PESQUISA TRABALHO DE DO LOURDESARTOGOInterao Antgeno/AnticorpoDepende das caractersticas:Afinidade: fora de ligao entre o epitopo e um Ac.Avidez: soma total de todas as afinidades.Valncia: nmero de stios de ligao ao antgeno presente na molcula de anticorpo.Temos 3 fases:1 fase: interao eptopo com seu anticorpo especifico. Temos que ter aumento de afinidade e avidez(interao).Conjugado: vai ser um anticorpo ou um antgeno marcado com uma enzima ou florescncia.2 Fase: visualiza a reao a partir da tcnica utilizada.3 Fase: o que o paciente sente, uma interao entre o antgeno e o anticorpo, podendo ser benfico ou no.Reao Especifica : com forte ligao, combinao de um anticorpo com apenas um determinante antgeno especfico, alta afinidade.Reao Cruzada: onde o anticorpo se interage com o antgeno errado por apresentar semelhanas qumicas estruturais entre eles, ligao fraca.Imungeno: sistema imunolgico.Janela Imunolgica: perodo que entra em contato mas no apresenta o anticorpo.Parmetros para Validao de um Teste Sorolgico.Validao: apresenta eficincia, preciso, exatido e reprodutibilidade.Sensibilidade de um Teste: o parmetro do resultado e sempre 100%, verdadeiramente positivo.Sensibilidade da Tcnica: quanto maior a sensibilidadeda tcnica, menor concentrao de Ag e Ac na minha amostra ser detectada. Evita falsos negativos.Sensvel: se tiver pouco Ag ela consegue identificar como no comeo da doena.Pouco Sensvel: tem que ter muito Ag para conseguir identificar.Especificidade: so os verdadeiramente negativos, no doentes. Evitar falso positivo.Eficcia ou Eficincia: so os verdadeiros positivos e verdadeiros negativos. Valor absoluto mais prximo de 1 melhor eficcia do meu teste.Valor Preditivo Positivo: proporo de indivduos realmente doentes.Valor Preditivo Negativo: proporo de indivduos realmente no doentes.Preciso: reprodutibilidade, o resultado/teste tem que dar valores iguais.Exatido: ele d o resultado se for igual ao meu controle(padro). Tem que estar prximo ao meu padro que vem.Reprodutibilidade: obteno de resultados iguais em testes realizados com a mesma amostra.Testes Sorolgicos/ Imunoensaios a deteco de Ag e Ac, hormnios, drogas, etc.So divididos em 2 tipos:Reagentes no marcados: precipitao, nefelometria, turbidimetria.Reagentes Marcados: so tcnicas que utiliza anticorpos marcados com algo para pesquisar ou quando for pesquisar um soro com antgeno marcado por algo. Pode ser marcado por elisa, fluorocromo, istopo.Conjugado Primrio:que j esta marcado e reage com a amostra.Conjugado Secundrio: um anti anticorpo.Tcnica Direta: sempre pesquisa um antgeno(soro) + AC. Temos quer adicionar substrato para gerar a cor ou fluorescncia ou reao qumica.Tcnica Indireta: o anticorpo na amostra do paciente.Fase de Transio: se liga tanto IgG como o IgM pois esta indo da fase aguda para fase crnica.Tcnica Qualitativa: presena ou ausncia, positivo ou negativo.Tcnica semi quantitativa: solta o resultado pelo Ttulo. Realiza uma titulao= diluir a amostra de soro do paciente, sempre utiliza microplacas.Titulao: at onde ocorreu reao entre antgeno e anticorpo gerando cor ou aglutinao. Diluir a amostra do paciente.Ttulo: a maior diluio que ocorre entre Ag e Ac.Tcnica Quantitativa: exatamente a concentrao Ag ou Ac presente na amostra.Tcnica de Precipitao: o Ag solvel + Ac solvel = agregados visveis precipitados, ocorre em meio lquido, semi-slido e slido. Temos: Imunodifuso simples, dupla e contra imunoeletroforese.Efeito Prozona: ocorre um ecesso de Ac, com isso no deixa o Ag se ligarem e com isso gera um resultado negatico.Imunodifuso Simples: uma tcnica de difuso simples em tubos. Em cada tubo vai ter o gel e a diluio do soro, comea com o soro puro edepois faz as diluies. Depois que gelificar colocar o antgeno e deixa uma semana. Forma um precipitado visvel, mas para isso temos que ter bastante antgeno para se interagir com os anticorpos.Iminodifuso Dupla: ambos so lquidos, o antgeno e o anticorpo vo se encontrar se forem positivos. O anticorpo se difunde para encontrar o antgeno. Demora 3 dias para visualizar.Contra Imunoeletroforese: aplica uma corrente eltrica a mesma tcnica da dupla, a diferena a aplicao da corrente eltrica, onde acelera em 1 e meia para facilitar o diagnstico. Se for positivo forma a linha de precipitao.Tcnica de Aglutinao: tem que formar uma agregado solvel. No 1 estgio vai ter Ag + Ac (soro) se incubam para se ligarem, no 2 estgio os AC se ligam para determinar Ag.Temos: aglutinao direta e aglutinao indireta/passiva.Aglutinao Direta: reao de Ac com o Ag naturais de hemcias, bactrias,... Pesquisa Antgeno.Aglutinao Indireta/Passiva: reao de anticorpo com antgeno artificialmente aderidos a hemcias, ltex, etc. Onde forma um agregado visvel. Pesquisa anticorpo que o paciente apresenta.Teste de Hemaglutinao Passiva: Pesquisa de IgM e IgG. O ensaio feito em microplacas em torno de 1 a 2 horas. IgG: ele no destri. IgM: mercaptoetanol ele destri.PESQUISAAfinidadevs.avidez-- As interaces entre antignios e anticorpos so comparveis s interaces enzima-substrato, definindo-se para cada tipo de anticorpo e o antignio que ele reconhece umaafinidade, medida em unidades de l/mol (M-1). As IgMs tm em geral uma baixa afinidade (Ka da ordem dos 107M-1), enquanto as IgGs tm geralmente uma alta afinidade (109M-1). Mas a medio das constantes de afinidade Karequer antignio e anticorpo purificados, o que no caso destes ltimos s possvel com anticorpos monoclonais. Para soros policlonais, em vez de se falar de afinidade fala-se deavidez, que uma medida global da fora das interaces entre o antignio (purificado) e os diversos anticorpos que o reconhecem, presentes nesse soro (em condies experimentais padronizadas). Se for vivel extrapolar dos resultados experimentais para situaes in vivo, a avidez tem um grande significado fisiolgico, pois permite avaliar a imunidade do indivduo para o antignio com que se fez a medio. Nestas situaes, a avidez mede-se, ao contrrio da afinidade que em medidas universais, em termos relativos, sendo o padro o soro pr-imune: do mesmo indivduo ou estirpe quando sem contacto prvio com o antignio. A avidez depende no s da afinidade das CDRs de uma imunoglobulina mas tambm do nmero de CDRs por imunoglobulina: as IgMs (pentamricas) tm uma avidez da mesma ordem de grandeza que as IgGs (monomricas), formando redes de interaces antignio-anticorpo que atingem a zona de equivalncia com ttulos semelhantes, apesar da sua mais baixa afinidade, s IgGs.PARTE IIIA natureza dos determinates antignicos:Determinate conformativo: quem determina o anticorpo que vai ligar a ele o antgeno.Determinante linear: pode ser acessivel ao antgeno na sua forma conformativa oudesnaturada (no perde sua caracterstica antigenica).Determinante neoantigenico: quando h uma alteo na caracteristica de uma protena cria-se um antgeno novo.Quando desnatura uma protena, essa perde sua conformao (capacidade de se ligar ao anticorpo).Valencia e avidez na relao antigeno-anticorpo:Valencia: Nmero de ligaes que uma molcula pode fazer com a outra.Avidez: Quanto mais forte for uma ligao(menor coeficiente de dissociao) maior ser a avidez das molculas. Os stios de ligao de AG da maioria dos ACs so superficies planas que podem acomodar eptopos conformativos de macromolculas.Ao se analisar a avidez (fora de ligao) entre AG-AC deve-se considerar o nmero de ligaes entre eptopos e seus stios no AC.QUANTO MAIS VALENCIAS, MAIOR A AVIDEZ!Caractersticas do reconhecimento do AG:Especificidade: caracterstica que determina que um AG reconhecido por um nico AC, por um nico clone. Os ACs podem apresentar especificidade extraordinria, distinguindo pequenas diferenas nas estrutura qumica de um AG.Diversidade: o grande nmero de ACs que se ligam a diferentes AGs.Afinidade e avidez: as mutaes somticas na regio varivel das imunoglobulinas so responsveis pelo aumento da afinidade e da avidez dos ACs durante as resposta imunolgicas.O Complexo principal de histocompatibilidade (MHC):Os linfcitos T NO reconhecem AGs livres, s reconhecem AG apresentadosRestrio do MHC:Os linfcitos s reconhecem AG restritos ao MHC prrprio.Imunizao gera a resposta imunolgica.HLA: AG leucocitrio humano. So genes que determinam a molcula de MHC.Estruturas das molculas de MHC:Cada molcula de MHC consite em uma fenda extracelular que liga os peptdeos e um par de domnios semelhantes a imunoglobulina.Os domnios imunoglobulinas no polimrficos contem stios de ligao para molculas CD4 e CD8.O MHC no tem a mesma especificidade que os linfcitos, ele s apresenta, no determina a especificidade.Cada molcula de MHCI ou MHCII possui uma nica fenda de ligao que pode acomodar peptdeos diferentes.Os peptdeos que ligam ao MHC possuem caractersticas estruturais comuns.A associao peptdeo-MHC saturada e de baixa afinidade.Ligao dos peptdeos ao MHC:A ligao feita por ligaoes no covalentes mediadas por aminocidos tanto nos peptdeos como nas fendas do MHC.Expresso de molculas de MHC:Quem limita ou determina essa expresso o perfil de citocinas produzidas por linfcitos.Molculas de MHCI so expressasna maioria das clulas nucleadas.Linfcito TCD8(linfcito T citotxico) tem que reconhecer qualquer clula infectada, mas para isso deve ser apresentado ao AG e depois ele induz a clula a morrer por apoptose.Moluclas de MHCII so em geral encontradas somente em clulas dendrticas, linfcitos B e macrfagos.Linfcito TCD4 (linfcito T auxiliar) ele mesmo coordena sua diferenciao. O TCD4 ativado, prolifera-se e produz citocinas que iro atuar sobre outras clulas.A taxa de transcrio o principal determinante da sntese e expresso do MHCII nas clulas.Processamento e apresentao do AG aos linfcitos T:Na imunidade celular as clulas TCD4 ativam o macrfago para destruir os microorganismos. E os TCD8 destroem clulas infectadas por microorganismos.Duas formas que o linfcito B consegue apresentar o AG:- aprsentao do linfcito B pode expressar o MHC.- pode apresentar o AG a sua imunoglobulina de membrana.Tipos de APCs para TCD4:As mais bem definidas so as clulas dendrticas (que so clular apresentadoras de AG profissionais), fagcitos mononucleados e os linfcitos B. Todas com papis diferentes.As clulas dendrticas ficam localizadas em locais estratgicos do organismo (AG entra em contanto com o organismo e ela est pronta para atuar).Captura e apresentao de AG in vivo:A primeira resposta dos TCD4 iniciam nos rgos linfides perifricosAs clulas dendrticas imaturas nos epitelios capturam o AG e os tranpostam para os linfonodos de drenagem.Obs.: As clulas dendrticas so mais eficientes para iniciar a resposta primria, pois, elas esto localizadas em locais privilegiados e tambm porque elas s apresentam AG.Na fase efetora, os linfcitos TCD4 podem reconhecer e responder a AGs em tecidos no linfides.PARTE IResposta imune humoral: mediada por anticorpos (linfcitos B).- Resposta imune celular: mediada por linfcitos T.

- Os linfcitos B amadurecem e se diferenciem em plasmcitos, a partir da passam a produzir os anticorpos.- Funo bsica dos ACs: neutralizar microorganismos,fagocitar e ativar o sistema complemento.- A fagocitose de um microorganismo por uma clula do sistema imune depende da opsonizao desse MO.*OPSONIZAO: Ac reconhece o MO, reveste-o por citocinas de forma que uma APC (clula apresentadora de Ag) reconhea mais facilmente esse MO.

- Linfcitos T podem ser divididos em auxiliar (CD4+) e citotxico (CD8+).- Ly-T CD4+ s reconhece antgenos que forem apresentados por uma APC juntamente com uma molcula MHC II, j os Ly-B so capazes de reconhecer Ag solveis sozinhos.-Ly-T CD4+, dependendo do tipo de antgeno, ter funo de ativao de macrfagos, iniciar um processo inflamatrio, ativar linfocitosT e B se proliferarem e diferenciarem.- Ly-T CD8+ uma clula efetora e, assim como o cd4+, vai reconhecer apenas antgenos apresentados por uma APC com uma molcula de MHC I. Assim que reconhecer o antgeno ele vai induzir a clula infectada a morrer por apoptose (portanto no haver processo inflamatrio).*Clula Efetora: aquela que destri o antigeno.

- AS clulas NK so clulas da resposta INATA, portanto no tem memria. Elas tm a sua funo potencializada quando estimuladas por linfcitos T. A destruio por clulas NK tambm atraves de apoptose, com a diferena que a NK no tem especificidade, agindo sobre qualquer corpo estrnho que entrar em contato.

FASES DA RESPOSTA IMUNE:RECONHECIMENTO:O Ag entra no organismo e ativa um clone de clulas especificas pr-existentes (memria).ATIVAO:So necessrios dois sinais para a ativao dos linfcios, o primeiro o antigeno e o segundo a manuteno de peptdeos do antgeno no meio.FASE EFETORA:Linfcitos ativados tm a funo de eliminar os Ags que o ativaram.HOMEOSTASIA:Ao final da resposta imune o SI retorna ao estado de repouso.MEMRIA:Uma pequena populao de clones de linfcitos mantida como clulas de memria.SELEO CLONAL:Todas as clulas do sangue derivam de um nico precursor. Cada Ag seleciona um clone de Ly e estimula sua proliferao e diferenciao.Os clones de Ly amadurecem em rgos linfides, quando esto maduros e especficos para cada antgeno, entram nos tecidos linfides. Clones de Ly especficos para um antgeno so ativados por um Ag e a ocorrem respostas imunolgicas especificas para esse Ag que o ativou.Dupla sinalizao para a ativao do Linfcito:1)Atravs do reconhecimento do Ag para a ativao do linfcito.2)Atravs de componentes microbianos ou substancias produzidas durante a resposta imune (Ou seja, tem que reconhecer outras substancias microbianas no meio do antgeno, que pode ser uma molcula produzida pelo MO).

O primeiro sinal sempre uma porta para o segundo, ou seja, quando tenho o sinal um sempre vou ter o sinal dois, no entanto, o AG do sinal 1 pode ser destrudo e ainda sobrar resduos dele no organismo, permanecendo o sinal 2.CLULAS E TECIDOS DO SISTEMA IMUNE:

Tecidos especializados: rgos linfides perifricos.Clulas: Linfcitos inativos (NAIVE), Linfcitos efetores e Linfcitos de memria.

Maturao de linfcito: Os linfcitos so gerados a partir de clulas-tronco da medula ssea e migram para os rgos linfides para sofrerem maturao. As respostas imunolgicas contra antgenos estranhos ocorrem nos rgos linfides perifricos.Os linfcitos que amadurecem no TIMO tornam-se linfcitos T e os que amadurecem na prpria medula se tornaram os linfcitos B.Clulas:Neutrfilos: funo de fagocitose e ativao dos mecanismos bactericidas. Presente em maior quantidade. So polimorfonucleares, isto , possui apenas um ncleo que segmentado.

Eosinfilos: Funo de destruir parasitas revestidos por Acs, alm de apresentar funo nos processos alrgicos.

Basofilos: Produz grnulos ligados a citotoxicidade celular, porem no se sabe o local de atuao.

Mastcitos: Faz a liberao de grnulos com histamina e outros agentes vivos. um linfcito B amadurecido.

NK: Faz a liberao de grnulos lticos.Moncito: clula que ainda est evoluindo para se tornar um macrfago ( moncito enquanto est na circulao e se torna um macrfago assim que se instalar em um tecido).

Maturao dos linfcitos:Quando o linfcito ainda est na medula ssea ou no timo ele ainda virgem (ou NAIVE) e, portanto, no funcional. partir do timo ou da medula eles migram para os rgos linfides secundrios (???ou perifricos???), onde iro amadurecer e se tornarem clulas efetoras, j as clulas que no se tornarem efetoras vo se tornar linfcitos de memria, quem vai determinar qual desses dois tipos de clula o linfcito ir se tornar o tipo de citocina que vai estimular cada uma dessas clulas.

Fase de ativao dos linfcitos:Quando tem um Ag os linfcitos iniciam sua atividade sintetizando protenas, e se proliferando e diferenciando em clulas de memria.- O primeiro passo para a sntese de protenas a TRANSCRIO (cpia do DNA ou RNA).- A segunda etapa a proliferativa (expanso clonal), ou seja, a clula estimulada a se ativar, se dividir por mitose e formar clones, sendo iguais e tendo a mesma especificidade para um Ag. Isso vai gerar uma hiperplasia, inchnado os rgos linfides perifricos (NGUAS). Uma vez que o clone se proliferou, parte dele se diferenciar em clula efetora, e o resto ser de memria. As efetoras podem ser um plasmcito (produtor de Ac) ou Ly-T citotxico ou auxiliar. As de memria podem ser um LyB ou T.O moncito uma clula precursora de um macrfago, sendo que s se torna um macrfago no tecido em que se instala. Por exemplo, no epitlio o macrfago ser uma clula dendritica, no fgado uma clula de kupffer, etc...Macrfagos: fazem fagocitose e ativao de mecanismos bactericidas, apresentao de AG.Plasmcitos: So clulas resultantes da diferenciao de linfcitos B em clulas que sintetizam e secretam anticorpos.Clulas fagocitrias mononucleares: desempenham o papel de apresentao de Ag (APC) nas respostas imunes mediadas por clulas T.

ANATOMIA E FUNO DOS TECIDOS LINFOIDES:rgos geradores ou rgos linfides primriosTimo e Medula ssea.rgos linfides secundrios ou perifricosLinfonodos, bao, tecidos linfides cutneos e mucoso, etc.

*Apndice: rgo linfide que involuiu ao longo da evoluo.

Timo: local de desenvolvimento de clulas T. dividido em regio cortical (densa populao de ly T) e em medular (populao menor de ly T)Linfonodo: Locais onde a resposta imune iniciada. Dividido em zona rica em lyT (zona medular) e em zona ricaem Ly B(felicular).Bao: Principal local da resposta imune Ags provenientes do sangue. Nele tambm ocorre segregao linfocitria, e o mecanismo semelhante a do linfonodo (depende de citocinas).O bao um importante filtro anguineo, onde os macrfagos da polpa vermelha retiram microorganismos e particulas do sangue.O bao tambm o principal local de fagocitose de microorganismos opsonizados. Portanto uma pessoa que no tem bao est disposto a ter qualquer doena infecciosa proveniente de agentes que usam o sangue para se disseminar.

SI cutneo: a pele contem um sistema imune especializado constitudo pos linfcitos e APCs. A pele participa na defesa contra microorganismos pois possui habilidade de gerar e manter respostas imunes e inflamatrias.SI mucoso do trato gastro intestinal e respiratorio so colonizados por ly e apcs.PARTE IIReconhecimento do AG:- Acs so produzidos por plasmocitos q so lybestimuladosWE@#$@&%...- Imunoglobulinas so tipos de anticorpos.- Anticorpos reconhecem ags solveis.- TCR um receptor de membrana para antgenos, mas soh vai reconhecer antgenos apresentados pelo MHC. TCR um receptor apenas de clula T.- No anticorpo o local de ligao do antgeno composto por 3 CDR (regio determinante de complementariedade) na VH e 3 CDR na VL.- Um TCR composto por 3 CDR na V.alfa e 3 CDR na V-beta.- Uma molcula de MHC composta por uma fenda de ligao de peptdeo de alfa1 e alfa2 (classe I) e alfa1 e beta1 (classe II). Ele s reconhece peptdeos. TCR s reconhece peptdeos ligados ao MHC e anticorpo reconhecem quaisquer macromolculas e substancias qumicas.Estruturas moleculares dos ACs: Um Ac tem estrutura bsica simtrica com duas cadeias leves idnticas e duas cadeias pesadas idnticas.Regio de ligao do AG: formado pelos domnios variveis parecidas entre si, com pequenas mudanas de uma para outra. Todas elas tem duas regies variveis e o resto da molcula chamada de regio constante, esta tem como funo efetora determinar o reconhecimento daquela imunoglobulina. A regio constante ligada na clula do sistema imune, ou seja, o anticorpo, e a regio varivel se liga no AG especifico de acordo com o tipo de imunoglobulina.A cadeia varivel varia de acordo com a resposta do antgeno e sua seqncia de aminocidos. A cadeia pesada chamada de H (heavy) e a leve de L (light).Os domnios das imunoglobulinas so as regies que desempenham o papel de ligao com o Ag (na parte varivel) e com uma clula do sistema imune (parte constante).

Uma clula B produz Acs clonados com a mesma regio varivel e com a mesma especificidade para um tipo de AgANTICORPO MONOCLONAL.Regio varivel das imunoglobulinas: so chamadas de variveis pois a seqncia de aas varivel, e distingue Acs feitos por diferentes clones de lyB.Os domnios da regio C so separados do local de ligao de Ags e no participam do seu reconhecimento.Regio Hipervarivel das imunoglobulinas: a maior parte das diferenas nas seqncias entre os Acs est confinada a trs pequenas extenses nas regies VH e VL: os segmentos hipervariveis.As regies hipervariaveis formam uma estrutura tridimensional que se liga ao Ag de forma complementar, por isso so tbm chamadas de regies determinantes de complementariedade (CDRs).A CDR 3 a mais hipervariavel de todas, ela tem maior especificidade.Anticorpo ligado antgeno: ocorre na regio hipervariavel, mas no significa que todas as CDRs participam desse evento.sotipos do ACCadeia HMeia-vidaFuno

IgA1 e 2Alfa 1 ou alfa 26Imunidade das mucosas

IgD03Receptor de ag dos LyB

IgE02Hipersensibilidade imediata

IgG1 a4Gama 1 2 3 ou 423Opsonizao, ativa complemento, imunidade neonatal, ADCC ???

IgM05Receptor de ag dos lyB inatos, ativa complemento.

ADCC: citotoxicidade celular dependente de anticorpo.

Flexibilidade das cadeias de Imunoglobulinas: as moleculas de AC so flexveis, permitindo que se liguem a uma grande variedade de antgenos.H dois tipos de imunoglobulinas: as secretadas e as de membras:- importante saber a diferena entra elas pois as secretadas significam que o individuo est com a resposta imune ativada, mas se for encontrado imunoglobulinas de membrana significa que so anticorpos de memria ligados a membrana do linfcito T. O tamanho e peso molecular das duas sero diferentes. Uma imunoglobulina de membrana precisa atravessar a membrana ate encostar no citoplasma, isto porque se ela precisar de nutrientes ela tem de onde pegar.Geralmente a forma secretada menor, pois ela no necessita de uma parte da seqncia de aas que usada para fazer fosforilao (traduo de sinais feita quando a imunoglobulina esta presa na membrana, ela envia esses sinais para ativar a clula do sistema imune que ela esta ligada).Protelise de imunoglobulinas: A clivagem de molculas de imunoglobulinas por enzimas:- Papanasepara duas regies que ligam-se a antigenos (fragmentos Fab) mais a poro que liga o complemento e os receptores Fc (fragmentos Fc).- Pepsinagera um nico fragmento bivalente que liga antgeno no F(ab)2.Expresso das Imunoglobulinas no desenvolvimento dos linfcitos B: o amadurecimento dos LB acompanhado por mudanas especificas na expresso dos genes de imunoglobulinas, resultando na produo de molculas de diversas formas.