aula 7 produtos não estéreis

7/25/2019 Aula 7 Produtos no estreis

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Controle Microbiolgico deProdutos Farmacuticos e

Cosmticos No EstreisQUESTES E P!"#$S%QUESTES E P!"#$S%C"NTE&" $S P!'()M$S $U*$S%C"NTE&" $S P!'()M$S $U*$S%+"!,!)" E $TEN)MENT" "N-*)NE%+"!,!)" E $TEN)MENT" "N-*)NE%

blog do .ro/essor0blog do .ro/essor01tt.022c1icotei3eira45ord.ress4com1tt.022c1icotei3eira45ord.ress4com
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$s.ectos 6erais

Produtos no estreis so a7ueles nos 7uais seadmite conceitualmente a .resen8a de cargamicrobiana9 embora limitada9 tendo em :ista ascaracter;sticas de sua utilirias de usotero contato com >reas .ortadoras de /loramicrobiana natural9 constitu;da de sa.r/itas em n?mero .or :e


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$s.ectos 6erais

" ob@eti:o imediato com.ro:ar a ausncia demicrorganismos .atognicos e determinar on?mero de microrganismos :i>:eis9 em /un8odos ti.os de utili


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Padr=es Microbianos

$s .rimeiras inclus=es de limites microbianosa.licados a .rodutos /armacuticos e seusinsumos ocorreram de /orma :aga9 como arecomenda8o de Aausncia de emboloramentoB%

D e D edi8=es da USP0GH e I9 res.ecti:amente%

No /ormul>rio Nacional de JK e na LD Edi8oda Farmaco.ia9 do mesmo ano9 a e3.resso /oi

modi/icada .ara0


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Padr=es Microbianos

Arogas :egetais e animais de:ero estar9 om>3imo .oss;:el9 isentas de microrganismos9sendo 7ue os .atognicos no de:ero estar.resentesB%

interessante lembrar 7ue o .rimeiro insumo/armacutico com es.eci/ica8o relati:a 7ualidade microbiolgica /oi a gelatina9 na USP ())de I9 com o limite tolerado9 em /un8o de suaorigem9 de KIbactrias totais .or grama%

Esta es.eci/ica8o /oi alterada di:ersas :e


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Padr=es Microbianos

$lm dessa e3igncia 7uantitati:a 1a:ia outrore7uisito9 isto 9 ausncia de .atgenoses.ec;/icos numa determinada tomada de ensaio9sendo 7ue este as.ecto /oi se tornando mais

e3igente%

K mg ou menos USP ())%

Com a tomada de ensaios de0

K mg USP (#)%

K g ou menos USP (#)))%

$*TE!$$ P$!$

$*TE!$$ P$!$


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Padr=es Microbianos

Em rela8o aos /itoter>.icos9 a Portaria n G de de outubro de I9 na Norma Tcnica .ara!egistro de Fitoter>.icos9 estabelece a seguintees.eci/ica8o .ara matrias-.rimas :egetais0

Menos 7ue KI2g de le:eduras ou /ungos%

Menos 7ue KO2g de total de :i>:eis%

Menos 7ue KG2g de enterobactrias%

$usncia de Salmonella sp.9 P. aeruginosa9 S.aureus9 E. colie /ungos da /am;liaAspergillus%


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Padr=es Microbianos

$.esar do recon1ecimento9 1> muitos anos9 daim.ortRncia do controle microbiano de .rodutosno estreis9 a im.lanta8o e aceita8o dos.adr=es sanit>rios tem ocorrido lentamente%

Produtos cosmticos Quanto aos .rodutos cosmticos9 a CTF$Cosmetic Toiletry and Fragrance Assoc.adotou limites de tolerRncia 7ue setornaram re/erncia internacional4 Esteslimites so no mais 7ue OKK

microrganismos .or grama em .rodutos.ara bebs e na7ueles utilireados ol1os e de no mais 7ue KKKmicrorganismos .or grama .ara todos osoutros9 alm de mencionar 7ue nen1um.roduto de:e ter conte?do microbiano

considerado noci:o .ara o usu>rio%


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trans.orte e .re.ara8o da amostra

.ara an>lise%

Mtodos de $n>lise

En:ol:em tanto os medicamentos no estreis7uanto os cosmticos9 abrangem trs eta.as/undamentais0

$mostragem englobando coleta%
http://images.google.com.br/imgres?imgurl=http://www.tropicaflore.com/images%2520diverses/Ginkgo%2520biloba%2520040102.JPG&imgrefurl=http://foresttrips.blogspot.com/2006/12/off-me-head-ginkgo-biloba.html&usg=__Z6yrB1U8gJ_lzR79kOjMwiEXVHQ=&h=429&w=317&sz=36&hl=pt-BR&start=16&tbnid=pf4-sgK5u24jmM:&tbnh=126&tbnw=93&prev=/images%3Fq%3Dginkgo-biloba%26gbv%3D2%26hl%3Dpt-BR%26sa%3DX


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Mtodos de $n>lise

etermina8o numrica ou contagem das /ormas:i>:eis%


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Mtodos de $n>lise

)solamento e identi/ica8o dos microrganismosindese@>:eis a serem .es7uisados%


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$ amostragem a ser e/etuada .ara in:estiga8o7uanto ao atendimento aos .adr=es microbianosde:e ser0

$mostragem

!e.resentati:a

Em termos de abrangncia do :olume contido9 do n?merode unidades contenedoras9 e das o.era8=es unit>riasen:ol:endo risco de contamina8o adicional ou.roli/era8o microbiana%

Em se tratando de sacos ou barricas contendo matria-.rima no estril na/orma .ul:eri


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Nos .rocessos cont;nuos9 a segmenta8o comoin;cio9 meio e /im do .rocesso de:e estarcontem.lada na amostragem%

$mostragem

Considerando o .roduto terminado9 toma-se :iade regra du.licata ou tri.licata da amostra9re.resentando in;cio9 meio e /im do .rocesso deenc1imento9 admitindo 7ue a.s o /ec1amento

do material de acondicionamento a introdu8o decontaminantes no mais e3istir>%

" trans.orte de:e ser em condi8=es ade7uadas

de tem.eratura%


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Quantidade a ser analisada0

$mostragem

No caso do :olume total da amostra ser de

K gm*9 ou in/erior9 este total de:e seranalisado4 $ tomada de ensaio .ode ser redu


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Pre.ara8o da amostra0

$mostragem

$ .rimeira .reocu.a8o ao .re.arar a amostra consistena :eri/ica8o da ati:idade antimicrobiana do .rodutode:ido .resen8a de conser:antes na /rmula%

Estes de:em ser inati:ados com substRncias ade7uadas9con/orme sua nature


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$mostragem

$ adi8o dos inati:antes9 .re:iamente esterili


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$mostragem

$ 1omogenei


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Produtos com /ase oleosa e3igem a adi8o de agentetensoati:o9 cu@a concentra8o de:e ser cuidadosamentede/inida .ara e:itar e/eito inibidor sobre .oss;:eis

microrganismos contaminantes%


$mostragem

Forma de manuseio o.eracional trabal1osa o sabonete97ue e3ige /ragmenta8o criteriosa9 seguida de le:ea7uecimento9 recurso tambm a.lic>:el no caso de

su.ositrios e .omadas%

$gente tensoati:o


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Em meio slido9 com semeadura da amostraem .ro/undidade Pour Plate%

Mtodos de Contagem de

Microrganismos

Em meio slido9 com semeadura da amostraem su.er/;cie%

Membrana /iltrante%

N?mero mais .ro:>:el%


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" meio de cultura estril /undido e res/riado a IO ILWC9

em 7uantidade de cerca de K m*9 :ertido sobre cadauma das .lacas contendo amostra9 reali


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Pour Plate0


Microrganismos

Segue-se incuba8o das.lacas9 em estu/a9 na.osi8o in:ertida%

$.s a O dias deincuba8o a GK GOWC9

.ara bactrias e O a J dias.ara bolores e le:eduras9 aK OWC9 as colXnias socontadas%


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Pour Plate0


Microrganismos

Para contagem total de bactrias os meios o/icialmente

recomendados so .rinci.almente >gar case;na-so@a e>gar nutriente%

Para /ungos9 >gar Sabouraud-de3trose e >gar batata%


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$ escol1a do meio de cultura9 condi8=es de incuba8o ec>lculos .ara determina8o da carga contaminante :i>:ele7ui:alem ao descrito .ara a tcnica Pour Plate%

Semeadura da amostra em su.er/;cie0


Microrganismos

" meio de cultura .re.arado e distribu;do .re:iamente

em .lacas de Petri4 Em.regando-se .i.etas estreis9:olumes de K9 a K9O m* de cada dilui8o considerada sodistribu;dos na su.er/;cie do gel @> solidi/icado9 sendo oes.al1amento e/etuado com mo:imentos cuidadosos oucom o au3;lio de basto de :idro ou al8a de rigalsYi%

Na de.endncia da densidade da amostra91a:er> absor8o total .elo meio4 $s .lacasin:ertidas so ento incubadas%


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" c>lculo .ara determinar o n?mero total decontaminantes :i>:eis igual ao descritoanteriormente%

Membrana /iltrante0


Microrganismos

$l;7uotas do .roduto sob /orma l;7uida ou suas dilui8=es

so /iltradas atra:s de membranas a.ro.riadas K9IO mou K9K m de .oro e IJ mm de diRmetro9 constitu;das emderi:ados celulsicos9 seguindo-se a de.osi8o dasmembranas9 na mesma .osi8o9 sobre .lacas contendomeio de cultura%

Esta metodologia :anta@osa .or .ermitir:olumes ele:ados na amostragem e .elaacuidade9 a.resentando recomenda8oes.ecial .ara amostras contendo agentesantimicrobianos%


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N?mero mais .ro:>:el NMP0


Microrganismos

$ determina8o do NMP de microrganismos se baseia em

estimati:a /undamentada em .robabilidade4 $ssim9 indicao :alor dentro de uma /ai3a 7ue re/lete o n?mero demicrorganismos .resente%

Embora a.resentando im.reciso maior 7ue os outrosmtodos descritos9 ainda recomendado e muitoem.regado9 inclusi:e como mtodo o/icial9 no controlemicrobiolgico de medicamentos9 cosmticos9 alimentose >guas%


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Microrganismos

Uma :antagem de seu em.rego consiste em .ermitir

mel1or re:itali


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Microrganismos

$ metodologia em.rega meios l;7uidos9 usando-se

dilui8=es seriadas das amostras inoculadas nos mesmos4E3ige a dis.onibilidade de tabelas estat;sticas es.ec;/icas.ara obten8o de resultados a .artir das leituras%

" n?mero de r.licas em.regadas a cada dilui8o .ode:ariar9 sendo mais comuns tabelas constru;das a .artir deG ou O r.licas4 No c>lculo de contaminantes da amostrade:e ser considerado ainda o /ator de dilui8o utili


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Procedimentos0

Pes7uisa de Patognicos Es.ec;/icos

"s .rocedimentos b>sicos so/rem .e7uenas distin8=esentre os com.ndios o/iciais de di/erentes .a;ses9entretanto os as.ectos b>sicos so mantidos%

Meios de Enri7uecimento0

$s tomadas de ensaio recomendadas so da ordem deK gm*9 7uantidade 7ue .ode ser simultaneamente

usada .ara .romo:er o enri7uecimento no seleti:o%

Para .es7uisa de E. colie Salmonella sp.9 em KK m* decaldo lactose e .ara .es7uisa de Staphylococcus aureuse Pseudomonas aeruginosa9 KK m* de case;na-so@a%


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Meios de Enri7uecimento0$ incuba8o de:e ser a GH Z WC9 durante I a IL 1oras%

Para Salmonella sp.9 .rocede-se tambm aoenri7uecimento seleti:o9 tomando-se :olumes de K m*da sus.enso resultante do enri7uecimento no seleti:o9.ara os caldos tetrationato e selenito-cistina9 em :olumesde KK m*9 ento incubados em estu/a9 durante I 1orasa GH Z WC%

Meios de i/erencia8o0

$.s enri7uecimento9 al;7uotas so trans/eridas9 .orre.i7ue9 no geral .or estria ou .or .icada9 .ara meios de

cultura .ara isolamento e de di/erencia8o%


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Es.al1amento nos7uatro 7uadrantes

!e.i7ue .or .icadacom mo:imento em S

,gar semi-slido .ara.ro:as de motilidade


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Meios de i/erencia8o0Staphylococcus aureus%

,gar [aird-ParYer colXnias .retas9 1alo trans.arente0

e uso es.ec;/ico .ara esta/ilococos coagulase-.ositi:os9 este meiocontm cloreto de l;tio e telurito em concentra8=es 7ue inibem a /loraacom.an1ante%

Simultaneamente9 o .iru:ato e a glicina estimulam seleti:amente ocrescimento de esta/ilococos%

e:ido .resen8a de gema de o:o no meio de cultura9 as colXnias deesta/ilococos a.resentam 1alos trans.arentes originados .or li.liseou .rotelise% o meio de cultura o.aco de:ido lecitina4$dicionalmente9 originada a colora8o negra de:ido redu8o do

telurito%


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,gar #ogel-\o1nson colXnias .retas9 1alo amarelo0

Trata-se de meio ade7uado .ara a in:estiga8o de esta/ilococosmanitol-.ositi:os4 Considerando a ca.acidade de redu8o do teluritoe a /ermenta8o do manitol deste gru.o de microrganimos%

$ concentra8o ele:ada de manitol e a adi8o de :ermel1o de /enolcomo indicador de .+ /acilitam a :isuali


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Caractericido com.ro:ada .ela:iragem do indicador de .+ :ermel1o de /enol%



,gar Manitol colXnias amarelas9 1alo amarelo0


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Tanto a /orma8o do .igmento :erde .iocianina como o as.ecto/luorescente das colXnias lu< ultra:ioleta ocorrem neste meio%

#alori:el.oder inibitrio sobre microrganismos distintos de Pseudomonasaeruginosa%

,gar Pseudomonas .ara PiocianinacolXnias es:erdeadas9 com /luorescncia a


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Meios de i/erencia8o0Escherichia coli%

,gar Mac ConYe] colXnias :ermel1o-ti@olo a .?r.ura9com 1alo de .reci.ita8o de bile0

Consiste em meio seleti:o .ara o isolamento de Salmonelas ebactrias coli/ormes9 caracter;stica decorrente de seus com.onentessais biliares e cristal :ioleta9 7ue inibem a /lora 6ram %

$ lactose9 tambm .resente na com.osi8o9 tem sua degrada8o

e:idenciada de:ido .resen8a do indicador de .+ :ermel1o neutro%$s colXnias lactose-negati:as so incolores Salmonella sp. e aslactose-.ositi:as so :ermel1o-:ioleta com 1alo tur:o9 de:ido diminui8o do :alor de .+ e a .reci.ita8o dos >cidos biliaresEscherichia coli9 ou rosadas e mucides Enterobacter9 Klebsiella%


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,gar Eosina-$lico0

Usualmente em.regado na identi/ica8o de Escherichia coli9 estemeio de cultura a.resenta conte?do rico em corantes9 7ue inibe osmicrorganismos 6ram %

En7uanto colXnias de Enterobacter aerogenes se a.resentam com

centro cin


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,gar EndocolXnias rosadas a :ermel1as9 bril1o met>lico0

Meio de cultura .ara identi/ica8o de coli/ormes /ecais9 de:ido ao seuconte?do de sul/ito sdico e /uccina re.rime considera:elmente ocrescimento de bactrias 6ram %

"s coli/ormes 7ue degradam a lactose .roducido4 "

alde;do9 .or sua :e:el9 com re/le3os :erdes%


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" e/eito seleti:o destes meios de cultura baseia-se no seu conte?dode :erde bril1ante9 inibindo a /lora 6ram acom.an1ante4 " e/eito

di/erenciador de:e-se ao /ato de as colXnias de microrganismos/ortemente redutores a.resentarem uma ele:ada .resso de eltronsna .arte central9 7ue diminui na .eri/eria%Portanto9 no centro destas colXnias ocorre redu8o a sul/eto de /erro9ocorrendo a colora8o negra4 $o redor9 a.enas .oss;:el a redu8odos ;ons bismuto a bismuto met>lico9 acarretando o surgimento debril1o met>lico na .eri/eria da colXnia%


Meios de i/erencia8o0Salmonella sp.%

ME)"S E EN!)QUEC)MENT" SE*ET)#" Caldo Selenito-Cistina eCaldo Tetrationato%

ME)"S E )S"*$MENT" ,gar #erde [ril1ante colora8otrans.arente e ,gar Sul/ito de [ismuto colXnia .reta oues:erdeada%


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,gar (ilose-*isina-eso3icolato (* colXn4 #ermel1as9n?cleo negro0

e:ido sua com.osi8o9 e .articularmente gra8as ao conte?doreducido .romo:e a :iragem do indicador de .+ :ermel1ode /enol a amarelo9 indicati:o de outras bactrias%

" tiossul/ato ser:e como substRncia de rea8o e o sal de Ferro )))como indicador da /orma8o de sul/eto de 1idrognio9 :isuali


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,gar (ilose-*isina-eso3icolato (* colXn4 #ermel1as9n?cleo negro0

$s bactrias 7ue descarbo3ilam lisina cada:erina so recon1ecidas.or .romo:erem a colora8o .?r.ura ao redor das colXnias9 de:ido ele:a8o do :alor de .+%

#>rias destas rea8=es .odem ocorrer simultRnea e sucessi:amente9

.ermitindo originar maticidos /ormados%


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,gar Tr;.lice $8ucar-Ferro colora8o a:ermel1ada nasu.er/;cie9 amarela no /undo9 .reci.ita8o de sul/eto de

/erro0Possibilita a in:estiga8o de Proteus9 Hafnia9 Providencia e outrasbactrias 7ue no /ermentam a lactose ou o /a.ida%

$ degrada8o de a8?car com /orma8o de >cido .ode sercom.ro:ada .elo indicador :ermel1o de /enol9 7ue .assa .ara acolora8o amarela9 e a alcalini


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,gar Tr;.lice $8ucar-Ferro colora8o a:ermel1ada nasu.er/;cie9 amarela no /undo9 .reci.ita8o de sul/eto de

/erro0

" :olume de meio de cultura dis.ensado no tubo e a suasolidi/ica8o so de /orma a .ermitir 7ue 1a@a9 no mesmo9uma .or8o inclinada .ara re.i7ue .or estria su.er/icial9e uma coluna na .arte in/erior .ara re.i7ue .or .icada9em .ro/undidade%


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Pro:as $dicionais+a:endo sus.eita de .resen8a destes microrganismos9 ecoerncia com a caracter;stica micromor/olgica9 de:eser seguida a .es7uisa em.regando outras .ro:asbio7u;micas e sorolgicas es.ec;/icas con/orme se /a8anecess>rio%

Ca.acidade de /ermenta8o de di/erentes a8?cares%

Potencial de a.ro:eitamento de sais amoniacais como?nica /onte de nitrognio e de citrato como ?nica /onte de

carbono >gar citrato%

Forma8o de aceto;na rea8o .ositi:a de #oges-ProsYauer9 rea8o de .ero3idase9 coagulase e outros%


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