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Prof. Kyoshi Beraldo | Centro de Ensino São José

Biologia molecular3ºEM2017

aula

#05março

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Bactéria: uma ferramenta•Ciclo rápido• E.coli duplica em 20min.

• Populações pequenas• bilhões em uma placa de petri

•DNA circular e pequeno• Plasmídeos• pedaços extra de DNA• intercambiáveis

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#05Biomol

Bactéria

Enzimarestrição

Eletrofor.Paternid.

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Transgenia

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Enzimas de restrição•Cortam DNAem locais específicos• Ex: enzima

bacteriana Eco RI corta onde houverG|AATT CC TTTA|G• vendidas por

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Enzimas de restrição• DNA submetido a uma

enzima sofre cortes sempre nos mesmos locais• Ex: DNA do vírus SV40

tratado com enzima Hind IIé cortada em 11 fragmentos

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Estrutura do DNA• "Escada" do DNA composta de fosfato e desoxirribose• Posição dos carbonos: 5' em cima, 3' em baixo

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Replicação do DNA• Novos nucleotídeos adicionados somente no sentido 5' -> 3'

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Replicação do DNA• Complexo enzimático - DNA polimerase, Primase etc.

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Eletroforese•Analogia: • trens de tamanhos variados e desconhecidos• trem menor chega mais rápido

•Cromatografia: processo semelhante

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Eletro

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Eletroforese•Gel de análise genética de milhos "cavalo de tróia"

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Teste de paternidade•Trechos de DNA VTNR

• número variável de repetições em sequência

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Sequenciamento de DNA• Método Sanger• Bases nitrogenadas

marcadas radioativamente

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Bactérias•Plasmídiocomo vetor

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Bactérias•Vírus bacteriófagocomo vetor

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Bactérias•Transgenia: produção de insulina humana

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Plantas• Plasmídio da

bactériaAgrobacterium

• Multiplicaçãodo DNA

• Injeção doDNA em planta

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Animais

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Éxons e Íntrons• Íntron - região do DNA que não codifica aminoácidos• presentes no DNA de eucariotos

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Splicing•O mesmo

trecho de DNA podeser transcritode formasdistintas

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