meios de cultura e coloração

1. Meios de cultura e coloraes

Os meios comerciais devem ser hidratados;

Devem ser pesadospapel manteiga/alumnio;

Frasco;

Hidratar em pequena quantidade;

Depois deve-se acrescentar o restante da gua;

Levar o meio para fundiraquecer;

Usar sempre luvas trmicas;

Sempre que for usado o termo"esterilizar em autoclave" , o tempo de esterilizao de 15 minutos e a temperatura de 121C;

Sempre que for usado o termo"esterilizar por filtrao",usar o filtro com porosidade de 0,22 micra, recomendado para partculas bacterianas;

Distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos no precisam estar esterilizados;

Distribuir o meio aps a autoclavao, os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrariasestreis;

Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas, para que a esterilizao seja por igual em todo o contedo dos tubos - tampas fechadas no permitem a entrada do vapor;

CARY BLAIR

Microrganismos patognicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio;

A carncia de uma fonte de nitrognio impede consideravelmente a multiplicao de microrganismos e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles;

Transporte de material fecal e conseqente conservao dos microrganismos;

SALINA TAMPONADA

Meio lquido tamponado que mantm a bactria vivel;

Meio de transporte de fezes.

MEIO STUART

A carncia de uma fonte de nitrognio impede consideravelmente a multiplicao de microorganismos e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles;

Transporte de diversos materiais e conseqente conservao dos microorganismos;

Haemophilusspp.,Pneumococcus ,Salmonellaspp.,Shigellaspp. entre outros.

GAR NUTRIENTE

Meio simples, de fcil preparao e barato;

Vrias aplicaesanlise de gua, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras submetidas exames bacteriolgicos e isolamento de organismos para culturas puras;

Conservao e manuteno de culturas em temperatura ambiente;

Usado para observar esporulao de espcies de bacilos Gram positivos;

GAR CHOCOLATE

Utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes;

Cresce quase todos os tipos de microrganismos;

base do meioadiciona-se sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura altahemcias lisam liberando hemina e hematinacompostoscrescimento dos m.o exigentes;

Observao :s e utilizar sangue de carneiro ou coelho no lugar do sangue de cavalo, adicionar os suplementos a base de NAD (coenzima I) e cistena aps resfriar a base achocolatada aproximadamente 50C;

THAYER-MARTIN CHOCOLATE

um meio rico e superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento deNeisseria sp;

Contm em sua frmula antibiticos;

Inibem o crescimento de outras bactrias, quando em amostras colhidas de stios contaminados;

GAR SALMONELLA-SHIGELLA (SS)

Possue componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sdio) que inibem

microrganismos Gram positivos;

Lactose ao meiose o m.o lactose positiva;

Tissulfato de sdio e o citrato frrico permitem a deteco de HS evidenciado por formao de colnias de cor negra no centro.

Selecionar e isolar espcies deSalmonella speShigella sp , em amostras de fezes, alimentos e gua.

CALDO SELENITO

Inibem coliformes e outras espcies da flora intestinal como estreptococos;

Isolamento deSalmonellaspp. eShigellaspp. em amostras de fezes, urina e alimentos...

CALDO TETRATIONATO

Os sais de bile contidos no meio de tetrationato inibem microrganismos Gram positivos e a adio da soluo de iodo inibe a flora intestinal normal de espcies fecais;

Meio de enriquecimento paraSalmonellaspp.

GAR MAC CONKEY

O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos;

A concentrao de sais de bile relativamente baixa em comparao com outros meios;

No to seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o gar SS;

BGN (enterobactrias e no fermentadores) e verificar a fermentao ou no da lactose;

GAR SANGUE

Base rica;

timas condies de crescimento;

Formao de halos de hemlise ntidos, teis para a diferenciao deStreptococcusspp. EStaphylococcusspp;

Usado para o isolamento de microrganismos no fastidiosos;

Verificao de hemlise dosStreptococcusspp. eStaphylococcusspp;

GAR CLED CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT

Microrganismos presentes em amostras urina;

A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas deProteus sp;

Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras;

CALDO BHI BRAIN HEART INFUSION

Nutrientes de crebro e corao, peptona e dextrose;

A peptona e a infuso so fontes de nitrognio, carbono, enxofre e vitaminas;

A dextose um carboidrato que os microrganismos utilizam para fermentao;

Cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactrias, no fermentadores, leveduras e fungos;

Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos;

Realizao de teste de coagulase em tubo;

Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44C;

LWENSTEIN JENSEN

A base do meio constituda por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das Micobactrias;

Isolamento primrio das micobactrias;

GAR CITRATO SIMMONS

Verifica a capacidade da bactria de utilizar o citrato de sdio como nica fonte de carbono;

Sais de amniaalcalinizando o meio;

Diferenciar gneros e espcies deEnterobactrias e no fermentadores.

GAR BLE-ESCULINA

Capacidade de bactrias hidrolisarem esculina na presenabile;

A esculina um derivado glicosdico da cumarina;

A esculina incorporada em um meio contendo 4% de sais biliares;

As bactrias Bile-Esculina POSITIVAScrescempresena de sais biliares;.

A hidrlise da esculina no meio resulta na formao de glicose e esculetina;

A esculetina reage com ons frricos (fornecidos pelo composto inorgnico do meio - o citrato frrico), formando um complexo negro;

Identificao dosEnterococcusspp. ,que so Bile-Esculina positiva;

GAR FENILALANINA

Verifica a capacidade da bactria de produzir cido fenilpirvico a partir da fenilalanina por ao enzimtica;

Diferenciar gneros e espcies de enterobactrias;

GAR TSI TRIPLO ACAR FERRO

Este meio contm trs acares: 0,1%glicose, 1,0% lactose, 1,0% sacarose, vermelho de fenol para deteco da fermentao de carboidratos e sulfato de ferro para deteco da produo de sulfato de hidrognio (indicado pela cor preta na base do tubo);

A fermentao indicada pela mudana da cor do indicador de pH de vermelho para amarelo. O

gar fundido deixado solidificar, formando uma superfcie inclinada;

Essa configurao origina duas cmaras de reao dentro do mesmo tubo;

A poro inclinada ou bico, exposta em toda sua superfcie ao oxignio atmosfrico, aerbia. A poro inferior, denominada profundidade ou fundo, est protegida do ar e relativamente anaerbia;

Diferenciar bacilos Gram negativos com base na fermentao de carboidratos, produo de sulfato de hidrognio e gs.

TSI - LEITURA

Reaes pice/base:

Prpura/amarelo = fermentao apenas da glicose (lactose e sacarose negativos);

Amarelo/amarelo = fermentao da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 aucares);

Presena de gs (CO) = bolhas ou meio fragmentado;

HS positivo = presena de precipitado negro;

GAR BASE URIA (CHRISTENSEN)

Determinar a habilidade do microrganismo de degradar a uria em duas molculas de amnia pela ao da enzima urease;

Positivona alcalinizao do meio;

BGN fermentadores e no fermentadores StaphylococcuseHaemophilus.

PARA PROVA DE GELATINASE

Determina a habilidade do microrganismo de produzir enzimas proteolticas (gelatinases) que

liquefaz/hidrolisa gelatina;

Identificar e classificar bactrias fermentadoras, no fermentadoras e bacilos Gram positivos esporulados.

PARA PROVA DE OXIDASE

O teste de oxidase baseado na produo intracelular da enzima oxidase pela bactria;

Ajuda caracterizar espcies deNeisseria , distingui no fermentadores (oxidase positiva) de enterobactrias (oxidase negativa);

Diferencia algumas bactrias fermentadoras oxidase positiva entre elasPlesiomonas shigelloides, Aeromonasspp. eVibriospp .

Oxidase positiva: roxo,bactria no fermentadora;

Oxidase negativa: fermentadora, fazer testes bioqumicos (enterobactrias);

PARA TESTE DE MOTILIDADE

A bactria mvelflagelo;

Flagelos ocorrem nos bacilos Gram negativos, poucas formas de cocos so mveis;

Determinar se o microrganismo o no mvel;

Meios associados a outros testes: Meios SIM (Sulfato, Indol, Motilidade);

MILI (Motilidade, Indol, Lisina);

MIO (Motilidade, Indol, Ornitina) utilizados para testes enterobactrias;

PARA PROVA DE TOLERNCIA AO NaCl 6,5%

A tolerncia ao NaCl a 6,5% uma prova utilizada para verificar a capacidade de alguns microrganismos crescerem em presena do sal;

Meio base utilizado o BHI caldo, que um meio nutritivo de uso geral, empregado para o cultivo de muitas bactrias;

SeparaEnterococcusspp. ,que so NaCl 6,5 % positivo dos demaisStreptococcusspp., que so NaCl 6,5% negativos;

Na identificao de bacilos Gram negativos no fermentadores.

GAR MUELLER HINTON

gar padronizado por Kirby e Bauer e pelo NCCLS que oferece condies de crescimento das principais bactrias;

Meio utilizado para a realizao do teste de avaliao da resistncia aos antimicrobianos pelos mtodos de difuso em disco e E-test para enterobactrias;

No fermentadores,Staphylococcus sp e Enterococcus sp .

Identificao das enterobactrias

Meios IAL ou Rugai

LTD: reao positiva = verde garrafa;

Sacarose fermentao: reao positiva = amarelo.

Glicose fermentao: reao positiva = amarelo;

Produo de gs: reao positiva = formao de bolhas;

Hidrlise da uria: rao positiva = azul intenso;

H2S (gs sulfidrco): reao positiva = negra.

Lisina: reao positiva = qualquer cor diferente de amarelo; Reao negativa = amarelo;

Mobilidade: reao positiva = turvao do meio e ou qualquer crescimento alm da picada ou arrebentamento do meio.

Indol: reao positiva = rosa ou vermelha aps a adio do reagente de Kovacs.

Kit EPM-MILI

Tubo EPM:aps o inculo, a tampa deve fica um pouco frouxa.

Provas

Glicose: prova positiva = base do tubo amarela;

H2S: prova positiva = cor negra.

Tubo MILI:aps o inculo, sua tampa deve ser bem fechada.

Provas

Mobilidade: reao positiva = crescimento para todos os lados;

Indol: reao positiva = negra;

Lisina: as enterobactrias capazes de descarboxilar a lisina presente no meio, primeiro descarboxila a glicose, onde reao positiva = qualquer cor diferente do amarelo; Reao negativo = amarelo claro.

Uria: reao positiva = alcaliniza a base do tubo provocando viragem do indicador para azul.

Prova do VM:testa a capacidade da bactria em produzir cidos orgnicos a partir da fermentao da glicose. Leitura 48 72 horas.

VM:reao positiva = colorao avermelhada.

Prova do VP:as bactrias utilizam glicose presente no meio liberando um produto que a acetona.

VP:reao positiva: turvao.

Verifica se a bactria degrada carboidratos especficos incorporados ao meiocom ou sem produo de gs.

Gs: positivo = formao de bolhas;

H2S: positivo = negra.

Resultados

Vermelho o pice:fermentao apenas da glicose, lactose e sacarose negativa abase amarela.

Amarelo o pice:fermentao da glicose, lactose e ou sacarose abase amarela.

Caldo indol-uria

Esse caldo tem por finalidade diferenciar as enterobactrias com base na capacidade de produo de indol e de hidrlse da uria.

Interpretao dos resultados

Uria positiva: reao alcalina = vermelha;

Uria negativa = amarelo.

Indol: reao positiva = anel avermelhado;

Indol negativo = ausncia de cor avermelhada.

Tubo de OFglicose (com vaselina);

Oxidase;

Lisina;

Arginina;

TSB para motilidade em lmina;

Indol;

Esculina;

Disco de polimixina;

Tubo com TSI;

Placa de Mac Conkey;

Tubo com gelatina;

DNAse;

Tubo com caldo NaCl 6,5%

Reage de modo distinto em diferentes bactrias;

Servem para diferenciar as bactrias;

Ex.: Gram e BAAR;

BACILOS LCOOL-CIDO-RESISTENTES;

Coram fracamente pelo gram;

cido miclico de parede;

Circundados por uma parede celular hidrofbica;

Resistem a descolorao;

Misturas de lcool-cido usadas na identificao;

Chamada colorao negativa;

Mtodo difcil;

Durante o procedimentolavagem retira cpsula;

Cpsulas geralmente no aceitam corantes biolgicos;

Tinta nanquim;

Verde malaquitacorante primrio;

Lavagem;

Safraninacora o restante da bactria;

Bactriaverde e rosa;

Estruturas muitos pequenas;

Procedimento delicado para colorao;

Usa-se mordente e carbolfucsina;

Aumenta o dimetro dos flagelosvisvel ao microscpio ptico;

Toda amostra potencialmente contaminada;

Manipulao de material biolgicoEPI;

Procedimento com risco com respingoscabine de segurana;

No pipetar com a boca;

No reencapar agulhas;

Descartar em recipiente adequado;

Material contaminado deve ser descontaminado antes do descarte;

Determinar rea limpa e contaminada;

Limpar e desinfetar todas as reas de trabalho;

Manter bancadas organizadas;

No estocar material contaminado;

Tirar jaleco quando sair do setor;

Lavar as mos sempre;

Separar materiais em sacos de lixo;

Todos os reagentes identificados;

Ter manual de procedimento;

Estocar inflamveislocal adequado;

Sempre pedir ajuda;

No omitir fatos;

Material biolgicosuperfciehipoclorito 2%;

Material biolgicopelesabo e lcool 70%;

Material biolgico no jalecolavagem;

meios de cultura e coloração

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