FACULDADE ASSIS GURGACZCURSO DE AGRONOMIA

PROF. DRA GLÁUCIA CRISTINA MOREIRA

MANUAL DE AULA PRÁTICA DEBIOLOGIA CELULAR

RECOMENTAÇÕES SOBRE AS AULAS PRÁTICAS

Para melhor aproveitamento das aulas práticas, as seguintes normas serão adotadas:

1. Comparecer pontualmente, munido do jaleco e do manual de laboratório; 2. Ler cuidadosamente o roteiro, antes da execução da aula prática;3. Dividir os trabalhos eqüitativamente com os companheiros do grupo;4. Realizar os trabalhos com calma e organização, mantendo silêncio no

laboratório;5. Tomar notas das observações e resultados, levando em consideração

todos os pormenores relevantes ao estudo posterior;6. Discutir com o professor ou com o monitor, todos os pontos em dúvida;7. Usar apenas o material estritamente necessário, evitando desperdícios e

danos;8. Antes de retirar-se, limpar o balcão de trabalho, colocando o lixo sólido e

líquido nos locais designados;9. Ao final de cada aula, colocar as vidrarias e os aparelhos em locais

previamente designados;10.As práticas serão consideradas como terminadas, desde que seus

resultados tenham sido aprovados pelo professor;11.As notas referentes às aulas práticas somente podem ser obtidas

perante a apresentação do relatório e comprovada sua presença no dia da aula prática, com exceção de justificativa de falta aprovada pelo colegiado do curso, não dispensando nesse caso, a apresentação do relatório e revisão bibliográfica sobre o assunto abordado.

1. Instruções para o uso do laborátorio de Biologia Celular

1. Antes de iniciar a aula prática de Biologia Celular, verifique se o microscópio está ligado à corrente elétrica. 2. Antes de colocar a lâmina sobre a platina, verifique se a laminula não esta voltada para baixo, pois com a objetiva de 40X não é possivel o ajuste do foco nessa situação3. Ao iniciar sua observação, focalize primeiro com a objetiva de menor aumento (10X).4. Após observar com a objetiva de 10x, passe para a de a proxima de maior aumento5. Para a observação mais detalhada passe para a objetiva de 40x. Nesta objetiva o foco deve ser ajustado somente com o micrométrico.6. Caso necessite utilizar a objetiva de 100x, proceda da seguinte maneira:a) após obtido o foco com a objetiva de 40x, gire o revolver, sem contudo encaixar a objetiva de 100x.b) pingue uma gota de óleo de imersão sobre a lâmina no ponto onde incide a luz.c) encaixe a objetiva de 100x e ajuste o foco com o auxilio do micrométrico.d) após a observação, limpe a lâmina e a objetiva com auxílio de um lenço de papel ou papel higienico.

2. Algumas Dicas sobre o uso e cuidado com o microscópio

a) Verifique se as objetivas estão encaixadas, caso contrário você verá o campo completamente escuro ou parcialmente iluminada.b) Algumas estruturas podem ser melhor, observadas com o auxílio do diafragma. Caso seja esse dispositivo em seu microscópio, experimente usá-lo.c) Se após tomar todos esses cuidados você ainda não obtiver o foco, limpe os oculares e lâmina com o auxílio de papel higiênico.d) Não coloque os dedos e nem apoie qualquer parte do corpo sobre o micrscópio.

3. Normas gerais para o trabalho diário nos laboratórios da FAG - É obrigatório o uso de jalecos dentro do laboratório para assistir as aulas práticas em todos os laboratórios;- É obrigatório o uso de proteção individual, como luvas, calçado fechado, máscaras e óculos de segurança, quando necessário;- É proibido beber, comer e fumar dentro do laboratório;- Não é permitida entrada ou permanência de pessoas estranhas ao laboratório;- O aluno é responsável por possíveis perdas causadas pela falta de cuidado ou mau comportamento no laboratório;- Ao utilizar as vidrarias, proceda com cuidado para evitar danos e cortes perigosos;

- Não circule no laboratório com frascos de produtos voláteis e inflamáveis, quando a chama do bico de Bunsen estiver acesa;- Não ligue o bico de Bunsen, se não for necessário, você poderá causar um incêndio;- Não jogue material sólido na pia;- Procure não desperdiçar reagentes;- Utilizar somente o material que está a sua disposição na bancada de trabalho;- Não pipetar material tóxico, ácidos concentrados ou outras substâncias perigosas com a boca;- Não colocar materiais quentes diretamente sobre superfícies frias, evitando-se acidentes;- Ao término de cada aula deixar sua bancada em ordem e fechar todos os bicos de gás;- O trabalho em grupo deve ser encarado com seriedade e não como oportunidade para brincadeiras;- Em caso de acidente comunicar imediatamente ao professor ou responsável pelo laboratório;- Seguir o regulamento geral e normas específicas de cada laboratório.

PRÁTICA Nº 01 – MICROSCÓPIO

Data:Acadêmico (a):Assinatura da professora:

Introdução: Descrição do microscópio fotônico

A palavra microscópio é de origem grega (micros =pequeno, scopein

=observar, olhar com atenção). É um instrumento óptico que amplia a

imagem de um pequeno objeto utilizando um sistema de lentes e fontes de

iluminação.

Todo microscópio é composto de partes mecânicas e partes ópticas, que

juntas nos permitem a observação detalhada de materiais em estudo.

Material: Microscópio

Partes mecânicas: Base ou pé: é o suporte do microscópio, peça que sustenta todas

as outras partes do aparelho. Braço ou coluna: peça que liga o pé à parte superior do

microscópio. Mesa ou platina: peça de apoio da lâmina contendo o material

para estudo, no centro da mesa existe um orifício para a passagem da luz.

Charriot: peça ligada à platina que permite movimentar a lâmina no plano horizontal da esquerda para a direita e vice-versa, e de trás para frente e vice-versa.

Parafuso macrométrico: localiza-se em ambos os lados do braço, serve para ajustar o foco grosseiramente através de avanço ou recuo da mesa em relação à objetiva.

Parafuso micrométrico: ajusta o foco finamente através de pequenos avanços ou recuos da mesa.

Canhão: parte superior do microscópio constituída por um tubo contendo um prisma. Sustenta lentes objetivas e oculares, e serve para focalização do material.

Revolver: peça onde se encaixam as lentes objetivas. É composto por um disco de ranhuras que permite a mudança das objetivas.

Partes ópticas:

Condensador: conjunto de lentes situado abaixo da platina que concentra a luz e fornece iluminação uniforme à preparação biológica.

Botão do condensador: permite a movimentação do condensador.

Diafragma: regula a intensidade de luz que atinge a preparação através de uma alavanca para sua abertura ou fechamento.

Objetivas: conjunto de 4 ou mais lentes superpostas que proporcionam aumentos diferentes para observação do material. O valor do aumento está gravado na objetiva.

Oculares: possui 2 lentes convergentes que ampliam e corrigem os defeitos da imagem. O valor do aumento proporcionado está gravado na ocular.

MICROSCÓPIO ÓPTICO

Identificação dos componentes do microscópio:

1 8

2 9

3 10

4 11

5 12

6 13

7 14

PRÁTICA Nº 02 – VISUALIZAÇÃO DE LETRAS AO MICROSCÓPIO

Data:

Acadêmico (a):Assinatura da professora:

Objetivo: Fazer observações de materiais ao microscópio relacionando as imagens

formadas e os aumentos obtidos com seu funcionamento.

Materiais: Microscópio óptico comum; Letras recortadas do jornal; Pinça; Lâminas e lamínulas; Descarte.

Procedimento:Lâminas com letras:

Coloque sobre a lâmina uma letra que você recortou do jornal;

Coloque esta lâmina sobre a platina do microscópio, de modo a

manter a letra na posição em que é lida por você;

Focalize a letra, conforme o procedimento descrito anteriormente;

Observe a posição da letra, na imagem formada pelo microscópio

com a objetiva de 4X e 10X;

Desenhe o observado.

1. Que diferenças você observou entre a posição da letra a olho nu e no MO?

2. Nas objetivas de diferentes aumentos, o que você notou quanto ao tamanho da imagem e quanto à área do campo de observação?

3. Por que a lamínula deve estar sempre voltada para cima quando se observa ao microscópio?

4. Por que é necessário o óleo de imersão quando se observa na objetiva de 100x?

PRÁTICA Nº 03 – CARACTERIZAÇÃO DE CÉLULA ANIMAL E VEGETAL

Data:Acadêmico (a):

Assinatura da professora:

Objetivo:Diferenciar célula animal e vegetal;

Materiais: Microscópio; Palito ou espátula; Lâmina; Lamínula; Descarte; Solução de azul de metileno; Solução Salina; Elodea.

1. Célula animal: Raspar a mucosa bucal com palito de picolé e fazer um esfregaço na

lamina de microscopia. Pingar uma gota de solução de azul de metileno e

cobrir com lamínula. Observar ao microscópio até a objetiva de 40X. Ao final da

observação, descartar a lamina e lamínula em local devido.

2. Preparação a fresco de Elodea sp.Destaque uma folha de Elodea sp. Coloque-a sobre uma lâmina limpa e

sobre ela uma gota de água. Cubra o material com a lamínula sem que se

formem bolhas de ar. Retire o excesso de água com papel filtro. Observe ao

MO com objetiva de 4X e desenhe o material. Passe para os aumentos

seguintes e esquematize de novo com a objetiva de 40X.

1. Esquematize as células observadas e identifique os componentes.

PRÁTICA Nº 04 – IDENTIFICAÇÃO DE COMPONENTES QUÍMICOS CELULARES

Data:Acadêmico (a):

Assinatura da professora:

Objetivos: Identificar macromoléculas constituintes das células em batata-inglesa,

laranja e leite em pó.

Materiais: Lâmina; Lamínula; Bisturi; Tubérculo de batata; Vidro de relógio; Solução de lugol; Açúcar; Reagente de Benedict; Leite em pó; Suco de laranja; Bico de bunsen; Tubo de ensaio; Grampo de madeira; Laranja; Bisturi; Azul de metileno; Pincel.

Procedimento:

Experimento 1:Cortar uma fatia de batata com bisturi. A espessura deverá ser muito

fina. Colocar esta fatia em uma lâmina. Pingar 1 a 2 gotas de lugol e deixar

corar por 3 minutos. Cobrir com lamínula e observar nas objetivas de 4x, 10x e

40x. Desenhar apenas na de 40x. Observar a coloração dos grãos de

amiloplasto, morfologia e estrutura celular (parede celular).

Experimento 2:Numerar tubos de ensaio de 1 a 3.

Colocar no tubo 1: um grama de açúcar comum, 1 ml de água e 5 gotas

de reagente de benedict.

Colocar no tubo 2: 1ml de leite em pó já dissolvido em água e 5 gotas de

reagente de benedict.

Colocar no tubo 3: 1ml de suco de laranja e 5 gotas de reagente de

benedict.

Acender o bico de bunsen e aquecer os tubos com auxílio do grampo de

madeira até levantar fervura. Observar possíveis alterações nas colorações e

descrevê-las.

Experimento 3:Fazer um corte tangencial na casca da laranja. A espessura do corte

deverá ser fina de tal maneira que possa transpassar a luz que nela incidirá.

Pingar algumas gotas de ou azul de metileno em um vidro de relógio e

acrescentar a este o corte efetuado na laranja.

Aguardar aproximadamente 7 minutos. Retirar o corte com um pincel e

transferi-lo para uma lâmina. Cobrir com lamínula e observar nas objetivas de

4x e 10x. Desenhar em ambas.

PRÁTICA Nº 05 – OBSERVAÇÃO DE BACTÉRIAS

Data:Acadêmico (a):Assinatura da professora:

Objetivos: Identificar as bactérias e suas diferenças em relação às células

eucariontes.

Materiais: Lâmina; Lamínula; Espátula; Microscópio; Óleo de imersão; Azul de metileno; Fucsina básica.

ProcedimentoRetire um pouco da placa bacteriana dos seus dentes com a ajuda da

espátula. Espalhe esse material em uma lâmina, junte uma gota de fucsina

básica e cubra com a lamínula

Observe ao microscópio (AT 1000x), desenhe e anote suas

observações

Repita o procedimento adicionando agora 1 gota de azul de metileno.

1. O que são bactérias?

2. Quais as diferenças entre uma bactéria (organismo procarionte) e uma

célula animal (organismo eucarionte)?

PRÁTICA Nº 06 – OBSERVAÇÃO IN VITRO DE SERES UNICELULARES

Data:Acadêmico (a):Assinatura da professora:

Objetivos: Reconhecer alguns seres unicelulares – protozoários e identificar

algumas de suas características

Materiais: Cultura caseira de protozoários; Lâminas; Lamínulas; Solução aquosa de iodo; Algodão; Solução de fermento para pão; Vermelho congo; Seringa.

Procedimento:Preparação da cultura: 15 dias antes da aula separe um vidro de

“maionese” limpo e coloque uma amostra de água do ambiente (poças de

terreno vazio, margens de rios, córregos ou lagos...), coloque dentro do

vidro folhas de alface, couve, capim...., feche com uma gaze e prenda-a

com um elástico. Deixe essa cultura parada em um ambiente que receba

luz solar indireta. No dia da aula traga a amostra de preferência cuidando

para que ela não balance muito.

Coloque uma gota da amostra (de preferência da superfície) em uma

lâmina com lamínula. Em outra lâmina coloque uma gota da amostra e um

pouco de algodão desfiado (procedimento padrão). Observe as duas, desenhe

e anote suas observações.

Siga o mesmo procedimento padrão mas deixe algumas bolhas de ar,

observe desenhe e anote suas observações? Os seres são atraídos ou

repelidos pela bolha de ar? Por que?

Siga o mesmo procedimento mas adicione uma gota da solução aquosa

de iodo. Observe. Preste atenção aos movimentos ciliares dos organismos

Siga o mesmo procedimento padrão mas adicione uma gota da solução

de fermento. Observe, desenhe e anote suas observações.

1. Os microorganismos observados apresentam diferenciação entre eles?

2. A forma dos microorganismos se altera quando se movimentam?

3. O que acontece quando encontram um obstáculo?

4. Qual a função dos cílios e flagelos?

5. Comente sobre a ingestão de partículas alimentares pelos protozoários.

PRÁTICA Nº 07 – PERMEABILIDADE SELETIVA E OSMOSE

Data:Acadêmico (a):

Assinatura da professora:

Objetivos: Demonstrar a presença da membrana em células vegetais e

animais; Observar o comportamento da membrana quanto a sua

permeabilidade seletiva a diferentes substâncias e tratamentos.

Materiais: Beterraba (Beta vulgaris); Leveduras (fermento biológico); Epiderme de cebola (Allium cepa); Tubos de ensaio; Acetona Vermelho Congo 1%; Lâmina, lamínula, bisturi; Água destilada, NaCl 3.0%; Banho Maria, M.O.

1. Procedimento:Experimento 1: efeito da acetona

Numere os tubos de ensaio e coloque em cada um deles 5ml das

seguintes soluções, respectivamente:

o água destilada

o acetona 25%

o acetona 50%

o acetona 75%

o acetona pura

Adicione a cada tubo um pequeno pedaço de beterraba (1cm3); Espere

cerca de 1 hora e observe o que ocorreu em cada tubo.

Experimento 2: Efeito do calor

Numere 2 tubos de ensaio e coloque em cada um 5ml da solução de

vermelho Congo 1%; Adicione 5ml de suspensão de fermento nos 2 tubos; O

tubo 1 deixe à temperatura ambiente. O tubo 2 incube a 50ºC por 5 minutos.

Monte uma lâmina com a suspensão do tubo 1 e observe ao MO, nas objetivas

de 10X e 40X. Faça o mesmo com o tubo 2. Desenhe e anote o que observou

nos dois casos.

Experimento 3: Efeito da diferença de concentração

Retire um fragmento da epiderme inferior de cebola e coloque-a sobre a

lâmina; Cubra com uma gota de água e lamínula; Observe ao MO em 10X e

40X. Desenhe o que observou. Em seguida retire a lamínula, seque o excesso

de água e coloque uma gota de solução NaCl 3.0% sobre a epiderme; Observe

ao MO em 10X e 40X e desenhe. Agora retire a lamínula e a epiderme que

você observou. Coloque-a em outra lâmina limpa com duas gotas de água

destilada; Observe ao MO em 10X e 40X e desenhe.

1. Anote os resultados observados, comparando as soluções de cada tubo.

2. Que diferenças você observou nas células submetidas aos dois

tratamentos?

3. Que nome se dá ao movimento de água através da membrana

plasmática?

4. Qual a diferença entre os fenômenos de difusão e osmose?

PRÁTICA Nº 08 – EXTRAÇÃO DE DNA

Data:Acadêmico (a):

Assinatura da professora:

Objetivos: Extrair o DNA de cebola; Verificar a função de alguns reagentes

utilizados na técnica.

Materiais:

Cebola; Detergente (SDS) Sódio dodecil sulfato; H2O destilada; Banho Maria; Papel filtro; Etanol 95%; NaCl; Microbalança; Gelo ou nitrogênio líquido.

Procedimento:

Pique uma cebola com cerca de 250g, em pedaços quadrados de 5

milímetros. Misture em um Becker 10ml de SDS 10%, 3g de NaCl e complete

com água até obter 100ml de solução. Agite até dissolver. Juntar a esta

solução a cebola levando ao banho-maria 60ºC por 15 minutos. Em seguida

resfrie rapidamente em nitrogênio líquido ou gelo. Agite novamente. Coe a

mistura em papel filtro, exclua o material sólido aproveitando somente o líquido

resultante em um tubo de ensaio. Verifique que o DNA (nuvem) precipita-se no

etanol, pois suas moléculas são insolúveis em álcool.

1. Onde se encontra o DNA na célula?

2. Qual a função dos reagentes usados na experiência? Sal, detergente e álcool?

PRÁTICA Nº 09 – CROMOSSOMOS HUMANOS

Data:Acadêmico (a):Assinatura da professora:

Objetivos: Observar cromossomos humanos.

Materiais: Lâminas permanentes de cromossomos humanos; Óleo de imersão.

Procedimento:

Observar e caracterizar os diferentes cromossomos na maior objetiva (100 x), utilizando óleo de imersão para a visualização.

1. Esquematizar os cromossomos.

PRÁTICA Nº 10 – IDENTIFICAÇÃO DE NÚCLEO E NUCLÉOLO

Data:Acadêmico (a):Assinatura da professora:

Objetivo: Identificação de núcleo e nucléolo.

Materiais: Fígado bovino fresco; Lâmina; Lamínula; Azul de metileno; Microscópio ótico;

Procedimento:Tocar uma lâmina levemente na superfície do fígado bovino; Deixar secar

as células sobre a lâmina; Corar o material por 5 minutos com Azul de

metileno; Cobrir com lamínula e observar ao MO em 4X, 10X e 40X;

1. Esquematize o que foi observado. Qual a importância do núcleo para

uma célula? O que o nucléolo representa em uma célula eucarionte?

PRÁTICA Nº 11 – MITOSE EM RAIZ DE CEBOLA

Data:Acadêmico (a):Assinatura da professora:

Objetivo: Identificar as diferentes fases da mitose através de observação ao

MO.

Material: Laminas permanentes de raiz de cebola

Materiais:Lâminas permanentes em corte longitudinal de pontas de raiz de Allium

cepa (cebola).

Procedimento:Utilizando a objetiva de 4X localize a região meristemática da raiz que fica

entre a coifa, bem na extremidade, e a zona de alongamento e diferenciação

celular, na parte posterior do corte.

Centralize o tecido meristemático e passe para as objetivas de 10X e 40X.

Ao longo do tecido meristemático, identifique células nas diferentes fases do

ciclo celular, com objetiva de 40X ou 100X (imersão).

1. Esquematize e identifique as diferentes fases encontradas: prófase, anáfase e metáfase na mitose.