meios de cultura
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MEIOS DE CULTURA
Como preparar
• Meios comerciais devem ser hidratados
• Primeiramente devem ser pesados
• Tansferir para um frasco
• Hidratar em pequena quantidade e misturar
• Depois deve-se acrescentar o restante da água
• Levar o meio para fundir aquecer
• Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos não precisam estar esterilizados previamente
• Esterelizar em autoclave por 15 minutos e à temperatura de 121ºC
• Distribuir o meio após a autoclavação - tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias estéreis
• Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor
Classificação dos meios
• Meios para transporte e conservação• Meios para cultivo e isolamento• Meios comerciais para provas de identificação
Transporte e conservação
• Cary Blair
• Salina Tamponada
• Meio Stuart
• Agar nutriente
Cary Blair
• Microrganismos intestinais patogênicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio.
• ƒA carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação dos microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.
• Utilizado para transporte de material fecal e consequente conservação dos microrganismos.
Salina Tamponada
• Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável.
• Usado como meio de transporte de amostras biológicas.
• Contém NaCl, fosfato dipotássico anidro, Glicerina bidestilada e água destilada.
Meio Stuart
• A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.
• Usado para transporte de diversos materiais e consequente conservação dos microrganismos.
• ƒConservação de microorganismos patogênicos como: Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp. entre outros.
Agar Nutriente
• É um meio relativamente simples, de fácil preparação e barato, muito usado nos procedimentos do laboratório de Microbiologia.
• Usos: • ƒAnálise de água, alimentos e leite• Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a
exames bacteriológicos• Isolamento de organismos para culturas puras. • Observar esporulação de espécies de bacilos Gram
positivos. • O uso mais frequente - conservação de culturas em
temperatura ambiente, para os laboratórios que não dispõem de crioconservação (freezer à - 70ºC).
Cultivo e Isolamento
• Ágar TSA• Ágar Chocolate• Ágar MacConkey• Ágar Sangue• Ágar CLED• Ágar Salmonella-Shigella • Ágar Manitol (MSA)• Ágar EMB• Ágar Mycosel• Ágar Sabouraud• Ágar Verde Brilhante (BGA)• Caldo Tioglicolato com indicador• Caldo Tioglicolato sem indicador
• Caldo BHI • Caldo Selenito• Caldo Tetrationato• Löwenstein Jensen• Meio bifásico: Löwenstein e
Middlebrook,
Tryptic Soy Agar (TSA)
• Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar
• Também chamado de CASO Agar (Casein-peptone soymeal-peptone agar)
• É recomendado para o cultivo de bactérias não fastidiosas – uso geral.
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Caldo BHI• Brain Heart Infusion – meio enriquecido
• É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose.
• Fornece fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas.
• Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos.
• Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos
• Realização de teste de coagulase em tubo
• Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C
• Teste de motilidade em lâmina.
Agar Sangue
• Meio enriquecido e diferencial
• Compra-se a base comercial, depois de autoclavada e resfriada, adiciona-se sangue.
• A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos.
• Diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.
Bacillus cereus
-hemolítico
Estreptococcus -hemolítico
Enterococcus faecalis
Não hemolítico ()
Agar Chocolate
• Meio de cultura enriquecido
• À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes.
• Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.: Neisseria, Haemophilus)
• Alguns organismos que não crescem em meios comuns são capazes de crescer neste meio
Neisseria gonorrhoeae
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Agar Thayer-Martin
• Thayer-Martin Chocolate é um meio rico seletivo
• É superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis
• Contém em sua fórmula antibióticos que inibem o crescimento de Neisserias saprófitas e outras bactérias, evitando contaminações.
Neisseria gonorrhoeae
Agar Salmonella-Shigella (SS)
• Seletivo e diferencial
• Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram positivos.
• O meio possui lactose, que permite diferenciar bactérias lactose positivas e negativas
– Lactose positivas- produzem ácido que na presença do indicador vermelho - formação de colônias de cor rosa
– Lactose negativas- formam colônias transparentes.
• ƒPermite a detecção de H2S - formação de colônias de cor negra no centro.
Agar MacConkey
• Seletivo e diferencial
• O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos.
• ƒ A concentração de sais de bile é relativamente baixa, por isso não é tão seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS.
• Usado para isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose.
Pseudomonas aeruginosa
Escherichia coli Salmonella sp.
Meio Hektoen
• É um meio seletivo e diferencial
• Utilizado para detectar a fermentação de lactose e produção de H2S
• Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactérias não-entéricas
• Fermentados de lactose - amarelo ou salmão• Não fermentadores - sem cor• Produção de H2S - precipitado preto
Escherichia coli
Salmonella enteridis
Agar Sal Manitol
• Meio seletivo e diferencial
• Utilizado para selecionar Staphylococci, que crescem em altas concentrações de sal
• Diferencia Staphylococcus aureus de outros Staphylococci
• Após o crescimento, Staphylococcus aureus é amarelo (fermenta o manitol), outros Staphylococci são brancos
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus aureus Escherichia coli
Agar CLED
• Cystine Lactose Eletrolyte Deficient – Seletivo e diferencial
• A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus.
• Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina.
• Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.
• Colônias lactose positivas: cor amarela/ negativas: cor �azul.
Staphylococcus aureus
Proteus mirabilis Escherichia coli
Agar verde brilhante (BGA)
• É um meio altamente seletivo, usado para o isolamento de outras salmonelas que não a S. Typhi, existentes nas fezes e em outros materiais.
• A presença de extrato de levedura e duas peptonas fornecem os nutrientes
• A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de fenol, fornecem um sistema de diferenciação de fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).
• Salmonelas não produzem ácido a partir destes açúcares.
• O verde brilhante é o agente seletivo que inibe a flora de acompanhamento.
Escherichia coli
Salmonella sp.
Agar Eosina Azul de Metileno
• Agar EMB é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo
• Utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outros bastonetes gram-negativos).
• Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactérias gram-positivas num determinado grau - diferenciar os fermentadores
• Coliformes produzem colónias pretas-azuladas
• Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente, não fermentam lactose
• Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à rápida fermentação da lactose
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Salmonella enteridis
Meio Löwenstein Jensen
• A base do meio é constituída por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactérias
• O crescimento é satisfatório para o teste de niacina (que é positivo para Mycobacterium tuberculosis)
• Utilizado para isolamento primário das micobactérias
• Crescimento bom a excelente (colônias amarelas) - Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium
• Incubação por 60 dias
Mycobacterium tuberculosis
Agar Mycosel
• A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para selecionar dermatófitos.
• O cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias e alguns fungos filamentosos.
• Usado para isolamento de fungos patogênicos, principalmente dermatófitos, a partir de material de investigação contaminado.
• Crescimento bom a excelente: Trichophyton verrucosum, Candida albicans
• Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candida tropicalis, Penicillium spp.
Candida albicans
Agar Sabouraud
• Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leveduriformes e filamentosos.
• Cultivo e crescimento de espécies de Candidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infecções superficiais.
• Caracterização macroscópica do fungo filamentoso (colônia gigante).
Candida albicans
Sporothrix schenckii
Microsporum canis
Meios para identificação
• Ágar TSI• CaldoTSB • Meio SIM• Ágar Citrato Simmons• Ágar Fenilalanina• Ágar base uréia• Caldo Triptona• Caldo Nitrato• Caldo Malonato • Ágar Bílis-Esculina• Ágar Sangue• Caldo base de Moeller
• Ágar Dnase • Ágar Esculina• CTA – Cystine Tryticase Agar• Meio base para oxidação e
fermentação - OF• Base de nitrogênio para
leveduras
Veremos os meios para identificação na nossa próxima aula!