meios de cultura

5/26/2018 Meios de Cultura

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MEIOS DE CULTURA

Prof MSc: Priscila MartinsAULA 3


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Como preparar

Meios comerciais devem ser hidratados

Primeiramente devem ser pesados

Transferir para um frasco

Hidratar em pequena quantidade e misturar

Depois deve-se acrescentar o restante da gua

Levar o meio para fundir aquecer


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Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos noprecisam estar esterilizados previamente

Esterilizar em autoclave por 15 minutos e temperatura

de 121C

Distribuir o meio aps a autoclavagem - tubos, frascos,placas, pipetas e vidrarias estreis

Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas - tampas fechadas no permitem a entrada dovapor


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Classificao dos meios

Meios para transporte e conservao

Meios para cultivo e isolamento

Meios comerciais para provas de identificao


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Transporte e conservao

Cary Blair

Salina Tamponada

Meio Stuart Agar nutriente


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Cary Blair

Microrganismos intestinais patognicos e outroscoliformes fecais sobrevivem bem neste meio.

A carncia de uma fonte de nitrognio impede

consideravelmente a multiplicao dos microrganismose a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles.

Utilizado para transporte de material fecal e

consequente conservao dos microrganismos.


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Salina Tamponada

Meio lquido tamponado que mantm a bactria vivel.

Usado como meio de transporte de amostras biolgicas.

Contm NaCl, fosfato dipotssico anidro, Glicerinabidestilada e gua destilada.


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Meio Stuart

A carncia de uma fonte de nitrognio impedeconsideravelmente a multiplicao de microrganismos ea composio nutritiva garante a sobrevivncia deles.

Usado para transporte de diversos materiais econsequente conservao dos microrganismos.

Conservao de microorganismos patognicos como:Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp.,

Shigellaspp. entre outros.


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Agar Nutriente

um meio relativamente simples, de fcil preparao ebarato, muito usado nos procedimentos do laboratriode Microbiologia.

Usos: Anlise de gua, alimentos e leite Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a

exames bacteriolgicos Isolamento de organismos para culturas puras.

Observar esporulao de espcies de bacilos Grampositivos. O uso mais frequente - conservao de culturas em

temperatura ambiente, para os laboratrios que nodispem de crioconservao (freezer - 70C).


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Cultivo e Isolamento

gar TSA gar Chocolate gar MacConkey gar Sangue

gar CLED gar Salmonella-Shigella gar Manitol (MSA) gar EMB

gar Mycosel gar Sabouraud gar Verde Brilhante (BGA) Caldo Tioglicolato com indicador Caldo Tioglicolato sem indicador

Caldo BHI Caldo Selenito Caldo Tetrationato Lwenstein Jensen

Meio bifsico: Lwenstein eMiddlebrook,


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Tryptic Soy Agar (TSA)

Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar

Tambm chamado de CASO Agar (Casein-peptone

soymeal-peptone agar)

recomendado para o cultivo de bactrias nofastidiosas uso geral.


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Pseudomonas

aeruginosa

Staphy lococcus

aureus

Escher ichia col i


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Caldo BHI

Brain Heart Infusion

meio enriquecido um meio derivado de nutrientes de crebro e corao,

peptona e dextrose.

Fornece fontes de nitrognio, carbono, enxofre evitaminas.

Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos,meningococos, enterobactrias, no fermentadores,leveduras e fungos.

Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste

de susceptibilidade aos antimicrobianos Realizao de teste de coagulase em tubo

Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44C

Teste de motilidade em lmina.


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Agar Sangue

Meio enriquecido e diferencial

Compra-se a base comercial, depois de autoclavada eresfriada, adiciona-se sangue.

A conservao dos eritrcitos ntegros favorecem aformao de halos de hemlise ntidos.

Diferenciao de Streptococcusspp. e Staphylococcusspp.


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Meios de Cultura

InterpretaoCor original do meio: vermelho.Beta hemlise: presena de halotransparente ao redor das colniassemeadas (lise total dos eritrcitos).Alfa hemlise: presena de haloesverdeado ao redor das colnias

semeadas (lise parcial dos eritrcitos).Gama hemlise (sem hemlise):ausncia de halo ao redor das colnias

(eritrcitos permanecem ntegros).


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PARCIALTOTAL

SEMHEMLISE


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Baci l lus

cereus

-hemoltico

Estreptococcus

-hemoltico

Enterococcus

faecalis

No hemoltico ()


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Agar Chocolate

Meio de cultura enriquecido

base do meio, adicionado sangue de cavalo,carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz comque as hemcias lisem, liberando hemina e hematina,compostos fundamentais para o crescimento dosmicrorganismos exigentes.

Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.:Neisseria, Haemophilus)

Alguns organismos que no crescem em meios comunsso capazes de crescer neste meio


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Meios de Culturagar Chocolate (AC):

InterpretaoCor original do meio: castanho escuro(chocolate).Colnias de tamanho pequeno a mdio,com pigmento amarelo: sugestivo deNeisseriaspp, Branhamella catarrhalis

ou Moraxella spp.Colnias pequenas e delicadas, compigmento creme claro: sugestivo de

Haemophilusspp.


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Micr ob iolo gia Clnic a Prof MSc. Prisc ila Martin s

Meios de Cultura


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Neisseria

gonorrhoeae

Staphy lococcus

aureusEscher ichia col i


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Agar Thayer-Martin

Thayer-Martin Chocolate um meio rico seletivo

superior a outros meios de cultivo destinados para oisolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseriameningitidis

Contm em sua frmula antibiticos que inibem ocrescimento de Neisserias saprfitas e outras bactrias,evitando contaminaes.


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Meios de Cultura

gar Thayer Martin (TM): um meio rico e superior a outrosmeios de cultivo destinados para o

isolamento de Neisseria gonorrhoeaeeNeisseria meningitidis, pois contmem sua frmula antibiticos que inibem

o crescimento de Neisserias saprfitase outras bactrias, quando emamostras colhidas de stioscontaminados.


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Neisser ia gon orrh oeae


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Agar Salmonella-Shigella(SS)

Seletivo e diferencial

Possui componentes (sais de bile, verde brilhante ecitrato de sdio) que inibem microrganismos Grampositivos.

O meio possui lactose, que permite diferenciar bactriaslactose positivas e negativas

Lactose positivas- produzem cido que na presenado indicador vermelho - formao de colnias de cor

rosa Lactose negativas- formam colnias transparentes.

Permite a deteco de H2S - formao de colnias decor negra no centro.


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Meios de Cultura

gar Salmonel la-Shiguel la(SS):Interpretao

Cor original do meio: vermelho alaranjado.Colnias com centro negro (H

S) ou colniasincolores: suspeita de Salmonella.Colnias incolores: suspeita de Shigella spp.Colnias cor de rosa ou vermelho: suspeita deEscherichia coliou Klebsiella spp.

As bactrias no fermentadoras de lactose soincolores.As bactrias fermentadoras de lactoseaparecem na cor rosa.


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Agar MacConkey

Seletivo e diferencial

O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismosGram positivos.

A concentrao de sais de bile relativamente baixa,por isso no to seletivo para Gram negativos como,por exemplo, o gar SS.

Usado para isolar bacilos Gram negativos(enterobactrias e no fermentadores) e verificar afermentao ou no da lactose.


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Pseudomonas

aeruginosa

Escher ichia

col i Salmo nel la sp.


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CONTINUAO NA PRXIMA AULA...


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Meio Hektoen

um meio seletivo e diferencial

Utilizado para detectar a fermentao de lactose eproduo de H2S

Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactriasno-entricas

Fermentados de lactose - amarelo ou salmo

No fermentadores - sem cor Produo de H2S - precipitado preto


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Escher ichia col i

Salmo nel la enter idis


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Agar Sal Manitol

Meio seletivo e diferencial

Utilizado para selecionar Staphylococcus, que crescemem altas concentraes de sal

Diferencia Staphylococcus aureus de outrosStaphylococcus

Aps o crescimento,Staphylococcus aureus amarelo(fermenta o manitol), outros Staphylococcus sobrancos


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Staphy lococcus

epidermidis

Staphy lococcus

aureus Escher ichia col i


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Agar CLED

Cystine Lactose Eletrolyte Deficient Seletivo ediferencial

A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas de

Proteus. Usado para isolamento e quantificao de

microrganismos presentes em amostras urina.

Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Grampositivos, Gram negativos e leveduras.

Colnias lactose positivas: cor amarela/ negativas: corazul.


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Meios de Cultura

Meios de Cultura


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Meios de CulturaCaractersticas de crescimento:Escher ich ia co l i: colnias opacas, amarelas com ligeira cor

amarelo escuro no centro, com cerca de 1,25 mm de dimetro,as no fermentadoras de lactose colnias azuisEspcies de Klebsiel la: colnias muito mucosas, cor varivelde amarelo a branco azuladoEspcies de Proteus: colnias azul translcidas, geralmentemenor que E.coliEspcies de Salmonel la: colnias planas, cor azulEnterococcus faecalis: colnias amarelas, com cerca de 0,5mm de dimetroStaphyloc occu s aureus: colnias amarelas, com cerca de 0,75mm de dimetroStaphylococcuscoagulase negativa: colnias amarelo palhae brancasCorynebacter ium: colnias pequenas e cinzaLactobaci los: colnias pequenas e com superfcie rugosaPseudom onas aeruginosa: colnias verdes, com superfcie

prateada e periferia rugosa

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Meios de Cultura

St h l


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Staphy lococcus

aureus

Proteus

mirabi l is Escher ichia col i


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Agar verde brilhante (BGA)

um meio altamente seletivo, usado para oisolamento de outras salmonelas que no a S. Typhi,existentes nas fezes e em outros materiais.

A presena de extrato de levedura e duas peptonas

fornecem os nutrientes A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de

fenol, fornecem um sistema de diferenciao defermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).

Salmonelas no produzem cido a partir destesacares.

O verde brilhante o agente seletivo que inibe a florade acompanhamento.


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S l l l


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Escher ichia

col i

Salmonel la

sp.


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Agar Eosina Azul de Metileno

Agar EMB um meio para diferenciao ligeiramenteseletivo

Utilizado para o isolamento e diferenciao de bacilosentricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outrosbastonetes gram-negativos).

Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactriasgram-positivas num determinado grau - diferenciar osfermentadores

Coliformes produzem colnias pretas-azuladas

Salmonellae Shigellaso incolores ou tm uma cor mbartransparente, no fermentam lactose

Escherichia coli podero apresentar um reflexo verdemetalizado caracterstico, devido rpida fermentao da

lactose


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Escher ichia

col i

Klebsiel la

pneumoniae

Salmonel la

enter idis


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Meio Lwenstein Jensen

A base do meio constituda por ovos integrais, o quepermite amplo crescimento das micobactrias

O crescimento satisfatrio para o teste de niacina (que

positivo para Mycobacterium tuberculosis) Utilizado para isolamento primrio das micobactrias

Crescimento bom a excelente (colnias amarelas) -

Mycobacterium tuberculosise Mycobacterium avium

Incubao por 60 dias


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Mycobacter iumtuberculos is


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Agar Mycosel

A Cicloheximida, um dos componentes do meio, servepara selecionar dermatfitos.

O cloranfenicol inibe o crescimento de bactrias ealguns fungos filamentosos.

Usado para isolamento de fungos patognicos,principalmente dermatfitos, a partir de material deinvestigao contaminado.

Crescimento bom a excelente: Trichophytonverrucosum, Candida albicans

Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candidatropicalis, Penicillium spp.


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Cand ida albicans


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Cand ida albicans


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Agar Sabouraud

Meio com nutrientes que favorece o crescimentode diversos fungos leveduriformes efilamentosos.

Cultivo e crescimento de espcies de Candidase fungos filamentosos, particularmenteassociados a infeces superficiais.

Caracterizao macroscpica do fungofilamentoso (colnia gigante).


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Cand ida albicans

Sporothr ix

schenck i i

Mic rosporum

canis


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Meios para identificao

gar TSI CaldoTSB Meio SIM gar Citrato Simmons

gar Fenilalanina gar base uria Caldo Triptona Caldo Nitrato Caldo Malonato gar Blis-Esculina gar Sangue Caldo base de Moeller

gar Dnase gar Esculina CTA Cystine Tryticase Agar

Meio base para oxidao efermentao - OF Base de nitrognio para

leveduras

meios de cultura

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