Andreia Nunes Oliveira Jardim

Laboratório de Toxicologia Universidade de Brasília

419 princípios ativos permitidos (Anvisa, 2007)

8º consumidor mundial de agrotóxicos 3,2 kg/ha; 1º Holanda 17,5 kg/ha (Sindag, 2003)

5º país exportador de produtos agrícolas (MAPA, 2004)

A presença de resíduos de pesticidas em alimentos:◦ Risco para saúde humana◦ Barreira alfandegárias

São compostos mundialmente utilizados:◦ Forte atividade fungicida;◦ Pesticidas não-sistêmicos◦ Baixa persistência ambiental

5 DTC permitidos em 39 culturas de alimentos – mancozeb, metiram, propineb,

tiram e metam sódio. (Anvisa, 2007)

PARA (2001-2004) ◦ >20% das amostras positivas para DTC

Composto(classe)

Estrutura

Metan sódio(N-Metil ditiocarbamato)

Tiram(Dissulfeto de Tetralquiltiuram)

Mancozeb, Metiram(Etilenobisditiocarbamatos –

EBDC)

Propineb(Propiletilenobisditiocarbamato)

HN

CH3

S

S

Na

N SS N

CH3CH3

S

SCH3

CH3

CH2

CH2

NH

NH

C

C

S

S

S

S Zn(NH3)

CH2

CH2

NH

NH

C

C

S

S

S

S

3 X

(Zn)yCH2

CH2

NH

NH

C

C

S

S

S

S Mn

X

S NN S

Zn

S CH3

H

H

S

X

Características◦ Degradação

Fotólise e hidrólise Perda durante processamento da amostra

◦ EBDC`s e propineb – polímeros – insolúveis em solventes orgânicos

Toxicidade◦ Baixa toxicidade aguda◦ Metabólitos neurotóxicos e carcinogênicos

EBDC`s – etilenotiouréia (ETU) Propineb – propilenotiouréia(PTU)

• As metodologias analíticas mais utilizadas incluem a hidrólise ácida das moléculas de DTC para liberação do CS2.

• O CS2 liberado poder ser diretamente analisado por CG/FPD e CG/MS ou complexado e determinado espectrofotométricamente.

• Definição de resíduo nacional e internacionalmente: ditiocarbamatos total, expresso em CS2 mg/Kg .

Quantificação de ditiocarbamatos total

CH3N

CH3

S

SZn

S

S

NCH3

CH3

CH3N

CH3

S

S H + ZnCl2

N+CH3

CH3

H

H Cl-2

2 CS2

(CH3COO)2CuHO

N

HO

H

N CS

SCu

S

SC N

OH

OH

HO

HO

Ziram

2 HCl 2

Headspace

Isooctano

Espectrofotômetro 435 nm

CG/FPDCG/MS

CulturaEspectrofotometria

CS₂ mg/Kg* CG/FPD

CS₂ mg/Kg*Razão

Espec/CG

Maçã0,25 0,27 0,931,13 1,21 0,93

Uva0,08 0,11 0,730,09 0,11 0,820,10 0,12 0,83

Pimentão 0,40 0,44 0,91

Alface1,00 0,9 1,111,64 1,58 1,04

Mamão

0,07 0,07 1,000,08 0,07 1,140,08 0,13 0,620,09 0,12 0,750,10 0,1 1,000,30 0,3 1,00

Tomate

0,09 0,13 0,690,10 0,09 1,110,12 0,18 0,670,35 0,3 1,170,40 0,42 0,950,40 0,45 0,89

Ditiocarbamato, como CS2 por espectrofotometria e CG/FPD

*LOQ = 0,05 CS2 mg/Kg

• Embora os Limites Máximos de Resíduos são expressos como CS2 mg/kg, não há como saber sua origem.

• Exemplo: FeijãoLMR = 0,3 CS2 mg/kg Mancozeb e

Tiram• Falso-positivo:

• Família das Brassicas (Brócolis, couve-flor, repolho)

• Cebola

09/2006 – 11/2007 - 159 amostras analisadas- Método Espectrofotométrico; LOQ = 0,05 CS2 mg/Kg

34 falso-positivos

Assumir a fonte de CS2 ◦ IDA Propineb = 0,005 mg/kg pc◦ IDA EBDC’s = 0,03 mg/kg pc◦ Em Caldas et al. (2006)

– 10 a 30 % CS2 propineb

– 70 a 90 % CS2 EBDC (mancozeb e metiram)

Falso-positivos◦ superestimação da exposição e risco

• Extração: EDTA, sulfato ácido de tetrabutilamonia (TBAHS), fosfato ácido dissódico (Na2HPO4) . Algumas metodologias utilizam L-cisteína e derivatização com iodeto de metila.

• HPLC, Detecção– UV (280 nm ou 286 nm)– Eletroquímico (0,60 V – 0,70 V)

• Limitação: Não separa compostos da mesma classe

Van Lishaut & Schwack, JAOAC 2000

1. Metam Sódio2. Ziram3. Mancozeb4. Propineb

Detector Eletroquímico

Detector UV

Van Lishaut & Schwack, JAOAC 2000

Abranger as principais classes de pesticidas como organofosforados, carbamatos,

organoclorados, piretróides, etc. O primeiro MMR foi publicado em 1963 (Mills

et al.) (FDA) Introduzidas outras MMR conforme as

necessidades e o avanços tecnológicos apareciam (Luke, mini Luke; Specht, Becker).

Anastassiades M. et al. 2003

Principais dificuldades enfrentadas pelos analistas:◦ Solventes

Volume/toxicidade Polaridade

◦ Tempo de extração◦ Efeito matriz◦ Recuperação◦ Disponibilidade de equipamentos

Mini Luke Ultrason QuechersAmostra, g 15 5 - 15 10 - 15

Reagentes

30 mL Acetona 30 mL

Diclorometano 30 mL Éter de

petróleo

40 mL Acetato de etila

8g - 30g Sulfato de sódio

10 mL -15 mL acetonitrila

Tempo Extração

1,5 min 35 - 15 min 1 min

Tempo finalização

4 min Centrifugação 10 min 5 min Centrifugação

Clean up - SPE PSA

Extração

Pan J. et al. 2008; Caldas E.D. et al. 2005;

CG◦ CG/FPD/ECD/NPD - US$ 50.000 ◦ CG/MSD; CG/MS/MS; CG/ITD; CG/Q/TOF

US$ 200.000 HPLC/UPLC

◦ LC/MS; LC/MS/MS◦ US$ 450.000

Manutenção◦ Solventes/Colunas

Cromatográficas/Gases/Colunas SPE/Filtros Profissionais capacitados.

Kovalczuk T. et al. 2006; Leandro C.C. et al. 2007; Picó Y. et al. 2003;

Implementação◦ Recursos humanos

Padrões Certificados◦ Custo◦ Resíduos

Calibração dos equipamentos Ensaios de proficiência Acreditação Manutenção

DTC por CS2

◦ Problemas legais para mercado interno e internacional

◦ Avaliação de risco Laboratórios rede pública – poucos são

devidamente equipados para análises multirresíduos.

Confiabilidade dos resultados ◦ sistema da qualidade◦ ensaios de proficiência

andreia@unb.brandreia@unb.br