UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTASCENTRO DE DESENVOLVIMENTO TECNOLÓGICO

CURSO DE GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIADICIPLINA DE GENÔMICA II

AULA PRÁTICA:AULA PRÁTICA:PCR-RFLP E SEQUENCIAMENTOPCR-RFLP E SEQUENCIAMENTO

Helena Strelow Thurow

Pelotas, abril de 2011

PCR-RFLPPCR-RFLP

Fragmento amplificado: 199pb

Sitio da Enzima BstUI: CGCG

digestão digestão ––AciIAciI ou ou SfcISfcI

DNADNA PCRPCR eletroforeseeletroforese anan áá lise em gellise em gel

eletroforeseeletroforeseEnzymatic cleavageEnzymatic cleavage

BstBstUU II

DNADNA PCRPCR ElectrophoresisElectrophoresis

ElectrophoresisElectrophoresis

Enzy

me

Agarose gel Agarose gel analysisanalysis

Agarose gel Agarose gel analysisanalysis

199p199pbb

Amplificação do fragmento do SNP Amplificação do fragmento do SNP Arg72Pro Arg72Pro

199p199pbb

113p113pbb

86pb86pbArgArg

ProArg

ProPro

ArgArg

ArgArg

ArgArg

ArgArg

ProPro

ProArg

ProPro

ArgArg

ArgArg

ArgArg

ArgArg

Genotipagem das amostras para o SNP Genotipagem das amostras para o SNP Arg72ProArg72Pro

ArgininaArginina

ProlinaArginina

ProlinaProlina

SEQUENCIAMENTOSEQUENCIAMENTO

Pré-

mix

Prim

er

DN

A

vortex +

sequenciamento

2ul 2ul 2ul

PURIFICAÇÃOPURIFICAÇÃO

SEQUENCIAMENTOSEQUENCIAMENTO

PRÓXIMAS ETAPAS...PRÓXIMAS ETAPAS...