DETERMINAÇÃO DA FRAÇÃO CICATRIZANTE DE FUMAÇA DE Artemisia vulgaris EM MODELO DE

ÚLCERA POR PRESSÃO EM CAMUNDONGOS

Ricardo de oliveira Lima

Emile Costa Barros

Edilberto Rocha Silveira

Nayara Coriolano de Aquino

Tamara Gonçalves Araújo

Mariana Lima Vale

Introdução

Prevalência 10% a 18% hospitalização de curta permanência; 2,3% a 28% hospitalização de longa duração e 0% a 29% no atendimento domiciliar.

Dorner B, et al. Adv Skin Wound Care 2009, 22(5):212-21

1,99 bilhões de dólares no tratamento hospitalar. Entre 1990 e 2001, dos 27 milhões de óbitos nos Estados Unidos, 114.380 (0,4%) foram induzidos por úlceras de pressão

Catania, K. et al. Am J Nurs 2007, 107(4):44-52; Reed, K, et al. Health Grades, Denver, 2011.

Artemisia vulgaris - Abad MJ, et al. Molecules 2012. 2(17):2542-66; Suresh

J, et al. Int J Curr Pharm Res. 2011. 3(1):49-52.

Medicina tradicional chinesa - Morant, G.S. Acupuntura. Medica

Panamericana. 1990; CAO D, et al. Inter. J. of Pharm 2008. 354:117-25

Justificativa

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OBJETIVOS GERAIS

• Investigar a fração do condensado da fumaça de Artemisia vulgaris responsável pela ação cicatrizante em modelo de úlcera por pressão em camundongos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS • Separar o extrato da fumaça de moxa de Artemisia vulgaris em

frações obtidas no fracionamento cromatográfico; • Fazer hidrogel de cada frações do extrato da fumaça de Artemisia

vulgaris. • Avaliar o efeito da aplicação tópica do hidrogel de cada fração da

fumaça de Artemísia vulgaris sobre a cicatrização de úlceras por pressão em camundongos: Avaliando parâmetros macroscópicos de cicatrização por meio da

Escala - Experimental Wound Assessment Tool (EWAT) e percentual de contração da área da úlcera;

Investigando a colagênese em cortes histológicos corados com Tricrômio de Mallory;

Avaliando o potencial antioxidante.

Camundongos Swiss ♂, peso25-30g

Fornecidos pelo Biotério Central da Universidade Federal do Ceará – UFC

12/12ciclo claro/escuro a 25°C, com alimentos e água ad libitum

Comitê de Ética em Pesquisa animal (CEPA) nº 89/2011

P1

P2

P3

PD4

PD5

D6

D7

A8

M9

Pentano (P) Pentano/diclorometano (PD) Diclorometano (D) Acetato de etila (A) Metano (M)

0,48% P1

0,27% P2-3

1,37% PD4

0,53% PD5

0,60% D6

0,29% D7

2,36% A8

1,94% M9

Fracionamento

cromatográfico

(coluna gel de silica)

1.Naïve (4 animais) 2.Controle (7 animais) 3.Veículo (7 animais) 4.Fração P1 (5 animais) 5.Fração P2-3 (5 animais) 6.Fração P4 (5 animais) 7.Fração PD5 (5 animais) 8.Fração PD6 (5 animais) 9.Fração PD7 (5 animais) 10.Fração A8 (5 animais) 11.Fração M9 (5 animais)

Total de 58 animais

Formol 10%

tamponado

14ºdia

Freezer -80º

Centrifugado Sobrenadante

para o teste

MDA

Parafinizado

IHQ HE

T. Mallory

Análise estatística

• Resultados foram expressos como média EPM

• Análise de Variância (ANOVA) seguido de Bonferroni ou Teste t para dados paramétricos

• Kruskal-Wallis seguido de Dunn’s ou Teste de Mann Whitney para dados não-paramétricos

• Nível de significância estatística, p < 0,05

• GraphPad Prism 5 for Windows® (GraphPad software, INC., USA, 2007)

Efeito sobre a reepitelização

6 8 10 12 140

20

40

60

80

100

C

P1

*

BCOMPARAÇÃO ENTRE O GRUPO CONTROLE E P1

DIAS

CO

NT

RA

ÇÃ

O D

A Á

RE

A (

%)

COMPARAÇÃO ENTRE O GRUPO CONTROLE E M9

6 8 10 12 140

20

40

60

80

100

C

M9

***

*

C

DIAS

CO

NT

RA

ÇÃ

O D

A Á

RE

A (

%)

6 8 10 12 140

20

40

60

80

100

C

V

P1

P2-3

P4

PD5

PD6

PD7

A8

M9

COMPARAÇÃO ENTRE TODOS OS GRUPOS

A

DIAS

CO

NT

RA

ÇÃ

O D

A Á

RE

A (

%)

Todas as frações Fração P1 Fração M9

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre percentual de contração da ferida

Efeito sobre a cicatrização

Grupo Dia 5 Dia 7 Dia 14

Controle 18(15-20) 17 (0 – 21) 9,5 (0 - 18)

Veículo 18 (13 - 22) 16,5 (13 - 21) 11 (0 - 16)

P1 16,50 (15 - 20) 14,5 (0 - 18) 5 (0 - 13)

P2/3 20,5 (18 – 22) 18 (15 - 20) 1 (0 - 18)

P4 21 (21 – 22) 19 (18 -20) 16 (0 - 16)

PD5 18 (15 - 19) 14,5 (12 - 17) 0 (0 - 16)

D6 18 (15 - 19) 16,5 (14 - 19) 6 (0 - 19)

D7 18,5 (15 - 19) 14,5 (6 - 19) 10,5 (0 - 16)

A8 17,5 (14 – 22) 18,5 (17 - 21) 0 (0 - 16)

M9 20,5 (16 – 22) 16 (0 - 17) 0 (0 - 8)ab

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre Escores EWAT

Efeito sobre a colagênese

N C V P1 P2-3 P4 PD5 PD6 PD7 A8 M90

500

1000

1500

2000

2500

*##+

14º dia

es

pe

ss

ura

da

de

rm

e (

m)

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre a camada de colágeno na derme da ferida

Avaliação do efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris na dosagem de MDA no leito da ferida.

N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M90.00

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

**

*****

MD

A (

pp

m)

Efeito Antioxidante

Efeito anti-inflamatória, antioxidante e antinitrosante

N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M90

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

*#

perc

en

tag

em

de p

ixels

(%

)

N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M90

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

******

******

** **p

erc

en

tag

em

de p

ixels

(%

)

iNOS Nitrotirosina

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre imunoexpressão de NOSi e nitrotirosina no leito da ferida ou na cicatriz

Naïve

D6

Controle

Veículo

P1

P2-3

PD4

PD5

D7

A8

M9

Análise dos espectros de Ressonância Magnética Nuclear Protônica (RMN¹H) Extrato etanólico das folhas

de Artemisia vulgaris

Fração M9

Extrato etanólico das folhas de Artemisia vulgaris

Extrato etanólico dos palitos de moxa

Fumaça de Artemisia vulgaris

Fração P1

CONCLUSÕES A formulação de hidrogel com a fração M9 utilizada foi a que mais acelerou o processo de cicatrização, mostrando: • Menores escores na escala EWAT • Maiores percentuais de contração da área das úlceras Os resultados podem ser atribuídos por: • A diminuição dos marcadores de estresse nitrosativo, relacionado a

diminuição da expressão de NOSi • Diminuição nos níveis de radicais livres de oxigênio e de nitrogênio

pode esta envolvida em sua atividade cicatrizante

A formulação de hidrogel com a fração P1 também teve uma ação cicatrizante evidenciada por: • Aumento da contração da área de ulcera no 7º dia • Estimulação da colagênese Os resultados podem ser atribuídos por: • Atividade sequestradora de radicais livres de nitrogênio, evidenciado

pela diminuição da marcação para nitrotirosina

• A moxa palito e a fumaça de moxa apresentaram um espectro semelhante ao extrato etanólico das folhas Artemísia vulgaris.