estudio microbiolÓgico del aceite extraÍdo a …
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ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DEL ACEITE EXTRAÍDO A PARTIR DE LA
CRISÁLIDA DE Bombyx mori linn HIBRIDO PILAMO 1 PARA SU USO COMO
MATERIA PRIMA EN LA INDUSTRIA COSMÉTICA
Presentado por:
JAIRO ALBERTO AGUIRRE GALVIS
LUZ ADRIANA CABRERA PATIÑO
Director:
GLORIA EDITH GUERRERO
UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGÍAS
ESCUELA DE QUÍMICA
GRUPO DE OLEOQUIMICA
Pereira, 2007
ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DEL ACEITE EXTRAÍDO A PARTIR DE LA
CRISÁLIDA DE Bombyx mori linn HIBRIDO PILAMO 1 PARA SU USO COMO
MATERIA PRIMA EN LA INDUSTRIA COSMÉTICA
Presentado por:
JAIRO ALBERTO AGUIRRE GALVIS
LUZ ADRIANA CABRERA PATIÑO
TRABAJO DE GRADO
Requisito parcial para optar al titulo de tecnólogo químico
Director:
GLORIA EDITH GUERRERO
UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGÍAS
ESCUELA DE QUÍMICA
GRUPO DE OLEOQUIMICA
Pereira, 2007
NOTA DE ACEPTACIÓN DEL TRABAJO DE GRADO
ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DEL ACEITE EXTRAÍDO A PARTIR DE LA
CRISÁLIDA DE Bombyx mori linn HIBRIDO PILAMO 1 PARA SU USO COMO
MATERIA PRIMA EN LA INDUSTRIA COSMÉTICA
Presentado por:
Luz Adriana Cabrera Patiño
Jairo Alberto Aguirre Galvis
Los suscritos directores y jurados del presente trabajo de grado, una vez revisada
la versión escrita y presenciado la sustentación oral decidimos otorgar:
La nota de: __________________________________
Con la connotación de:_________________________
Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy
El director:
Nombre: Gloria Edith Guerrero A.
Jurado:
Nombre: Luz Stella Ramírez
Jurado:
Nombre: Carolina Marín
Dedicatoria
A mis padres, que con su paciencia, entrega y amor hacen posible que culmine
satisfactoriamente este periodo de mi vida, porque la vida misma encierra
dificultades que solo son posibles de sobrellevar con la comprensión de quienes
verdaderamente te aman. Adriana.
A mi Mami Marlen Galvis por tantas molestias en estos años de universidad y en
estos 25 años de vida, la amo con todo mi ser y le agradezco con toda mi alma; a
mis hermanos Jorge Andrés y Alejandro por su paciencia y por su apoyo, han sido
mi inspiración y mi modelo a seguir; a mi universidad, que como academia
permitió mi crecimiento intelectual; y a todos aquellos hombres y mujeres que han
permitido que la ciencia avance y que la humanidad se aleje de falsos dogmas y
se concentre en la verdad: La Ciencia Como Único Camino. Jairo A.
AGRADECIMIENTOS
A mis padres, por crear en mí la conciencia del Ser.
A jairo y familia, por su amistad, su apoyo incondicional e inigualable sentido de
pertenencia, su empeño y paciencia durante este tiempo.
A Adriana y sus papas, por los incontables días de trabajo y dedicación a este
proyecto.
A todos los profesores que contribuyeron a la formación de nuestro intelecto, por
compartir sus conocimientos y su sabiduría.
A Gloria Edith guerrero por sus aportes intelectuales en el campo de la Sericultura,
además de su sincera colaboración y confianza.
Al personal administrativo de la Escuela de Química por proporcionarnos los
recursos necesarios para la ejecución de este proyecto.
A todos aquellos que de una u otra manera estuvieron pendientes de nuestro
bienestar, de nuestros logros y de nuestro grado, gracias!
A Ana Carolina Acuña, quien me apoyo incansablemente para que terminara este
trabajo y me alentó e inspiro en tantos momentos.
A Tomas Rodrigo Medina S. y José Reinaldo Marín B. ya que sin sus consejos me
hubiese retirado de Química y no tendría el orgullo de ser Tecnólogo Químico.
A los grandes hombres que han inspirado mi vida, entre ellos Lavoiser, Dalton,
Gay-Lussac, Avogadro, Erwin Schrödinger, Charles Darwin, Alfred Russell
Wallace, Willi Hennig, Aristarco de Samos, Nicolás Copérnico, Galileo Galilei,
Johannes Kepler, Isaac Newton, Edwin Hubble y Carl Sagan
TABLA DE CONTENIDO Página. i Índice De Tablas i ii Índice De Graficas iii iii Índice De Figuras iv iv Resumen v v Abstract vi 1. Justificación 1 2. Formulación Del Problema 3 3. Objetivos 4 3.1. Objetivo General 4 3.2. Objetivos Específicos. 4 4. Marco de referencia 5 4.1. La Sericultura 5 4.1.1. Gusano de seda Bombyx Mori Linn 6 4.1.1.1. Taxonomia 6 4.1.1.2. Ciclo Biológico 6 4.1.2. Enfermedades Del Gusano De Seda 7 4.1.2.1. Enfermedades Por Hongos. 8 4.1.2.1.1. Muscardina Blanca 8 4.1.2.1.2. Muscardina Verde 9 4.1.2.1.3. Muscardina Negra 9 4.1.2.1.4. Muscardina Amarilla 10 4.1.2.1.5. Aspergillus. 10 4.1.2.2. Enfermedades Por Bacterias. 11 4.1.2.2.1. Desmayo Bacterial. 11 4.1.2.2.2. Septicemia Bacterial. 11 4.1.2.2.3. Enfermedad Intestinal Por Bacteria. 11 4.2. Aplicaciones Alternativas De La Sericultura. 12 4.2.1. Aplicaciones medicas 12 4.2.2. Aplicaciones alimenticias 13
4.2.3. Aplicaciones industriales 13 4.2.3.1 Aplicaciones de las proteínas del hilo de seda. 14
4.3. Aceite de crisálida del gusano de seda Bombyx Mori Linn. 15
4.3.1.
Comparación de la cantidad relativa de aceites grasos presentes en el extracto y los estudios realizados con el aceite de crisálida fresca de la raza china (LH) y el aceite de crisálida de hibrido pilamo 1.
15
4.4 Cosméticos: Aceites y materias primas. 16 4.4.1. Normalización 18
4.5. Análisis Microbiológico como herramienta y su importancia 19
4.5.1. Crecimiento De Microorganismos. 19 4.5.1.1. Curva De Crecimiento. 20 4.5.1.1.1. Fase de latencia 20 4.5.1.1.2. Fase exponencial 21 4.5.1.1.3. Fase estacionaria 21 4.5.1.1.4. Fase de muerte 22 4.5.2. Tipos De Microorganismos. 23 4.5.2.1. Microorganismos Mesofilos. 23 4.5.2.1.1. Microorganismos Patógenos. 24 4.5.2.2. Hongos. 24 4.5.3. Recuento De Células Viables 25 4.5.4. Medios De Cultivo. 26 4.5.5. Métodos De Siembra. 26
4.5.5.1. Siembra Por El Método De Extensión En Placa. 27
4.5.5.2. Siembra Por El Método De Vertido En Placa. 27
4.5.6. Esterilización. 28
4.6. Fundamentos Fisicoquímicos. 28 4.6.1. Extractor Soxhlet. 28
4.6.2. Eliminación De Disolventes A Presión Reducida (Rotavapor). 29
5. Metodología 31 5.1. Muestras 31 5.2. Sacrificio 31
5.3. Conservación del capullo 32
5.4. Secado del capullo 32 5.5. Obtención de la crisálida 32 5.6. Secado de la crisálida 33 5.7. Extracción del aceite 33 5.8. Tratamiento de control microbiológico 33 5.9. Análisis microbiológico 33
5.9.1. Determinación De Microorganismos Mesófilos Aerobios Viables. 34
5.9.2. Determinación De Mohos Y Levaduras. 34
5.9.3. Determinación De Staphylococcus aureus. 35
5.9.4. Determinación De E. coli. 35 5.9.5. Control de medio 35 6 Resultados Y Discusión 36 6.1 Caracterización microbiológica del aceite fresco 37
6.1.1. Recuento de microorganismos mesófilos aerobios viables 37
6.1.2. Recuento de patógenos 38 6.1.2.1. Contaminación por manipulación humana 38 6.1.2.2. Contaminación por contacto con materia fecal 38 6.1.3. Recuento de mohos y levaduras 39
6.2. Caracterización microbiológica del aceite sometido a calentamiento 40
6.2.1. Recuento de microorganismos mesófilos aerobios viables 40
6.2.2. Recuento de patógenos 41 6.2.2.1. Contaminación por manipulación humana 41 6.2.2.2. Contaminación por contacto con materia fecal 41 6.2.3. Recuento de mohos y levaduras 42
6.3. Evaluación de la estabilidad del aceite crudo y del aceite sometido a calentamiento, en un periodo de 8 semanas
43
6.3.1. Estabilidad del aceite crudo 43 6.3.2. Estabilidad del aceite sometido a calentamiento 44
6.3.3. Estabilidad del aceite crudo contra estabilidad del aceite sometido a calentamiento 45
6.3.4. Recuento de patógenos 47 6.3.4.1. Contaminación por manipulación humana 47 6.3.4.2. Contaminación por contacto con materia fecal 48 6.3.5. Recuento de mohos y levaduras 48 7. Conclusiones 51 8. Recomendaciones 52 9. Bibliografía 53 10 Anexos 58 Anexo 1 58 Anexo 2 59 Anexo 3 60 Anexo 4 64 11 Glosario 66
ÍNDICE DE TABLAS
TABLA #
NOMBRE DE LA TABLA PAGINA
1
Comparación de la cantidad relativa de aceites grasos
presentes en el extracto y los estudios realizados con el
aceite de crisálida fresca de la raza china (LH) y el aceite
de crisálida de hibrido pilamo 1.
16
2 Recuento de microorganismos mesófilos aerobios viables
del aceite fresco. 37
3 Recuento de microorganismos patógenos: Staphylococcus
aureus del aceite fresco. 38
4 Recuento de microorganismos patógenos: E. coli del
aceite fresco. 38
5 Recuento de mohos y levaduras del aceite fresco 39
6 Recuento de microorganismos mesófilos aerobios viables
del aceite sometido a calentamiento. 40
7 Recuento de microorganismos patógenos: Staphylococcus
aureus del aceite sometido a calentamiento. 41
8 Recuento de microorganismos patógenos: E. coli del
aceite sometido a calentamiento. 41
9 Recuento de mohos y levaduras del aceite sometido a
calentamiento. 42
10 Estabilidad de mesófilos del aceite crudo 43
11 Estabilidad de mesófilos del aceite sometido a
calentamiento. 44
12 Estabilidad de mesófilos del aceite crudo y del aceite
sometido a calentamiento. 45
13 Estabilidad de Staphylococcus aureus del aceite crudo y
del aceite sometido a calentamiento. 47
14 Estabilidad de E. coli del aceite crudo y del aceite
sometido a calentamiento. 48
15 Estabilidad de mohos y levaduras del aceite crudo y del
aceite sometido a calentamiento. 48
ÍNDICE DE GRAFICAS
GRAFICA # NOMBRE DE LA GRAFICA PAGINA
1 Curva de crecimiento de mesófilos del aceite crudo 44
2 Curva de crecimiento de mesófilos del aceite sometido
a calentamiento.
45
3 Curva de crecimiento de mesófilos del aceite crudo vs
aceite sometido a calentamiento.
46
ÍNDICE DE FIGURAS
FIGURA # NOMBRE DE LA FIGURA PAGINA
1 Curva de crecimiento microbiano 22
2 Siembra por el método de extensión en placa 27
3 Siembra por el método de vertido en placa 28
4 Extractor Soxhlet 29
5 Rotavapor 30
6 Muestra de los capullos 31
7 Proceso de secado en horno WTB-BINDER 32
8 Diluciones del aceite crudo 36
9 Diluciones del aceite sometido a calentamiento 36
10. Recuento de mohos y levaduras del aceite fresco
dilución 10-1 39
11. Recuento de mohos y levaduras del aceite fresco
dilución 10 -2 42
12. Tinciones de Gram. seleccionadas 47
13. Comparación de las siembras de mohos y levaduras
en el seguimiento microbiológico de ocho semanas 50
RESUMEN
Se realizó el estudio microbiológico del aceite de crisálida de Bombyx mori linn
Hibrido Pilamo 1. El aceite se extrajo por la técnica de Soxhlet conservando una
relación muestra –solvente 1/10. El aceite obtenido se dividió en dos fracciones, a
una de las cuales se le realizó un tratamiento de calentamiento y la otra se
conservó a temperatura ambiente para un posterior seguimiento. A las dos
fracciones se les realizó los análisis microbiológicos de rutina exigidos por la
Norma Técnica Colombiana NTC 4833 para su uso como materia prima de base
oleosa para productos cosméticos que incluyen Mesófilos Aerobios Viables,
Hongos y levaduras, Staphylococcus aureus y Escherichia coli. Según los
resultados el aceite conservado a temperatura ambiente no cumple con la
normatividad vigente por superar el recuento de mesófilos y el proceso de
calentamiento incrementó la multiplicación de microorganismos Mesófilos aerobios
viables y de hongos.
ABSTRACT
It’s been studied the oil extracted from a Bombyx mori linn chrysalides, pilamo 1
hybrid. The extraction method used was the soxhlet technique with a ratio 1/10
sample-solvent. The extracted oil was divided in two fractions, one of which was
given a warming treatment while the other one was kept at environmental
conditions for a posterior study. Microbiological analysis, which were obtained by
the Colombian Technical Standard NTC 4833 for use as a primal probe for the oil
base to cosmetical products including mesophyll, fungi and yeast, Staphylococcus
aureus and Escherichia coli were given to the fractions. According to the results,
the oil that was kept at environmental conditions doesn’t match the standard due to
a superior account of mesophile and the warming process increment the cell
multiplication of microorganism such as mesophyll and fungi.
1. JUSTIFICACIÓN
En el año de 1868 se inicia en Colombia el cultivo de la morera cuando se
siembran los primeros acodos de este arbusto en la zona de Cartago. En el año de
1924 el italiano Francesco Sartori determina que las condiciones climáticas de
algunas zonas de Colombia son óptimas para el cultivo de morera y la cría de
gusano de seda, especialmente entre los 1000-2000 metros de altura sobre el
nivel del mar por contar con temperaturas no mayores a 27 ºC, (1). De esto se
deduce que Colombia tiene un potencial excelente e infinito para el desarrollo de
la industria de la sericultura en el mundo, basado en las tres ventajas siguientes:
Condiciones agro-climáticas favorables, condiciones socioeconómicas y
disponibilidad de recursos genéticos superiores.
En el año de 1971 la Federación Nacional de Cafeteros observa el potencial de
este cultivo y lo propone como medio alternativo para las familias cafeteras, de
esta forma se aprovecharían las excelentes condiciones del suelo cafetero y se
masifica el cultivo y la cría del gusano de seda,(2).
Hasta la fecha la sericultura tiene un gran impacto social en Colombia, en los
últimos años se ha convertido en la herramienta de subsistencia para gran
cantidad de familias campesinas y desplazados que por la crisis no han tenido
ingresos con sus otros cultivos. Además Colombia coopera con los países andinos
suministrando los huevos híbridos de gusano de seda que requieran estos países,
esto se hace a través del banco de germoplasma que maneja y sostiene La
Universidad Tecnológica de Pereira, mediante convenio con la red andina de la
seda en noviembre de 2004, (3).
La sericultura en Colombia presenta dificultades ya que el costo del hilo nacional
no compite con el costo del hilo internacional y en parte esto se debe a que en
Colombia no se aprovecha ningún subproducto de este proceso tal como lo hacen
en países como China, Italia y Argentina donde se produce la sericina con fines
cosméticos, por lo cual se debe buscar el aprovechamiento integral con el fin de
aumentar la competitividad del producto nacional en el mercado internacional, (2).
En el grupo de Oleoquímica de la Universidad Tecnológica de Pereira se han
realizado estudios para aprovechar las proteínas (9) y el aceite de la crisálida del
gusano de seda (4), (5), (6), (8); pero se ha encontrado que el aceite no tiene una
buena estabilidad por posibles causas microbiológicas (6), (7). Es por esto que se
requiere hacer un control permanente de la calidad del aceite tanto en sus
propiedades físico-químicos como microbiológicos para establecer si cumple con
la normatividad vigente para insumos cosméticos. Por esta razón se plantea el
presente estudio con la finalidad de implementar el análisis microbiológico exigido
a aceites de uso cosmético según la norma NTC 4833, (32). Y evaluar el proceso
de calentamiento como alternativa para mantener una mejor calidad del aceite.
2. FORMULACION DEL PROBLEMA
¿Cumple el aceite de la crisálida de gusano de seda obtenido como producto
primario con la Norma Técnica Colombiana NTC 4833, para su uso como materia
prima en la industria cosmética?
3. OBJETIVOS
3.1. OBJETIVO GENERAL
Evaluar la carga microbiológica del aceite fresco y del aceite sometido a
calentamiento, extraído de crisálidas de Bombyx mori linn Híbrido Pilamo 1, con el
fin de determinar si se encuentra dentro de los parámetros máximos permitidos
por la normatividad vigente y la industria cosmética Nacional.
3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
3.2.1. Obtener y caracterizar microbiológicamente el aceite de las crisálidas recién
sacrificadas de Bombyx mori linn, hibrido Pilamo 1,
3.2.2. Evaluar la estabilidad del aceite fresco y el aceite sometido a calentamiento
mediante el trazo de la curva de crecimiento microbiano, realizando un
seguimiento por un periodo de 2 meses, evaluando cada 15 días,
3.2.3. Comparar los datos experimentales con la norma técnica colombiana NTC
4833 y determinar si el aceite crudo y el aceite sometido a calentamiento,
cumple los parámetros microbiológicos máximos requeridos para su uso
como base oleosa de productos cosméticos.
4. MARCO DE REFERENCIA 4.1. LA SERICULTURA
La sericultura es la combinación de los cuidados del hombre y el trabajo de un
gusano poseedor de la invaluable capacidad para producir, con sus glándulas
salivosas, miles de metros del finísimo hilo, (3). El insecto se caracteriza por
elaborar una hebra única, muy requerida por la industria textil, (10)
El ciclo productivo de la sericultura comienza con la producción de la seda cruda a
través de la crianza de gusanos de seda, conocida en China desde hace más de
5.000 años, se extendió por Asia, y durante el siglo XI a Europa. Allí llevaron
algunos huevos y semillas de la planta de mora y comenzaron a criar gusanos de
seda. Así llegó más tarde al sur de los Estado Unidos en los tiempos coloniales,
(10).
Actualmente, China es el principal productor de seda natural. En América, Brasil
ocupa un lugar preponderante como productor mundial.
Como cadena productiva abarca: cultivo de morera, cría del gusano de seda,
producción y transformación del capullo en hilos y tejidos para su posterior
comercialización.
Los Capullos de seda, se pueden comercializar a valores que oscilan de acuerdo
con su calidad, cotizándose en dólares por kilogramo. Lo óptimo es producir hilo
de seda a partir del capullo, que se puede vender por lo menos a tres veces el
valor del capullo por kilogramo. Para ello es necesario contar con una hiladora,
máquina para hilar a pequeña escala, que se puede fabricar a un costo
relativamente bajo.
Como la demanda mundial es muy superior a la oferta global, la cría de los
gusanos de seda y la comercialización de capullos o hilos de seda natural, se
perfila como una actividad promisoria para pequeños cultivadores en el mundo. El
secreto es lograr un producto de alta calidad y competitivo con los grandes
productores, (10).
4.1.1. Gusano de Seda Bombyx mori linn
4.1.1.1 Taxonomia
El gusano de seda tiene por nombre científico Bombyx mori linn, es un insecto
perteneciente al orden de los Lepidopteros (Mariposas) y de la familia Bombicidae,
en la cual todos sus integrantes se caracterizan por formar un capullo de seda (7).
El género que agrupa a las diferentes mariposas de Seda es Bombyx, y la especie
comúnmente domesticada en todo el mundo es la mori linn. Existen 4 subespecies
y en el caso de este estudio se usa un hibrido, denominado “hibrido pilamo 1”,
(11).
4.1.1.2 Ciclo biológico
Es un insecto monófago, ya que se alimenta exclusivamente de la hoja de la
morera durante su etapa larval, es holometábolo y presenta una metamorfosis
completa desde huevo hasta la etapa de adulto, (10). El ciclo evolutivo del gusano
de seda se cumple en aproximadamente dos meses, (12).
Como su alimentación es con hojas de la morera, el cultivo y disponibilidad o
producción de esta planta está estrechamente vinculada a la actividad, (10).
Durante los 50 a 55 días del ciclo de su vida se presentan cuatro etapas bien
definidas: Huevo, larva, pupa o crisálida y polilla (mariposa), (12).
Huevo: esta cubierto por un Corion, el cual determina su forma, su color se
establece por los colores tanto del Corion como las de las membranas vitelinas
que se transmite de la polilla hembra y el color de la serosa la cual se forma
después de la fecundación, (10).
Larva: esta formada por una cabeza relativamente grande, cubierta por quitina, la
cual es un protector duro de color negro, también posee tórax y abdomen, que
esta cubierta por una cutícula, la cual es mas flexible y tiene en su cuerpo setas o
pelos, los que le dan una apariencia de oruga peluda, (10).
Pupa o Crisálida: este estado comienza con la formación del capullo
caracterizado por estar constituido por un hilo continuo, el gusano realiza su
metamorfosis pasando del estado de larva al de crisálida de forma oval, un poco
alargada y de color primeramente amarillo claro, cuando avanza su edad tiende a
tomar un color oscuro. Exteriormente deja entrever los ojos, así como las alas de
la futura mariposa, la pupa es incapaz de comer alimento y aparece en estado
inquieto o inmóvil, sin embargo, esta etapa es muy importante fisiológicamente,
porque es una etapa transitoria durante la cual se definen cambios en la forma del
insecto. Durante este periodo de actividad biológica el cuerpo larval y sus órganos
internos experimentan un completo cambio y asumen una nueva forma de estado
adulto o polilla, (10).
Polilla: Es el estado de mariposa, es incapaz de volar como consecuencia de la
domesticación, la duración de la polilla es de 3 a 5 días a temperatura ambiente y
solamente se dedica a copular para producir huevos, (12).
4.1.2. Enfermedades del Gusano de Seda
Es importante conocer las enfermedades que atacan al gusano de Seda para
tomar medidas preventivas antes, durante y después de las crías, el control, de
plagas y enfermedades de gusano de seda juega un papel importante en el
resultado de la cría tanto en calidad como en cantidad de capullos, por lo tanto es
necesario hacer énfasis en ellas, (12).
Entre los patógenos que causan las enfermedades infecciosas en el gusano se
encuentran: hongos, bacterias, virus, y protozoarios.
Las enfermedades causadas por hongos son: Muscardina blanca, Muscardina
amarilla, Muscardina verde, Muscardina negra, Muscardina roja, Aspergillus, por
bacterias: Desmayo bacterial, Septicemia, Bacteria del órgano digestivo y por
virus: Virus Poliedrosis Nuclear (VPN), Virus poliedrosis citoplasmática (VPC) y
Virus de flacherie. Además presenta una enfermedad causada por protozoarios
conocida como pebrina, (13).
4.1.2.1. Enfermedades causadas por hongos
4.1.2.1.1. Muscardina blanca.
El agente causal es el hongo Beuveria bassiana (Bals) el cual forma conidias que
aparecen de un color yeso en toda la población, pero con variaciones de color de
individuo a individuo. El ciclo de vida de espora a espora dura 10 días cuando el
tiempo esta frío, y cerca de 4 días en verano. La transmisión de una generación a
otra puede ocurrir cuando la conidia contamina la superficie externa de los huevos
e infectan la larva que sale de estos huevos.
La infección, tiene lugar a través de la piel, aunque también puede ocurrir a través
de la abertura traqueal. Usualmente la infección ocurre por una penetración directa
del integumento por la infección del tubo germinativo de la conidia del hongo. Los
hongos continúan su desarrollo una vez han entrado en la cavidad del cuerpo. La
sangre comienza a escasearse, las células son destruidas y la acidez de ellas
comienza a neutralizarse. Finalmente la circulación se detiene y el insecto muere,
(13).
4.1.2.1.2. Muscardina Verde.
Lo que es llamado como Muscardina verde en Europa es conocida como
Muscardina negra en Japón. El agente causal es el hongo: Metarrhizium
anisopliae (Match), es llamada verde debido al color verde oscuro de las esporas.
La infección tiene lugar en la cobertura por la germinación de las hifas y esporas.
Después de que el hongo entra en la cavidad del cuerpo se desarrolla en la
sangre y no penetra el tejido después de que el gusano de seda no ha muerto.
Esta enfermedad tiene un largo periodo (11-13 días) de incubación, que
comprende el periodo entre la infección y aparición de los síntomas inducidos por
patógenos. Afecta el tercer instar, especialmente en la tercera muda,
considerando un largo periodo de incubación, la infección de la enfermedad se
supone que tiene lugar durante la primera edad, (13).
4.1.2.1.3. Muscardina negra.
Esta enfermedad prevalece en el Japón; es causada por el hongo: Spicaria
prasina (MAUBL). Las conidias son verde brillante, células simples y ovales.
Germinan en 15 a 20 horas por medio de un tubo germinativo, en temperaturas
óptimas de 22º-23º C. Las hifas germinativas forman el micelio e invaden el cuerpo
líquido de los gusanos de seda y forman esporas cilíndricas.
Las larvas jóvenes son más susceptibles a la Muscardina negra, que las larvas
maduras. Las esporas de este hongo tienen un largo periodo de incubación, que
comprende el periodo entre la adherencia de las conidias, su germinación y la baja
formación de esporas cilíndricas después de la entrada del micelio a la hemolinfa.
Esta enfermedad afecta especialmente al tercer instar larval, particularmente en la
tercera muda, (13).
4.1.2.1.4. Muscardina amarilla.
El agente causal es el hongo: Isaria Farinosa. Las conidias tienen forma esférica
de color amarillo. La germinación se hace por medio de un tubo germinativo, en
los gusanos muertos el micelio produce muchos conidioforos, los cuales se reúnen
en manojos llamados sinemas. La humedad óptima para la germinación de la
espora es mayor a 93% y no germina bien con menos de 81% de humedad. El
periodo de incubación en gusanos jóvenes es de 5 a 7 días y de 7 a 10 días en los
gusanos adultos, (13).
4.1.2.1.5. Aspergillus.
Diferentes especies de hongos del genero Aspergillus causan esta enfermedad,
de las cuales las siguientes especies son las mas importantes: Aspergillus flavae
Link, Aspergillus oryzae Wehmer y Aspergillus ochraceus Wilm.
El ciclo de vida de Aspergillus tiene tres etapas de desarrollo; conidia, hifa
vegetativa e hifa aérea. Las conidias son esféricas. Para la germinación de las
conidias se requiere una temperatura alta de 30-35ºC. Entre todos los hongos
estas conidias son las más resistentes a factores ambientales, sobreviviendo
hasta un año o más.
El hongo ataca principalmente los gusanos jóvenes, pero son lo suficientemente
patogénicos en larvas adultas. Las larvas jóvenes afectadas exhiben un cuerpo
tenso y lustroso y finalmente mueren. Algunos presentan manchas pero
generalmente no las desarrollan. Las especies de Aspergillus no forman esporas
cilíndricas en la hemolinfa, la propagación de los patógenos esta limitada al área
de penetración. Si el gusano muere, presenta endurecimiento solo en el área por
donde el hongo penetró, (13).
4.1.2.2. Enfermedades por Bacterias
4.1.2.2.1. Desmayo Bacterial.
El agente causal es la bacteria Bacillus thuringiensis, la cual produce una
sustancia toxica que infecta varios insectos del campo causando desmayo y
parálisis en muy corto tiempo, por esto, se utiliza para el control microbiológico de
otros insectos.
La infección de esta enfermedad ocurre por vía oral. Cuando el cristal toxico es
ingerido por el gusano, este se disuelve en la parte alcalina del líquido digestivo y
se absorbe a través de la pared del intestino. El efecto es en el sistema nervioso,
causando desmayo y parálisis, (13).
4.1.2.2.2. Septicemia Bacterial.
Es causada por la penetración y multiplicación de bacterias corrosivas en la
hemolinfa del gusano de seda. Las principales bacterias patogénicas son: Seratia
spp, Pseudomonas spp, Aeromonas spp y Streptococcus spp.
La infección principal de Septicemia se hace a través de heridas o espiráculos en
la piel del gusano y se multiplican en la hemolinfa del insecto. Además, cuando el
tejido del intestino medio esta herido por otras enfermedades, las bacterias
pueden penetrar a la hemolinfa causando la septicemia, (13).
4.1.2.2.3. Enfermedad intestinal por bacteria.
La causa de esta enfermedad no es solamente por bacterias, sino por otros
factores que hacen los gusanos no saludables. Las bacterias que han sido
identificadas son algunas de Enterococcus spp. Estas bacterias son resistentes al
jugo digestivo del gusano, y se multiplican en el intestino medio cuando el gusano
no ha tenido buenas condiciones nutricionales y ambientales, (14).
4.2. APLICACIONES ALTERNATIVAS DE LA SERICULTURA
4.2.1. Aplicaciones médicas.
El gusano de seda es una excelente alternativa para el control de enfermedades
como el control de la diabetes, el medico Kang Sun Ryu del Instituto Nacional de
Investigación en Sericultura y Entomología (NSERI) de Corea, desarrollo en 1995
una medicina para el control de dicha enfermedad.
Este tipo de medicina se podría denominar natural realizada a partir del proceso
de liofilización del gusano mostrando ser el mas efectivo en el control de la acidez
(sustancia producida normalmente por el gusano) ya que con el uso de sustancias
químicas para este proceso se dificulta su consumo final en humanos, (15).
Los primeros experimentos fueron hechos en ratones, a algunos se les dio a
comer muchos carbohidratos desarrollando así alto contenido de azúcar en su
sangre, usando para su tratamiento gusano de seda en polvo, a partir de la cuarta
semana, el contenido de azúcar en la sangre comenzó a caer agudamente, en
diez semanas llegaron al nivel normal de los ratones que no les dieron
carbohidratos desde el comienzo. Posteriormente se hicieron pruebas en los
pacientes de diabetes en el hospital de la universidad de Kunai en Corea, estas
pruebas fueron un éxito, (15).
Todo esto muestra que el gusano de seda en polvo tiene una tendencia para
reducir rápidamente los niveles de glucosa en la sangre por su alto contenido de la
molécula 1-deoxinajirimicina siendo desde entonces reconocido como
medicamento, (15).
Así mismo, el gusano de seda a partir de una enzima que produce en su intestino
y posteriormente procesado a través de la fermentación es usado para pacientes
con arterias coronarias obstruidas previniendo los ataques al corazón y también
para remover las placas que se encuentran en las arterias ya que reduce los
coágulos formados, (16).
También se investiga en este campo, para producir vacunas, hormonas y otras
moléculas útiles.
4.2.2. Aplicaciones alimenticias
Además de la morera, la pupa del gusano seco es consumida normalmente en
países como alimento para humanos y es vendida en los supermercados en forma
enlatada como cualquier otro producto. La pupa contiene buenas cantidades de
humedad, quitina, proteína soluble en agua, carbohidratos, aminoácidos,
minerales (potasio, sodio, calcio, fósforo) y vitamina C. Los antiguos griegos y
romanos también usaron la pupa seca y pulverizada en la preparación de pan y
tortas. En China los niños prefieren la pupa como alimento a la chocolatina. Los
indios nativos de América, usan las pupas deshidratantes en harinas y gomas de
mascar, todo lo anterior basado en los excelentes contenidos nutricionales de la
pupa, (11).
4.2.3. Aplicaciones industriales
La madera producida por los frondosos árboles de morera es utilizada en algunos
países en labores normales de carpintería, mientras que en otros son famosas las
raquetas de tenis hechas con madera de morera. Otro uso importante que se le
puede dar a las ramas de morera en las áreas rurales es para el consumo de
éstas como leña, dado el importante volumen que de ésta se puede obtener por
hectárea, ayudando así a la conservación del medio ambiente, (11).
En la industria, la seda es utilizada para los tejidos artesanales, tejidos
industriales, cintas para maquinas de escribir y computadores, y hasta para sutura
de alta cirugía, (11).
4.2.3.1. Aplicaciones de las proteínas del hilo de seda.
El uso de la seda en cosmetología fue reportado por primera vez en 1935, cuando
una seda atomizada fue introducida en Inglaterra. Esta seda pulverizada fue
recomendada para ser usada en todas las cremas de cosmetología, lociones,
maquillajes, polvos, preparaciones para baños y preparaciones farmacéuticas.
Posteriormente muchas patentes fueron registradas para relacionar la fabricación
de productos útiles, utilizando la seda en cosmetología, el primero de estos
productos fue producido por Lawson & Verdiere quien manufacturo un polvo
impalpable de seda que fue incorporado en sus cosméticos, (17).
La seda en polvo también ha sido usada en la producción de champú para
dispersar los surfactantes. Tiene también propiedades importantes como un
aditivo natural así como proteínas solubles de seda que ofrecen grandes
beneficios, (17).
Los aminoácidos de seda son obtenidos por medio de un proceso de hidrolización
de la fibroína, mezclándolos con aminoácidos libres dipéptidos y tripéptidos. Los
aminoácidos de seda son solubles en agua y forman soluciones claras. Ello
demuestra la buena compatibilidad con las soluciones alcohólicas y son
compatibles con anfótericos aniónicos y catiónicos lo cual hace que se pueda
incorporar fácilmente en todos los tipos de formulaciones cosméticas y de aseo
personal. Los aminoácidos de seda tienen unas excelentes condiciones
humectantes comparadas con los humectantes convencionales como la glicerina.
Esta es una propiedad valiosa para usar en productos para el cabello donde se
necesita flexibilidad y suavidad al tacto. El bajo peso molecular que poseen los
aminoácidos de seda permiten que estos penetren en las delgadas fibras de los
cabellos suplementando los aminoácidos libres dentro de la corteza, (17).
Además, de los beneficios socio-económicos que ofrece a los sericultores, en su
mayoría campesinos, el gusano de seda incrementa la investigación en el campo
farmacéutico y en la industria cosmética.
4.3. ACEITE DE CRISALIDA DEL GUSANO DE SEDA Bombyx Mori Linn
Es una fuente de ácidos grasos esenciales y esteroles; sustancias que tienen
aplicación cosmética y dermatológica. También es una fuente potencial de ácido
linoleico, el cual se destaca por formar bloques de construcción básicos de los
cuerpos grasos, membranas biológicas y prostaglandinas, (7).
La vida útil del aceite de crisálida del gusano de seda esta estrechamente
relacionada con la sanidad de la pupa, es decir con el buen estado que ella
presente al momento de su recolección. Algunos de los factores que se deben
controlar antes y durante la obtención del aceite son: microorganismos, oxigeno
que penetra en la muestra, la luz solar, la humedad y otros factores ambientales,
(7).
4.3.1. ÁCIDOS GRASOS PRESENTES EN EL ACEITE DE CRISÁLIDA DE Bombyx mori linn.
El aceite de crisálida es rico en ácidos grasos saturados como el palmítico y el
esteárico, y ácidos grasos insaturados como el oleico y poliinsaturados como el
linoléico el linolénico y araquídico. Estos tres ácidos poliinsaturados no pueden ser
sintetizados por los animales superiores (incluido el hombre), y como su función
biológica es fundamental, deben ser suministrados en la dieta. De ahí que estos
ácidos sean llamados ácidos grasos esenciales, (18).
Aceites grasos
Aceite de crisálida fresca
de Bombyx mori linn
raza japonesa (k05 x
k30), (4).
Aceite de crisálida
fresca de Bombyx
mori linn raza
china(LH), (8)
Aceite de crisálida
(subproducto) de
Bombyx mori linn
híbrido Pilamo 1, (8)
Palmitoléico 0.84 0.78 ____
Palmítico 22.35 19.97 23.7
Linoléico 9.66 9.66 7.0
Linolénico 56.24 56.70 28
Esteárico 9.18 9.93 7.8
Araquídico 0.83 1.23 ____
Béhenico 0.44 0.52 ____
Oleico _____ _____ 31.6
Tabla 1. Comparación de la cantidad relativa de aceites grasos presentes en el extracto y los
estudios realizados con el aceite de crisálida fresca de la raza japonesa (k05 x k30), (4) raza china
(LH), (8) y el aceite de crisálida del híbrido Pilamo 1, (8).
4.4. COSMÉTICOS: ACEITES Y MATERIAS PRIMAS
Las cremas o leches cosméticas se componen principalmente de agua y grasa,
además de otros aditivos que proporcionan a la crema la textura, color u olor que
interesan desde el punto de vista comercial, así como estabilizantes,
antioxidantes, conservantes, perfumes y los principios activos que determinan la
finalidad de la crema.
Emulgentes: para unir grasa y líquidos
Antioxidantes: impiden el deterioro en contacto con el aire
Gelificantes: dan textura y cremosidad
Conservantes: impiden el deterioro temporal
Bactericidas: desinfectan el medio para que no se formen hongos, etc, (19).
Existen en la naturaleza diversas fuentes vegetales y animales de aceites
enriquecidos en ácido oleico, linoleico y linolénico de gran importancia en
cosmética, tal es el caso del aceite de oliva, de maíz, de palmiste, de castor y de
germen de trigo. (20).
Estos aceites son vehículos portadores de gran variedad de antioxidantes, los
antioxidantes son compuestos importantes porque poseen la capacidad de
proteger a las células contra el daño oxidativo, el cual provoca el envejecimiento y
las enfermedades crónico-degenerativas, tales como el cáncer, enfermedades
cardiovasculares y diabetes, su efecto consiste en oxidarse antes que otros
compuestos, además permiten la conservación de los cosméticos, debido a que
son utilizados como aditivos.
Existen un gran número de compuestos antioxidantes de origen tanto sintético
como natural, pero son estos últimos los que se prefieren. Ejemplo de dichos
antioxidantes son las vitaminas C y E que están siendo utilizadas desde hace años
para combatir los efectos de los radicales libres que agreden la piel, (21).
Cuando se somete a la epidermis a exposiciones repetidas a estos y otros aditivos
se pueden producir alteraciones de los procesos y funciones biológicas de la piel.
Es tan importante conocer las propiedades de las sustancias activas como las
características del vehículo o sustancias excipientes que les acompañan en la
composición del producto.
Debido a esto las materias primas para la elaboración de cosméticos deben ser
cuidadosamente estudiadas y caracterizadas en todos sus diversos componentes,
también ya que todo producto de manufactura cosmética debe cumplir con la INCI
(Nomenclatura Internacional de Ingredientes en la Cosmética). Esta declaración
de ingredientes debe ser completa y exhaustiva de tal forma que en ella estén
incluidos todos los componentes específicos hasta de las materias primas. Se
pretende con ello que el consumidor tenga así una mínima orientación ya que
cuantas más sustancias naturales estén enumeradas en los primeros lugares, más
natural será el producto, (19).
La alteración que se presenta más comúnmente en los aceites y grasas es la
llamada rancidez, la cual estropea el olor y el color natural del aceite. Algunas
causas químicas y biológicas que causan la rancidez son: el efecto del aire y la
luz, principalmente la humedad que en presencia de oxigeno actúa sobre los
ácidos grasos insaturados de la molécula produciendo un olor desagradable
debido a la formación de peróxidos.
La presencia de metales también acelera este proceso, se recomienda envasar el
aceite en frascos ámbares previamente esterilizados. Los peróxidos se
descomponen formando ácidos libres de menor peso molecular, razón por la cual
las sustancias en descomposición son ácidas. Por oxidación de los ácidos grasos
saturados se forman metilcetonas y por oxidación de los ácidos grasos no
saturados se obtienen aldehídos, (7). La calidad del aceite se ve cuantificado por
la cantidad de ácidos grasos liberados.
4.4.1. NORMALIZACIÓN
En Colombia los aceites son normalizados por el Instituto Técnico Colombiano
(ICONTEC) e instituciones legisladoras como el INVIMA, encargadas de garantizar
el buen funcionamiento, la calidad de medicamentos y alimentos, a través del
ministerio de salud se preocupan por la reglamentación de los regimenes
sanitarios de control de calidad y de vigilancia de los productos cosméticos.
Entre algunos de los aceites de uso cosmético que se utilizan por su alto
contenido de antioxidantes y que se encuentran normalizados en Colombia
encontramos:
Aceite de Castor (NTC 1529), (22), Aceite de Germen de Trigo (NTC 3758), (23),
Aceite de Oliva (NTC 258), (24), Aceite de Coco (NTC 252), (25), Aceite de
Babasu (NTC 263), (26), Aceite crudo de algodón (NTC 257), (27), Aceite de
Ajonjolí (NTC 256), (28) y Aceite de Palma (NTC 262), (29), entre otros.
4.5. ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO COMO HERRAMIENTA Y SU IMPORTANCIA
La microbiología trata de las células vivas y su funcionamiento. Estudia los
microorganismos, especialmente las bacterias, un amplio grupo de células con
una enorme importancia básica y aplicada. Trata de la diversidad microbiana y de
la evolución, de cómo surgieron las diferentes clases de microorganismos y por
qué. Analiza lo que los microorganismos hacen en el mundo en general, en la
sociedad humana, en el cuerpo humano, y en los cuerpos de animales y plantas,
(30)
Uno de los objetivos de los microbiólogos es comprender como trabajan los
microorganismos y, a través de ese conocimiento, diseñar modos mediante los
cuales su efecto beneficioso pueda ser aumentado y el perjudicial reducido, (30).
4.5.1. CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS
El crecimiento es un componente esencial de la función microbiana, ya que en la
naturaleza cualquier célula tiene un periodo de vida finito y la especie se mantiene
como resultado del crecimiento continuo de la población y es necesario
controlarlo, (30).
Durante el ciclo de división celular, todos los componentes estructurales de la
célula se duplican. El tiempo de generación de un microorganismo determinado
también es función del medio de cultivo utilizado y de las condiciones de
incubación empleadas.
El crecimiento de poblaciones, puede ser exponencial, este crecimiento se
caracteriza porque la velocidad del aumento de número de células es inicialmente
lenta, pero incrementa cada vez más con el tiempo. Esto determina que en las
últimas etapas el aumento de número de células sea realmente explosivo.
Una consecuencia practica del crecimiento exponencial es que cuando un
producto no estéril, como la leche, se deja en condiciones que permiten el
crecimiento microbiano unas cuantas horas, durante las primeras fases del
crecimiento exponencial el efecto no es muy relevante, mientras que si se deja
durante el mismo tiempo en fase exponencial tardía, el resultado es desastroso
para el producto, (30).
4.5.1.1. CURVA DE CRECIMIENTO
Para representar este crecimiento se realiza una curva de crecimiento que se
divide en varias fases: fase de latencia, fase exponencial, fase estacionaria y fase
de muerte, (Ver figura 1).
4.5.1.1.1. FASE DE LATENCIA
Cuando se inocula una población microbiana en un medio fresco, por lo general el
crecimiento no comienza inmediatamente sino tan solo tras un periodo de tiempo
que constituye la fase de latencia, la cual puede ser breve o larga dependiendo de
la procedencia del cultivo y de las condiciones de crecimiento. Si un cultivo
exponencial se inocula en el mismo medio y en las mismas condiciones de cultivo,
no se observa un retraso y el crecimiento exponencial se inicia inmediatamente.
Sin embargo, si el inoculo se toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se
inocula en el mismo medio, se observa normalmente un retraso aunque todas las
células del inoculo sean viables, es decir, sean capaces de reproducirse. Esto se
debe con frecuencia a que las células carecen de varios componentes esenciales
para dividirse y se requiere tiempo para su síntesis. También se observa un
retraso cuando las células del inoculo han sido dañadas parcialmente con calor,
radiaciones o compuestos tóxicos, debido al tiempo requerido para recuperarse y
reparar los daños. La fase de latencia también ocurre cuando se transfiere una
población de un medio rico a otro medio mas pobre. Para que ocurra crecimiento
en un medio de cultivo particular, las células deben tener un equipo enzimático
completo que permita la síntesis de los metabolitos esenciales ausentes en el
medio. Al pasar a otro medio, se necesita tiempo para la síntesis de las nuevas
enzimas, (30).
4.5.1.1.2. FASE EXPONENCIAL
Es una consecuencia del hecho de que cada célula se divide para formar dos,
cada una de las cuales va a formar otras dos y así sucesivamente.
La mayoría de los microorganismos unicelulares crecen exponencialmente pero
las velocidades del crecimiento exponencial son muy variables. La velocidad de
crecimiento esta influenciada por las condiciones ambientales (temperatura,
composición del medio de cultivo. etc.). Así como por las características genéticas
del organismo. Por lo general, los microorganismos procarióticos crecen más
rápido que los eucarióticos, y los eucariotas de pequeño tamaño lo hacen más
rápido que los de mayor tamaño, (30).
4.5.1.1.3. FASE ESTACIONARIA
En un sistema de cultivo cerrado, el crecimiento exponencial no se puede
prolongar de modo indefinido. Se puede calcular que una sola bacteria con un
tiempo de generación de 20 minutos produciría en tan solo 48 horas de
crecimiento exponencial continuado una población que pesaría unas 4000 veces
el peso de la Tierra, porque una sola célula bacteriana pesa alrededor de 10ֿ¹²
gramos. Por lo tanto algo debe pasar mucho antes de ese tiempo, que limite el
crecimiento de la población. Generalmente sucede que un nutriente esencial del
medio de cultivo se usa y llega a ser un factor limitante del crecimiento; o se
acumulan en el medio algunos productos de desecho hasta niveles inhibitorios que
hacen que cese el crecimiento exponencial. Frecuentemente, ocurren ambas
cosas. Al producirse esto, la población alcanza la fase estacionaria.
En esta fase no hay aumento ni descenso neto en el número de células. Aunque
no suele haber crecimiento en la fase estacionaria muchas funciones celulares
continúan, como el metabolismo energético y algunos procesos biosintetico. En
algunos casos puede ocurrir un lento crecimiento durante la fase estacionaria;
algunas células de la población crecen, pero otras mueren y los dos procesos se
equilibran de modo que no hay aumento ni disminución en el numero de células
(este fenómeno se conoce como crecimiento críptico).
4.5.1.1.4. FASE DE MUERTE
Si la incubación continúa después de que la población haya alcanzado la fase
estacionaria, las células pueden continuar vivas y metabolitamente activas, pero
también pueden morir. Si ocurre esto ultimo, se dice que la población esta en fase
de muerte, (30).
Figura .1 Curva de Crecimiento Microbiano, (30).
4.5.2. TIPOS DE MICROORGANISMOS
Los microorganismos procarióticos tienen la particularidad de reproducirse a
diferentes temperaturas, de acuerdo a la temperatura a la cual se desarrollen los
podemos clasificar en:
Mesófilos: son los microorganismos que crecen a temperatura ambiente entre 30-
37 ˚C,
Psicrófilos: son los que crecen a temperaturas bajas entre 0-5 ˚C, y
Termófilos: son los que se desarrollan y reproducen a temperaturas mayores de
50 ˚C.
Los microorganismos patógenos como E. coli y S. aureus, se encuentran dentro
de los microorganismos Mesófilos que crecen a temperaturas entre 30-37 ˚C.
4.5.2.1. MICROORGANISMOS MESOFILOS
Se encuentran en casi todos los productos, además son los microorganismos que
se encuentran ampliamente difundidos en el medio ambiente.
Un recuento total de aerobios Mesófilos bajo, no asegura que un producto este
exento de patógenos o de sus toxinas; tampoco un recuento total alto significa,
inevitablemente, presencia de microbiota patógena.
La determinación de mesófilos se utiliza para:
• Verificar la eficacia de los sistemas de limpieza y desinfección y averiguar la
temperatura a que fue preservada la materia prima durante los procesos de
tratamiento industrial, transporte y almacenamiento, (31).
• Hacer una comparación con la norma establecida y decidir si el producto es
apto para uso humano o si la industria de donde proviene el producto cumple
con los requerimientos de calidad, (31).
4.5.2.1.1. MICROORGANISMOS PATÓGENOS
Dentro de las bacterias parasitas se distingue a los patógenos, que son aquellos
que producen enfermedad, morfológicamente los microorganismos tienen
ocurrencia muy variable sin embargo, es muy común encontrar en bacterias las
formas cilíndrica, esférica y espirales.
A las formas esféricas se les denomina cocos, cuando constituyen una especie de
racimos, estafilococos, y cuando adoptan la forma de una cadena, estreptococos;
cuando los cocos adoptan una forma ovalada se les llama cocobacilos. Las
bacterias de conformación cilíndrica reciben el nombre de bacilos, cuando ocurren
en cadena estreptobacilos.
Entre los microorganismos patógenos que se buscan en bases oleosas de
cosméticos se encuentran: Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa y Clostridium Anaerobios Esporoformadores, (32).
4.5.2.2. HONGOS
Los hongos constituyen un grupo diverso de organismos unicelulares o
pluricelulares que se alimentan mediante la absorción directa de nutrientes. Los
alimentos se disuelven mediante enzimas que secretan los hongos; después se
absorben a través de la fina pared de la célula y se distribuyen por difusión simple
en el protoplasma. Junto con las bacterias, los hongos son los causantes de la
putrefacción y descomposición de toda la materia orgánica.
Algunos son parásitos de organismos vivos y producen graves enfermedades en
plantas y animales. Otros han sido benefactores de la humanidad y han sido
cultivados en forma controlada por los humanos, como las levaduras que se usan
ampliamente para producir desde pan hasta biocombustibles; o mohos como el
productor de la penicilina, que fue descubierta por Fleming en 1928 cuando estaba
estudiando cultivos bacterianos de Staphylococcus aureus, él observó que cuando
se contaminaban las placas de cultivo con un hongo microscópico del género
Penicillium (Penicillium notatum) éste inhibía el crecimiento de las bacterias
debido a la producción de una micotoxina por parte del Penicillium, esto se debe a
que este moho forma metabolitos secundarios que actúan como antibióticos
favoreciendo la prevalencia del moho frente a otros microorganismos causando en
estos micotoxicosis, (33).
4.5.3. Recuento de células Viables
En el recuento microscópico directo se cuentan tanto células vivas como muertas.
En muchos casos interesa contar solo las células vivas, con este fin se han
desarrollado métodos de recuento de células viables. Una célula viable se define
como aquella que es capaz de dividirse y dar lugar a una descendencia; y el
método usual para realizar una determinación de células viables se basa en contar
el número de células de la muestra que es capaz de formar colonias sobre un
medio sólido adecuado, (30).
Para realizar el recuento es necesario realizar la dilución de las suspensiones
celulares antes de la siembra en placa, con el fin de obtener el numero apropiado
de colonias, cuando se desconoce el numero de células viables, normalmente se
realiza mas de una dilución. Lo mas frecuente es realizar diluciones decimales de
la muestra. Para hacer una dilución de 10ֿ¹ se mezclan 1 mL de la muestra con 9
mL del diluyente, una dilución de 10ֿ² se puede hacer de modo seriado haciendo
sucesivamente dos diluciones de tipo 10ֿ¹.
El numero de colonias que se obtiene en una determinación de viables no sólo
depende del tamaño del inoculo sino también de lo adecuado que sea el medio de
cultivo y de las condiciones de incubación. Las células depositadas en la placa no
se desarrollaran todas en colonias a la misma velocidad y si se emplea un corto
tiempo de incubación, se obtendrán menos colonias de las posibles. La
determinación de viables puede estar sujeta a grandes errores y, si se desean
recuentos precisos, han de hacerse con cuidado y hacer las placas de las
diluciones por duplicado o triplicado según se dé el caso. El recuento de viables se
expresa a menudo como unidades formadoras de colonias (UFC) obtenidas, más
que como numero de células viables (ya que una unidad formadora de colonia
pudo originarse a partir de una o mas células iniciales), (30).
Existen varios factores que afectan el recuento en los productos a analizar, entre
estos se tienen: el tratamiento de la muestra, el método de la dilución, la
naturaleza del diluyente, medios de cultivo utilizados, temperatura de los medios,
antagonistas presentes en la muestra, técnica de siembra utilizada, temperatura
de incubación, tiempo de incubación, colonias que difunden, numero de colonias y
el método de lectura, (31).
4.5.4. MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo son la base fundamental de todo el trabajo experimental.
Son los medios de cultivo los encargados de proporcionar los nutrientes y la fuente
de energía, es decir, son el alimento para los microorganismos a estudiar, de esta
manera contribuyen al crecimiento bacteriano. Están constituidos por una mezcla
compleja de nutrientes como: Carbono, Vitaminas, minerales, iones.
Los medios de cultivo sólidos son los medios para verter en cajas de petri, con un
contenido de agar del 1% o más. Los microorganismos se agrupan y forman
colonias, en cultivos puros para ser identificables, (30), (VER ANEXO 4)
4.5.5. MÉTODOS DE SIEMBRA
Existen varios métodos de cultivo; entre los que se destacan en este estudio:
• El método de extensión en placa, (por superficie).
• El método de vertido en placa, (por profundidad).
4.5.5.1. Siembra por el método de extensión en placa
Un cierto volumen de cultivo diluido, que no suele ser superior a 0.1 mL, se
extiende sobre la superficie de una placa con medio sólido utilizando un asa estéril
de extensión. La placa se incuba después hasta que aparecen las colonias y se
cuenta su número, (30). (VER ANEXO 3)
Figura 2. Siembra por el método de extensión en placa, (38).
4.5.5.2. Siembra por el método de vertido en placa
Se toma un volumen conocido (normalmente 0.1-1.0 mL) de cultivo en una placa
petri estéril, sobre la que se añade el medio con agar fundido y se mezcla con
suaves movimientos de la placa sobre la superficie de la mesa antes de que
solidifique, (30).
Figura 3. Siembra por el método de vertido en placa, (38)
4.5.6. ESTERILIZACIÓN
Para la ejecución del análisis microbiológico se tiene en cuenta la esterilización de
todos los materiales, permitiendo de esta manera el trabajo exclusivo con los
microorganismos deseados, por esto se hace referencia a la esterilización.
4.6. FUNDAMENTOS FÍSICO-QUÍMICOS 4.6.1. EXTRACTOR SOXHLET
El extractor Soxhlet o simplemente Soxhlet es utilizado para la extracción de
compuestos, generalmente de naturaleza lipídica, contenidos en un sólido, a
través de un solvente afín.
Fue inventado en 1879 por Franz von Soxhlet, y fue diseñado originalmente para
extraer un lípido de una muestra de un material sólido. Este equipo está diseñado
para aplicaciones a nivel micro durante el análisis y experimentación en procesos
de extracción de grasas. Integrado por un extractor, un condensador especial de
tipo bulbo y un matraz, (36).
Figura 4. Extractor SOXHLET.
4.6.2. ELIMINACIÓN DE DISOLVENTES A PRESIÓN REDUCIDA (ROTAEVAPORACION)
Una operación frecuente en un laboratorio es la eliminación de un disolvente
orgánico volátil de una mezcla de reacción. Esto se puede realizar por destilación
simple, sin embargo el procedimiento más rápido y cómodo es el empleo de un
rotaevapor.
1. buzo / agitador / granallas o esferas 2. balón 3. brazo para ascenso del vapor 4. cartucho de extracción o cartucho Soxhlet 5. muestra (residuo) 6. entrada del sifón 7. descarga del sifón 8. adaptador 9. refrigerante (condensador) 10. entrada de agua de refrigeración 11. salida de agua de refrigeración
Figura 5. Rotaevaporador.
Básicamente consiste en un motor eléctrico que produce el giro de un tubo con un
ajuste esmerilado al que se acopla un matraz de fondo redondo que contiene la
disolución. Dicho matraz se sumerge parcialmente en un baño de agua,
manteniendo el giro.
La temperatura del baño no debe exceder de 35-40º para la manipulación de los
disolventes orgánicos más comunes.
Acoplado al sistema, se encuentra un condensador por el que circula un líquido,
por lo general agua, que produce la condensación del disolvente que se recoge en
un colector, (37).
5 METODOLOGÍA 5.1. MUESTRAS Se seleccionaron capullos de gusano de seda Bombyx mori linn, de un lote
suministrado por los sericultores del municipio de Buga en el Valle del Cauca, se
escogieron los capullos mas grandes.
Figura 6. Muestra de los Capullos de bómbix mori linn
5.2. SACRIFICIO
Se realizó inicialmente un tratamiento con CO2 sometiendo las crisálidas
contenidas en el capullo a una atmósfera de CO2 producido a partir de
Bicarbonato de Sodio (NaHCO3)) y ácido acético (CH3COOH), posteriormente para
garantizar la mortalidad se llevó a cabo a una temperatura de 80º C durante 14
horas en un horno marca WTB-BINDER (ver figura 7).
La reacción química que tuvo lugar fue la siguiente:
NaHCO3 + CH3COOH ----> CH3COONa + CO2 + H2O
En el sacrificio se produce una
muerte de las crisálidas por asfixia.
Se implemento este método
buscando aminorar el estrés que
se produce en el momento de la
muerte para evitar la posible
degradación del aceite por
reacciones químicas.
Figura 7. Proceso de secado en horno WTB-BINDER
5.3. CONSERVACION DEL CAPULLO
El capullo se conservo en bolsas Ziploc ®, y se llevaron a un refrigerador marca
Selecta, modelo Templow a -20ºC durante dos meses.
5.4. SECADO DEL CAPULLO
Se sacaron los capullos y se secaron en un horno de fabricación manual en
madera con flujo de aire caliente a una temperatura de 55-65ºC durante 96 horas
en el laboratorio de Oleoquímica de la Universidad Tecnológica de Pereira, para
eliminar la humedad adquirida en este periodo de tiempo, verificando un peso
constante, pesando en balanza triple brazo marca OHAUS.
5.5. OBTENCION DE LA CRISALIDA
Se cortaron los capullos para obtener la crisálida que se encuentra dentro de ellos
y se preservaron en bolsa Ziploc ® a temperatura ambiente libre de humedad en
un desecador durante 24 horas para la posterior extracción del aceite.
.
5.6. SECADO DE LA CRISALIDA.
Las crisálidas se sometieron a secado en el horno de fabricación manual en
madera hasta obtener un peso constante y garantizar la eliminación de humedad
que haya podido adquirir en el proceso de corte y preservación en desecador.
5.7. EXTRACCION DEL ACEITE
Se realizó mediante extracción por el método soxhlet partiendo de crisálida fresca
y n-hexano como solvente, conservando una relación 1/10 y utilizando los tiempos
y técnicas propuestos en estudios previos, (4).
El extracto se concentró en rotaevaporador marca: Rotavac, modelo: Heidolph y el
aceite obtenido se guardó en frascos de vidrio previamente esterilizados para
evitar la contaminación de la muestra; protegidos de la luz y envueltos en papel
aluminio a temperatura ambiente para su posterior análisis, (5).
El aceite extraído se dividió en dos porciones, uno se sometió a tratamiento de
calentamiento y la otra porción para análisis directo. Se conservó a temperatura
ambiente y posteriormente se sometieron a los diferentes análisis microbiológicos.
5.8. TRATAMIENTO DE CONTROL MICROBIOLÓGICO
El aceite de crisálidas fresco se sometió a un calentamiento a 60ºC durante 6
horas en un baño termostatico marca Memmert WB-10 en el laboratorio de
Oleoquímica.
5.9. ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
Tanto al aceite sometido a calentamiento como al aceite conservado a
temperatura ambiente se les realizo el análisis microbiológico de rutina según la
norma NTC 4833, (32), se le realizó por duplicado las diluciones 10-1 ,10-2 y por
triplicado las diluciones 10-3 para las pruebas de mesófilos aerobios viables y
mohos y levaduras, para Escherichia coli y Staphylococcus aureus se realizo por
triplicado las diluciones 10-1 y 10-2 adaptándola a los recursos disponibles en el
laboratorio de microbiología de La Escuela de Química de La Universidad
Tecnológica de Pereira. ANEXO 3.
Para la ejecución del análisis microbiológico del aceite se tuvo en cuenta la
esterilización de todos los materiales que se emplearon para las pruebas en el
laboratorio de microbiología de La Universidad Tecnológica de Pereira,
permitiendo de esta manera el trabajo exclusivo con los microorganismos
deseados: Mesófilos aerobios viables, mohos y levaduras, Escherichia coli y
Staphylococcus aureus.
La incubación de los diferentes microorganismos se llevó a cabo en una
Incubadora Marca: Selecta, Modelo: Incudigit.
El análisis microbiológico incluyo las siguientes pruebas:
5.9.1. DETERMINACION DE MICROORGANISMOS MESOFILOS AEROBIOS VIABLES
Para esta identificación, el medio de cultivo utilizado fue el Agar Tripticasa de Soya
Se realizaron las respectivas diluciones con agua peptonada y la muestra. Se
continuó con la siembra por el método de vertido en placa y se incuban de 35
±2˚C, por 48 horas. Realizando un seguimiento de quince días durante dos meses.
5.9.2. DETERMINACION DE MOHOS Y LEVADURAS
Para esta identificación, el medio de cultivo utilizado fue Agar Saboraud se
realizaron las respectivas diluciones con agua peptonada y la muestra. Se
continuó con la siembra por el método de vertido en placa y se incubó de 25 ±2˚C
durante 8 días. ANEXO 1: Marcha analítica para conteo de mesofilos, mohos y
levaduras Realizando un seguimiento de quince días, durante dos meses.
5.9.3. DETERMINACION DE Staphylococcus aureus
Para esta identificación, el medio de cultivo utilizado fue Baird Parker. Se
realizaron las respectivas diluciones con agua peptonada y la muestra, efectuando
una preparación preliminar de la muestra se incubó de 35-37 ˚C durante 48 horas,
para continuar a realizar la siembra por el método de extensión en placa e
incubando a temperatura de 35-37˚C durante 48 horas. Por quince días durante
dos meses.
5.9.4. DETERMINACION DE Escherichia coli
Para esta identificación se realizaron las respectivas diluciones con agua
peptonada y la muestra. Se incubaron las diluciones a 35-37ºC por 24 horas, se
continúo con la siembra por extensión en placa utilizando el medio EMB se incubó
a una temperatura de 35-37ºC durante 24 horas. ANEXO 2: Marcha analítica para
S. aureus y E. coli. Por quince días durante dos meses.
5.9.5. CONTROL DE MEDIO
A cada una de las anteriores pruebas se les realiza control del medio que es una
placa llevada en las mismas condiciones que las placas que contienen el
microorganismo, con la única diferencia que en ella no se inocula muestra, se usa
normalmente para verificar el estado de la siembra y de los conteos.
6 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El aceite crudo obtenido presentó una coloración amarilla como se aprecia en la
figura 8. El aceite sometido a calentamiento no presentó cambio de color con
relación al aceite sin tratamiento, ver figura 9.
Los análisis microbiológicos se llevaron a cabo a los cinco días después de
obtenido el aceite.
A continuación se presentan los resultados obtenidos de los análisis
microbiológicos del aceite fresco así como del aceite sometido a calentamiento.
Figura 8. Diluciones Aceite crudo.
Figura 9. Diluciones del Aceite sometido a calentamiento.
6.1. CARACTERIZACIÓN MICROBIOLÓGICA DEL ACEITE FRESCO
6.1.1. Recuento de Microorganismos Mesófilos Aerobios Viables
Mesófilos Aerobios Viables Fecha del recuento Aceite Crudo
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
27-Jul-06 60000 <1000 <100
Tabla 2.Recuento de microorganismos mesófilos aerobios viables del aceite fresco
Se observó al extraer el aceite, que la carga de microorganismos mesófilos es
muy alta y no cumple con los parámetros exigidos por la norma NTC 4833, ni para
cosméticos en general, ni para cosméticos para bebe y área de los ojos, lo cual
puede atribuirse a que el aceite contiene suficientes sustancias nutritivas para
permitir el desarrollo de diferentes microorganismos, muchas de las bacterias
provienen del contacto del gusano con el aire, el suelo, animales, plantas vivas o
en descomposición y fuentes minerales, (35), además existe un factor externo que
es el tratamiento de la muestra (no existe control en el proceso de recolección y
transporte, los equipos para sacrificio y secado no eran desinfectables) el cual
influye considerablemente en el análisis de los resultados.
6.1.2. Recuento de Patógenos
6.1.2.1. Contaminación por manipulación humana
Staphylococcus aureus Fecha del recuento Aceite Crudo
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
27-Jul-06 0 Ausencia Total Ausencia Total
Tabla 3 Recuento de microorganismos Patógenos: Staphylococcus aureus del aceite fresco.
Se observa que no presenta crecimiento de S. aureus por lo tanto esta dentro de
la normatividad.
6.1.2.2. Contaminación por contacto con materia fecal
Escherichia coli Fecha del recuento Aceite Crudo
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
8-Ago-06 0 Ausencia Total Ausencia Total
Tabla 4.Recuento de microorganismos Patógenos: E.Coli del aceite fresco.
Se observa que no presenta crecimiento de E. coli, por lo tanto esta dentro de la
normatividad.
6.1.3. Recuento de mohos y levaduras.
Mohos y levaduras
Fecha del recuento Aceite Crudo
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos
en general
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
01-ago-06 980 <1000 <100
Tabla 5.Recuento de mohos y levaduras del aceite fresco.
Se observó que el aceite fresco presenta una baja carga de levaduras y mohos de
980 UFC/ml como se aprecia en la tabla 8. El recuento se realizo en la caja con
dilución de 10-1 (figura 10). Se cumple con un recuento < 1000 como lo exige la
norma NTC 4833, aunque sigue siendo elevada cumple para cosméticos en
general mas no para cosméticos para bebe y área de los ojos. Se puede atribuir la
presencia de mohos y levaduras a la exposición del aceite y la crisálida al
ambiente, a la humedad y a las condiciones naturales de manipulación, en
laboratorio por causa del secado en el horno de madera o en el campo en los
cultivos de la morera, como en la recolección del capullo y el almacenamiento, en
el cual pudo adquirir los mohos. Normalmente la presencia de mohos y levaduras,
así como de mesófilos aerobios no necesariamente indica la contaminación del
producto con microorganismos patógenos, sin embargo; los hongos pueden
Figura 10. Recuento de mohos y levaduras del
aceite fresco Dilución 10-1
generar toxinas que ocasionan daños en la piel, se recomienda realizar un estudio
micotoxicológico para evaluar la presencia o ausencia de éstas en el aceite.
6.2. CARACTERIZACIÓN MICROBIOLÓGICA DEL ACEITE SOMETIDO A
CALENTAMIENTO 6.2.1. Recuento de Microorganismos Mesófilos Aerobios Viables
Mesófilos Aerobios Viables Fecha del recuento Aceite sometido a
calentamiento (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
27-Jul-06 360 <1000 <100
Tabla 6. .Recuento de microorganismos mesófilos Aerobios Viables del aceite sometido a
calentamiento
Se observa que al calentar el aceite fresco la carga de microorganismos mesófilos
disminuye y cumple con los parámetros exigidos por la norma NTC 4833, para
cosméticos en general, pero aun así no alcanza las exigencias para cosméticos
para bebe y área de los ojos. Esto indicaría que el tratamiento de calentamiento es
efectivo pero no con los resultados esperados, hay que recordar que el
calentamiento no es una esterilización (30). En el calentamiento se busca que la
carga microbiológica disminuya y que cumpla los criterios de la Norma Técnica
Colombiana 4833 que es la que garantiza si puede ser utilizado en la industria de
los cosméticos, al no ser así se recomienda buscar otras formas de control
microbiológico hasta encontrar la indicada.
6.2.2. Recuento de Patógenos
6.2.2.1. Contaminación por manipulación humana
Staphylococcus aureus Fecha del recuento Aceite sometido a
calentamiento (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
27-Jul-06 0 Ausencia Total Ausencia Total
Tabla 7 Recuento de microorganismos Patógenos: Staphylococcus aureus del aceite sometido a
calentamiento
Se observa que no presenta crecimiento de S. aureus, por lo tanto cumple los
parámetros exigidos en la NTC.
6.2.2.2. Contaminación por contacto con materia fecal
Escherichia coli Fecha del recuento
Aceite sometido a calentamiento
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
08-ago-06 0 Ausencia Total Ausencia Total
Tabla 8. Recuento de microorganismos Patógenos: E.coli del aceite sometido a calentamiento
Se observa que no presenta crecimiento de E. coli, por lo tanto cumple los
parámetros exigidos en la NTC.
6.2.3. Recuento de mohos y levaduras
Mohos y levaduras Fecha del recuento
Aceite sometido a calentamiento
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
01-ago-06 19200 <1000 <100
Tabla 9.Recuento de mohos y levaduras del aceite sometido a calentamiento
Como se observa en la tabla 13 y en la figura 11, el aceite sometido a
calentamiento presenta una elevadísima carga microbiológica de levaduras. Existe
un crecimiento menor de mohos. Esto no necesariamente indica que no haya
mohos en la muestra, sino que las levaduras se desarrollan mas rápido en el
medio de cultivo que los mohos (aprox. 72h) (38) esto produce una competencia
interespecífica y la respuesta a esta condición de estrés en la muestra es mas
demorada por parte del hongo, que se demora mucho mas tiempo en sintetizar
micotoxinas para eliminar a especies competidoras por los nutrientes (bacterias y
levaduras) (33) y poder crecer y marcar correctamente su contenido en la caja de
petri. Este interferente se podría eliminar usando productos como el Actidione©
(ciclohexamida), que inhibe el crecimiento de levaduras y permite el conteo
adecuado de mohos, (38). Sin embargo, este producto es controlado
Figura 11. Recuento de mohos y levaduras del aceite sometido a calentamiento Dilución 10-2
comercialmente por su alta toxicidad y solo se consigue por importación con
permisos especiales de ley. Por esto no se uso en este caso.
6.3. EVALUACIÓN DE LA ESTABILIDAD DEL ACEITE CRUDO Y DEL ACEITE SOMETIDO A CALENTAMIENTO POR UN PERIODO DE 8 SEMANAS
6.3.1. Estabilidad del Aceite Crudo
Mesofilos Aerobios Viables Fecha del recuento Aceite Crudo
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
27-Jul-06 6,00E+04
02-Ago-06 4,20E+04
24-Ago-06 2,97E+04
06-Sep-06 1,85E+04
20-Sep-06 6,50E+02
<1000 <100
Tabla 10.Estabilidad de mesófilos del aceite crudo
Según estudios previos del aceite crudo obtenido de crisálidas de desecho del
proceso de obtención de la seda (7) se encontró que el crecimiento de
microorganismos mesófilos aerobios viables en las fases de latencia y la fase de
crecimiento exponencial estaban entre el primero y el sexto día después de la
extracción, por la disponibilidad del laboratorio no se pudo hacer la primera
siembra sino hasta el cuarto o quinto día después de la extracción y por la
escasez de medios de cultivo no fue posible hacer el seguimiento inicial
diariamente, entonces no fue posible apreciar las fases de latencia y crecimiento
exponencial, de esta forma, como se observa en la grafica 1, la fase estacionaria y
la fase de muerte ocurren entre la segunda y la octava semana, encontrándose en
la octava semana de seguimiento un mínimo crecimiento de los microorganismos.
Aceite Crudo
0,00E+00
1,00E+04
2,00E+04
3,00E+04
4,00E+04
5,00E+04
6,00E+04
7,00E+04
1 2 4 6 8
Semana de Seguimiento
UFC
/mL
GRAFICA 1. Curva de crecimiento de mesófilos del aceite crudo
6.3.2. Estabilidad del Aceite sometido a calentamiento
Mesofilos Aerobios Viables Fecha del recuento Aceite sometido a
calentamiento (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para bebé y
área de los ojos (UFC/mL)
27-Jul-06 3,60E+02
02-Ago-06 2,53E+05
24-Ago-06 3,35E+04
06-Sep-06 3,05E+04
20-Sep-06 0,00E+00
<1000 <100
Tabla 11. Estabilidad de mesófilos del aceite sometido a calentamiento
Al observar el comportamiento del crecimiento microbiológico de mesófilos
aerobios viables en el aceite sometido a calentamiento (grafica 2) se aprecia que
la fase de crecimiento exponencial es claramente observable entre la primera y la
tercera semana, luego entre la tercera y la cuarta semana se alcanza la fase
estacionaria, la fase de muerte se observa entre la quinta y la séptima semana,
encontrándose que en la octava semana ya no hay crecimiento microbiano.
Aceite sometido a calentamiento
0,00E+00
5,00E+04
1,00E+05
1,50E+05
2,00E+05
2,50E+05
3,00E+05
1 2 4 6 8Fecha de Seguimiento
UFC
/mL
GRAFICA 2. Curva de crecimiento de mesófilos del aceite sometido a calentamiento
6.3.3. Estabilidad del Aceite Crudo contra estabilidad del aceite sometido a calentamiento
Mesofilos Aerobios Viables
Fecha del recuento Aceite Crudo
(UFC/mL)
Aceite sometido a calentamiento
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para
bebé y área de los ojos
(UFC/mL)
27-Jul-06 6,00E+04 3,60E+02
02-Ago-06 4,20E+04 2,53E+05
24-Ago-06 2,97E+04 3,35E+04
06-Sep-06 1,85E+04 3,05E+04
20-Sep-06 6,50E+02 0,00E+00
<1000 <100
Tabla 12.Estabilidad de mesófilos del aceite crudo y el aceite sometido a calentamiento
Aunque inicialmente se aprecia que el aceite sometido a calentamiento tiene una
menor carga microbiológica al inicio del estudio (tabla 16), lo cual es consistente
con el proceso de calentamiento, se observa que este tratamiento térmico
favorece el desarrollo de los microorganismos en el aceite, en función del tiempo
(grafica 3). Probablemente esto se deba a la desnaturalización de ácidos grasos,
proteínas fibrosas, vitaminas y otros nutrientes, dejando las estructuras más
simples y más asimilables por los microorganismos, (39). La desnaturalización de
ácidos nucleicos, proteínas y aminoácidos por acción del aumento de la
temperatura pone a disposición de las bacterias mayores niveles de FAN (free
amino nitrogen), con lo cual la contaminación en el sistema de estudio se puede
ver potenciada por este nutriente disponible, (38).
Aceite Crudo vs Aceite sometido a calentamiento
Mesofilos aerobios viables
0,00E+00
5,00E+04
1,00E+05
1,50E+05
2,00E+05
2,50E+05
3,00E+05
1 2 4 6 8
Fecha de Seguimiento
UFC
/mL
Aceite Pasteurizado Aceite Crudo
GRAFICA 3. Curva de crecimiento de mesófilos del aceite crudo vs aceite sometido a
calentamiento
Entre los mesófilos observados se encuentran Bacilos Gram. - , Cocos Gram + y
Bacilos Gram +. No se apreciaron Cocos Gram -.
6.3.4. Recuento de Patógenos 6.3.4.1. Contaminación por manipulación humana
Staphylococcus aureus
Fecha del recuento Aceite Crudo
(UFC/mL)
Aceite sometido a
calentamiento (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en
general (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para
bebé y área de los ojos
(UFC/mL)
27-Jul-06 0 0
11-Ago-06 0 0
31-Ago-06 0 0
13-Sep-06 0 0
Ausencia Total Ausencia Total
Tabla 13.Estabilidad de Staphylococcus aureus del aceite crudo y el aceite sometido a
calentamiento
El resultado obtenido es la ausencia de colonias de Staphylococcus aureus tanto
en las cajas como en las diluciones; por el espacio de ocho semanas que duró la
investigación.
Por tanto, se descarta contaminación por manipulación humana.
Figura 12. Tinciones de Gram seleccionadas.
6.3.4.2. Contaminación por contacto con materia fecal
Escherichia coli
Fecha del recuento Aceite
Crudo (UFC/mL)
Aceite sometido a
calentamiento (UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos en general
(UFC/mL)
NTC 4833 Cosméticos para
bebé y área de los ojos
(UFC/mL)
08-Ago-06 0 0
22-Ago-06 0 0
08-Sep-06 0 0
20-Sep-06 0 0
Ausencia Total Ausencia Total
Tabla 14.Estabilidad de E. coli del aceite crudo y el aceite sometido a calentamiento
El resultado obtenido es la ausencia de colonias de Escherichia coli tanto en las
cajas como en las diluciones; por el espacio de ocho semanas que duró la
investigación.
Por tanto, se descarta contaminación por contacto con materia fecal
6.3.5. Recuento de mohos y levaduras
Mohos y levaduras Fecha del recuento Aceite Crudo
(Orden de contaminación)
Aceite sometido a calentamiento
(Orden de contaminación)
01-Ago-06 101
Mohos y
Levaduras
102
Mohos y Levaduras
15-Ago-06 101
Mohos y algunas
levaduras
103
Mohos y
muchísimas
Levaduras
05-Sep-06 102
mohos 102
mohos
19-Sep-06 102
mohos 101
mohos
Tabla 15.Estabilidad de mohos y levaduras del aceite crudo y el aceite sometido a calentamiento
Se observa que se inicia con un crecimiento menor en el aceite crudo, con
presencia tanto de mohos como de levaduras, en la medida en que transcurre el
análisis se va incrementando la presencia de mohos y disminuyendo la de
levaduras (tabla 19). Al punto que al final del seguimiento no se observan sino
mohos. En microcultivo y al microscopio se aprecia la estructura característica de
mano tridáctila del genero penicillum. La presencia de penicillum en las siembras
puede atribuirse bien al contenido de humedad del substrato, la temperatura, el
tiempo, el grado de invasión fúngica antes del almacenamiento y la actividad de
insectos y ácaros que facilitan la diseminación, ya que en el almacenamiento la
muestra esta expuesta a especies de hongos como: aspergillus, penicillum,
xenofilos, (33).
En el aceite sometido a calentamiento hay un crecimiento mayor de mohos y
levaduras al inicio del seguimiento. En las sucesivas semanas se dispara el
crecimiento de levaduras y se mantiene la misma cantidad de mohos. Hacia el
tercer recuento ya no se observan levaduras, y se observa un aumento en la
cantidad de mohos, que al final desciende al terminar el seguimiento. Las colonias
que se observan son idénticas a las del aceite crudo. Por lo tanto existe una alta
probabilidad que también sean del genero penicillum. (Figura 13).
El incremento de mohos en la muestra tiene una estrecha relación con el
tratamiento que reciben los gusanos desde su proceso de alimentación en la que
pueden adquirir una micotoxina, ya sea por una contaminación directa o indirecta.
La contaminación directa de un moho y la consecuente producción de la toxina
puede ocurrir durante la producción, el transporte y el almacenamiento del capullo;
mientras que la contaminación indirecta se debe a la presencia de un ingrediente
previamente contaminado con moho toxicogénico que ya ha desaparecido y cuya
micotoxina persiste, (33). Se recomienda realizar un estudio en el cual se analice
si puede el aceite contener o no micotoxinas, recordando que dicho estudio tiene
que realizarse desde el lugar de cultivo de los gusanos de seda hasta la obtención
del aceite.
Fecha del recuento
Aceite Crudo
Aceite sometido a calentamiento
01-Ago-06
15-Ago-06
19-Sep-06
Figura 13. Comparación de las siembras de Mohos y levaduras en el seguimiento microbiológico de 8 semanas.
7. CONCLUSIONES
7.1. El aceite fresco y el aceite sometido a calentamiento, extraído a partir de
Bómbyx mori linn hibrido pilamo 1, no cumple con los parámetros exigidos por la
Norma Técnica Colombiana NTC 4833 para su uso en la industria cosmética, ya
que las lecturas de los parámetros de mesófilos, de hongos y levaduras
establecidos superan los límites.
7.2. Se evaluó la estabilidad microbiológica del aceite de crisálida de Bómbyx mori
linn mediante un seguimiento quincenal de las diferentes pruebas microbiológicas,
por un periodo de ocho semanas obteniendo que el aceite crudo presenta una
menor degradación que el aceite sometido a calentamiento debido a que el
calentamiento no es un tratamiento de esterilización, y en el caso de este aceite,
por su alto contenido de nutrientes, el tratamiento térmico acelera la degradación
al aumentar la disponibilidad de alimento fácilmente asimilable por las bacterias,
mohos y levaduras, transformando el aceite en un sustrato ideal para el
crecimiento de las mismas.
7.3. El calentamiento no es el método de esterilización que contribuya al
cumplimiento de los parámetros establecidos por la normatividad vigente para el
uso del aceite en la industria cosmética.
7.4. Se concluye la presencia del hongo penicillum.
7.5. La ausencia de microorganismos patógenos es indicativo de que el aceite no
presenta contaminación por manipulación humana y/o contaminación por materia
fecal
8. RECOMENDACIONES
8.1 Establecer un protocolo de manejo de capullos y crisálidas que aseguren que
los mismos no estén sufriendo contaminación desde el proceso de recolección,
transporte, almacenamiento, secado y extracción del aceite; para esto se sugiere
que el método de muestreo se haga según la NTC 4833 numeral 4: Manejo de
muestras. Y consultar el documento: ISO “Cosmetics- Microbiologic-General
Recommendations for Microbiological Examinations (ISO/CD21148) o la norma
vigente y con una evaluación microbiológica por etapas.
8.2. Realizar una caracterización de proteínas, vitaminas, macronutrientes y
micronutrientes que permita dilucidar las propiedades que pueda tener y lo
vuelvan un sustrato ideal para los microorganismos
8.3. Explorar otros posibles métodos de control que son usados a nivel industrial
(antibióticos, biocidas, radiaciones, etc.) para disminuir la carga microbiológica y
de esta forma lograr que el aceite cumpla con los parámetros exigidos por la
norma.
8.4. Investigar el uso del aceite como sustrato para el crecimiento de
microorganismos con beneficio industrial como puede ser la producción de mohos
como penicillum y/o levaduras.
9. BIBLIOGRAFÍA
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25. Norma Colombiana ICONTEC 252. Grasas y Aceites. Aceite de coco. Instituto
Colombiano de Normas Técnicas, Santa Fe de Bogota. Octubre 1968.
26. Norma Colombiana ICONTEC 263. Grasas y Aceites. Aceite de Babasu.
Instituto Colombiano de Normas Técnicas, Santa Fe de Bogota. Febrero 1969.
27. Norma Colombiana ICONTEC 257. Grasas y Aceites. Aceite Crudo de
Algodón. Instituto Colombiano de Normas Técnicas, Santa Fe de Bogota. Tercera
actualización septiembre 1996.
28. Norma Colombiana ICONTEC 256. Grasas y Aceites. Aceite de ajonjolí o
sésamo. Instituto Colombiano de Normas Técnicas, Santa Fe de Bogota. Tercera
actualización septiembre 1996.
29. Norma Colombiana ICONTEC 262. Grasas y Aceites. Aceite de Palma.
Instituto Colombiano de Normas Técnicas, Santa Fe de Bogota. Cuarta
actualización septiembre 1996.
30. Michael T. Madigan, Jhon M. Martinko, Jack Parker. Biología de los
microorganismos. Décima edición. Pearson educación, S.A. Prentice hall. Madrid,
2004. 1096 paginas. BROCK.
31. Vélez de López, Maria Teresa. Control Microbiológico a medicamentos,
cosméticos y desinfectantes. 2005 Universidad de Cartagena.
32. Norma técnica colombiana 4833. Industria de Cosméticos y de Tocador.
Método de Ensayo Microbiológicos Para Productos Cosméticos. ICONTEC.
Noviembre de 2004.
33. Carrillo, Leonor. Mohos y Micotoxinas, los hongos de los alimentos y forrajes.
Universidad Nacional de Salta. Universidad Nacional de Jujuy. 2003.
34. Material Safety Data Sheets and Scharlau culture media. Prepared culture
media for microbiology. Scharlau Chemie, S.A. Barcelona 2006.
35. Romero Rojas, Jairo Alberto. Acuiquimica Escuela Colombiana de Ingeniería
1996.
36. MATISSEK, Reinhard, SCHNEPEL, Frank M. y STEINER, Gabriela. Análisis
de los alimentos: Caracterización de grasas y aceites. Berlin, Alemania. 1992.
Editorial: Springer- Verlag. GMBH & Co., KG.
37. Instrumental procedures of elimination of solvents to small pressure. En:
Organic Preparations and Procedures International.2005 Organic Preparations and
Procedures Inc. Publication
38. Praj Standard Methods. Libro: Analytical Methods for Cane Feedstock Based
Fermentation and Distillation Process. Ed. Matrix – The Innovation Center. Praj
Industries. 4th Edition. July 14 – 2004. FAN: Pág. 69-70-71
39. Morrison R.T. Boyd R.N. Química Orgánica Quinta edición. Addison- wesley
Iberoamericano. 1996. Pág. 1342.
40. Cifuentes, C. “Avances de la Sericultura Colombiana en los últimos 10 años”.
En Memorias del Forum “La Seda en los países de la Comunidad Andina”. 2001,
Quito Ecuador. Instituto Italo-Latinoamericano, Roma.
41. Boletín andino de La Seda Año 2 Nº 4. Red Andina de La Seda. Febrero de
2005.
42. Boletín andino de La Seda Año 1 Nº3. Red Andina de La Seda. Noviembre de
2004.
43. Segundo curso Latinoamericano de Sericultura Tropical. CDTS. Mayo 11 al 22
de 1998. Pereira, Risaralda, Colombia.
44. Revista de Campo N. 38 Periódico. El Espectador. Mayo de 1987 Colombia.
10. ANEXOS
ANEXO 1.
SIsoluble
NO
NO
Adicionarlos en 90 ml de diluyente
Incubar de 30 a 35 ºC de 24 a 48 horas para
bacterias
Marchas analiticas para conteo de mesofilos aerobios, mohos y levaduras en cosmeticos
Tome 10 ml de muestra
Cumple especificaciones
Identificaciones de microorganismos por marchas bioquimicas
Liberar producto
adicionarlos en 80 mL de diluyente que contiene 10 ml de Tween 80
Tome 1 ml de muestra y siembre por triplicado
(1 en 10).
Tome 0,1 ml de muestra y siembre por triplicado
(1 en 100)
Homogenice
Incubar de 20 a 25 ºC de 5 a 7 dias para
hongos
ANEXO 2.
sisoluble
no
Observar ausencia o presencia y hacer pruebas confirmativas
Marchas analiticas para S. aureus, E. coli y Pseudomonas en cosmeticos
tome 10 ml de muestra
adicionarlos en 80 mL de diluyente que contiene 10 ml de tween 80
Aislar E. coli en agar EMB o Mc Conkey
Aislar S. Aureus en Baird Parker y agar
salado manitol
Homogenice
Coagulasa Indol y Bioquimicas Confirmativo oxidasa
adicionarlos en 90 ml de diluyente
Aislar Pseudomonas en agar Cetremide o GSP
Tome 10 ml en 90 de Caldo Lactosa para E. coli
Tome 10 ml en 90 ml en caldo TS para
Pseudomona y S. Aureus
Incubar de 30 a 35 ºC de 24 a 48 horas
Incubar a 30 a 35 ºC 24 horas
ANEXO 3.
PROTOCOLO DE LABORATORIO Adaptación de la norma “NTC 4833: Industria De Cosméticos Y De Tocador. Métodos De Ensayo
Microbiológicos Para Productos Cosméticos, Noviembre 2004”, para regularizarla a la disponibilidad de laboratorios y reactivos del Laboratorio de Oleoquímica de la Escuela de Química
de la Universidad Tecnológica de Pereira.
ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DEL ACEITE DE CRISÁLIDA FRESCA DEL HÍBRIDO PÍLAMO 1 DE Bombyx mori linn
MESÓFILOS AEROBIOS VIABLES
1. Dilución: Se toma 1 mL de aceite de cada fracción (crudo y pasteurizado) y se adiciona 0.5 mL de tween al 20%. Se diluyen en tubos previamente llenados con 9 ml de Agua Peptonada Estéril (APE), con homogenización fuerte, sin que se forme espuma o burbujas. Esta será la solución 1. (10-1).
2. se toma 1 mL de 10-1 y se diluyen a 10 mL en APE. Esta será solución 2 (10-2) 3. se toma 1 mL de 10-2 y se diluyen a 10 mL en APE. Esta será solución 3 (10-3) 4. se siembra 1 mL de cada una de la soluciones en el medio de cultivo “tripticasa
de soya“, por profundidad, así: solución 1: 2 cajas solución 2: 2 cajas solución 3: 3 cajas blanco: 1 caja
5. la incubación se realizara durante 48 horas a una temperatura de 35 º C ± 2 º C 6. transcurrido el tiempo de incubacion se realiza recuento de colonias
seleccionando las cajas con el numero de colonias entre 30 y 300, por dos operarios diferentes, se promedia los valores, se informan las Unidades Formadores de Colonias (UFC) en la solución original, en UFC/g ò UFC/mL.
7. se tabulan los datos contra los máximos permitidos por la ley, así: Cosméticos en general: menor a 1000 UFC/g ò UFC/mL Cosméticos para bebe: menor a 100 UFC/g ò UFC/mL Cosméticos para área de los ojos: menor a 100 UFC/g ò UFC/mL
PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO “TRIPTICASA DE SOYA” PARA 15 CAJAS
Se toman 12 gramos del medio de cultivo “Tripticasa de soya“ y se diluyen en 300 mL de agua esteril, se calienta hasta ebullición y se esteriliza durante 15 minutos a 120 °C, se congela si es necesario su uso posterior.
MOHOS Y LEVADURAS 1. Dilución: Se toma 1 mL de aceite de cada fracción (crudo y pasteurizado) y se
adiciona 0.5 mL de tween al 20%. Se diluyen en tubos previamente llenados con 9 ml de Agua Peptonada Estéril (APE), con homogenización fuerte, sin que se forme espuma o burbujas. Esta será la solución 1. (10-1)
2. se toma 1 mL de 10-1 y se diluyen a 10 mL en APE. Esta será solución 2 (10-2) 3. se toma 1 mL de 10-2 y se diluyen a 10 mL en APE. Esta será solución 3 (10-3) 4. se siembra por superficie 0,1 mL de cada una de la soluciones en el medio de
cultivo “Saboraud“, así: a. solución 1: 2 cajas b. solución 2: 2 cajas c. solución 3: 3 cajas d. blanco: 1 caja
5. la incubación se realizara durante 5 a 7 días a una temperatura de 25 º C ± 2 º C
6. transcurrido el tiempo de incubación se realiza recuento de colonias por dos operarios diferentes, seleccionando las cajas con el numero de colonias inferior a 100, se promedia los valores del recuento, se informan las Unidades Formadores de Colonias (UFC) en la solución original, en UFC/g ò UFC/mL.
7. se tabulan los datos contra los máximos permitidos por la ley, así: Cosméticos en general: menor a 1000 UFC/g ò UFC/mL Cosméticos para bebe: menor a 100 UFC/g ò UFC/mL Cosméticos para área de los ojos: menor a 100 UFC/g ò UFC/mL
PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO “SABORAUD” PARA 15 CAJAS Se toman 19,5 gramos del medio de cultivo “saboraud “ y se diluyen en 300 ml de agua destilada se calienta hasta ebullición y se esteriliza durante 15 min a 120 C, agitan, congelan, etc.
PATÓGENOS
Staphylococcus aureus 1. de la solución 1 de cada una de las fracciones, se toma una fracción
representativa y se incuba en tubo de ensayo 48 horas a una temperatura de 35 º C ± 2 º C.
2. se siembra por superficie 0.1 ml en el medio de cultivo “Baird Parker”, y se incuba durante 72 horas, de esta forma.
solución 1: 3 cajas blanco: 1 caja
3. transcurrido el tiempo de incubación se realiza recuento de colonias por dos
operarios diferentes, seleccionando las cajas con el numero de colonias entre 30 y 100, se promedia los valores del recuento, se informan las Unidades Formadores de Colonias (UFC) en la solución original, en UFC/g ò UFC/mL.
4. se tabulan los datos contra los máximos permitidos por la ley, así: Cosméticos en general: Ausencia total Cosméticos para bebe: Ausencia total Cosméticos para área de los ojos: Ausencia total 5. Se realiza prueba confirmativa en caso de formación de colonias de color
negro, como prueba de la coagulasa, de esta forma: Se toma una muestra de sangre de aprox. 15 ml por cada colonia que se vaya a confirmar, se centrifuga hasta que el plasma se separe, se toma el plasma sobrenadante y se introducen en tubos de ensayo con tapa, se toma una muestra de la colonia a confirmar con un asa microbiológica estéril y se disuelve en el plasma, se incuba durante 24 horas, si hay coagulación del plasma es prueba confirmativa. 6. Si no se puede prueba confirmativa, se realiza prueba explorativa como la
tinción de Gram, sin olvidar que la presencia de un coco gram positivo de una colonia negra NO CONFIRMA que sea S. aureus
PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO “Baird Parker” PARA 4 CAJAS
Se toman 9.8 gramos del medio de cultivo y se diluyen hasta 150 ml se calientan agitan, congelan, etc.
Escherichia coli 1. de la solución 1 de cada una de las fracciones, se toma una fracción
representativa y se incuba en tubo de ensayo 24 horas a una temperatura de 35 º C ± 2 º C.
2. se lleva 1 ml a 10 ml de caldo laurel sulfato con mug, se incuba a 44 º C por 48 horas.
3. se toma 1 mL en el medio de cultivo “Eosina Azul de Metileno EMB” por profundidad y se incuba durante 24 horas a 37 ºC.
4. transcurrido el tiempo de incubación se realiza recuento de colonias por dos operarios diferentes, seleccionando las cajas con el numero de colonias entre 30 y 100, se promedia los valores del recuento, se informan las Unidades Formadores de Colonias (UFC) en la solución original, en UFC/g ò UFC/mL.
5. se tabulan los datos contra los máximos permitidos por la ley, así: Cosméticos en general: Ausencia total Cosméticos para bebe: Ausencia total Cosméticos para área de los ojos: Ausencia total 6. Se realiza prueba confirmativa en caso de formación de colonias. 7. Si no se puede prueba confirmativa, se realiza prueba explorativa como: tinción
de Gram. GRAM NEGATIVO.
ANEXO 4
1. TRIPTICASA DE SOYA. TSA
Este medio es usado comúnmente en la determinación de Mesofilos Aerobios
Viables. Su composición se presenta en la tabla 2. Su pH final debe ser 7,3 ± 0,2.
Componente Contenido (g/L)
Caseina de peptona 15,0
Peptona de Soya 5,0
Cloruro de Sodio 5,0
Agar 15,0 COMPOSICIÓN DEL TRIPTICASA DE SOYA, (34).
2. SABOURAUD.
Este medio es usado comúnmente en la determinación de Mohos y Levaduras. Su
composición se presenta en la tabla 3. Su pH final debe ser 5,6 ± 0,2.
Componente Contenido (g/L)
D(+) Glucosa 40,0
Peptona de Caseina 5,0
Peptona de Carne 5,0
Agar 15,0 COMPOSICIÓN DEL SABOURAUD, (34).
3. AGAR EOSIN METHYLENE BLUE. EMB
Este medio es usado comúnmente en la determinación de Escherichia coli. Su
composición se presenta en la tabla 4. Su pH final debe ser 7,1 ± 0,2
Componente Contenido (g/L)
Peptona 10,0
Lactato 10,0
Eosina Amarillenta 0,40
Fosfato Básico de Dipotasio 2,0
Azul de Metileno 0,065
Agar 15,0 COMPOSICIÓN DEL EOSIN METHYLENE BLUE, (34).
4. AGAR BAIRD PARKER
Este medio es usado comúnmente en la determinación de Staphylococcus Aureus.
Su composición se presenta en la tabla 5. Su pH final debe ser 7,0 ± 0,2
Componente Contenido (g/L)
Tristona 10,0
Piruvato de Sodio 10,0
Glicina 12,0
Extracto de carne 5,0
Cloruro de Litio 5,0
Extracto de Levadura 1,0
Agar 17,0 COMPOSICIÓN DEL BAIRD PARKER, (34)
11. GLOSARIO
RECUENTO DE CÉLULAS: Los recuentos son la forma como en microbiología se
mide el crecimiento de los microorganismos, ya que las medidas directas del
crecimiento microbiano hacen parte de la comprensión del trabajo de los
microorganismos; tales recuentos son: recuento de células totales y recuento de
células viables.
CONIDIOFOROS: Hifa portadora de conidios, de una espora fúngica (o de
bacterias semejantes al hongo) asexual producida por constricción de la punta de
una hifa o estigma, no encerrada en un esporangio.
ESPORANGIO: En relación al ciclo de vida de las plantas, en aquellas plantas
cuya generación diplonte es multicelular (poseen "esporofito"), se llama
esporangio a la estructura nacida en el esporofito que se especializa en producir la
meiosis que dará las esporas haploide (n).
SINEMA: Estructura alargada, productora de conidios, formada por un conjunto de
conidióforos paralelos reunidos.
HEMOLINFA: Se denomina hemolinfa al líquido circulatorio de los insectos,
análogo a la sangre de los vertebrados. Su composición varía mucho de una
especie a otra.
SURFACTANTE: Sustancia que reduce la tensión superficial de un liquido y que
sirve como agente humectante o detergente.
UFC: Unidad Formadora de Colonia, término que se emplea para expresar el
contenido de bacterias viables, asumiendo que una bacteria da origen a una
colonia. Cuando una célula aislada comienza a crecer sobre un substrato sólido, el
resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Se denomina unidad
formadora de colonia (UFC) a una célula viva y aislada que se encuentra en un
substrato y en condiciones ambientales adecuadas y produce una colonia en un
breve lapso de tiempo. Una UFC también puede corresponder a más de una
célula cuando éstas forman parte de grupos unidos fuertemente (estreptococos o
diplococos, por ejemplo) ya que cada grupo formará una sola colonia.
Límite permisible: Máxima cantidad de microorganismos expresada como UFC
que se acepta en un determinado alimento.
MONOFAGO: Ser vivo que come una sola clase de alimento. Animal que tiene
una alimentación superespecializada, entre los cuales se encuentran numerosos
parásitos específicos y algunas larvas de insectos.
CORION: Es un saco concéntrico al amnios, compuesto también por
somatopleura con una membrana extraembrionaria mas externa compuesta de
trofoblastos alineados en el interior del mesodermo., queda adherido a la
superficie interna del huevo, envolviendo al embrión y a todas las otras
membranas fetales. Desarrolla vellosidades a las dos semanas de la fertilización y
recibe la vascularización de vasos provenientes del alantoides una semana
después. Da lugar a la placenta y persiste hasta el nacimiento como la capa más
externa de las dos membranas que contienen el líquido amniótico y el feto.
En asociación con los vasos alantoideos forma el alantocorion, involucrado en el
intercambio respiratorio y en la absorción de calcio de la cáscara al final de la
incubación
QUITINA: La quitina es uno de los componentes principales de las paredes
celulares de los hongos, del resistente exoesqueleto de los artrópodos (arácnidos,
crustáceos, insectos) y algunos otros animales (quetas de anélidos, perisarco de
cnidarios). La primera persona que consiguió describir correctamente su estructura
química fue Albert Hofmann, el conocido químico suizo, quién también es el padre
de la LSD, el enteógeno más conocido de la cultura occidental.
Es un polisacárido, compuesto de unidades de N-acetilglucosamina (exactamente,
N-acetil-D-glucos-2-amina). Éstas están unidas entre sí con enlaces β-1,4, de la
misma forma que las unidades de glucosa componen la celulosa. Así, puede
pensarse en la quitina como en celulosa con el grupo hidroxilo de cada monómero
reemplazado por un grupo de acetilamina. Esto permite un incremento de los
enlaces de hidrógeno con los polímeros adyacentes, dándole al material una
mayor resistencia.
MICOTOXINA: Sustancias tóxicas obtenidas metabólicamente por algunos
géneros y especies de hongos cuando estos se desarrollan en sustratos como los
alimentos, y bajo condiciones adecuadas de humedad y temperatura. La presencia
de estos compuestos en el alimento para animales es importante por su capacidad
para: inducir diferentes tipos de cáncer, disminuir la conversión del alimento,
afectar en forma adversa la reproducción y originar daños en el sistema
inmunológico.
FIBROINA: La mayor parte de las sedas están constituidas por la proteína fibrosa
fibroína y por una proteína amorfa viscosa sericina, que desempeña el papel de
cementación. La fibroína de la seda está formada por cadenas con plegamiento b
antiparalelo, en el cual las cadenas se extienden paralelamente al eje de la fibra.
Los estudios muestran que grandes extensiones de la cadena están constituidas
por seis residuos que se repiten.
(- gli -ser - gli - ala - gli - ala -)n
Las hojas b proyectan la glicina hacia una superficie, las cadenas laterales de la
alanina y la serina están dispuestas hacia la otra superficie. Además, las cadenas
se apilan, de modo que las capas en las que se establece contacto con las
cadenas laterales de la glicina se alternan con aquellas de alanina y serina. Esta
estructura explica en parte las propiedades mecánicas de la seda.
DESNATURALIZACIÓN: La desnaturalización es causada por calor, por ácidos o
bases fuertes o por otros varios agentes. La extrema facilidad con que se
desnaturalizan muchas proteínas dificulta el estudio. La desnaturalización produce
un cambio fundamental en la proteína, en particular destruyendo toda actividad
fisiológica (la desnaturalización provoca cambios en la estructura secundaria de
las proteínas). Los ácidos nucleicos también sufren del proceso de
desnaturalización,
FAN: Los microorganismos necesitan como elemento fundamental el nitrógeno,
sin este no se da la reproducción de microorganismos, pero todo el nitrógeno de la
muestra no es asimilable por las bacterias, solo el que se presenta en forma de
amino-nitrógeno libre (FAN: free amino nitrogen). El FAN es requerido para la
síntesis de proteínas, componentes de la pared celular y enzimas.