AVALIAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-HLA NO TCTH COM DOADORES ALTERNATIVOS:

PARA QUEM, POR QUE, QUANDO E COMO?

III Reunião Educacional da SBTMO - 2017

Alberto Cardoso Martins Lima, MSc Laboratório de Imunogenética – HC/UFPR

PARA QUEM?

A pesquisa de anticorpos anti-HLA e avaliação da presença de anticorpos específicos contra o doador (DSA) deve ser solicitada:

Para os pacientes com indicação de TCTH que apresentarem doadores com incompatibilidades HLA, aparentados ou não aparentados

POR QUE?

269 patients who underwent haplo BMT

In a multivariate binary logistic regression analysis, independent risk factors associated with graft failure:

A positive crossmatch for anti-donor lymphocytotoxic antibodies (RR = 2.3; 95% CI: 1.8 to 2.8; P = 0.0038)

Retrospective analysis of 528 patients receiving Haplo HSCT

“The majority of clinical studies employing solid phase immunoassays to date have demonstrated significant associations of DSA with engraftment failure (Table 4)”

The patients with a DSA MFI ≥2000 experienced a significantly higher incidence of Primary Poor Graft Function than those with a MFI <2000

(27.3 % vs. 1.9 % , P = 0.003)

QUANDO?

Pré-TCTH:

Quando o paciente apresentar doador com incompatibilidade HLA

Critérios HC/UFPR:

• Na presença de novo evento sensibilizante

• Antes e após protocolo de dessensibilização

• Antes da infusão das células-tronco (D-1), nos TCTH com DSA

QUANDO?

Pós-TCTH:

Monitoramento pós-transplante nos TCTH com DSA • Avaliar efeito rebote do DSA

Critérios HC/UFPR:

• D+5

• D+15

• D+30 (Se necessário)

COMO?

Ensaios de fase sólida em plataforma Luminex:

Single antigen beads (SAB)

Prova cruzada de linfócitos (XM):

Citotoxicidade Dependente do Complemento (CDC-XM) Citometria de Fluxo (Flow-XM)

Virtual Crossmatch & Análise de Epitopos HLA

DSA (MFI=1,140)

Eplet 76ESN/TerEp #216 (Bw6)

Foi realizada prova cruzada por citometria de fluxo com células HLA-B39 do doador

Gebel HM, Bray RA. Am J Transplant. 2014 Sep;14(9):1964-75

Flow T-Cell XM: 205 MCF (Cut Off - 180 MCF) Flow B-Cell XM : 312 MCF (Cut Off - 271 MCF)

XM POSITIVO

FORÇA COLETIVA DO EPITOPO Bw6 >25.000 MFI EFEITO DILUCIONAL DO DSA CONTRA O EPITOPO PÚBLICO

A análise detalhada dos padrões de reatividade epitôpica possibilita uma caracterização mais robusta dos anticorpos

anti-HLA, minimizando a ocorrência de tais situações

Ellis TM, Transplantation Reviews , 27 (2013) 108–111

Relatar um DSA que não existe: Resultado falso-positivo

Retira a chance do paciente realizar o TCTH ou exclui um doador adequado

Não detectar um DSA existente: Resultado falso-negativo

Risco de rejeição mediada por anticorpos específicos contra o doador

CASO – SELEÇÃO DE DOADORES ALTERNATIVOS:

PACIENTE COM LMA SECUNDÁRIA A ANEMIA DE FANCONI

SEM DOADORES HLA COMPATÍVEIS NO NÚCLEO FAMILIAR

AVALIAÇÃO DE TCTH HAPLOIDÊNTICO DEVIDO À GRAVIDADE DO CASO (PACIENTE PANCITOPÊNICA):

PESQUISA DE ANTICORPOS ANTI-HLA (SINGLE ANTIGEN BEADS - SAB)

ANÁLISE DE EPÍTOPOS HLA:

o HLA FUSION (TER EPS) o HLAMATCHMAKER (EPLETS)

CASO - SELEÇÃO DE DOADORES ALTERNATIVOS:

RESULTADO DA PESQUISA DE ANTICORPOS ANTI-HLA & VIRTUAL CROSSMATCH:

8 DSAs CONTRA A MÃE: ANTI-A1, B18, DR7, DR53, DQ2, DQA1*02:01,

DPB1*04:01 E DPA1*02:02

6 DSAs CONTRA O PAI E IRMÃO: ANTI-A1, DR7, DR53, DQ2, DQA1*02:01

E DPB1*04:01

TCTH HAPLOIDÊNTICO DESCARTADO:

RISCO ELEVADO DE REJEIÇÃO HUMORAL DO ENXERTO

CASO - SELEÇÃO DE DOADORES ALTERNATIVOS:

REALIZADA A AVALIAÇÃO DE UNIDADES DE SANGUE DE CORDÃO UMBILICAL E PLACENTÁRIO (SCUP) APÓS O TCTH HAPLOIDÊNTICO TER SIDO DESCARTADO:

BUSCA REALIZADA NO REDOME (BRASILCORD) & NMDP

REALIZADO VIRTUAL CROSSMATCH (vXM) ENTRE OS ANTICORPOS ANTI-HLA DA PACIENTE E AS INCOMPATIBILIDADES HLA DAS UNIDADES SCUP

REALIZADA VXM EM 12 UNIDADES SCUP DISPONÍVEIS NO REDOME 5 SCUP SEM TIPIFICAÇÃO PARA HLA-C

TODOS OS SCUP SEM TIPIFICAÇÃO DQA1, DQB1, DRB3/4/5, DPA1 E DPB1

DSA (VXM POSITIVO) CONTRA OS 12 SCUP DISPONÍVEIS NO BRASILCORD

REALIZADA VXM EM 38 UNIDADES SCUP DISPONÍVEIS NO NDMP

MAIORIA DOS SCUP SEM INFORMAÇÃO PARA HLA-C, DQA1, DQB1 E DRB3/4/5

TODOS OS SCUP SEM TIPIFICAÇÃO HLA-DPA1/DPB1

VXM POSITIVO PARA 37 SCUP DISPONÍVEIS DO NMDP

“SEM DSA”

TNC/Kg = 3.3 x 107 (DESCARTADO)

TNC/Kg = 6.4 x 107

MM DR53 (DRB4)

DR4 (MFI ≈ 20.000) DR53 (MFI ≈ 21.000)

DSA

DESCARTADO

CASO - SELEÇÃO DE DOADORES ALTERNATIVOS:

AVALIAÇÃO DE DOADORES NÃO APARENTADOS NO REDOME & NMDP:

3 DOADORES DISPONÍVEIS COM COMPATIBILIDADE PARA HLA-A, B, C, DRB1, DQB1, MAS COM INCOMPATIBILIDADES (MM) PARA HLA-DPB1:

I. DV NMDP 1801-0516-5: DPB1*03:01, DPB1*04:02

II. DV REDOME 4.130.713: DPB1*04:01, DPB1*104:01

III. DV NMDP 1997-2637-3: DPB1*01:01, DPB1*04:01

REPETIÇÃO DO SAB COM DILUIÇÕES 1:4 & 1:16 PARA AVALIAÇÃO DA FORÇA DO ANTICORPO CONTRA O EPITOPO 56A

AVALIAÇÃO DA PERMISSIVIDADE DPB1 PELOS MODELOS TCE 2.0 & ∆FD

Epitopos DP próprios: 56EE, 56ED, 84GGPM, 84DEAV

PROVA CRUZADA DE LINFÓCITOS B POR CITOMETRIA DE FLUXO:

POSITIVA (MCF:308; CUTOFF: 237)

VETO

CASO - SELEÇÃO DE DOADORES ALTERNATIVOS:

TRANSPLANTOU COM O DV NMDP SEM DSA & MM DPB1 PERMISSIVO

APRESENTOU PEGA NEUTROFÍLICA NO D+17 SEM USO DE FILGRASTIM

100% DOADOR NO QUIMERISMO D+30

100% DOADOR NO QUIMERISMO D+89 (CÉL. TOTAIS, T, B & GRAN.)

100% DOADOR NO QUIMERISMO D+150 (CÉL. TOTAIS, T, B & GRAN.)

NÃO APRESENTOU DECH ATÉ O MOMENTO

RECEBEU ALTA DO HOSPITAL DIA COM ACOMPANHAMENTO AMBULATORIAL SEMANAL

RESUMO DO CASO: 1. TCTH HAPLOIDÊNTICO: DESCARTADO DEVIDO À PRESENÇA DE VÁRIOS DSA

2. TCTH COM SCUP: DESCARTADO DEVIDO À PRESENÇA DE VÁRIOS DSA

3. AVALIAÇÃO NAP: TRÊS DVMO 10x10 (HLA-A, B, C, DRB1, DQB1 EM ALTA RESOLUÇÃO)

RISCOS DE COMPLICAÇÕES PÓS-TCTH DISTINTOS ENTRE OS TRÊS DVMO, QUANDO O HLA-DPB1 É CONSIDERADO:

DV NMDP 1801-0516-5: SEM DSA & MM DPB1 PERMISSIVO

→ BAIXO RISCO

DV REDOME 4.130.713: COM DSA & MM DPB1 PERMISSIVO

→ RISCO INTERMEDIÁRIO (REJEIÇÃO HUMORAL DO ENXERTO)

DV NMDP 1997-2637-3: COM DSA & MM DPB1 NÃO PERMISSIVO GvH

→ RISCO ELEVADO (REJEIÇÃO HUMORAL DO ENXERTO + ALORREATIVIDADE NO VETOR GvH)

AGRADECIMENTOS

Equipe do Laboratório de Imunogenética do HC-UFPR

Unidade de Busca de Doadores Não-Aparentados

Equipe Médica do STMO-HC/UFPR

Equipes do Serviço Social e Enfermagem do STMO-HC/UFPR

OBRIGADO PELA ATENÇÃO

acml@ufpr.br Laboratório de Imunogenética – HC/UFPR

41 3360-1800 Ramal 6481