Trabalho Prático nº6

Técnicas de Coloração

Intrudução:

Este trabalho surgiu no âmbito da disciplina de Microbiologia. Neste trabalho foram estudadas várias técnicas de coloração de microrganismos, neste caso, bactérias. A coloração de bactérias permite-nos recolher informações sobre estas mesmas, e em relação à sua morfologia, em Gram + ou Gram – que denominamos de Coloração diferencial. Observa-mos também estruturas, neste caso cápsulas e foi feita também uma coloração vital.

A coloração simples foi realizada para observar a forma e arranjos das bactérias. A coloração vital permite-nos observar através da aplicação de um corante, se estas ficam vivas ou mortas através da sua cor após aplicação do corante. Para observar a forma e tamanho das células foi utilizada a coloração negativa. Foi também realizada uma coloração diferencial, nomeadamente coloração de Gram, esta diferenciação é feita em Gram + e Gram -, em que as bactérias que são Gram + apresentam uma parede com elevado teor em peptidoglicano ( cerca de 80% ) e as Gram – apresentam pouco teor de peptiglicano ( cerca de 10 % ) e muitos lipidos. Se as células corarem de rosa ou azul, dependendo do corante, são Gram -, se ficarem violeta são Gram +. Dentro da coloração de estruturas, foram corados esporos e cápsulas.

Em relação aos corantes e para a técnica de coloração de Gram são usados os seguintes corantes e têm as respectivas funções:

Corante primário – cristal violeta: cora o citoplasma de púrpura, independentemente do tipo de célula.

Mordente – soluto de lugol: aumenta a afinidade entre o violeta de cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da célula.

Agente descolorante – álcool: solvente lipídico, desidrata o peptidoglicano. Contrastante – safranina: cora o citoplasma de vermelho.

Objectivos:

- Aprender a preparar e interpretar uma coloração de Gram;

- Identificar a morfologia, tipo de agrupamento e reacção à coloração de Gram de várias espécies bacterianas;

- Identificar factores que alteram os resultados da coloração de Gram;

Resultados:

Bactérias Gram –(rosa) :

Bactérias Gram +(violeta):

Na coloração vital:

- Se a célula estiver morta o corante fica azul na mesma, mantendo-se oxidado.

- Se a célula estiver viva o corante fica incolor, pois a célula reduz-se.

Na observação da morfologia:

- Através da morte celular, usando o calor ou agentes químicos foi possível observar a morfologia das células. Foi utilizada também a coloração negativa para visualização da forma e tamanho das células.

Coloração de esporos:

- Foi realizada para poder-mos ter uma melhor visualização da posição da célula, sendo consideradas 3 posições, posição central, subterminal e terminal.

Bibliografia:

http://www.prof2000.pt/users/biologia/tcolgram.htm

Relatório realizado por: Tiago Pinto, nº 24870, Engenharia do Ambiente