímica e Psicofarmacologia,

Faculdade de Biociências, Pontifícia Universidade Católica do

Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brasil.3Departamento de Biologia Celular e do Desenvolvimento,

Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo,

SP, Brasil

A Doença de Alzheimer (DA) é a desordem

neurodegenerativa mais prevalente, caracterizada por

declínio cognitivo, acúmulo de Amiloide-β (Aβ) e fosforilação

aberrante de tau. Evidências recentes sugerem que as

formas solúveis de Aβ se ligam a receptores de membrana

modulando a atividade da GSK3-β, que por sua vez fosforila

a proteína tau associada à microtúbulos, estabelecendo uma

ligação entre os principais marcadores celulares da DA.

Objetivo: Investigar os efeitos da injeção intraventricular de

Aβ1-42 em zebrafish (Danio rerio) sobre a capacidade

cognitiva e parâmetros celulares e moleculares associados à

DA e o potencial neuroprotetor do LiCl, inibidor da GSK-3β.

Todos os experimentos foram aprovados pela comissão de

ética da universidade (CEUA-PUCRS protocolo: 0107/12).

Métodos: Embriões com 24hpf, obtidos de acasalamentos de

matrizes mantidas em sistemas automatizados de aquários

no ZebLab, foram tratados com água do sistema (H2O) ou

100mM LiCl em água, a partir de 1hpf até 5dpf. Ao

completarem 24hpf os animais foram anestesiados, tiveram o

córion removido e foram injetados no ventrículo com 5-10nL

33


de uma solução 10µΜ Aβ1-42 (diluído em veículo PBS; 1%

DMSO; 0,5% PhenolRed) ou somente com a solução de

veículo. Também foi realizado um controle não injetado.

Efeitos embriotóxicos foram monitorados diariamente. Aos

5dpf os animais foram submetidos a avaliação

comportamental exploratória e cognitiva e as amostras de

tecido nervoso isoladas para quantificação protéica dos

níveis de tau fosforilada e marcadores associados à morte

celular por Western Blot e qPCR. Resultados : Não foram

observados efeitos da injeção de Aβ ou dos tratamentos na

curva de sobrevivência de Kaplan-Meier e nos parâmetros

exploratórios analisados. A injeção de Aβ reduziu a resposta

aversiva em relação ao não injetado (H2O-Aβ 71,3%)

(p<0.05, Bonferroni post-hoc) enquanto o tratamento prévio

com LiCl facilitou a resposta cognitiva em todos os grupos em

relação a seus respectivos controles (LiCl-Ø 80%; LiCl-veh

77,9%; LiCl-Aβ 66,7%) (ANOVA de duas vias, p<0.0001;

F(1,166)=40.77; N=10 em triplicata). A injeção de Aβ também

ocasionou um aumento na fosforilação de tau, o que foi

revertido pelo tratamento com LiCl, que novamente teve

efeitos positivos nos demais grupos (H2O-Ø 5,3u; H2O-veh

6,5u; H2O-Aβ 7,9u; LiCl-Ø 3,3u; LiCl-veh 3,1u; LiCl-Aβ 3u)

(p<0.0001, F(1,42)=296.02; N=3 em triplicata). Níveis protéicos

e de RNAm de p53, bax e bcl-2 foram avaliados mas não

foram observados efeitos da injeção com Aβ ou do

tratamento. Estes resultados corroboram com achados em

outros modelos e sugerem que a injeção de Aβ acarreta em

alterações típicas de estágios iniciais da DA, além de ser

crucial para a complementação dos estudos de mecanismos

e screening de fármacos.

Apoio financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS.

11. O EXERCÍCIO FÍSICO VOLUNTÁRIO REDUZ A

NEUROINFLAMAÇÃO INDUZIDA POR LPS NO CÓRTEX

PRÉ-FRONTAL DE CAMUNDONGOS

Anelise Bavaresco**, Débora da Luz Scheffer**, Lucila de

Bortoli da Silva**, Priscila Ferreira**, Rodrigo Augusto da

Silva**, Renata Tiscoski Nesi**, Alexandra Latini, Aderbal

Silva Aguiar Junior

Laboratório de Bioenergética e Estresse Oxidativo, Centro de

Ciências Biológicas, Universidade Federal de Santa Catarina

– Florianópolis, Santa Catarina.

Introdução: A neuroinflamação é um processo patológico

que ocorre em diversas doenças do sistema nervoso central

(SNC). A neuroinflamação é mediada por diversas células,

como as células mononucleares, responsáveis pela secreção

das citocinas pró-inflamatórias interleucinas IL-1ß e IL-6. A

neuroinflamação também aumenta produção de Espécies

Reativas de Oxigênio (EROs) que contribuem para o

aumento do estresse oxidativo/nitrosativo. Neste trabalho,

nosso objetivo foi investigar os efeitos do exercício físico

voluntário em um modelo de neuroinflamação induzido pela

35


administração sistêmica de LPS em camundongos. Métodos:

O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de

Animais (CEUA) da Universidade Federal de Santa Catarina

(CEUA N° PP00760). Camundongos Swiss machos adultos

(3-5 meses), com peso variando entre 40 e 60 gramas, foram

submetidos a exercício físico voluntário (roda de correr)

durante seis semanas. No final do protocolo, a

neuroinflamação foi induzida pela administração de LPS

(0,33 mg/kg, i.p). O grupo controle (CTR) recebeu solução

salina. Após 4 horas da administração foi realizada a

eutanásia para extração das estruturas cerebrais e do

músculo quadríceps para análise das citocinas IL-1ß e IL-6 e

da atividade do complexo I mitocondrial. As médias foram

comparadas através da ANOVA de duas vias, com Bonferroni

post hoc test. O P<0,05 foi considerado significativo.

Resultados: No córtex pré-frontal (CPF), a administração de

LPS induziu um aumento significativo das concentrações de

IL-1ß e IL-6 respectivamente e o exercício voluntário foi

capaz de atenuar esta resposta (IL-1ß: F(1,8) =8.969;

sedentário: 0,150; exercício: 0,066 e IL-6: F(1,9) =13.02;

sedentário: 0,010; exercício 0,004). Por outro lado, no

estriado, o LPS também aumentou a produção destas

mesmas citocinas (IL-1ß e IL-6), no entanto o exercício não

foi capaz de reestabelecer esta resposta (IL-1ß: F(1,9)=6,651;

sedentário: 0,123; exercício: 0,090 e IL-6: F(1,10)=6.639;

Sedentário: 0,006; Exercício: 0,005). A atividade do complexo

I da cadeia respiratória foi avaliada em amostras de

quadríceps. O LPS apresentou uma tendência de diminuição,

enquanto o exercício aumentou discretamente a atividade

deste complexo em comparação ao grupo CTR, no entanto,

estes dados não apresentaram diferença estatística, apenas

uma forte tendência. Desta forma, nossos dados demonstram

que o exercício voluntário não atenuou a neuroinflamação no

estriado ou a atividade do complexo I, no entanto, atenuou

significativamente a neuroinflamação no CPF. Conclusão:

Nossos resultados demonstram que o exercício atenua a

resposta neuroinflamatória induzida pelo LPS no córtex pré-

frontal de camundongos.

Apoio: CAPES

12. RETIRADA DE ÁLCOOL PRODUZ ANALGESIA EM

RATOS REVERTIDA PELO TRATAMENTO COM

PASSIFLORA INCARNATA

Rebeca Vargas Antunes Schunck1**, Isabel Cristina

Macedo3**, Gabriela Laste3**, Andressa de Souza3**, Marina

Tuerxlink Costa Valle1**, Janaína Lucas de Oliveira

Salomón2*, Jonnsin Kuo3**, Eliane Dallegrave4, Iraci Lucena

da Silva Torres3, Mirna Bainy Leal1,2

1 Programa de Pós Graduação em Neurociências, UFRGS,

Porto Alegre, RS

37


2 Departamento de Farmacologia, UFRGS, Porto Alegre, RS3 Laboratório de Farmacologia da Dor e

Neuromodulação,UFRGS, Porto Alegre, RS4 Departamento de Farmacociências, UFCSPA, Porto Alegre,

RS

Objetivos: As intersecções entre dependência química e dor

são frequentes. Diversos fatores modulam tanto a resposta

nociceptiva quanto os aspectos relacionados ao alcoolismo,

entre esses fatores podemos citar BDNF e IL-10. Para tratar

o alcoolismo e prevenir recaídas, a Passiflora incarnata L. é

uma planta que possui atividade terapêutica em potencial. O

presente estudo visa avaliar a resposta nociceptiva na fase

da abstinência ao álcool em um modelo de administração

intermitente de álcool, assim como investigar o potencial

antiaditivo do extrato de Passiflora incarnata L.(EPI) na

resposta nociceptiva e no conteúdo de BDNF e IL-10 no

córtex pré-frontal em ratos submetidos a um modelo de

síndrome de abstinência ao álcool. Métodos: Aprovação do

CEUA/UFRGS nº 23651. Ratos Wistar (n=8-15/grupo),

machos (90 dias, peso entre 300-350g) foram divididos em 5

grupos (CONTROLE, ÁGUA+ÁGUA, ÁLCOOL+ÁGUA,

ÁGUA+EPI e ÁLCOOL+EPI) e administrados por gavagem

oral. Grupo CONTROLE não recebeu tratamento. As

administrações de Álcool 20% (4g/kg) ou Água foram

realizadas por gavagem em ciclo intermitente de

administração com três períodos de cinco dias de

administração e dois intervalos de dois dias entre eles. Após

este período, os animais foram tratados com extrato de

Passiflora incarnata (EPI) 200 mg/kg ou Água (via gavagem)

durante 9 dias. Os ensaios nociceptivos foram realizados no

20º e 29o dia (teste de tail-flick [Ugo Bazile]) e no 20º e 30o

dia respectivamente, (teste da placa quente [Insight

Equipamentos Ltda]). No 31o dia os animais foram

anestesiados, eutanasiados e o córtex pré-frontal dissecado

para as análises do conteúdo de BDNF e IL-10 (Imunoensaio

de ELISA). Os resultados foram analisados por ANOVA/SNK

e expressos em média±EP. Resultados: O extrato de EPI

demonstrou reverter a analgesia (P<0,001) observada pela

avaliação do teste da placa quente (ÁGUA+ÁGUA

[4,97s±0,30], ÁGUA+ÁLCOOL [7,30s±0,66], ÁGUA+EPI

[4,56s±0,45], ÁLCOOL+EPI [5,07s±0,41]), mas não

apresentou efeito no teste do tail-flick (ÁGUA+ÁGUA

[4,62s±0,19], ÁGUA+ÁLCOOL [5,77s±0,29], ÁGUA+EPI

[4,71s±0,22], ÁLCOOL+EPI [5,64s±0,33]). Esta reversão é

benéfica, pois demonstrou que a resposta nociceptiva

retornou aos níveis basais encontrados em ratos controle.

Observou-se um aumento (P<0,05) nos níveis de BDNF

(pg/ug) (ÁGUA+ÁGUA [0,27±0,03], ÁGUA+ÁLCOOL

[0,77±0,17], ÁGUA+EPI [0,16±0,03], ÁLCOOL+EPI

[0,75±0,07]) e IL-10 (pg/mg) (ÁGUA+ÁGUA

[1849,12±506,43], ÁGUA+ÁLCOOL [5069,56±1044,94],

ÁGUA+EPI [2886,90±509,39], ÁLCOOL+EPI

[4951,84±447,56]) no córtex pré-frontal dos animais

39


abstinentes ao álcool. O aumento nos níveis de BDNF e IL-10

não foi revertido pelo EPI. Conclusão: A retirada de álcool

aumenta o limiar nociceptivo e decresce a resposta

nociceptiva, levando a analgesia. Este efeito pode estar

relacionado ao aumento nos níveis centrais de BDNF e IL-10.

O tratamento com extrato de Passiflora incarnata pode

reverter a analgesia observada após a retirada de álcool, mas

este efeito não tem correlação com níveis de BDNF e IL-10.

Mais estudos são necessários, pois é preciso elucidar os

mecanismos envolvidos na ação da Passiflora incarnata em

reverter a síndrome de abstinência ao álcool.

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES e PROPESQ/UFRGS.

13. ASTRÓCITOS ADULTOS ENVELHECIDOS IN VITRO

APRESENTAM FUNÇÕES CELULARES DEFICITÁRIAS

Camila Leite Santos*, Débora Guerini Souza**, Bruna

Bellaver**, Diogo Onofre Gomes Souza, André Quincozes-

Santos

Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre -

RS

Objetivo: O Sistema Nervoso Central (SNC) de mamíferos

apresenta dois principais grupos celulares: neurônios e

células gliais. Astrócitos são células gliais versáteis, e estão

envolvidos em um grande número de funções que garantem

a manutenção das condições fisiológicas do cérebro. Estas

funções são suscetíveis a mudanças durante a vida e, à

medida que a célula vai envelhecendo, algumas propriedades

podem se tornar deficitárias. Estudos prévios do nosso grupo

demonstraram que culturas de astrócitos de ratos Wistar

adultos e envelhecidos são uma nova ferramenta de estudo

sobre a funcionalidade astrocitária em condições normais e

patológicas, portanto, neste trabalho, nós avaliamos se as

células sofrem alterações em propriedades metabólicas de

maneira idade-dependente. Métodos: Para tanto, utilizamos

cultura de astrócitos de ratos Wistar machos de 1 (n=6), 90

(n=6) e 180 dias (n=6) ressaltando que este projeto foi

aprovado pelo CEUA/UFRGS nº 24419. Para a elaboração

da cultura, os cérebros foram cuidadosamente dissecados e

o córtex foi dissociado mecânica e enzimaticamente. As

células foram cultivadas em incubadora a 37 °C (5% CO2,

95% ar), com DMEM/F12 (10% SFB) nas duas primeiras

semanas e DMEM/F12 (20% SFB) até atingirem a

confluência. Realizamos captação de 2-Deoxy-D-[1,2-3H]Glicose em condições basal, inibida por citocalasina e

estimulada com 500 µM glutamato por 20 min a 37 °C na

confluência e 30 dias após a confluência. Também,

verificamos a atividade da enzima glutamina sintetase (GS) e

o conteúdo de glutationa (GSH). Resultados: Comparadas

com culturas de astrócitos advindas de neonatos, as células

adultas (90 e 180 dias) apresentam menor captação de

glicose, menor atividade da GS e menor conteúdo de GSH na

confluência (p < 0.05). Trinta dias após a confluência, esse

41


perfil se manteve para GS e GSH. Na captação de glicose, as

culturas advindas de animais adultos apresentaram alta taxa

de morte celular na presença de 500 µM de glutamato,

devido à fragilidade celular frente à citotoxicidade deste

aminoácido. Conclusão: Considerando que o cérebro adulto

apresenta diferenças significativas em relação ao cérebro

neonato, nosso trabalho apresenta um importante progresso

no estudo de características celulares no tecido

maduro/diferenciado. Assim, astrócitos adultos cultivados in

vitro apresentam características mais similares ao cérebro

adulto in vivo, e nossos resultados contribuem para a

elucidação de propriedades celulares nestas condições.

Apoio financeiro: Capes, CNPq e FAURGS

14. RECONSOLIDAÇÃO DE MEMÓRIA AVERSIVA EM

RATOS MACHOS E FÊMEAS SUBMETIDOS A

INTERVENÇÕES NO PERÍODO NEONATAL

Natividade de Sá Couto-Pereira**, Grasielle Kincheski,

Camilla Lazzaretti**, Diego Carrilho da Silva*, Raquel

Breunig*, Diego Bertolini*, Jorge Alberto Quillfeldt, Vitor

Molina, Carla Dalmaz

Departamento de Bioquímica, Instituto de Ciências Básicas

da Saúde

Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre -

RS

Objetivos: Estudar os efeitos de experiências precoces na

vida na capacidade de labilizar-reconsolidar memórias

aversivas. Métodos: Vinte ninhadas de ratos Wistar foram

divididas em 3 grupos e submetidas aos seguintes

procedimentos, do dia pós-natal (PND) 1 a 10: grupo Intacto

– sem nenhuma perturbação; grupo Manipulado – os filhotes

foram retirados do ninho e gentilmente colocados numa

incubadora, a 32 ºC por 10 minutos, uma vez por dia; grupo

Separado – mesmo procedimento do grupo Manipulado, com

permanência na incubadora por 3 horas. Na idade adulta, os

ratos machos e fêmeas submetidos às intervenções

neonatais descritas foram avaliados no paradigma de medo

condicionado ao contexto. O treino consistiu em 3 minutos de

habituação, 3 choques de 0,8 mA, 30 segundos de intervalo

entre eles, 1 minuto de permanência no aparato. 24 horas

após o treino, foi realizada uma sessão de reativação de 5

minutos, no aparato do treino (E), seguida de administração

i.p. de solução salina ou midazolam 3 mg/kg. Um grupo

controle foi submetido aos mesmos procedimentos, no

entanto, a sessão foi conduzida em um aparato alternativo

(C), de forma a controlar a especificidade do efeito da droga

administrada. No terceiro dia, todos os animais foram re-

expostos ao aparato E, por 5 minutos. Em todas as sessões,

o tempo total de freezing foi contabilizado em segundos e

utilizado como um indicador de memória. Este projeto de

número 23844 foi aprovado pela CEUA/UFRGS em

13/11/2012. Resultados: Na sessão de reativação no

43


aparato E, os machos manipulados apresentaram tempo de

freezing inferior aos intactos (125,4±12,4 s vs. 178,6±12,2 s,

respetivamente). Não foram encontradas diferenças

significativas entre as fêmeas. No aparato C, o tempo de

freezing foi significativamente menor do que no aparato E em

todos os grupos, no entanto os machos separados

congelaram por mais tempo do que os restantes grupos

(91,8±12,8 s vs. 53,9±12,9 s – intactos; 30,6±6,5 s –

manipulados). Na sessão teste, o tempo de freezing dos

machos intactos que receberam midazolam após a

reativação foi significativamente menor do que os machos

que receberam salina (184,0±18,1 s vs. 84,2±12,4 s), no

entanto não foram encontradas diferenças entre os

tratamentos nos machos manipulados nem separados. As

fêmeas intactas e manipuladas também não tiveram o seu

comportamento alterado pela droga na sessão de teste, no

entanto, as fêmeas separadas que receberam midazolam

tiveram um aumento no tempo de congelamento em relação

às que receberam salina (98,0±21,8 s vs. 59,8±18,2 s).

Conclusões: O protocolo utilizado neste estudo induziu com

sucesso labilização e reconsolidação de memória aversiva

em machos intactos, mas não parece ter tido a mesma

eficácia em fêmeas. As intervenções na fase neonatal

parecem diminuir a capacidade do animal labilizar uma

memória aversiva, principalmente a separação materna; além

disso, este estresse precoce também parece favorecer uma

generalização da resposta de medo. Os machos manipulados

apresentam um comportamento de enfrentamento de

situações aversivas distinto dos outros animais deste estudo,

que necessita ser melhor investigado.

15. RE-EXPOSITION IN THE PRESENCE OF

DISTRACTOR STIMULUS DISRUPT FEAR MEMORY

CONSOLIDATION AND RECONSOLIDATION

Ana Paula Crestani**, Flávia Zacouteguy Boos**, Josué

Haubrich**, Rodrigo Ordoñez Sierra**, Fabiana Santana**,

Lucas de Oliveira Alvares and Jorge Alberto Quillfeldt.

Psychobiology and Neurocomputation Lab - Neurosciences

Graduate Program, UFRGS, Porto Alegre, Brazil.

Background. A new experience becomes a stable memory

trace through a consolidation. However, memory reactivation

can initiate a new transient labile phase, named

reconsolidation, through which it can be enhanced, impaired

or updated. Thus, reconsolidation provides an opportunity to

change unwanted fear memories. Furthermore, among the

psychotherapies that aim to the removal or reduction of

unwanted fear memories are those that employ distracting

stimuli during patient´s retrieval of traumatic events, such as

EMDR. Aims. Evaluate whether a distractor stimulus

presented in labile state of memory is able to disrupt the fear

memory consolidation and reconsolidation in a long-lasting

form. Also, research the molecular mechanisms underlie

memory destabilization and if the destabilization is a

45


mandatory factor to distractor stimulus be effective in impair

the fear memory. Methods. In this study, we used adult male

Wistar rats (270-400g) trained in the contextual fear

conditioning in order to reproduce a traumatic memory.

Animals per group:7-12. Since data was normally distributed

experiments were analyzed with independent Student’s t test

or two-way ANOVA followed by a Tukey post hoc when

applicable. Significance was set at P<0.05. These

experiments was approved by the UFRGS Ethics Committee

nº23326. Results. Our results demonstrated that animals

reactivated in the presence of distractor stimulus exhibited

long-lasting fear attenuation when compared with control

ones (test: t(21)=2.090;P=0.049; retest:t(21)=2.879;P=0.009).

We also found that the disruption of original memory trace

depends on the destabilization-reconsolidation process: when

animals were exposed to a novel context, memory

destabilization did not occur and distractor stimulus failed to

disrupt aversive memory (t(13)=0.472;P=0.645). Moreover,

drugs that prevent memory destabilization, such as the L-

VGCC and GluN2B antagonists, administered before the re-

exposition, prevent fear memory disruption caused by

distractor stimulus. In more details to nimodipine experiment:

two-way ANOVA showed a main effect of the distractor

(F(1,29)=7.245,P=0.012), drug (VEH and NIMO) (F(1,29)

=12.174, P=0.002) and interaction (distr X drug):

F(1,29)=4.299,P=0.047;Tukey’s post-hoc demonstrated that

vehicle+distractor stimulus expressed lower freezing levels if

compared with all other groups (P ≤0.05). In the same way,

ifenprodil experiment: two-way ANOVA demonstrated a main

effect of distractor (F(1,46)=6.130,P=0.017) and interaction (dist

X drug) (F(1,46)=5.418,P=0.025);Tukey’s post-hoc indicated

that ifenprodil infusion prevents the distractor effect

(P=0,915). Additionally, distractor stimulus is also effective in

disrupting memory consolidation if it is performed shortly after

training (t(13) =3.075;P <0.009). Conclusions. Our results

showed that it was possible to interfere with a previously

acquired fear memory inhibiting memory (de)stabilization

process through distractor stimulus, a finding that may have

relevant clinical implications for improvement the treatment of

emotional disorders.

Financial support : CAPES, CNPq, PROPESQ and FINEP

16. PROTEÇÃO DO GANGLIOSÍDIO GM1 FRENTE À

TOXICIDADE DO PEPTÍDEO Aβ EM NEUROBLASTOMA

HUMANO (SH-SY5Y) ENVOLVE A INTERAÇÃO ENTRE A β

E GM1 EXÓGENOS E A PREVENÇÃO DA LIGAÇÃO DO

PEPTÍDEO ÀS MEMBRANAS NEURAIS

Ana Luíza Fragoso*, Fernando Kreutz**, Marina

Michelsen*, Taíse Goulart*, Letícia Pettenuzzo,

Christianne Salbego e Vera T. Trindade – Dep.

Bioquímica, ICBS, UFRGS

A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem

neurodegenerativa que afeta irreversivelmente a memória e

47


outras funções cognitivas. Sua patogenia envolve a produção

(amiloidogênese) do peptídeo β-amilóide (Aβ) e sua

agregação na forma de oligômeros ou fibrilas. A interação do

Aβ com as membranas neurais parece ser essencial ao

processo de agregação do peptídeo, ao desencadeamento

de sua toxicidade e ao ciclo patológico estabelecido entre a

deposição do Aβ e o estímulo, em cascata, da

amiloidogênese. Assim, drogas capazes de impedir a

interação do Aβ com as membranas neurais teriam um

potencial efeito neuroprotetor e uma capacidade de alterar a

evolução da DA.

Objetivos: Considerando a literatura, que aponta o

gangliosídio GM1 como o constituinte das membranas

neurais responsável pela interação com o Aβ e dados prévios

do grupo, que indicam efeito neuroprotetor do GM1 em

modelos in vivo e in vitro de DA, os objetivos deste trabalho

foram: avaliar o efeito neuroprotetor do GM1 exogenamente

administrado à cultura de células expostas ao Aβ e investigar

se a potencial proteção seria mediada pela capacidade do

gangliosídio de interagir com o Aβ, impedindo, assim, sua

ligação às membranas neurais.

Métodos: Células de neuroblastoma humano (SH-SY5Y)

foram semeadas em placas de 96 poços (3x104 células/poço)

e incubadas por 24h com diferentes concentrações do Aβ1-

42 na forma fibrilada (0,25; 0,5; 1 e 2µM). A morte neural foi

avaliada por marcação com iodeto de propídio (necrose) e

com corante Höscht (apoptose). Definida a concentração de

Aβ indutora de morte celular, foi avaliado o efeito

neuroprotetor de diferentes concentrações de GM1 (10, 20 e

30µM) quando co-administradas com o peptídeo. Para avaliar

o efeito da interação AβGM1 na neuroproteção observada,

estes foram co-incubados (AβGM1i) in vitro (37ºC) por 1h. O

sedimento (Aβfibrilado), obtido após centrifugação, foi lavado

com tampão para retirada do GM1 que não interagiu com o

Aβ, recentrifugado, suspenso no meio de cultura e exposto às

células por 24h. Para controle do processo, o Aβ foi

submetido aos mesmos procedimentos de centrifugação,

porém sem a etapa de incubação com GM1 (Aβi). A

toxicidade do AβGM1i foi comparada aos grupos controle

(sem Aβ nem GM1), Aβ (células incubadas com a

concentração tóxica do peptídeo) e Aβi. A fim de avaliar a

interação Aβ-GM1, o sedimento AβGM1i foi suspenso em

tampão contendo SDS e submetido a dot-blot para

imunodetecção de GM1.

Resultados: GM1, nas concentrações testadas, foi capaz de

prevenir a morte neural (apoptose e necrose) observada em

células expostas ao Aβ (0,5µM). Da mesma forma, o Aβ

previamente incubado (in vitro) com GM1 (0,5 e 10µM,

respectivamente) apresentou menor toxicidade frente aos

neuroblastomas. O dot-blot confirmou a presença de GM1 no

sedimento AβGM1i, o que indica a interação in vitro deste

com o peptídeo.

Conclusões: GM1, exogenamente administrado, promove

neuroproteção frente ao dano causado pelo Aβ através de

49


sua capacidade de interagir e neutralizar o peptídeo,

possivelmente impedindo sua interação com as membranas

neurais. (PIBIC- CNPq/UFRGS, PROBIC-

FAPERGS/UFRGS, CNPq)

17. PREJUÍZOS NA MEMÓRIA DE RECONHECIMENTO

SOCIAL E EM COMPORTAMENTOS EXPLORATÓRIOS

EM ANIMAIS SUBMETIDOS AO PROCEDIMENTO DE

HIPÓXIA-ISQUEMIA ENCEFÁLICA.

Juliana Jaboinski**, Luis Alexandre Montecinos de Almeida**,

Roberto Decker*, Andreo Rysdyk*, Lisiane Bizarro**.

Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Instituto de

Psicologia. Porto Alegre, RS, Brasil.

O procedimento experimental de hipóxia-isquemia encefálica

(HI) provoca dano em estruturas importantes para a memória

e o comportamento social (e.g. hipocampo, córtex, estruturas

límbicas associativas), (Amer Jour of Perinatol. 3:103-120,

2000), esse procedimento permite o estudo da relação entre

a hipoperfusão em áreas cerebrais e os prejuízos na

memória e no comportamento. Entretanto, poucos estudos

compararam o desempenho em memória para objetos e

memória social em animais com HI. Objetivo: observar se há

alterações na memória e no comportamento de animais

submetidos ao procedimento de hipóxia-isquemia encefálica.

Métodos: Foram utilizados 22 ratos Wistar (projeto aprovado

pelo CEUA Nº 24030), sendo 11 designados ao grupo hipóxia

(HI) e 11 ao grupo controle (CTR). No 7º dia pós-natal (DPN),

foi realizado o procedimento de HI pela oclusão permanente

da artéria carótida, seguido pela hipóxia sistêmica. No

momento dos experimentos a idade dos animais variou de

um mês e quinze dias (45º DPN) até um mês e vinte dias (52º

DPN). O peso médio variou de 160 g (no 45º DPN) a 200 g

(no 52º DPN). Entre o 45º e o 52º DPN, foram realizados

testes que avaliaram a memória de reconhecimento social e

de objetos. Na tarefa de memória de reconhecimento social,

cada animal HI e CTR foi exposto a 2 animais desconhecidos

por 5 minutos. Em seguida ele foi isolado por 30 minutos,

depois exposto por 10 minutos a um animal conhecido e

outro desconhecido. Registrou-se a frequência de emissão

de comportamentos sociais (cheirar, cheirar áreas genitais do

intruso, segui-lo e/ou exercer dominância ou agressão). Em

seguida os animais foram avaliados na tarefa de

reconhecimento de objetos. Cada rato foi exposto a dois

objetos iguais, transcorrido 5 minutos o animal foi retirado e

isolado por 1 hora para então ser recolocado no campo

aberto contendo 1 objeto familiar e 1 objeto desconhecido.

Registrou-se o tempo que o animal passou investigando cada

objeto. O desempenho dos dois grupos foi comparado

utilizando-se teste t. Resultados: Os animais do grupo HI

não apresentaram, um índice de reconhecimento de objetos

menor t(20)=-1,3660, p=0,187. Entretanto, na tarefa de

51


reconhecimento social os animais do grupo HI apresentaram

um índice de reconhecimento social (M=0,49, DP=0,087)

menor que os do grupo controle (M=0,58, DP=0,049), t(20)= -

3,147, p=0,005. O tipo de comportamento social que

apresenta diferença significativa entre os grupos foi o de

cheirar áreas genitais, F(1)=4,548, p=0,046. Além disso, os

animais do grupo HI exploraram menos os objetos que os do

grupo CTR (t(20) = -3.027, p = 0.007). Conclusões: Em

ratos, o procedimento de HI parece não ter produzido

prejuízos de memória para objetos, mas dificultou a memória

de reconhecimento social. Além disso, o baixo índice de

exploração dos objetos sugere um comportamento

exploratório diminuído. O comportamento de exploração do

ambiente e cheirar a genitália no contato social são

importantes no desenvolvimento social de ratos jovens e este

resultado pode indicar um atraso do desenvolvimento deste

tipo de comportamento no grupo HI.

Contato : [email protected]

Fomento: CNPq

18. NIVEIS SÉRICOS DE INTERLEUCINA-10

ASSOCIADOS COM OS SINTOMAS INICIAIS E COM A

DURAÇÃO DA DOENÇA EM PACIENTES COM

DEPRESSÃO MAIOR

Clarissa Bastosª**, Sílvia Oliveiraª**, Marta Gazalª**, Karen

Jansenª**, Luciano Dias de Mattos Souzaª**, Jean P.

Osesª**, Pedro Magalhãesª**, Ricardo Pinheiroª**, Luciana

Quevedoª**, Flávio Kapczinskib**, Ricardo Azevedo da

Silvaª**, Manuella P. Kasterª**, Gabriele Ghisleniª**

ª Programa de Pós-Graduação em Saúde e Comportamento,

Universidade Católica de Pelotas, (UCPel), Pelotas, Rio

Grande do Sulb Laboratório de Psiquiatria Molecular, Instituto Nacional de

Ciência e Tecnologia – Translacional em Medicina (INCT),

Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Universidade Federal

do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brasil.

Introdução: A Depressão Maior (DM) e o Transtorno Bipolar

(TB) são relevantes problemas de saúde mental, pois

acarretam um alto custo social e econômico. De etiologia

ainda pouco elucidada, estudos têm evidenciado o papel das

citocinas pró e anti-inflamatórias nos transtornos

psiquiátricos. Objetivos: Verificar os níveis da interleucina-10

(IL-10) e sua associação com o início e a duração da doença

em pacientes com DM e TB quando comparados aos

controles. Métodos: O estudo trata-se de um caso-controle

aninhado a um estudo de base populacional. A amostra final

incluiu 231 indivíduos de 18 a 24 anos residentes na zona

urbana de Pelotas, RS (Brasil). Este estudo foi aprovado pelo

Comitê de Ética da Universidade Católica de Pelotas

53


(2006/96). O diagnóstico foi realizado através da Mini-

International Neuropsychiatric Interview (MINI 5.0) e

confirmado por meio da Entrevista Clínica Estruturada para o

DSM-IV (Manual Diagnóstico e Estatístico de Transtornos

Mentais - 4 ª edição). Os níveis de IL-10 foram determinados

pelo método de ELISA. Resultados: Não foram encontradas

diferenças significativas nos níveis de IL-10 em pacientes

com DM ou TB quando comparados com os controles (p =

0,903). No entanto, uma diminuição significativa foi

encontrada nos níveis de IL-10 em pacientes com DM de

início precoce (p = 0,043), mas não no TB. Além disso, os

níveis de IL-10 foram correlacionados negativamente com a

duração da doença em pacientes com DM (r = -0,258, P =

0,021), o que não foi observado em pacientes com TB.

Conclusão: Os resultados mostram que altos níveis de IL-10

podem estar correlacionados com o início tardio da

depressão e estes níveis diminuem com a progressão da

doença, sugerindo que um balanço anti-inflamatório pode ser

responsável pelo início dos sintomas depressivos e pela

duração da doença.

Apoio financeiro: Cnpq e Fapergs

19. ANÁLISE DA FLUORESCÊNCIA E DA CAPTAÇÃO DE

DOXAZOSINA EM CÉLULAS DE GLIOMA DE RATO (C6)

Bárbara Paranhos Coelho**, Mariana Maier Gaelzer**, Alice

Hoffmann de Quadros*, Clara Ponzi de Almeida*, Christianne

Gazzana Salbego. Universidade Federal do Rio Grande do

Sul, Porto Alegre.

Introdução: A doxazosina [4 - (4-amino-6,7-

dimetoxiquinazolina-2-il)-piperazina] 1-il - (2,3-diidro-1,4-

benzodioxina-3-il) metanona é um derivado quinazolínico que

compreende a classe terapêutica dos alfa-bloqueadores

adrenérgicos. São fármacos que bloqueiam seletivamente os

receptores alfa1 adrenérgicos. É utilizada na clínica como

Mesilato de doxazosina (Cardura®) para o tratamento de

hipertensão, insuficiência cardíaca congestiva e hiperplasia

benigna de próstata. A dixazosina induz apoptose de células

prostáticas malignas através de um mecanismo alternativo ao

relacionado com o adrenoceptor alfa-1, também exercendo

efeitos pró-apoptóticos em células de câncer de mama e

câncer de bexiga. Por apresentar em sua estrutura química a

presença de anéis conjugados com ligações pi, a mesma

apresenta autofluorescência intrínseca. No entanto, a

autofluorescência da doxazosina não havia sido descrita até

o momento, nem a captação do fármaco por células

cancerosas. Objetivos: O objetivo deste estudo foi a

identificação do espectro de emissão de fluorescência da

doxazosina e análise da captação da droga em linhagem de

glioma de rato (C6). Métodos: Foram utilizadas

concentrações de 50µM a 200µM de doxazosina para a

determinação do espectro de emissão da fluorescência. A

55


quantidade de fármaco captada foi avaliada por citometria de

fluxo em células C6 tratadas por 48h com a droga. A

presença do fármaco nas células também foi analisada em

microscópio de fluorescência. Resultados: Utilizando

comprimento de onda de excitação de 320nm é possível

observar três faixas de emissão de fluorescência da

doxazosina em torno de 410nm, 630nm e 770nm. Desse

modo, a captação da droga pelas células C6 foi analisada no

citômetro de fluxo nas fluorescências verde e vermelha. A

doxazosina é captada pelas células em ambos comprimentos

de onda e a intensidade da fluorescência nas células é

proporcional ao aumento da concentração da droga. O

mesmo pode ser observado por microscopia. Conclusões: A

autofluorescência da doxazosina pode ser utilizada para

análise da captação da droga por células tumorais,

possibilitando a identificação de populações resistentes ao

fármaco e um estudo aprofundado do tempo e mecanismo de

ação da doxazosina.

Apoio financeiro: CNPq e Capes.

20. INDUÇÃO DA EXPRESSÃO DE EGFR EM CÉLULAS

DE GLIOMA DE RATO (C6)

Mariana Maier Gaelzer**, Helena Flores Mello*, Bárbara

Paranhos Coelho**, Alice Hoffmann de Quadros*, Clara Ponzi

de Almeida*, Christianne Gazzana Salbego. Universidade

Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre.

Introdução: Glioblastomas (GBs) são os tumores mais

agressivos envolvendo o Sistema Nervoso Central (SNC),

são altamente infiltrativos e de rápida proliferação. O

tratamento padrão concilia cirurgia seguida de radio e

quimioterapia, mas ainda assim o prognóstico é bastante

desanimador: pacientes tem sobrevida média de 15 meses

após o diagnóstico. A superexpressão do Receptor do Fator

de Crescimento Epidermal (EGFR) está relacionada às

formas mais malignas de GBs, pois as rotas ativadas por

esse receptor estão envolvidas na proliferação e migração

celular, além de inibição de apoptose. Em células saudáveis

há cerca de 4x104 a 1x105 moléculas de EGFR, enquanto

células tumorais expressam mais de 2x106 receptores por

célula. O Fator de Crescimento Epidermal (EGF) é a proteína

ligante de EGFR, que estimula a dimerização e ativação do

receptor, consequentemente estimulando sinalizações de

proliferação e inibição da apoptose. Em trabalho anterior,

mostrou-se que a doxasozina induz morte por apoptose em

células de glioma de rato (C6) e humano (U138-MG).

Objetivos: O objetivo do estudo foi padronizar um protocolo

de indução de superexpressão de EGFR na presença de

EGF exógeno em células de glioma de rato (C6), com a

intenção de produzir uma variação da linhagem que

mimetizasse com mais veracidade um GB de subtipo

clássico, o qual apresenta superexpressão de EGFR. Após o

estabelecimento do protocolo de indução as células foram

57


tratadas com doxazosina, para avaliar se seu mecanismo de

ação possui envolvimento com o receptor (EGFR). Métodos:

As células foram expostas às concentrações de 2,5 ng/mL, 5

ng/mL e 10 ng/mL de EGF no meio de cultivo durante 24 e 48

horas. O número de células viáveis e o estágio no ciclo

celular foram avaliados por citometria de fluxo. A expressão

do gene EGFR foi observada pela análise de qPCR. Após o

estabelecimento do protocolo de indução, as células C6

foram expostas ao EGF 10ng/ml por 48hs e depois foram

tratadas com uma concentração de 180µM de doxazosina.

Resultados: Não houve diferença significativa no número de

células viáveis quando expostas por EGF durante 24h. No

entanto, as amostras tratadas com 10 ng/mL de EGF por 48h

apresentaram aumento significativo de proliferação e também

se observou aumento na expressão do gene EGFR pela

análise de qPCR. O tratamento com 180µM de doxazosina

induziu morte celular nas células que superexpressaram

EGFR. Conclusões: Nosso estudo desenvolveu um

protocolo de indução de expressão de EGFR pela presença

de EGF e mostra indícios de que a molécula EGFR está

envolvida no mecanismo de ação da doxazosina na indução

da apoptose em células de glioma de rato (C6).


21. EFEITO DA DOXAZOSINA SOBRE LINHAGENS DE

GLIOMA

Clara Ponzi de Almeida*, Mariana Maier Gaelzer**, Alice

Hoffmann de Quadros*, Juliana Bender Hoppe**, Bárbara

Paranhos Coelho**, Christianne Gazzana Salbego.

Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre.

Introdução: Glioblastoma (GB) é o tumor cerebral maligno

mais frequente, com sobrevida média após o diagnóstico

variando de 6 meses a 1 ano. Isso ocorre devido à ineficácia

das estratégias terapêuticas dos tratamentos atuais, pois

esses tipos de tumores são altamente invasivos. Deste modo,

novas estratégias terapêuticas são necessárias. A

doxazosina, um composto quinazolínico pertencente à classe

farmacológica dos antagonistas dos receptores adrenérgicos

α1, é amplamente utilizada na clínica para o tratamento de

pressão arterial elevada, assim como no tratamento de

retenção urinária relacionado com a hiperplasia benigna da

próstata (BPH). Estudos têm demonstrado o efeito

antitumoral da doxazosina em células de câncer de próstata,

mama e bexiga. Objetivos: O objetivo deste estudo foi

investigar o efeito antitumoral da doxazosina em linhagem de

glioma humano U138-MG e de rato C6, bem como avaliar a

citotoxicidade do fármaco em células não tumorais. Métodos:

Foram utilizadas concentrações de 5µM a 75µM de

doxazosina, para linhagem de glioma humano (U138-MG); e

30µM a 180µM para linhagem de glioma de rato (C6) durante

48h de tratamento. Com a finalidade de analisar a

59


porcentagem de células aderidas e a morte celular realizou-

se a coloração com sulforrodamina B (SRB) e a marcação

com iodeto de propídeo (IP), respectivamente. A cultura

astrocitária e cultura organotípica de fatias de hipocampo de

ratos Wistar machos foram utilizadas para avaliar a

citotoxicidade da doxazosina em células não tumorais. Os

procedimentos com animais foram aprovados no

CEUA/UFRGS sob o número de protocolo 200005.

Resultados: Através da coloração por SRB, foi constatada

diminuição da viabilidade celular em ambas linhagens após o

tratamento com doxazosina. A menor porcentagem de células

marcadas com SRB foi observada nas concentrações de

75µM (p<0,001; n=4) na linhagem U138-MG e de 180µM

(p<0,001; n=4) na linhagem C6. A marcação por IP resultou

em aumento na porcentagem de morte celular com o

aumento das concentrações de doxazosina, corroborando

com os resultados da marcação com SRB. Para o ensaio de

citotoxicidade em células e em tecido saudáveis, utilizamos

cultura primária de astrócitos e cultura organotípica de

hipocampo. Na cultura primária de astrócitos, houve

diminuição na viabilidade celular apenas na concentração de

250µM de doxazosina (p<0,001; n=3), ocorrendo o mesmo na

cultura organotípica (p<0,001; n=6). Conclusões: A

doxazosina foi efetiva em induzir morte celular e diminuir a

porcentagem de células em ambas as linhagens de glioma,

após 48 horas de tratamento. A doxazosina não apresentou

citotoxicidade em células não tumorais nas concentrações

em que causou morte celular nas linhagens de glioma.


22. EFEITO DA HIPÓXIA EM CÉLULAS DE GLIOMA

Alice Hoffmann de Quadros*, Mariana Maier Gaelzer**,

Mariana Silva dos Santos, Bárbara Paranhos Coelho**, Clara

Ponzi de Almeida*, Silvia Resende Terra**, Fabrício Simão,

Christianne Gazzana Salbego. Universidade do Rio Grande

do Sul, Porto Alegre.

Introdução: Glioblastomas (GBs) são os tumores primários

mais agressivos do SNC, possuem uma alta taxa

proliferativa, são citologicamente malignos e mitoticamente

ativos. Apesar da combinação de diferentes tratamentos

como a radio e quimioterapia, a sobrevida média do paciente

é em torno de 15 meses. A hipóxia é frequentemente

associada a um prognóstico ruim ao paciente, pois a baixa

concentração de O2 altera a expressão de genes associados

com metabolismo, sobrevivência, migração, angiogênese e

metástase celular, contribuindo para uma maior

agressividade tumoral . O microambiente hipóxico é

caracterizado por morte celular, pela presença de moléculas

que estimulam a progressão tumoral e selecionam as células

com fenótipo mais agressivo. São as chamadas células

tronco tumorais. O fator de crescimento endotelial vascular

61


(VEGF) é associado à angiogênese, e à indução do fenótipo

indiferenciado (formação das células tronco tumorais), além

de ser um importante marcador de hipóxia celular. Objetivo:

O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da privação de

oxigênio (PO) em linhagem de glioma de rato (C6), com o

intuito de mimetizar o microambiente tumoral in vitro.

Métodos: As células foram expostas à privação de oxigênio

por 15min, 1h e 3h em meio livre de soro e em meio

suplementado com 5% de soro fetal bovino (SFB). Foi

avaliada a morte celular, análise de mudanças morfológicas

induzidas pela PO, bem como a presença de marcadores de

hipóxia. A morte celular por necrose/apoptose, o tamanho e

granulosidade celular e o aumento do número de células

marcadas de VEGF e do seu receptor (FLK-1/VEGFR-2)

foram avaliados através da técnica de citometria de fluxo.

Alterações morfológicas foram observadas através de

fotomicrografias. Resultados: Através da citometria de fluxo

foi possível observar aumento da morte celular por apoptose

em todos os tempos utilizados com privação de oxigênio

(PO). As células expostas ao meio livre de soro, entretanto,

mostraram aumento de morte por apoptose em 1h e 3h de

PO. Marcação por iodeto de propídeo foi pouco observada

em células expostas a PO e núcleos picnóticos foram

detectados em todos os grupos de PO por coloração com

DAPI. Alterações morfológicas que se assemelham à

características de células tronco foram observadas após a

PO e foram mais proeminentes no grupo cultivado com meio

livre de soro. Estes resultados indicam um possível processo

de desdiferenciação de células expostas a PO. Não houve

diferença significativa em relação à presença de VEGF e

VEGFR entre as células expostas a PO e o controle.

Conclusões: Nosso protocolo de PO in vitro foi capaz de

induzir apoptose e mudanças morfológicas em células de

glioma de rato C6, recriando algumas das características

presentes no microambiente hipóxico.

Apoio financeiro: Capes e CNPq.

23..PARTICIPAÇÃO DOS RECEPTORES CB1 NA

CONSOLIDAÇÃO E RECONSOLIDAÇÃO DA MEMÓRIA

NO CÓRTEX INFRALÍMBICO COM INFUSÃO DE AM251

Autores

Flávia Zacouteguy Boos** 1,3,4, Fabiana

Santana** 1,3,4, Querusche Klippel Zanona** 1,3,4,

Rodrigo Ordoñez Sierra** 1,3,4, Ana Paula

Crestani** 1,3,4, Johanna Molina Duran** 1,3,4, Josué

Haubrich**1,3,4, Fabrício Diniz Dutra** 2,3,4,

Fernanda Lopes 1, Lucas de Oliveira Alvares 2,3,4,

Jorge Alberto Quillfeldt 1,3,4

Instituição 1 UFRGS - LPBNC - Laboratório de Psicobiologia e

Neurocomputação 2 UFRGS - LNM - Laboratório

de Neurobiologia da Memória, 3 UFRGS - PPG

Neuro - Programa de Pós-Graduação em

63


Neurociências, 4 UFRGS - IB - Instituto de

Biociências - Porto Alegre, RS

Introdução. Após a aquisição e consolidação de uma

memória, esta pode ser reativada e sofrer reconsolidação,

caso seja desestabilizada. Tem sido relatado que a ativação

do receptor CB1 está envolvida nos processos de

consolidação e reconsolidação. Objetivo. Neste trabalho, o

objetivo foi investigar o efeito do antagonista canabinóide

CB1 AM251 no córtex infralímbico sobre a consolidação e a

reconsolidação de uma memória aversiva. Métodos. Ratos

Wistar machos adultos (270-320g) foram treinados no

Condicionamento Aversivo ao Contexto (2 choques de 0,7

mA, por 2s cada). No experimento para avaliar o efeito do

AM251 sobre a consolidação, imediatamente após o treino foi

administrado AM251 (grupo AM251) ou seu veículo (grupo

vei) no córtex infralímbico. No experimento para avaliar o

efeito do AM251 sobre a reconsolidação, 48h após o treino

foi realizada uma sessão de 3min de reativação da memória.

Foi administrado AM251 15min antes da sessão de

reativação e seu veículo logo após a sessão (grupo AM251

pré), veículo 15min antes da sessão de reativação e AM251

logo após a sessão (grupo AM251 pós) ou veículo 15min

antes da sessão de reativação e veículo logo após a sessão

(grupo vei). O efeito das intervenções (experimento 1 e 2) foi

verificado através de um teste 24h (teste 1) e 7 dias (teste 2)

após o treino, ambos com duração de 4min. A memória foi

avaliada através da resposta de congelamento. Os resultados

foram analisados com Teste t para amostras independentes

ou ANOVA de uma via e post hoc SNK, o intervalo de

confiança foi de 95%. O projeto de n° 7862 foi apro vado pela

Comissão de Ética no Uso de Animais da UFRGS.

Resultados e Conclusões. No experimento de

consolidação, o grupo AM251 (n=7) apresentou níveis mais

altos de congelamento em relação ao grupo vei (n=10) (Teste

t, p=0,032) no teste 1. No teste 2 os grupos não diferiram

significativamente (Teste t, p=0,820). No experimento de

reconsolidação, a ANOVA de uma via demonstrou diferença

entre os grupos no teste 1 (p=0,013) e o teste post hoc SNK

apontou diferença significativa entre o grupo AM251 pós

[72,4(4,8), n=10] e os demais [AM251 pré 53,0(6,9), n=12; vei

47,7(4,6), n=14). No teste 2 os grupos não diferiram

significativamente [AM251 pós 35,41(5,88); AM251 pré

23,78(5,64); vei 20,09(4,59)]. Os resultados sugerem que a

administração de AM251 no córtex infralímbico

imediatamente após o treino teve um efeito facilitatório. Isto

indica que os receptores CB1 hipocampais modulam a

consolidação da memória. Além disso, AM251 também

provocou um efeito facilitatório com a infusão imediatamente

após a sessão de reativação, aumentando os níveis de

congelamento. Com isso, torna-se evidente que o mecanismo

que conduz tanto a consolidação quanto a reconsolidação de

uma memória aversiva é modulado por canabinóides no

córtex infralímbico.

Apoio financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS,

65


24. AÇÃO DO SISTEMA ENDOCANABINÓIDE SOBRE A

MEMÓRIA E SUA MODULAÇÃO PLÁSTICA ATRAVÉS DA

LTP IN VIVO.

André Sizer,1* Fabiana Santana,2,3** Flávia Zacouteguy

Boos,2,3 Querusche Klippel Zanona,2,3** Rodrigo Ordoñez

Sierra,2,3** Ana Paula Crestani,1,3** Johanna Molina Duran,2,3

Josué Haubrich,1,3** Fabrício Diniz Dutra,1,3** Fernanda

Lopes,1,3** Jorge Alberto Quillfeldt,2,3 Lucas de Oliveira

Alvares1,3

(1) Laboratório de Neurobiologia da Memória, (2) Laboratório

de Psicobiologia e Neurocomputação, (3) PPG Neurociências

UFRGS

Departamento de Biofísica, Universidade Federal do Rio

Grande do Sul, Porto Alegre, Rio Grande do Sul

Objetivo: O sistema endocanabinoide é um sistema

modulatório do sistema nervoso central (SNC), através da

interação de seus ligantes, os endocanabinoides, com os

receptores (CB1 e CB2), eles são fundamentais na

modulação de necessidades fisiológicas básicas da

sobrevivência humana, como o apetite, sono, dores, o

comportamento e a memória. A consolidação é uma das

fases da memória que pode ser completa dentro de horas

após o treino e envolve estabilização de mudanças na

conectividade sináptica em circuitos locais. Os receptores

CB1 modulam a plasticidade sináptica no hipocampo, assim

como na consolidação da memória. A abordagem

experimental que utilizamos para o estudo da biologia da

memória é a eletrofisiológica e o comportamento, que busca

decifrar como os sistemas neurais participam na

consolidação. O objetivo deste trabalho é estudar a

participação do sistema endocanabinoide hipocampal sobre o

processo de consolidação e evocação da memória na tarefa

de condicionamento aversivo ao context (CAC) e avaliar a

participação desse sistema sobre a indução da potenciação

de longa duração (LTP). Métodos e resultados: Ratos

Wistar foram canulados bilateralmente no hipocampo e

treinados na tarefa de condicionamento aversivo ao contexto.

Os animais receberam veículo (DMSO 8%) ou CP 55940 (5

µg/µl). Houve diferença significativa entre os grupos (ANOVA

de uma via, p=0,007) veículo (52,40[7,16] N=7) e 5 µg/µl CP

55940 (19,27[4,44] N=8,) no teste para consolidação. O teste

post hoc de Tuckey apontou diferença significativa entre o

grupo controle e a dose 5µg/lado (p=0,02), demonstrando um

efeito amnésico. Para o estudo eletrofisiológico os animais

foram anestesiados com uretano (1,5g/kg). O eletrodo de

estimulo foi colocado em Schaffer e o de registro no

hipocampo contralateral em CA1. O desenho experimental

apresentou 20 minutos basal de pulso pareado (50 % do

máximo de fEPSP), infusão da droga (5 µg/µl CP 55940) e

após 15min a estimulação de alta frequência. O projeto foi

67


aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal

da Universidade Federal do Rio Grande do Sul

(Project#7862). Conclusões: Os resultados sugerem que a

administração de CP 55940 intra-hipocampal imediatamente

após o treino teve um efeito amnésico. Isto indica que os

receptores CB1 hipocampais modulam a consolidação da

memória. Os estudos eletrofisiológicos corroboram com os

nossos experimentos comportamentais mostrando que o

agonista dos receptores CB1 inibe a indução da LTP.

Provavelmente, infusão de canabinoide exógeno ativa os

receptores CB1 que provoca a inibição de liberação de

glutamato na transmissão sináptica hipocampal.

viii oficina de neurociências - inicial — ufrgs ... · anais da viii oficina de neurociência...

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