aula 4 - fundamentos da espectrofotometria
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Introdução aos métodos ópticos
Propriedades da Luz:A luz ou radiação eletromagnética pode ser descrita tanto em termos de onda com em termos de partícula, conhecido como princípio dual da radiação eletromagnética.
Princípio da dualidade da matéria de Louis de Brodlie: a Luz apresenta
característica DUAL, ou seja, comporta-se como matéria e energia sendo
uma partícula-onda.
Em 1923, Louis Broglie mostrou, através de uma equação matemática, que
"qualquer corpo em movimento estaria associado a um fenômeno ondulatório".
Desta maneira o elétron apresenta a natureza de uma partícula-onda,
obedecendo assim, às leis dos fenômenos ondulatórios, como acontece com a
luz e o som.
Onde λ (lambda) é o comprimento da onda associada à partícula de massa m que se move a uma velocidade v,e h é a constante de Planck (~ 6,626 x 10-34 j.s)
λ = h/mv
Para descrever a luz, são utilizados os termos comprimento de onda (λ), frequência (ν) e energia (E). As relações matemáticas entre estas variáveis são:
c = λ.ν (Eq. 1)
E = h. ν (Eq. 2)
Temos então que:
ν = c/λ
substituindo a equação acima na equação da energia:
E= hc/λ
onde: c é a velocidade da luz no vácuo (3×108 m. s-1) e h é a constante de Planck, cujo valor no Sistema Internacional (SI) é 6,627×10-34 J.s
Exercício resolvido
1. Qual a energia associada a uma radiação eletromagnética com comprimento de onda de 250 nm? Dado: n (nano) =10-9
c = λ.ν e E= h. ν
Temos então que:
ν = c/λ
substituindo a equação acima na equação da energia:
E= hc/λ
Prefixo para unidades de medidas
Fundamentos da Espectrofotometria
“Uma maneira boa de cutucar moléculas, é com radiação
eletromagnética (luz)”
A espectrofotometria faz parte da classe dos métodos analíticos que baseiam-se na
interação da matéria com a energia radiante
Luz incidente
Luz emergente
Luz absorvida
Perdas: - reflexões - dispersão -absorção
• Boa sensibilidade• Baixo custo
de análise• Fácil
operação•Equipamento
s robustos
Definição de alguns Termos
• Espectroscopia
Termo geral para a ciência que trata da interação da matéria com vários tipos de
radiação
• Espectrometria / Métodos Espectrofotométrico
Amplo grupo de métodos analíticos que são baseados em espectroscopia molecular e
atômica.
Tratam da medida da intensidade da radiação.
Definição de alguns Termos
• Espectrofotometria
Medição de substâncias químicas baseada em informação espectral de um conjunto de
em um espectrofotômetro.
• Fotometria
Quantificação por intensidade de luz, não necessariamente mantendo a informação
espectral.• Colorimetria
Quantificação em colorímetro.
Num sentido amplo, radiação é aquilo que
irradia (emite raios) de algum lugar.
Em física, o termo refere-se usualmente a
partículas e campos que se propagam
(transferindo energia) no espaço (preenchido
ou não por matéria).
Conceitos teóricos
Radiações eletromagnéticasA representação gráfica do espectro
eletromagnético é mostrada na figura abaixo
Absorção de radiação eletromagnética
Fundamentos da Espectrofotometria
Porque ocorre o fenômeno da absorção? Moléculas que apresentam elétrons que podem
ser promovidos a níveis de energia mais elevados mediante a absorção de energia
◦ TRANSIÇÕES ELETRÔNICAS Níveis discretos de energia são absorvidos devido
à vibrações e rotações das moléculas
◦ ROTACIONAL E VIBRACIONAL Por este motivo não se observa uma linha de
absorção nítida, mas sim uma banda de absorção
◦ ESPECTRO UV-VISÍVEL
Fundamentos da Espectrofotometria
Transições Eletrônicas
Energia Rotacional e Vibracional
Espectro UV-Visível
Distinção das cores.Ao falarmos de cores, temos duas linhas de pensamento distintas: a Cor-Luz e a Cor-Pigmento. Falar de cor sem falar de luz é impossível, mesmo se tratando da Cor-Pigmento, pois ela, a luz, é imprescindível para a percepção da cor, seja ela Cor-Luz ou Cor-pigmento. No caso da Cor-Luz ela é a própria cor e no caso da Cor-Pigmento ela, a luz, é que é refletida pelo material, fazendo com que o olho humano perceba esse estímulo como cor. Os dois extremos da classificação das cores são: o branco, ausência total de cor, ou seja, luz pura; e o preto, ausência total de luz, o que faz com que não se reflita nenhuma cor. Essas duas "cores" portanto não são exatamente cores, mas características da luz, que convencionamos chamar de cor.
Cores de Radiação Região do Visível
Para caracterizar as absorções temos a lei de Lambert-Beer:
Transmitância = (I / I0)
% Transmitância = (I / I0) * 100%
I = intensidade de luz transmitida I0 = intensidade de luz incidente
Lei de Beer:
A intensidade de luz absorvida mede-se pelo porcentagem da luz incidente que atravessa a amostra
Para líquidos ou sólidos transparentes O espectro de absorção: é obtido através do monitoramento da
intensidade da radiação incidente (I0) e transmitida (I).
Teoria da Espectrofotometria
Teoria da Espectrofotometria
A absorção é função do número de moléculas que absorvem (concentração).
Absorbância = -log(I / I0) = . b . c
A = . b . c
Esta relação se conhece como Ley de Beer-Lambert e permite corrigir a dependência da concentração e outros fatores operacionais ao comparar distintos compostos:
Onde:
= absorvidade molar (característica da molécula)
c = concentração molar da espécie que absorve
b = espessura da amostra atravessada pelo feixe de luz (habitualmente 1 cm)
Para líquidos ou sólidos transparentes
Calcule a absorbância sabendo-se que a transmitância é:
a) 3,15%b) 0,0290
Calcule a transmitância (%) partindo-se dos seguintes valores de absorbância:
a) 0,912b) 0,027
Exercícios
Lei de Beer-Lambert
A absorbância é muito importante porque ela é diretamente proporcional à concentração, c, de espécies absorventes de luz
na amostra
Desvios da Lei de Beer-Lambert LIMITAÇÃO REAL
◦ A Lei é válida somente para baixas concentrações◦ Altas concentrações = Interação entre as
moléculas afeta a distribuição de carga, alterando o coeficiente de absortividade molar
DESVIO QUÍMICO◦ Surgem quando um analito se dissocia, se associa
ou reage com um solvente para dar um produto que tem um espectro de absorção diferente
Desvios da Lei de Beer◦ DESVIO INSTRUMENTAL
A lei só é válida para radiação monocromática, ou seja, para um único comprimento de onda ()
Como minimizar o desvio? Escolher a região onde o é constante na região
selecionada
Análises Quantitativas
Curva de Calibração ou Curva padrão
Concentração
Absorbância
2,5 5 10
0.200
0.400
0.600
07,5
0.500 AmostraA = 0,50
CALIBRAÇÃO DE MÉTODOS INSTRUMENTAIS
1- Introdução da Análise Instrumental
C
A
X1 X2
Y1
Y2
b =X2 – X1
Equação de uma reta: Y = bx + a
Coeficienteangular
Coeficientelinear
Coeficienteangular
Coeficientelinear
b
Y2 – Y1
Introdução à Análise Instrumental Adição de Padrão
Am
Pd Am
Sinal AnalíticoAmostra
Sinal AnalíticoAmostra + Padrão
+
Introdução à Análise Instrumental Padrão Interno
Sinal Analítico
Sinal Analítico
Sinal Analítico
Pd
Bco
Pds
Am