Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESBDepartamento de Tecnologia Rural e Animal - DTRA Anlise de AlimentosEngenharia de Alimentos

Curva Padro pelo Mtodo DNS

Relatrio apresentado ao professor Nvio Batista, como pr-requisito para nota parcial da disciplina Anlise de Alimentos, pelos alunos Francklim Joel, Marielle Prates e Ricardo Fillho.

ITAPETINGA BAMARO DE 2013

INTRODUO

A espectrofotometria, medida de absoro ou transmisso de luz amplamente utilizado em anlises qumicas. Seu princpio baseia-se na comparao de sinais gerados pela diferena entre as radiaes transmitidas por solues tomadas como referncia e as radiaes transmitidas pelas amostras analisadas, num determinado comprimento de onda, emitido pelo aparelho (espectrofotmetro), e que caracterstico da absoro do composto que se quer identificar. Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi absorvida por essa soluo. Usando um prisma o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda (tal como acontece no arco-ris com a separao das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar atravs da amostra um feixe de luz monocromtica (de um nico comprimento de onda, ou quase). O espectrofotmetro permite-nos saber que quantidade de luz absorvida a cada comprimento de onda. A espectrofotometria apresenta maior sensibilidade e exatido de resultados. Dessa forma, pode-se construir curvas padres cujas equaes de regresso so utilizadas para a quantificao dos compostos em amostras desconhecidas.O mtodo DNS utiliza a caracterstica redutora de acares para sua quantificao. O princpio vem atravs de uma molcula chamada cido 3,5 dinitro saliclico (DNS), que quando puro apresenta uma colorao alaranjada, este cido facilmente reduzido por acares, embora possa apresentar menor eficincia se a soluo utilizada possuir outras espcies redutoras fortes. Quando reduzido, o DNS se torna cido 3-amino 5 nitro saliclico, e passa a apresentar-se com uma colorao acastanhada. Atravs dessa mudana de colorao possvel construir roteiros de ensaios colorimtricos e medir a quantidade de acares relacionando a quantidade de DNS reduzido (a estequiometria da reao 1:1).

OBJETIVO:Construo de uma curva padro para utilizao na determinao de acar redutor pelo mtodo do DNS, empregando a glicose como padro.

MATERIAIS E REAGENTES

gua DestiladaGlicosecido 3,5 dinitrosaliclicoSoluo de NaOH 1NTartarato de Sdio e potssio tetrahidratado1 Balo volumtrico de 100 ml1 Bquer de 50 ml1 Basto de vidroBuretas de 10 e 50 ml7 tubos de ensaio com tampa de roscaPipeta volumtrica de 1ml

EQUIPAMENTOS

Espectrofotmetro UV-VisBalanaTermmetroBanho Maria

MTODOS

PREPARO DA SOLUO PADRO DE GLICOSE: 5MOLS/mL:Pesou-se em um bquer de 100mL, 0,09g de glicose. Anotou-se a massa para realizar os clculos, solubilizou com gua destilada e transferiu-se para balo volumtrico de 100 mL. Avolumou o balo.PREPARO DO REAGENTE DNS: Para preparar o reagente DNS dissolveu-se com aquecimento 5 gramas de cido 3,5 dinitrosaliclico em 150 mL de gua destilada e 200 mL de soluo de NaOH 1N. Aps dissoluo, foram adicionadas 150 g de tartarato de sdio e potssio tetrahidratado.Ajustou-se o volume para 500 mL em balo volumtrico. O reagente foi ento colocado em frasco envolvido com papel alumnio para proteo contra luz e estocado em geladeira.CONSTRUO DA CURVA PADROEm tubos de ensaio com tampa, e com o auxlio da pipeta de 10 mL, preparou-se os seguintes pontos da curva, em duplicata com exceo do branco:AGUA DESTILADA( mL)SOLUO PADRO (mL)

Branco1,0-

10,80,2

20,60,4

30,40,6

40,20,8

5-1,0

Foi adicionado 1 mL de DNS em cada tudo, agitou-se e aqueceu 100C em banho-maria por 5 minutos. Em seguida, resfriou e acrescentou-se 13 mL de gua destilada em cada tubo, com auxilio da pipeta de 50 mL, tampou-se os tubos e homogeneizou-se.

Grfico 1 Curva Padro da Glicose pelo mtodo DNS.

RESULTADOS E DISCUSSES

A absorbncia inversamente proporcional a Transmitncia, por exemplo, se a luz passa atravs de uma soluo sem absoro nenhuma, a absorbncia zero, e a transmitncia percentual 100%. No caso em que toda a luz absorvida, a transmitncia percentual zero e a absorbncia infinita.Nesse grfico, a reta indica a proporcionalidade entre o aumento da concentrao e da absorbncia e a poro linear correspondente ao limite de sensibilidade do mtodo espectrofotomtrico para o soluto em questo.Atravs do grfico pode-se gerar a equao da reta de calibrao que y = 0,0005x 0,0156.Outro fator relevante, diz respeito ao nmero de pontos para construo da curva de calibrao, que deve ser de no mnimo 5 ou 6, para maior certeza na determinao da concentrao da amostra.

CONCLUSO

Com base nos resultados observados, pde-se concluir que a curva de calibrao est de forma linear com os pontos obtidos das concentraes das solues analisadas, e que a margem de erro foi pequena, tendo em vista que o coeficiente linear (R) apresentou um valor muito prximo de 1, aproximadamente 0,9948.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BRACHT, A; ISHII-IWAMOTO, E. L Mtodos de Laboratrio em Bioqumica. So Paulo: Manole, 2003.

SAGIO, S. et al. Curvas Padres para determinao de acares redutores, acares solveis totais, protenas e aminocidos. Universidade Federal de Lavras (UFLA). Minas Gerais, 2007.