pesquisa de patÓgenos controle microbiológico de produtos não estéreis

PESQUISA DE PATÓGENOSPESQUISA DE PATÓGENOS

Controle Microbiológico Controle Microbiológico de Produtos não estéreisde Produtos não estéreis

Pesquisa de PatógenosPesquisa de Patógenos

Microrganismos a serem pesquisados devido à sua Microrganismos a serem pesquisados devido à sua presença indesejável nas formulações farmacêuticas, presença indesejável nas formulações farmacêuticas, segundo Resolução 481/99segundo Resolução 481/99:

- Staphylococcus aureus - nas preparações tópicas em Geral. - Pseudomonas aeruginosa - preparações tópicas, principalmente para áea dos olhos. - Escherichia coli - nas preparações orais. -Salmonella sp - Nas preparações orais.

-Obs. Pode ser tb interessante a pesquisa de outras cepas ou grupos microorganismos, tais como coliformes.

Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus

• Staphylococcus aureus– Familia Staphylococcaceae– Coco Gram (+) cacho de uva– Anaeróbios facultativos

• Doenças– Infecções cutâneas– Infecções oportunistas– Das vias urinárias– Sistêmicas potencialmente fatais

Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosa

• Pseudomonas aeruginosa– Bacilo Gram (-)– Anaeróbios facultativos

• Infecta– Aparelho pulmonar– Aparelho urinário– Queimaduras– Infecções Sanguíneas

Escherichia coliEscherichia coli

• Escherichia coli– Familia Enterobacteriaceae– Bacilo Gram (-) flagelado– Anaeróbios facultativos– Fermentadores de açúcares- Lactose (+)

• Doenças– Gastroenterites

Salmonella spSalmonella sp

• Salmonella– Familia Enterobacteriaceae– Bastonetes Gram (-) flagelado– Anaeróbios facultativos– Fermentadores de açúcares

• Sintomas da Salmonelose– Febre– Náuseas– Vômito– Diarréia

Procedimentos:Procedimentos:

-Sofrem pequenas distinções entre os vários compêndios oficiais, entretanto os aspectos básicos são mantidos.

- Segue- se apenas com a citação dos diferentes meios de cultura recomendados.

Sequência para execução das etapas para realizar pesquisa de patógenos em amostras de produtos não

estéreis:

- Amostragem matéria-prima, medicamentos ou cosméticos não estéreis;

- Determinação tomada de ensaio da amostra a ser analisada;

- Enriquecimento não seletivo da amostra;

- Isolamento seletivo utilizando meios cultura seletivos;

- Realização coloração de gram e provas bioquímicas pertinentes.

Meios de EnriquecimentoMeios de Enriquecimento

Tomada de ensaio: 10 g(mL). Enriquecimento não seletivo (100 mL): - Caldo lactose (CL): Escherichia coli e Salmonella sp - Caldo caseína-soja (TSB): Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa.

Ambos incuba: 35 – 37ºC - 24 a 48 horas

Enriquecimento seletivo para Salmonella sp: - 10 mL da suspensão resultante do caldo não seletivo para os caldos tetrationato (100mL) e selenito-cistina (100mL) por 24 horas a 36±1ºC.

Meios de DiferenciaçãoMeios de Diferenciação

- Após enriquecimento seletivo e não-seletivo (Salmonella sp), alíquotas são transferidas, por repique (estria), para meios de cultura para isolamento e diferenciação visando a identificação do microorganismo.


• Ágar Baird Parker

– colônias pretas, halo transparente.

Ágar Vogel-Johnson• colônias pretas, halo amarelo

Ágar Manitol• colônias amarelas, halo amarelo


Ágar Vogel-Johnson

Ágar ManitolMeio de cultura sem inoculação

• Ágar Pseudomonas Base– colônias amareladas a douradas

Placa inoculadaPseudomonas aeruginosa

Placa não-inoculada

• Ágar Cetrimida– colônias esverdeadas com fluorescência



• Ágar Pseudomonas para Fluoresceína (A e C)– colônias claras e amarelas, com fluorescência amarela.

• Ágar Pseudomonas para Piocianina (B e D)– colônias esverdeadas, com fluorescência azul.

• Ágar Mac Conkey– colônias vermelho-tijolo a púrpura – com halo de precipitação de bile


• Ágar Eosina-Azul de metileno (EMB)– colônias vermelho-escuras, brilho metálico


• Ágar Endo– colônias rosadas a vermelho, brilho metálico.

Salmonella spSalmonella sp

• Enriquecimento seletivo– caldo selenito-cistina e tetrationato

• Meio de isolamento

• Ágar Verde Brilhante– colônias transparentes

• Ágar sulfito de bismuto– colônias pretas ou esverdeadas

Teste de promoção de crescimento dos meiosTeste de promoção de crescimento dos meios

• Verificar a capacidade de promoção de crescimento do meio de cultura.

• São utilizados microrganismos testes:

– Para TSB (tryptone soya broth) , TSA (tryptone soya agar) : S.aureus e P. aeruginosa– Para CL (caldo lactose): E.coli e Salmonella– Para Sabouraud: C.albicans

Conforme Portaria 348/97 que determina a todos estabelecimentos produtores de Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes, o cumprimento das Diretrizes estabelecidas no Regulamento Técnico - Manual de Boas Práticas de Fabricação para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes.

TSA (Tryptone Soya Ágar) como meio de crescimento para bactérias, incubação a 35 a 37º C, durante 48h.

SDA (Sabouraud Dextrose Ágar) como meio de crescimento para fungos, incubação a 20-25º C, durante 7 dias.

MÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREISMÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREIS

Inativante + diluente9 mLPote de

creme

10g

TSB CL

10g

SAB TSA CETR

MAN. Mac SALM

10-1

Inativante + diluente90 mL

0,1mL

Inativante + diluente9 mL0,1mL 0,1mL

10g 1mL 1mL

10-2 10-3

E. coli Salmonella

Pseudomonas

StaphyloStaphylococcuscoccus

fungos bactérias

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