MANUAL DE PARASITOLOGIA CLNICA APOSTILAS EROTEIROS DE AULAS PRTICAS

Profa. Msc. Cludia Calheiros

MACEI 2001

APRESENTAO

Este manual foi elaborado com intuito de facilitar o aprendizado, durante a execuo de tarefas realizadas nas aulas prticas da disciplina de Parasitologia Clnica. Foram utilizadas diversas referncias bibliogrficas, alm de experincias vivenciadas ao longo dos cursos ministrados. No uma obra completa, e, ser lapidada, sempre que necessrio. Esperamos que o aluno aproveite o mximo da matria, lembrando sempre que este um momento nico, e que, no voltar, no instante em que as cobranas da vida profissional se efetivarem. Portanto aproveite! e, no esquea de retribuir, com entusiasmo e competncia, a grande parcela de brasileiros os parasitados que apostam na sua capacidade de mudar o mundo com honestidade, trabalho e justia.

Professora Cludia Calheiros ( Biloga Especialista em Entomologia Mdica; Mestre em Parasitologia humana e veterinria )

O tolo vangloria-se do seu saber. A vastido do conhecimento molda no sbio o carter do humilde

NDICE Introduo _________________________________________________________ 04 Microscopia _________________________________________________________ 05 1 Roteiro de Aula Prtica: Esfregao Sanguneo, de medula e Aposio de tecido ________________ 08 Diagnstico Parasitolgico de Sangue, Tecido e Medula _______________________________ 09 Diagnstico Parasitolgico da Leishmaniose Visceral _________________________________ 12 2 Roteiro de Aula Prtica: Formas Evolutivas do Trypanosoma e da Leishmania ______________ 13 Diagnstico da Doena de Chagas ____________________________________________ 15 3 Roteiro de Aula Prtica: Formas Evolutivas do T. gondii e do Trichomonas _________________ 17 4 Roteiro de Aula Prtica: Esfregao e Gota espssa de sangue Diagnstico diferencial do Plasmodium _ 18 5 Roteiro de Aula Prtica: Gota espssa de sangue Diagnstico diferencial dos Filardeos _________ 22 Diagnstico Parasitolgico da Filariose Linftica ___________________________________ 23 6 Roteiro de Aula Prtica: Diagnstico das Ectoparasitoses / Ident. Protozorios Intestinais ________ 25 7 Roteiro de Aula Prtica: Identificao de helmintos / Exame Parasitolgico das Fezes ___________ 26 Parasios do Ambiente; Parasitos Oportunistas e Parasitos Raros _________________________ 32 8 Roteiro de Aula Prtica: Mtodo de Sedimentao Espontnea _________________________ 36 9 Roteiro de Aula Prtica: Mtodos de Baermann e Rugai _____________________________ 38 10 Roteiro de Aula Prtica: Mtodo de Kato Katz _________________________________ 41 11 Roteiro de Aula Prtica: Mtodos: Grahan, Tamizao e Willis ________________________ 43 12 Roteiro de Aula Prtica: Mtodo de Blagg ou sedimentao por centrigugao _______________48 13 Roteiro de Aula Prtica: Mtodos: Faust e Ritcuie ________________________________ 50

Indicaes dos Mtodos Laboratoriais Cropolgicos __________________________________ 52 Caractersticas Morfolgicas de Ovos de Helmintos e Cistos de Protozorios __________________ 53 PRANCHAS ________________________________________________________ 54 Prancha 1: Estruturas no parasitrias encontradas nas fezes __________________________ 55 Prancha 2: Ovos de Helmintos _____________________________________________ 56 Prancha 3: Diferenas entre larvas de Ancilostomdeos e Strongyloides _____________________ 57 Prancha 4: Protozorios Enteroparasitos trofozotos e cistos __________________________ 58 Prancha 5: Larvas e Ovos de Helmintos ________________________________________ 59 Prancha 6: Dimenses dos Enteroparasitos ______________________________________ 60 Prancha 7: Protozorios das Vias Digestivas e Genito-Urinrias Humanas _________________ 61 Prancha 8: Helmintos Enteroparasitos: ovos, larvas e adultos __________________________ 62 Referncias Bibliogrficas _________________________________________________ 63

I INTRODUO:O EXAME PARASITOLGICO A solicitao do exame laboratorial feita tendo em vista uma finalidade, podendo ser: exame parasitolgico, estudo das funes digestivas, moleculares etc aspectos gerais, exames macro e microscpico, dosagens e anlises qumicas, cultura, exame imunolgico (pesquisa de anticorpos), inoculao em animais de laboratrio e mais recentemente, a PCR (reaes em cadeia da polimerase Polymerase Chain Reaction). O exame parasitolgico de grande importncia clnica, j que detecta a presena de alguma forma evolutiva do parasito, elucidando definitivamente a suspeita clnica. Os materiais biolgicos utilizados so: fezes, sangue, medula ssea, lquido cefaloraquidiano, urina, secreo, lquido ganglionar e tecido. No exame parasitolgico das fezes, ou exame coproparasitolgico ou ainda coproparasitoscpico, a solicitao dever indicar a tcnica a ser utilizada, bem como a suspeita clnica, atravs da

meno a alguma sintomatologia, ou ser justificado como controle de cura de alguma parasitose. No exame parasitolgico de outros materiais biolgicos, a solicitao dever indicar o tipo de material a ser examinado o nome do parasito ou o nome da parasitose de diagnstico provvel. As consideraes gerais sobre o exame parasitolgico em fezes esto mencionadas no tem III deste manual. No exame parasitolgico em sangue a colheita feita por picada percutnea ou puno venosa, o exame em lmina realizado fresco sob lamnula ou ainda esfregao ou gota espsssa corada (Giemsa, Leishman, Eosina Giemsa) . No exame de Urina a colheita direta e espera-se diagnosticar a tricomonase, tambm podendo ser encontrada no exame da secreo vaginal, onde o fluxo vaginal colhido com esptula, swab ou pipeta, nas paredes da vagina, aps de esfregaos ou exames colocao de espculo. A puno para confeco

imunolgicos realizada no exame do lquido cefalorraquidiano (Doena de Chagas, Toxoplasmose e esquistossomose), medula ssea (Leishmaniose visceral) ou lquido ganglionar (Doena de Chagas, Toxoplasmose, Leishmaniose visceral). A colheita de tecido realizada por bipsia da pele, gnglio, msculo ou vscera, onde realiza-se cortes histolgicos ou aposio do material em lmina (Leishmanioses, Amebase e Esquistossomose, Doena de Chagas, Toxoplasmose, Cisticercose,

Oncocercose. Outros procedimentos so utilizados para a pesquisa do parasito (xenodiagnstico, cultura, inoculao, radiologia, ultrassonografia), ou indcios de sua presena( hemograma, eletroforese das protenas e testes sorolgicos).PARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 01: Demonstrao e execuo das tcnicas de esfregao sanguneo, esfregao de medula e esfregao por aposio de tecido: Exames fresco e corados

OBJETIVOS: 1 - REALIZAR AS TCNICAS DE ESFREGAOS UTILIZADAS NOS DIAGNSTICOS PARASITOLGICOS DA LEISHMANIOSE VISCERAL, DOENA DE CHAGAS, MALRIA, E LEISHMANIOSE TEGUMENTAR. 2 - DESCREVER A TCNICA DE COLORAO PELO GIEMSA

MATERIAL: LMINA DE MICROSCOPIA, LANCETA, ALGODO IODADO, H 2O, FIXADOR(METANOL), CORANTE (GIEMSA)

A) - TIPOS DE EXAMES PARASITOLGICOS ONDE UTILIZA-SE MATERIAL BIOLGICO PARA CONFECO DE UM ESFREGAO: ( FRESCO (SANGUE) ( ESFREGAO SANGUNEO MATERIAL NA LMINA: TCNICA INDICAES: DOENA DE CHAGAS, MALRIA

( ESFREGAO POR APOSIO DE LESO (TECIDO) INDICAO: LEISHMANIOSE TEGUMENTAR AMERICANA ( ESFREGAO DE MATERIAL COLETADO DA MEDULA SSEA INDICAO: LEISHMANIOSE VISCERAL B) - ETAPAS DO ESFREGAO SANGUNEO: PUNO (DIGITAL, LBULO DA ORELHA, MEDULA) OU BIPSIA MATERIAL NA LMINA SECAR DESEMOGLOBINIZAR (H2O)# FIXAR (METANOL)# CORAR (GIEMSA) EXAMINAR # SE NECESSRIO DESCRIO DA TCNICA PELO GIEMSA: 12345Fixar o material com Metanol durante 2 a 3 minutos; Escorrer e secar o material Cobrir o material com corante por 20 minutos Escorrer o corante e lavar a lmina Deixar secar e levar ao microscpio com a objetiva de 100X ou imerso.

Boa prtica!

II - DIAGNSTICO PARASITOLGICO DE SANGUE, MEDULA E TECIDOPROCESSO DE COLORAO DE PROTOZORIOS PELO MTODO DE GIEMSA Vrias doenas parasitrias, tais com malria, filariose e Doena de Chagas, especialmente em sua fase aguda, podem ser diagnosticadas pelo encontro do parasito no sangue circulante. O sangue pode ser examinado a fresco (para Doena de Chagas e Filariose) ou aps colorao ( para D. de Chagas, Malria e Filariose) Em ambos os casos o sangue colhido atravs da puno da polpa digital ou lbulo da orelha, com uma lanceta descartvel. 1 - ESFREGAO

a) - Coloca-se pequena gota de sangue em uma extremidade de uma lmina e com outra lmina puxa-se a gota com movimento regular homognio, dando-se uma inclinao de aproximadamente 45o lmina que executa a preparao; b) - Seca-se a preparao por agitao da lmina. c) - Fixa-se pelo lcool metlico, durante 3 minutos. d) - Decorrido este tempo, vira-se o restante do lcool e pe-se a lmina em posio vertical para enxugar. e) - Faz-se a colorao deixando o corante agir durante 20 minutos( a lmina no deve apresentar manchas de corante precipitado). f) - Aps este perodo, lava-se com gua corrente, enxuga-se e a lmina est pronta para ser examinada. Colorao pelo Giemsa Preparar a soluo de Giemsa a partir da soluo estoque. Para cada 1 ml de gua destilada, pingar duas gotas de corante estoque; e Cobrir toda a preparao com a soluo do corante diludo, deixando-a corar durante vinte minutos. Filariose no requer imerso, basta examinar com objetiva 40X. Malria e Doena de Chagas requerem exame com a objetiva de imerso (100 X), tendo-se a precauo de colocar uma gota de leo de imerso sobre a preparao pronta. Os glbulos vermelhos apresentam colorao rseo-plida O citoplasma dos leuccitos cora-se em azul plido Os ncleos dos leuccitos cora-se em rocho azulado As granulaes dos leuccitos ficam ntidas As plaquetas coram-se de vermelho. Os elementos parasitrios intracelulares ou extracelulares coram-se bem, com todas as estruturas destacadas, mantendo suas caractersticas tpicas.

2 - GOTA ESPESSA a) - Coloca-se uma ou duas gotas de sangue no centro da lmina e com o canto de outra lmina ou da lanceta que foi usada na puno, espalha-se o sangue com movimento circular, at se obter uma rea de cerca de 1 cm de dimetro (Malria), ou movimento de estiramento at se obter um retngulo de bordas bem delimitadas (Filariose). b) - Deixa-se secar, recobrindo-se a lmina com placa de Petri.

c) - Uma vez seca, cobre-se a preparao com gua destilada ou mergulha-se a lmina em um recipiente contendo-se gua destilada. A gua destilada tem por finalidade desemoglobinizar a preparao. d) - Decorridos 10 minutos, inclina-se com cuidado a lmina para remover a gua, sem retirar o preparado. e) - Depois da secagem, fixa-se com Metanol durante 3 minutos e, aps, a lmina volta a secar f) - Cora-se com o corante de GIEMSA ( ver acima) durante 20 minutos; g) - Lava-se a lmina com gua; h) - Seca-se e examina-se com as objetivas 10X e 40X ( para Filariose) ou imerso ( para Malria). Observaes: Muito cuidado se deve ter ao usarmos a imerso, quando a lmina no fixada previamente, pois a preparao poder ser destacada ao mudarmos o campo do microscpio; verificar sempre se o lado que contm a preparao o lado que est sendo corado; ao colocar a lmina no microscpio, ter cuidado para a colocar com o lado corado voltado para a objetiva; e a gota espessa muito empregada em parasitologia pois reduz o tempo de exame, uma vez que a rea a ser pesquisada bem menor que em um esfregao, no entanto, os caracteres distintivos dos parasitos ficam menos perceptveis. 3 - EXAME A FRESCO a) - Com algodo hidrfilo molhado em lcool iodado, lcool ter ou ter puro, limpa-se a superfcie digital ou lobular da orelha b) - com alfinete ou agulha estril ou Lanceta, faz-se um pequeno furo e colhe-se uma gota de sangue que colocada no centro da lmina; c) - recobre-se com lamnula 24 x 24; e d) - leva-se ao microscpio e examina-se com as objetivas 40X. Observaes: Este exame dever ser executado imediatamente aps a colheita do sangue porque quando a gota secar no permitir a sua execuo. Preconiza-se examinar mais uma gota quando o primeiro exame for negativo. O esfregao e a gota espessa devem ser protegidos para evitar que moscas e baratas os destruam, caso no sejam fixados ou corados logo.

4 APOSIO DE TECIDO (Bipsia das bordas de Leses Leishmaniticas) a - Realiza-se assepsia na leso leishmanitica e, em seguida faz-se uma bipsia das bordas da leso b - Aps a colheita realizado um imprinting ou aposio em lmina de microscopia c - Espera secar e fixa-se com Metanol d - Aps a secagem, cora-se com Giemsa e o exame feito na objetiva de imerso (100X)

5 ESFREGAO DE MATERIAL COLETADO DA MEDULA SSEA a - Coloca-se pequena gota do material aspirado da medula em uma extremidade de uma lmina e com outra puxa-se a gota com movimento regular homognio, dando-se uma inclinao de aproximadamente 45o lmina que executa a preparao; b - Seca-se a preparao por agitao de lmina. c - Fixa-se pelo lcool metlico, durante 3 minutos. d - Decorrido este tempo, vira-se o restante do lcool e pe-se a lmina em posio vertical para enxugar. f - Faz-se a colorao deixando o corante agir durante 20 minutos( a lmina no deve apresentar manchas de corante precipitado); g - Decorrido este perodo, lava-se com gua corrente, enxuga-se e a lmina est pronta para ser examinada. MATERIAL NECESSRIO PARA PREPARAO SANGNEAS OU APOSIO DE TECIDO OU MEDULARES Lminas / Lamnulas / Pina / Lanceta Proveta de 15 ml / Pipetas conta-gotas / Placa de Petri Suporte ou cubas para corar lminas / Estante para secagem de lminas Algodo hidrfilo / lcool iodado / Papel de filtro / Luvas de borracha Corante (Giemsa ) / Metanol (Fixador) Microscpio / leo de imerso Bstur, Seringa, Xilocana ( Aposio de tecido e Esfregao de Medula seea)

Esfregao Sanguineo:

OUGota Espessa:

A fresco:

DIAGNSTICO PARASITOLGICO DA LEISHMANIOSE VISCERALEXAME DE MEDULA SSEA

1) Indicao: Diagnstico da Leishmaniose Visceral ou Calazar, atravs da pesquisadireta da Leishmania donovani em esfregao de medula ssea.

2) Fundamento: A L. donovani um parasito reticulatrpico tropismo pelas clulas doSRE ou SFM, Sistema Retculo Entotelial ou Sistema Fagocitrio Mononuclear. Medula ssea, bao e fgado, so ricos destas clulas apresentando, no caso da parasitose, elevado percentual de infeco. Pela simplicidade da tcnica, iseno mnima de riscos e facilidade de colheita, o exame da medula ssea o mais utilizado. 3) Tcnica: a) A puno poder ser: esternal, no manbrio, 2cm abaixo da frcula esternal ou altura do primeiro ou segundo espao estercostal, um pouco desviada da linha mediana; ilaca, na crista ntero-superior, 1cm abaixo e para trs da espinha; tibial, no tero superior da effise. Assepsia local e anestesia xilocana at o peristeo, no local da trapanao. b) Com agulha apropriada, perpendicularmente, romper o peristeo, com toro e firmeza, caindo na parte esponjosa do osso. Retirar o mandril, adaptar uma seringa e aspirar. Retirado o conjunto seringa-agulha, fazer um curativo seco, compressivo. c) Colocar medula numa lmina, fazer o esfregao e, aps seco, corar Giemsa ou Leishman. Examinar com objetiva de imerso, 100x. 4) Observaes: a) Verificar a posio correta do mandril, estado da rsca e graduar o limitador. Pegar a agulha com firmeza, extremidade superior apoiada na palma da mo. S aspirar se a agulha estiver fixada. Caso no surja medula, retirar a seringa, recolocar o mandril, dar a 1 volta na pea que limita a parte a ser introduzida da agulha e penetrar mais um pouco. b) Usar seringa em bas condies, adaptando-a firmemente na agulha. c) Em caso negativo ou duvidoso, pode-se mobilizar as Leishmanias aplicando 1 ampola de adrenalina, a 1:1.000, SC, 30 minutos antes. d) O ndice de postividade de 80 a 90%. O local de puncionamento depende do examinador. O material deve ser esterilizado a seco. Evitar aspirar sangue, para no diluir a medula.

Amastigota

Promastigota PARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 02: Identificao das formas evolutivas da Leishmania, Trypanosoma cruzi e Trypanosoma lewise encontradas nos exames parasitolgicos coradosOBJETIVOS: 1 - RECONHECER E DIFERENCIAR FORMAS TRIPOMASTIGOTAS DO

Trypanosoma cruzi

e

DO Trypanosoma lewise, CORRELACIONANDO-AS COM O TIPO DE DIAGNSTICO PARASITOLGICO 2 - ATRAVS DA ANLISE DO MATERIAL BIOLGICO EXAMINADO, IDENTIFICAR AS PROVVEIS ESPCIES DE LEISHMANIA ( Leishmania chagasi e Leishmania braziliensis), BEM COMO SUAS FORMAS EVOLUTIVAS NOS DIAGNSTICOS PARASITOLGICOS APRESENTADOS. A) Trypanosoma cruzi e Trypanosoma lewise: Diferenciar as formas tripomastigotas sanguneas: tamanho FlageloNcleo

Cinetoplasto

Observar formas amastigotas do Trypanosoma cruzi em cortes histolgicos de tecido muscular e em cultura de clulas B) Leishmania : Leishmania chagasi Meterial: medula / Amastigotas isoladas, em pequenos grupos ou dentro de macrfagos Leishmania braziliensis Material: aposio de leso (pele) / Amastigotas numerosasNcleo Cinetoplasto

Boa prtica !

MTODOS DE DIAGNSTICO DA DOENA DE CHAGASI- INTRODUO Os mtodos de laboratrio usados na prtica parasitolgica para diagnstico da Doena de Chagas so divididos em dois grupos: 1 mtodos que tm por objetivo a evidenciao direta ao microscpio, da presena do Trypanosoma cruzi; o chamado Diagnstico Parasitolgico; 2 provas imunolgicas que possibilitem a descoberta de anticorpos especficos, o Diagnstico Imunolgico. MTODOS QUE EVIDENCIAM O PARASITO: 1- Pesquisa da forma tripomastigota no sangue; 2- Pesquisa da forma tripomastigota no lquor; 3- Pesquisa da forma amastigota em esfregaos ou cortes histolgicos dos gnglios da leso primria; 4- Pesquisa da forma amastigota em cortes de msculos esquelticos; 5- Xenodiagnstico; 6- Cultura de parasitos; e 7- Inoculao em animais. METODOS IMUNOLGICOS: 1- Reao de fixao de complemento; 2- Hemaglutinao; 3- Imunofluorescncia indireta; e 4- ELISA

II- MTODOS QUE EVIDENCIAM O PARASITO ( DIAGNSTICO PARASITOLGICO )

1- PESQUISA DE PARASITOS NO SANGUE: indicada para diagnstico da forma agudada Doena. Os T. cruzi so abundantes nos primeiros dias de infeco e o exame poder ser feito a fresco, entre lmina e lamnula, em gota espessa ou em esfregao corados pelo Giemsa.

2- PESQUISA

DE PARASITOS NO LQUOR: indicado nas formas graves meningoencefalticas. O material centrifugado em rotao baixa durante 10 minutos e o depsito examinado a fresco e depois por colorao. Para fixar o material na lmina, mistura-se a ele uma gota de soro humano.

3- BIPSIA GANGLIONAR: a pesquisa das formas amastigotas do T.cruzi nos gngliosexige a coleta do material por bipsia. Os gnglios escolhidos so os satlites do ponto de inoculao das formas metacclicas do parasito que compem o complexo primrio da doena de Chagas. Os gnglios so fixados e tratados segundo a tcnica histolgica usual para serem submetidos microscopia. esquelticos recomendada em casos agudos em que h sinais de miosite.

4- BIPSIA MUSCULAR: a pesquisa das formas amastigotas em cortes dos msculos

5- HEMOCULTURA:A hemocultura para isolamento e identificao do T.cruzi semelhante usada em bacteriologia. Os meios mais utilizados so os difsicos com base em gar-sangue. Na prtica, 5 ml do sangue do doente so semeados em 100 ml do meio, conservado em local sem luz, temperatura ambiente ou na estufa, entre 25 a 28o C. O desenvolvimento do protozorio tem lugar em aproximadamente uma semana, quando aparecem em grande nmero as formas epimastigotas juntamente com algumas formas tripomastigotas. A hemocultura tem indicao para o diagnstico da forma aguda, porm com resultados inconstantes, sendo entretanto, imprescindvel para isolamento de amostras do T.cruzi, necessrias preparao de antgenos usados nas reaes sorolgicas. 6- INOCULAES EM ANIMAIS O camundongo jovem mais susceptvel infeco. A via de inoculao preferida a intraperitonial e a parasitemia pode ser precoce, manifestando-se em 48 horas, se bem que possa se manifestar s aps dois meses. Contrastando com o pequeno nmero de formas sanguneas no homem, podese observar em cada campo microscpico, um ou mais exemplares dos parasitos no sangue dos animais inoculados. Alm de permitir o diagnstico dos casos clnicos da infeco chagsica, as inoculaes em animais de laboratrio servem para conservao de amostras do T. cruzi. 7 - XENODIAGNSTICO: INDICAO: Diagnstico da Doena de Chagas pela pesquisa do T.cruzi, em fezes de triatomneo, alimentado no paciente. Indicado nas fazes aguda e crnica, sendo mais sensvel na primeira devido alta parasitemia.

FUNDAMENTO: Alimentando-se no paciente o triatomneo ingere as formas tripomastigotas do T.cruzi que nele se transformam e multiplicam em epimastigotas e tripomastigotas metacclicos, estes ltimos encontrados nas fezes. O inseto suga o sangue em quantidade muito maior que a necessria para um esfregao. TCNICA: a) Colocar numa caixinha de papelo, ou de outro material, com tampa substituda por fil ou tela fina, 6 a 4 triatomneos, de preferncia ninfas. Fix-la com a face do fil para baixo, na pele do paciente, face anterior do antebrao. Deixar 20 a 30 minutos, tempo necessrio para realizarem o hematofagismo. b) Aps 20 dias proceder o exame: segurar o triatomneo com uma pina altura do trax, extremidade posterior para baixo, e com outra pina comprimir o abdmem na direo crneocaudal para sada das fezes, colhidas, diretamente, numa lmina com soluo fisiolgica. Misturar, cobrir com lamnula e examinar, 100 X. OBSERVAES: a) S utilizar triatomneos limpos, criados em laboratrio a partir do ovo, e alimentados em pombo ou galinha. No exame devem estar em jejum, 2 a 3 semanas. b) Os insetos devem ser examinados 2 por dia e, aps, sacrificados. c) Colocar na caixinha um rtulo para identificao do paciente e anotao dos resultados. Sempre usar luvas e suluo desinfetante para limpar o material utilizado. d) O resultado do exame depende da parasitemia, volume de sangue sugado e quantidade de triatimneos utilizados. XENODIAGNSTICO ARTIFICIAL (IN VITRO) Usado quando no possivel o natural ou se deseja pesquisar o T.cruzi em lquido cefalorraquidiano. Colocar 10 ml de sangue com anticoagulante num Borrel e cobrir a boca com pedao de intestino de boi ou papo de galinha, que umedecido, adere ao frasco. Colocar o Borrel em Banho-Maria a 37 0C, 10 minutos e apos inverter sobre a face do fil da caixinha com os triatomneos, e depois em estufa a 370C, durante 1 hora. Examinar a partir do 200 dia. FORMAS EVOLUTIVAS DO Trypanosoma cruzi :

Amastigota

Epimastigota

Tripomastigota

PARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 03: Identificao das formas evolutivas do Toxoplasma gondii, Cryptosporidium e do Trichomonas vaginalis encontradas em preparaes coradas e fresco.

OBJETIVOS: Reconhecer taquizotos e cistos de Toxoplasma gondii, oocistos de Cryptosporidium e trofozo[itos de Trichomonas vaginalis encontrados em diagnstico parasitolgico.

1) - Toxoplasma gondii

RECONHECER TAQUIZOTOS EM LQUIDOS ORGNICOS*PREPARAO DA LMINA: Esfregao do material da medula corado pelo Giemsa

RECONHECER CISTOS COM BRADIZOTOS*PREPARAO DA LMINA: Corte de tecido nervoso corado pelo Giemsa 2) Cryptosporidium

RECONHECER OOCISTOS EM FEZES DIARRICAS DE PACIENTES AIDTICOSPREPARAO DA LMINA: Esfregao do material fecal com colorao Safranina Azul de Metileno

3) - Trichomonas vaginalis:

TROFOZOTOS: Forma de pra com 1 ncleo , 1 membrana ondulante axstilo e 2 pares de flagelosPREPARAO DA LMINA : esfregao fresco Esfregao de secreo vaginal corado Citologia

1

Boa Prtica !PARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 04:

Demonstrao e execuo das tcnicas de esfregao sanguneo e Gota espssa de sangue, com respectivas coloraes e identificao do Plasmod\ium berghei . Identificao e diagnstico diferencial dos plasmdiuns humanos: Plasmodium falciparum e Plasmodium vivax

OBJETIVOS: Reconhecer as diversas formas evolutivas dos protozorios do gnero Plasmodium Compreender como realizado o diagnstico parasitolgico diferencial da malria 1) - OBSERVAR AS SEGUINTES FORMAS EVOLUTIVAS DE Plasmodium:

- TROFOZOTO JOVEM (anel delicado) - MORFOLOGIA: NCLEO E CITOPLASMA - TROFOZOTO AMEBIDE (anel grosseiro) - MORFOLOGIA: NCLEO E CITOPLASMA - ESQUIZONTE - MORFOLOGIA: NCLEO EM DIVISO - MERCITO - HEMCIA REPLETA DE MEROZOTAS / DESENHAR*PREPARAO DAS LMINAS: ESFREGAO SANGUNEO CORADO PELO GIEMSA

DIAGNSTICO PARASITOLGICO DA MALRIA HUMANA : DIAGNSTICO DIFERENCIAL ENTRE AS ESPCIES DE PLASMODIUM realizado atravs da confeco de esfegaos sanguneos e ou/ gota espessa corados pelo Giemsa, onde sero observados as diversas formas do parasito dentro de hemcias A observao ao microscpio feita em imerso (100X). No exame de esfragao ou gota espessa de sangue perifrico com Plasmodium humano necessrio observar algumas caractersticas diferenciais entre as espcies que ocorrem no Brasil: Plasmodium falciparum

1-

Poliparasitismo frequente Trofozotos jovens delgados com ncleo apresentando 1, 2 ou at 3 gros de cromatina. So pequenos, delicados Trofozotos de localizao perifrica ( acol ) Gametcitos em crescente ou banana Hemcias normais Ausncia de esquisontes no sangue perifrico (exceto em infeces graves). Esquizonte (Cultivo) - no ocupando toda hemcia. Observar ainda, que o nmero de hemcias imaturas ( reticulcitos) elevado e que elas so geralmente parasitadas (o parasito tem preferncia por clulas imaturas). Os reticulcitos so produzidos intensamente em consequncia da anemia ocasionada pela doena. 2- Plasmodium vivax Trofozotos amebides, grandes e grosseiros Hemcias aumentadas, plidas com finas granulaes Schuffner

Poliparasitismo raro Esquizontes so encontrados ocupando quase toda a hemcia; pigmento frrico castanho claro Gametcitos arredondados, grandes, citoplasma regular, ocupam toda a hemcia; granulaes de Schuffner e pigmento abundantes. 3- Plasmodium malariae Esta espcie existe na Amaznia e se parece com o P vivax do qual se diferencia por: Presena de trofotos e esquizontes; Rosceas com nmero pequeno de merozocos ( 6 a 12) ; Hemcia geralmente no aumentada de volume. Observao 1: No diagnstico de um Plasmodium humano importante saber que, geralmente em P. vivax e P. malariae encontramos todas as formas evolutivas e em P. falciparum s encontramos trofozotos jovens e os gametcitos (raramente esquizontes). Observao 2: Gotas espessas so importantes no diagnstico de rotina, porque frequentemente o nmero de parasitas to baixo que sua pesquisa no esfregao se torna difcil. Entretanto, o diagnstico especfico e requer um observador experiente. Compare uma gota espessa de sangue negativo com as de P. vivax e de P. falciparum. Observao 3: Ao realizar o diagnstico da malria importante que se observe as seguintes recomendaes: a- No confundir o parasito com plaquetas, glbulos brancos ( moncitos numerosos), com restos de hemcias e com precipitados de corante; b- Usar imerso: o condensador deve estar suspenso e o diafragma, aberto (os parasitos so intracelulares e de difcil visualizao); c- Mesmo para um especialista, 10% das formas so difceis de identificao. s vezes representam fases de transio e outras foram deformadas durante a preparao das lminas; d- Examinar muitos campos e no fazer o diagnstico baseando-se em uma nica forma. Infeco mista pode ocorrer; e e - Ao retirar o leo da preparao, faz-lo cuidadosamente para no arrancar o esfregao. 4 - Espcie: Plasmodium berghei: a- Trofozoto jovem com pequena massa de citoplasma em anel, corados em azul, e cromatina perifrica compacta e bem corada ( vermelha). b- Trofozoto maduro maiores, citoplasma mais denso, gro de cromatina nico, geralmente mais central. Gros de pigmento frrico podem estar presentes. O trofozoto s vezes amebide e outras semelhante aos gametcitos com os quais podem ser confundidos. c- Esquisontes cromatina dividida por sucessivas mitoses, nmero variado de gros.

d- Rosceas ou esquizontes maduros ocupam quase toda a hemcia. So visveis vrios ncleos fortemente corados, circundados por pores do citoplasma. e- Gametcitos citoplsam abundante, homognio, arredondado, ncleo grande com cromatina pouco densa.Vrios gros de pigmentos malricos dispersos. f- Poliparasitismo muito comum nesta espcie de plasmodium na mesma hemcia pode ser parasita por duas ou mais formas iguais ou diferentes(trofozoitos, esquizontes, etc). DIFERENAS MORFOLGICAS ENTRE AS ESPCIES DE Plasmodium HUMANOS: Plasmodium vivax Ciclo 48 horas Esquizognic o Caracterstic > e mais plida do que as da clula a normal, geralmente infectada com granulaes Infeco mltipla na hemcia Formas evolutivas encontradas no sangue perifrico Trofozotos jovens Pouco comum Trofozotos, esquizontes e gametcitos Cromatina nica Plasmodium falciparum 36 a 48 horas Alteraes na forma, com alguma policromatofilia e pontilhado Muito comum Trofozotos e gametcitos (esquizontes nas formas severas) 1 ou 2 grnulos cromticos, com anel delicado, s vezes situando-se na borda da hemcia Ovais ou redondos. Cromatina compacta. Raros no sangue perifrico Raros no sangue perifrico. Ovides ou arredondados com cromatina em grossos grnulos, formando pequenas massas Plasmodium malariae 72 horas Aparentemente normal ns forma, tamanho e colorao Muito rara Trofozotos, esquizontes e gametcitos Anis redondos e espessos

Trofozotos maduros

Amebides, citoplasma com vacolos com uma nica cromatina Irregular com pigmentos pardo escuros em finos grnulos espalhados no parasito e divises precoces da cromatina

Esquizontes

Mercitos (Rosceas)

Ocupam completamente a hemcia dilatada. 12 24 merozotas,

Ocorre nas vsceras, raramente no sangue perifrico. 8 36 merozotas dispostos ao

Formas em faixas largas atravessando a hemcia. Cromatina granulosa e irregular Oval ou arredondado com pigmento grosseiro pardo claro disposto perifericamente no corpo do parasito. Podem ocorrer divises precoces da cromatina. Ocupam completamente a hemcia de tamanho normal. 6 12

merozotas, dispostos como ptalas de uma flor, ao redor de uma massa de pigmentos Macrogamet Redondos, ocupam Em forma crescente ou Redondos, menores citos uma hemcia dilatada. de banana, delgados. do que os de P. Citoplasma em azul Citoplasma em azul vivax, ocupando a intenso; pigmentos intenso. Cromatina hemcia de tamanho grosseiros e cromatina central, s vezes normal. Citoplasma perifrica. obscurecida pelos gros em azul intenso, de pigmentos. cromatina perifrica e pigmentos grosseiros. Em geral pouco numerosos Microgamet Redondos, ocupando a Em forma crescente ou Semelhantes aos do citos hemcia dilatada. de banana, menos P. vivax, sendo Citoplasma em azul delgados, s vezes retos, menores e no claro cheio de com as extremidades dilatam a hemcia. pimentos grosseiros e arredondadas. Citoplasma em azul ncleo com cromatina Citoplasma azul claro e claro com pigmentos plida, usualmente cromatina difusa, central, grosseiros. Em geral central. s vezes obscurecida pouco numerosos pelo pigmento grosseiro. ( adaptado de: Neves, 2000; Castro, 1995; Pessoa, 1988)

irregularmente dispostos entre uma massa de pigmentos.

redor de uma massa de pigmentos

PARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 05: Execuo da tcnica de gota espssa de sangue e identificao de filardeos: Wuchereria bancrofti e Dirofilaria immitisObjetivos: Observar microfilrias de Wuchereria bancrofti Compreender o diagnstico parasitolgico da filariose Diferenciar microfilrias de Wuchereria bancrofti e Dirofilaria immitis

1) Wuchereria bancrofti: Observar microfilrias: bainha e clulas germinativas Preparao da lmina: Gota espssa corada pela Eosina-Giemsa

2) Dirofilaria immitis Observar microfilrias: clulas germinativas Preparao da lmina: Gota espssa corada pelo Giemsa Observar movimentos da microfilrias nos exames fresco3) TCNICA DE GOTA ESPSSA (GE) RESUMO IDENTIFICAO DA LMINA PUNO (DIGITAL OU LBULO AURICULAR) SECAR DESEMOGLOBINIZAR FIXAR (METANOL) CORAR (EOSINA GIEMSA). RETANGULAR: FILARIOSE CIRCULAR / QUADRANGULAR: MALRIA

BOA PRTICA ! As tartarugas conhecem as estradas melhor do que os coelhos

DIAGNSTICO PRASITOLGICO DA FILARIOSE LINFTICAA tcnica da gota espessa consiste em um dos mtodos laboratoriais utilizado para o diagnstico da parasitemia na filariose. Trata-se de um recurso prtico e econmico, de grande valia para inquritos epidemiolgicos, exigindo-se para realizao da mesma, certos requisitos que so indispensveis para a obteno de bons resultados. A coleta das amostras sanguneas dever ser feita obedecendo o aparecimento das microfilrias no sangue (periodicidade) adequado a cada regio. I MATERIAL: Lminas; Corantes (Giemsa e Eosina) ; Cubas para desemoglobinizao e colorao das lminas; gua destilada; algodo com lcool iodado; Lancetas descartveis ; Metanol; Gaze; Capilares mensurados; Suporte para secagem de lminas; Lapis grafite. II TCNICA:

1. IDENTIFICAO DA LMINA: esta etapa de fundamental importncia para se evitartroca de material. Utiliza-se lpis dermogrfico em uma das extremidades da lmina.

Caso esta seja esmerilhada pode-se usar lpis grafite. Coloca-se o nome do indivduo e/ou o nmero de registro, a data e o horrio da coleta.

2. LIMPEZA DA LMINA: esta dever estar limpa, o que obtido com lavagem prviaem detergente. Aps a lavagem, as lminas devem ser colocadas no lcool etlico. Aps secagem acondicion-las em local prprio. Antes da coleta faz-se uma limpeza com gaze para retirar os resduos que ainda possam existir na superfcie da lmina. Sempre manusear as lminas pelas bordas.

3. ASSEPSIA: Para a realizao deste exame poder ser puncionada a extremidade

digital ou o lbulo auricular. Procede-se a limpeza do local a ser lancetado com algodo hidrfilo embebido em soluo antissptica de lcool iodado, no sentido proximal distal do eixo corporal. lancetas descartveis. Se a escolha do local a ser puncionado recair sobra a extremidade digital, recomenda-se o segundo quirodctilo, preferencialmente da mo esquerda para os indivduos dextros ou vice-versa. A puno deve ser feita no leito arterial, ou seja, na borda lateral da extremidade digital e nunca diretamente na polpa digital. Obedecendo a esses requisitos, haver uma menor sensibilidade a puno, como tambm ter-se- uma rea mais vascularizada. Na orelha, a puno realizada no lbulo. partindo-se da extremidade da identificao, em uma nica gota, ou at trs de 20 l cada. Imediatamente espalha-se as gotas de sangue com a extremidade da prpria lanceta, ou outro material que se adeqe funo, formando quadrados de tamanho semelhantes, (no caso de trs gotas) de maneira que haja uma certa uniformidade nas extremidades; e formando um retngulo no primeiro caso. O filme de sangue dever ter uma espessura ideal que permita uma boa visualizao aps o processamento.

4. PUNO CAPILAR: a abteno da amostra sangnea, medienate a utilizao de

5. COLETA DA AMOSTRA: Pode-se colocar at 60 l de sangue em uma nica lmina,

6. SECAGEM DAS LMINAS: dever permanecer em local seco durante no mximo 24horas protegidas dos insetos.7.

DESEMOGLOBINIZAO: A partir de 4 horas da coleta da lmina, na dependncia da umidade local, pode-se proceder a esta etapa . Colocam-se as lminas em recipiente apropriado para desmoglobinizao com gua destilada, evitando-se o contato entre as lminas. Estas devem permanecer mergulhadas at se tornarem lmpidas, o que depender normalmente da espessura da gota. Em seguida, deixa secar a temperatura ambiente. FIXAO: aps a secagem da lmina procede-se a fixao da mesma com lcool metlico, caso o corante no tenha fixador, coloca-se algumas gotas de lcool metlico sobre a lmina em superfcie plana, de forma a cobrir todo o material. Espera-se no mnimo 1 minuto. Deixa secar, retirando o excesso por inverso. COLORAO: em superfcie plana, coloca-se o corante sobre a lmina, deixando por 15 minutos. Em seguida lava-se a lmina em gua corrente e deixa secar. Os corantes utilizados so a Eosina e o Giemsa, nessa ordem e aps as devidas secagens, o primeiro servindo para corar a bainha da microfilria e o segundo os ncleos desse embrio.

8.

9.

10.

LEITURA DA LMINA AO MICROSCPIO PTICO: inicialmente a lmina observada com objetiva de 10X, de modo a correr todo o campo uniformimente no sentido vertical ou horizontal. A objetiva de 40X poder ser utilizada para melhor caracterizar a microfilria e certificar a espcie de microfilria envolvida.

Observaes: A gota espessa pode ser mensurada e no mensurada. No primeiro caso deve-se adequar o material para obteno do volume de sangue a ser obtido, com capilares mensurados. Outra tcnica de diagnstico parasitolgico utilizada a filtrao em membrana de policarbonato. Mais sensvel que a anterior, pois a quantidade de sangue usada muito maior ( 2 a 5 ml), porm de maior custo; s sendo utilizada no controle de cura de pacientes submetidos ao tratamento. * DIAGNSTICO DIFERENCIAL ENTRE MICROFILRIAS QUE PODEM SER ENCONTRADAS NO ORGANISMO HUMANO (nas amricas):

A Wuchereria bancrofti B Onchocerca volvulus C Dipetalonema perstans D - Dipetalonema streptocerca E Mansonella ozzardi F Dirofilaria immitis (comum em ces)

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ROTEIRO DE AULA PRTICA N 06:

Identificao dos principais ectoparasitos humanos / Identificao de protozorios intestinais

OBJETIVOS: *OBSERVAR AS FORMAS EVOLUTIVAS DOS ARTRPODES QUE PROVOCAM ECTOPARASITOSES HUMANAS, CORRELACIONANDO-AS COM A TCNICA DIAGNSTICA PARASITOLGICA. * VISUALIZAR CISTOS DE PROTOZORIOS INTESTINAIS HUMANOS

a)- ARTHROPODA - DIPTERA: ( CYCLORRHAPHA (Moscas) Dermatobia hominis; Cochliomyia hominivorax: LARVAS DIAGNSTICO: RECONHECIMENTO DAS LARVAS NOS TECIDOS HUMANOS: LOCALIZAO E COMPORTAMENTO DAS LARVAS. b)- ARTHROPODA - SIPHONAPTERA (Pulgas) Tunga penetrans (Bicho do p) DIAGNSTICO: VISUALIZAO DE LESO CARACTERSTICA COM A PULGA. c)- ARTHROPODA - ANOPLURA (Chatos e Piolhos) Pthirus pubis ( %& ) Pediculus capitis ( %& e observar ovos) DIAGNSTICO: RECONHECIMENTO DO INSETO ADULTO OU SEUS OVOS NOS PLOS PUBIANOS OU CABELOS. d)- ARTHROPODA - ARACHNIDA - ACARI Sarcoptes scabiei (caro - Sarna), DIAGNSTICO: APLICAO DE FITA GOMADA TRANSPARENTE SOBRE A PELE DA REGIO AFETADA: COLAR A FITA SOBRE UMA LMINA E EXAMINAR AO MICROSCPIO. e) MONTAR LMINAS FRESCO E PROCURAR CISTOS DE PROTOZORIOS INTESTINAIS:1 - Giardia lamblia /2 - Entamoeba histolytica / 3 - Entamoeba coli / 4 - Entamoeba hartmani / 5 Iodamoeba butschlii / 6 - Endolimax nana

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ROTEIRO DE AULA PRTICA N 07: Identificao de ovos e larvas de helmintosOBJETIVO: VISUALIZAR TODOS OS POSSVEIS OVOS E LARVAS DE HELMINTOS ENCONTRADOS NOS DIVERSOS EXAMES PARASITOLGICOS DAS FEZES. OBS.: CONSULTAR AS PRANCHAS DE OVOS E LARVAS DE PARASITOS

III - DIAGNSTICO PARASITOLGICO DAS FEZESCONSIDERAES GERAISPara o diagnstico das parasitoses intestinais, diversos mtodos podem ser utilizados, tais como provas imunolgicas (sorolgicas e reao intradmica), pesquisa de parasitos em material coletado em endoscopias (esofagogastroduodenoscopia e proctoscopia) e at mesmo apreciaes radiolgicas. No entanto, rotineiramente, se faz em primeiro lugar, o exame parasitolgico de fezes, levando em considerao as vantagens relacionadas sobretudo com simplicidade, custo e especificidade decorrentes de tal moda de proceder. As tcnicas descritas e destinadas a esta finalidade pretendem demonstrar a presena, na matria fecal de formas trofozoticas ou csticas de portozorios e de ovos, larvas ou adultos de helmintos porventura existentes no aparelho digestivo. Tais elementos, diferentes no que diz respeito ao tamanho, morfologia e densidade, so evidenciados por processos diversos. No existe um mtodo de exame de fezes capaz de evidenciar todos os ovos, larvas, cistos e trofozotos intestinais; no entanto, alguns so mais usados rotineiramente, pois so capazes de evidenciar maior nmero de formas, alm de serem de execuo fcil e barata.

a)

Noes de Fisiologia da Digesto: Os alimentos so constitudos por protenas, hidratos de carbono, gorduras, vitaminas, sais minerais e gua. A principal funo do trato alimentar fornecer ao organismo nutrientes, eletrlitos e gua. Os alimentos percorrem o tubo digestivo a uma velocidade apropriada levando 24 horas em todo trajeto, permanecendo cerca de 3 horas no estmago, e 3 a 6 no intestino. Para sua absoro sofrem, ao longo do tubo digestivo, modificaes de ordem fsica e qumica, sob influncia dos sistemas nervoso e endcrino. O intestino delgado duodeno e jejuno a zona, em especial, de digesto e absoro dos produtos finais da digesto: as protenas como aminocidos; os carboidratos como monossacardeos; as gorduras como cidos graxos e glicerol; alm da gua, sais minerais e biliares e vitaminas. No ccum e metade proximal do clon clon de absoro - h absoro de gua, cloro e sdio; a metade distal o clon de

armazenamento. O contedo total do intestino delgado de 10 litros, do qual 500 ml passa para o intestino grosso e, aps absoro restam 50 a 100 ml de lquido que exonerado nas fezes. No clon de absoro h numerosas bactrias, em especial colibacilos, que sintetizam enzimas capazes de digerir pequena quantidade de celulose vitaminas B1, B12, K e riboflavina, alm de cido flico e gases: escatol, indol, metano, sulfeto de hidrognio, entre outros.

b) c)

Discrepncia de resultado (Falso negativo): perodos negativos de eliminao; infeco unissexual; imaturidade dos parasitos. Causas de Erros: Falhas tcnicas quantidade insuficiente, amostra inadequada, gua e solues utilizadas, m dissoluo, tempo de centrifugao e de sedimentao, mtodo imprprio, entre outros. Falhas humanas desconhecimento, cansao, pressa, confuso devido presena de estruturas de origem animal e vegetal (levedura, esporo, fungo, gros de plen, fibras musculares, clulas teciduais, plos, leuccitos, entre outros).

d) As Fezes:1.0 Exame Macroscpico: * Aspectos Gerais: Consistncia e Forma: normalmente formada ou moldada (cilndrica), semi-moldada (diarria, colite, trnsito intestinal acelerado), Lquida (diarria, disenteria), Dura (constipao). Viscosidade: Depende do teor de muco e da consistncia. Normalmente viscosidade mdia. Pode ser muito viscosa (aderindo ao fundo do recipiente e desfazendo-se com dificuldade em gua colite, e pouco viscosa, sendo espojosa, arejada, flutuando e facilmente emulsionvel em gua dispepsia fermentativa. Cor: normalmente parda ou castanha-parda; parda escura (dispepsia putrefativa); parda clara (dispepsia fermentativa); acinzentada (insuficincia gstrica e pancretica); esbranquiada (massa de vidraceiro) insuficincia biliar, ictercia obstrutiva, trnsito intestinal acelerado - ; preta (sangue digerido) hemorragia digestiva alta esfago, estmago e duodeno; vermelha (sangue no digerido) hemorragia digestiva baixa: intestinos, reto e nus. A cor das fezes dada pela estercobilina originria do estercobilinogneo e este da bilirrubina, por ao da flora bacteriana. O regime alimentar e o uso de medicamentos pode influenciar: amarela (dieta lctea); verde (verduras); preta (sarapatel, feijo preto, medicamentos com ferro, bismuto e carvo); vermelha (beterraba, pomoato de pirvneo). Odor: normal (fecal); ptrido (dispepsia putrefativa); inodora (dieta lctea). Tambm depende da alimentao, medicamentos, flora intestinal e formao de gases. Reao: normal (pH 6,5 / 7,5); cida (dispepsia fermentativa, insuficincia biliar); alcalina (dispepsia putrefativa, insuficincia pancretica, insuficincia gstrica, colite). H influncia da alimentao.

Peso Total: varivel com a alimentao. Normal (100 150g / 24hs); aumentado (dispepsia fermentativa, insuficincia pancretica, enterite, esteatorria sndrome da m absoro); diminudo (constipao intestinal). Peso Seco: normalmente as fezes so formadas por 75% de gua e 25% de matria slida, assim distribuda: bactrias 30%, restos no digeridos (celulose e pigmentos) 30%, gorduras 10/20%, matrias inorgnicas 10/20%, protenas 2/3%. Em geral, o peso seco representa 20/25%, est diminudo diarria; aumentado obstipao, esteatorria. * Prova de Digestibilidade Resduos alimentares vegetais e animais, produtos de origem intestinal e outros, normalmente no so encontrados. Faz-se a pesquisa colocando o material fecal em placa de Petri, sobre fundo branco e parte escuro, diludo em gua a 10%. Para revolver, usar basto. Resduo Alimentar Feculento e Detritos Vegetais: Cenoura, batata (com lugol tomam cor violcea ou escura), folhas, fibras vegetais-mastigao defeituosa, insuficincia gstrica, insuficincia pancretica e trnsito intestinal acelerado. Tecido Conjuntivo animal: pequenos flocos brancos, gelatinosos, flexveis, elsticos, formando uma gota quando suspenso por uma agulha insuficincia gstrica (hipo ou acloridria). Fragmentos de Carne, Tecido Conjuntivo: Mastigao defeituosa insuficincia pancretica, insuficincia gstrica, trnsito gastro-intestinal acelerado. Muco e Membrana Resultantes de processos irritativo ou inflamatrio da mucosa intestinal. O Muco se apresenta como pequenos grumos, estrias ou filamentos acinzentados envolvendo o bolo fecal, quando o intestino grosso, ou em grumos misturados s fezes, se do delgado; a Membrana como placas ou filamentos grossos e longos, como macarro Colite mucomembranosa, colon irritvel (ao fsica, qumica, inflamatria, nervosa) processo alrgico, distrbio neuro-vegetativo. Gordura, Tecido Adiposo: Aspecto lustroso e esbranquiado ingesto excessiva de gordura, sindrome de m-absoro, giardase. Sangue: (Fezes diluida) Enterrogias: no digerido, das vias baixas, vivo Hemorroida, ulcerao do sigmoide, plipo, neoplasia, disenterias bacilar e amebiana, colite ulcerativa grave; digerido, das vias altas, Melena varizes gastro-esofageanas, diverticulite, neoplasia, prpura, trombose mesentrico. Pus: Geralmente associado a sangue e muco, colorao acinzentada colite ulcerativa grave, linfogranulomatose, abscesso, disenterias bacilar e amebiana. Parasitas: Inteiros ou partes Al, Tt, Na, Hn, Te (proglotes); pseudoparasitas larvas de moscas (Musca domestica, Tephritidae), caros de frutas. Outros Areia intestinal real: fragmentos de clcio, fosfato de clcio e magnsio; Falsa areia pequenos detritos oriundos da ingesto de frutas e outros vegetias; folhas e fibras; fragmentos de neoplasia, plipo; corpo estranho (velho e criana). 2.0 EXAME MICROSCPICO

* PROVA DA DIGESTIBILIDADEExame Direto a Fresco:

Normalmente so encontradas, por campo, 1 a 2 fibras musculares, bem digeridas, e clulas vegetais, com ou sem amido, e um pouco de muco. Fibras Musculares: M digeridas ou sem digerir Retangulares ou cilndricas, alongadas, ngulos ntidos, estrias longitudinais ou transversais, coradas em amarelo pela bile trnsito intestinal acelerado (lienteria), insuficincia pancretica (esteatorria), insuficincia gstrica, distrbios de absoro; Bem digeridas, sem estrias, sem ngulos, ovaladas ou em faixas. Tecido conjuntivo: Feixes de filamentos alongados ou fibras isoladas, sinuosas insuficincia gstrica. Celulose: A digesto ocorre no cecum e colon, pela flora bacteriana, sendo normal o encontro de pequena quantidade. Digestvel arcabouo das cluas de vegetais e de feculentos, com formas variadas, contornos ntidos, septadas, contendo ou no amido DP, TIA (desde o delgado), reduo ou eliminao da flora bacteriana por uso de antibiticos de largo espectro. Indigestvel sem valor semiolgico cutcula de cereias, vasos, plos, fibras vegetais, gros de plen esporos, fibras e clulas vegetais. Cristais: Substncias qumicas com formas definidas: Caroteno, cubos amarelados de cenoura aumentado na DF, TIA, ID; cidos graxos, finas agulhas entrecruzadas IB; Fosfato-amonaco-magnesiano, em forma de tampa de esquife ou plumas IP, DP, IG; Oxalato de clcio, com envelope ou alteres, na ingesto de tomate, feijo, vegetais, em fezes cidas ERE, DF, IG; Subxido de bismuto, cor negra; Colesterina, em lminulas processos extra-digestivos e uso de antibiticos de largo espectro; Carbonato de clcio como agulhas, estrelas; Chacot-Lyden, forma de losango bem alongado ulceraes intestinais, alergia digestiva, verminoses, alteraes da flora por antibiticos.

* EXAME DIRETO CORADO PELO LUGOL Amido: Intracelular (incluido) nas cluas dos feculentos, como massa envolta em membrana celulsica Trnsito intestinal acelerado (TIA), Insuficincia pancretica (IP) enterite; Amorfo, faixas isoladas ou manchas, em mistura com bactrias iodfilas TIA, IP, Dispepsia putrefativa (DP), enterites; Cru, forma de gros massa amorfa, originrias de po, frutas e outros alimentos ingesto em excesso Dispepsia fermentativa (DF), IP, enterite. Flora Iodfila: ausente nas fezes normais. Est presente no fim do leo e em abundncia no cecum e colon ascendente Clostrdeos, Leptotrix e Cocos DF e evacuao prematura do colon e cecum. 3.0 DOSAGENS E ANLISES QUMICAS Quantitativa e qualitativa. Pigmentos Biliares: Estercobilina, estado normal; Estercobilinognio Trnsito intestinal acelerado (TIA) do hemi-colon direito e leo terminal; Bilirrubina TIA desde o delgado. H diminuio ou ausncia de pigmentos nos obstculos ao livre trnsito da bile para o intestino e com o uso de antibiticos de largo espectro acolia. Sangue Oculto: lcera, varizes rotas, neoplasia, gastrite erosiva, diverticulite. O uso de aspirina, salicilatos, corticoide, pode provocar perda de sangue. Substncias Proteicas (Mucina, proteina no degradada e degradada, peptona) Colite, leso da parede intestinal, constipao.

Enzimas Proteolticas: Esteatorria, doenas fibrocstica do pncreas, mucoviscidose. cidos Orgnicos Dispepsias fermentativa e putrefativa, Trnsito intestinal acelerado Gordura Fecal: Insuficincia pancretica, doena do fgado e trato biliar, esteatorria. Nitrognio: Aumentado em quase todas as doenas intestinais com especialidade na insuficincia pancretica (m absoro), dispepsia fermentativa - Diminuda constipao. 4.0 DEFINIES Fezes: Excreo intestinal formada por alimentos no absorvidos, matrias indigestveis, secreo intestinal e gua. Diarria: Excreo intestinal constituda por fezes com consistncia diminuda: aquosa ou pastosa. Disenteria: Excreo intestinal constituda de fezesmuco-sanguinolenta, com clica abdominal e tenesmo. Tenesmo: Sensao dolorosa de tenso e constrio do nus com vontade imperiosa de defecar. Lienteria: Diarria em que as substncias ingeridas so eliminadas sem que lhes tenha feito a digesto. Cinese: Fenmeno de excitabilidade dos organismos, provocados por agentes externos, e que podem acelerar ou retardar os movimentos. Exsudato: material constitudo com elevado teor de protenas e clulas que, na inflamao, passa para os tecidos ou espaos adjacentes, atravs das paredes vasculares. Secreo: substncia elaborada por clulas, particularmente glandulares, com materiais fornecidos pelo sangue que, eliminada do corpo ou por ele utilizada, exerce funes especializadas. Fezes lquidas: examinar, no mximo, at 30 minutos aps evacuao. Fezes formadas: examinar ou preparar o material at 01 hora, completando o exame no mesmo dia. Na impossibilidade de faz-lo, usar conservador ou colocar a amostra em geladeira. 5.0 RECOMENDAES No deixar o recipiente descoberto, nem coloc-lo sobre requisio. No laudo, alm da identificao, devem constar: aspectos gerais da amostra, presena de resduos e outras estruturass, parasitas com gnero e espcie, grau de infeco, mtodo utilizado no exame. No caso de no ser possvel identificar formas parasitrias, colocar encontro de... (cistos, trofozoitos, ovos, larvas) no identifacos e nada encontrando nenhuma forma parasitria encontrada, em lugar de exame negativo. COLETA DE MATERIAL (fezes)

Geralmente as fezes emitidas so semi-slidas ou pastosas. Mas quando necessrio se fazer o exame com fezes lquidas, diarricas, e isto ocorre quando queremos pesquisar trofozotos de protozorios ou larvas de helmintos intestinais, mandamos ingerir um purgativo na noite anterior, tipo Sal de Gauber. Retira-se uma pequena quantidade das fezes emitidas e coloca-se num recipiente de boca larga. Fechar bem em seguida, rotula-se devidamente com nome, idade, data e hora da coleta, se possvel. Deve-se ter cuidado com o recipiente onde ser coletado o material fecal, devendo estar limpo e seco. Remeter imediatamente ao laboratrio.

MTODOS PARA CONSERVAO DO MATERIALs vezes no h possibilidade de remeter o material imediatamente ao laboratrio ou ainda que isto seja feito, por vezes no h possibilidade de se examinar prontamente. Nestes casos deve-se conservar as fezes atravs dos seguintes mtodos: a- Colocar no refrigerador: temperatura entre 5oC e 10oC (em geladeira ou em caixas com gelo e serragem) permite que o material seja examinado at 2 a 3 dias aps a coleta. b- Uso de substncias conservantes: as fezes devem ser homogenizadas nessa soluo e podero ser examinadas at 30 dias aps a emisso do material. A proporo ser de 2-3 partes de conservador para 1 de fezes. As solues mais utilizadas so FORMOL A 10%, MIF ( merthiolate ou mercrio, iodo e formol) e SAF (acetato de sdio, cido actico e formol), sendo este ltimo muito til para conservao de fezes diarricas.

MTODOS DE EXAMESDIRETO: colocar uma pequena quantidade de fezes na lmina e examin-la ao microscpio; fazer uma lmina contendo soluo fisiolgica apenas e outra contendo lugol ( para visualizar os cistos). INDIRETO: Nem suficiente para examinar um enriquecimento indiretos so de sempre a quantidade de fezes usada para o mtodo direto o nmero de formas contidas nas fezes. Assim necessrio maior volume fecal, fazendo-se a concentrao ou o das mesmas para evidenciao das formas. Os mtodos dois tipos:

QUALITATIVOS: a- HOFFMANN, PONS e JANNER (HPJ) ou MTODO DE LUTZ ou SEDIMENTAO ESPONTNEA. Evidencia principalmente ovos de helmintos, mas tambm pode-se ver larvas de helmintos e cistos de portozorios. b- SEDIMENTAO POR CENTRIFUGAO OU MIF OU BLAGG Evidencia principalmente cistos e ovos.

c- BAERMANN- MOARES: Especfico para o diagnsticos de larvas de helmintos / RUGAI: Tambm especfico para larvas. d- WILLIS Evidencia principalmente ovos de Ancilostomdeos e secundariamente ovos de Ascaris, Trichuiris, Hymenolepis e Taenia. e- FAUST Encontro de cistos de protozorios. Secundariamente ovos e larvas de helmintos (excesso do Ascaris e do Schistosoma) f- RITCHIE - Encontro de cistos de protozorios. Secundariamente ovos e larvas de helmintos. QUANTITATIVOS

ab-

KATO-KATZ : Para ovos de S.mansoni (PRINCIPALMENTE) A. lumbricoides, T. trichiura e Ancilostomatideos. STOLL: Principalmente Ancilostomdeos, secundariamente A. lumbricoides e T. trichiura

APRESENTAO DOS RESULTADOS:Os parasitos encontrados, patognicos ou no, bem como uma estimativa do parasitismo para cada espcie, deve ser mencionado. comum o uso, ao lado do nome da espcie encontrada, de Raros (1-3 formas de parasitos encontrados na lmina); Vrios (> 4 formas parasitrias na lmina) ou Numerosos( + de 2 formas por campo). Abaixo exemplos de resultados parasitolgicos de fezes, tendo como base a ficha para resultados utilizada pelo Ministrio da Sade: : PARASITOLGICO DE FEZESN DO EXAME

001

LABORATRIO DE PARASITOLOGIA CCBS CESMAC - FEJALNOME: ENDEREO:

Maria dos Santos R. So Cristovo, 76, Prado - Macei

SEXO: IDADE:

F

35 a

MDICO REQUISITANTE:

U. DE SADE:

David FernandesNATUREZA DO EXAME: ( X ) PARASITOLGICO COMUM (HPJ) ( ) PESQ. CRYPTOSPORIDIUM E ISOSPORA ( ) PESQ. E. VERMICULARIS (GRAHAN) ( ) PESQ. DE S. STERCORALIS (BAERMANN) ( ) PESQ. S. MANSONI (KATO-KATZ) ( ) PESQ. AMEBAS / GIARDIA ( MIF) ( ) PESQ. PROGLOTES TAENIA (TAMIZAO) ( ) PESQ. AMEBAS / GIARDIA (FAUST) NATUREZA DA AMOSTRA: ( x ) AMOSTRA NICA ( ) FEZES COLETADAS (3 AMOSTRAS / DIAS ALTERNADOS) ( ) 3 AMOSTRAS SEPARADAS: ( ) 1 AMOSTRA ( ) 2 AMOSTRA ( ) 3 AMOSTRA CONSISTNCIA: ( x ) PASTOSA ( ) SEMI-PASTOSA ( ) LQUIDA ( ) DURA HELMINTOSCOPIA PESQ. DE OVOS

ASCARIS LUMBRICOIDES: TRICHURIS TRICHIURA: SCHISTOSOMA MANSONI: ANCILOSTOMDEOS: HIMENOLEPIS NANA: TAENIA SP: ENTEROBIUS VERMICULARIS:

VRIOS RAROS XX XX XX XX XX

HELMINTOSCOPIA PESQ. DE LARVASSTRONGYLOIDES STERCORALIS: ANCILOSTOMDEOS: ENTAMOEBA XX XX XX

PROTOZOOSCOPIA PESQ. DE CISTOSHISTOLYTICA: ENTAMOEBA COLI: VRIOS ENTAMOEBA HARTMANI: XX GIARDIA LAMBLIA: RAROS ENDOLIMAX NANA: XX IODAMOEBA BUTSCHLII: XX OBS.: Resultado positivo para ovos de helmintos e cistos de protozorios e negativo para larvas de helmintos no material examinado

12

o1

2001ASSINATU

DATA: _________/_________/____________ ___________________________________________ RA DO RESPONSVEL

Ficha do Ministrio da Sade (SUS) adaptado pela profa. Cludia Calheiros

IV - CONSIDERAES SOBRE ALGUNS PARASITOS ENCONTRADOS NAS FEZES, NO AMBIENTE E EM OUTROS MATERIAIS BIOLGICOS, OU CHAMADOS OPORTUNISTAS1 - O DIAGNSTICO DAS AMEBAS APATOGNICASO parasitologista clnico deve diferenciar com segurana, principalmente, os cistos das amebas apatognicas. Estas formas evolutivas apresentam tamanhos, refringncia / quantidade dos ncleos e intensidade de colorao pelo lugol variados, sendo necessrio as caractersticas peculiares de cada ameba para o correto diagnstico. A grande importncia deste diagnstico reside no fato de que estes cistos podero ser confundidos com cistos de amebas patognicas.

2 - O DIAGNSTICO DAS AMEBAS DE VIDA LIVREEste diagnstico muito difcil, sendo realizado, na maioria das vezes, ps-mortem. Colhe-se material do rgo afetado (liquor cefalorraquidiano, mucosa nasal ou faringeana, entre outros), fazendo-se exame direto fresco ou corado pela hematoxilina frrica ou Giemsa. Com este material ou com o material

coletado de guas ou lodo de piscina e lagos pode-se fazer uma cultura. A identificao especfica das amebas encontradas dada por um especialista. As amebas de vida livre que so patognicas ao homem, determinando quadros de meningoencefalites, muitos deles fatais, so: Naegleria fowleri e Acanthamoeba rhysodes.

3 - O DIAGNSTICO DOS PARASITOS MENOS FREQUENTES EM NOSSO MEIO Syngamus laryngeus: um helminto da laringe e faringe da caprinos e bovinos, podendo, acidentalmente, infectar o homem quando este ingere lquidos, alimentos, artrpoda ou molusco infectados com larvas do parasito. A singamose pode causar tosse crnica com durao de meses e eliminao de catarro sanguinolento, principalmente noite. O diagnstico feito quando se d eliminao dos vermes, no acesso de tosse ou remoo atravs do laringoscpio. O verme mede de 3-9 mm, vivendo sempre em casal, com aspecto de Y e avermelhado. Angiostrongylus costaricensis: um helminto normal da artria mesentrica leocecal de roedores silvestres. Os ratos eliminam as larvas nas fezes que so ingeridas por lesmas, que posteriormente eliminam em seu muco larvas infectantes, contaminando os vegetais. O homem infecta-se ao ingerir lquidos ou vegetais contaminados, principalmente o agrio. A angiostrongiloidase caracterizada no homem por edemas, reduo da luz leo-cecal, arterites, tromboses, dor abdominal, febre, anorexia, constipao, vmitos e peritonite, podendo levar o paciente a bito. O diagnstico nos roedores feito pelo exame de fezes (Baermann). No homem o diagnstico imunolgico (RIFI / ELISA) ou atravs do encontro dos vermes em vasos leo-cecais durante as intervenes cirrgicas.

Lagochilascaris minor: um helminto cujo seu ciclo evolutivo ainda se encontra desconhecido. Seusovos, larvas e adultos podem ser encontrados em abcessos subcutneos na cabea, pescoo e trax (ouvido, pulmo SNC e abcessos dentrios) de populaes humanas principalmente da regio norte do Brasil. Os vermes adultos medem de 6,4 a 13 mm. Seus ovos so arredondados, com casca espssa, provida de escavaes ( reentrncias para dentro do ovo). Estas formas podem ser encontradas nas secrees das leses.

4 - O DIAGNSTICO DOS PARASITOS COMUNS EM OUTROS ANIMAIS, PODENDO INFECTAR O HOMEM Echinococcus granulosus: um cestdeo que tem como hospedeiro definitivo candeos e um grandenmero de herbvoros como hospedeiros intermedirios, apresentando a forma larvria, tambm chamada hidtide ou cisto hidtico. O homem pode se infectar, funcionando como hospedeiro intermedirio, ao ingerir os ovos em alimentos contaminados com fezes de ces, desenvolvendo, assim, a larva em seus tecidos e apresentando uma parasitose conhecida como hidatidose. O quadro clnico depende do tecido e do nmero de cistos. O crescimento excessivo e a ruptura de cistos em rgos como pulmes, fgado e crebro pode levar o indivduo bito. O diagnstico humano restringem-se a mtodos de deteco de imagens (radiografias, tomografias, etc), associados a mtodos imunolgicos (RIFI, ELISA, etc). O exame microscpico s pode ser usado, caso ocorra ruptura do cisto e eliminao de seus elementos atravs da urina e expectorao brnquica.

Hymenolepis nana: o menor cestdeo que pode parasitar o homem e relativamente comum. Tambmtem como hospedeiros definitivos roedores de vrias espcies. O homem se infecta ao ingerir lquidos ou alimentos contaminados com fezes humanas ou de roedores, contendo ovos do parasito; tambm pode se infectar ao ingerir, acidentalmente, insetos com as larvas do parasito. O surgimento de manisfestaes clnicas est relacionado com a idade do hospedeiro e o nmero de parasitos; assim em crianas com alta parasitismo podem surgir: agitao, insnia, irritabilidade, diarria, dor abdominal, congesto da mucosa, infiltrao linfocitria, pequenas ulceraes, eosinofilia e perda de peso. Raramente ocorrem sintomas nervosos, dos quais os mais penosos so: ataques epilpticos em formas vrias, incluindo cianose, perda de conscincia e convulses. Em geral, os pacientes com himenolepase costumam apresentar remisso dos sintomas espontaneamente, sem tratamento. O diagnstico laboratorial de escolha o parasitolgico, atravs do

encontro de ovo caracterstico nas fezes (Chapu de mexicano visto por cima), pelo mtodo de sedimentao espontnea.

Dipylidium caninum :

um cestoda comum em intestino delgado de ces e gatos, sendo raro no homem. Em infeces maias pode haver irritao da mucosa e ataques epileptiformes nas crianas, ao patognica semelhante ao que ocorre em ces e gatos. O diagnstico feito pelo encontro de progltes grvidas nas fezes, que se assemelham a sementes de abbora ou encontro de cpsula ovgera (cerca de 20 ovos em cada cpsula).

Balantidium coli:

um protozorio ciliado comum no intestino grosso de sunos e, ocasionalmente podendo ser encontrado no homem, que se infecta atravs da ingesto de lquidos e alimentos contaminados com fezes de sunos.. comensal, se alimentando de bactrias e amido, no sendo capaz de penetrar na mucosa ntegra. A doena balantidase no homem, se d quando h alguma leso prvia em sua mucosa do clon ou do ceco, e consequente invaso do parasito na mesma. O parasito tem a capacidade de aumentar a leso inicial pela produo de hialuridase, provocando lceras e necroses localizadas. As leses e a sintomatologia parecem com a amebase, podendo surgir diarria, meteorismo, dor abdominal, anorexia, fraqueza e febre. O diagnstico laboratorial feito pelo encontro de cistos em fezes formadas e trofozotos em fezes diarricas. Pode ser feito cultura das fezes para evidenciar o parasito (os meios mais usados so: soro de cavalo ou meio de Pavlova).

Babesia:

um protozorio que parasita as hemcias de vrias espcies animais e, raramente, as do homem, quando picado por carrapatos infectados ou por transfuses sanguneas. Pode ser confundido com malria, mas a morfologia dos parasitos so distintas. Na babesiose humana podem surgir: febre aguda, anemia hemoltica com ictercia e hemoglobinria, fadiga e mialgia. O diagnstico laboratorial da babesiose semelhante ao utilizado para diagnosticar malria humana, sendo mais facilmente realizado na fase de pico da parasitemia, que corresponde ao quadro agudo da doena, onde encontramos os parasitos nos esfregaos sanguneos corados pelo giemsa. Este diagnstico dever ser feito por um parasitologista. Quando a doena encontra-se j em uma fase sub-aguda ou crnica, pode ser feito o diagnstico sorolgico com a utilizao da RIFI e do ELISA.

5 - O DIAGNSTICO DOS PARASITOS OPORTUNISTAS Cryptosporidium: um protozorio que se desenvolve preferentemente nas clulas epiteliais do tratointestinal, tendo uma localizao intracelular extracitoplasmtica, pois ficam no interior de vacolos formados pela membrana destas clulas. O parasito alberga um grande nmero de espcies animais, e o homem se infecta quando ingere lquidos ou alimentos contaminados por fezes de seres parasitados ou inalam oocistos do parasito. Provoca diarria aguda em indivduos imunocompetentes, principalmente crianas, e diarria crnica em indivduos imunodeprimidos, caracterizada por dores abdominais, nuseas, vmitos, anorexia, m absoro de gorduras e vitaminas com perda de lquidos, chegando a vrios litros por dia, dependendo do estado de imunodepresso. O diagnstico feito pela pesquisa de oocistos nas fezes por mtodos de concentralo e colorao, sendo o mais utilizado o de Safranina / azul de metileno.

Isospora belli: um protozorio que se desenvolv na mucosa do intestino delgado da vrios animais,inclusive do homem, causando diarria aguda autolimitada em indivduos imunocompetentes e diarria aquosa crnica em pessoas imunodeprimidas, acompanhada de dores abdominais, anorexia, perda de peso, febre baixa, mal absoro, nuseas e vmitos. frequenta o achado de cristais nas fezes. O diagnstico o mesmo usado para o Cryptosporidium.

Cyclospora cayatanensis: So protozorios esfricos que parasitam o epitlio intestinal, com oocistosmedindo cerca de 8 10 micra, encontrados nas fezes seres humanos com diarria aquosa, nuseas, dores abdominais, anorexia, perda de peso, e vmitos. O diagnstico deve ser diferencial devido a criptosporidiose. O parasito da cilosporase cora-se pela fucsina ou safranina, onde deve ser medida cuidadosamente o dimetro dos oocistos. O parasito fluoresce em azul quando sob efeito de luz ultravioleta (caracterstica prpria).

MICROSPORDEOS:

So vrias espcies de protozorios do trato digestivo, intracelulares obrigatrios que podem parasitar o homem. A microsporidiose em pacientes com imunodepesso associada a diarria aquosa crnica, com perda de peso, anorexia e nuseas. O diagnstico depende de bipsias de intestino delgado, corado por Giemsa ou exame de fezes diarricas, devendo ser examinado por especialista.

Blastocystis hominis:

um protozorio anaerbio, exigindo a presena de bactrias para o seu crescimento. Em pacientes com imunodepesso produz diarria crnica, respondendo satisfatoriamnte ao tratamento especfico. O diagnstico feito pelo exame das fezes, onde o parasito apresenta-se sob as formas amebide, granular e vacuolar, sendo a ltima a mais frequentemente encontrada.

COLORAO ESPECIAL PARA ALGUMAS FORMAS EVOLUTIVAS DE PROTOZORIOS OPORTUNISTAS ENCONTRADOS NAS FEZES: CRYPTOSPORIDIUM E ISOSPORA: Colorao Safranina / azul de metileno 1) Fezes diarricas com formol a 10% (1:3) em tubo p/ centrifugao 2) Deixar decantar e depois despreza o sobrenadante 3) Acrescenta 1 a 2 ml de ter 4) Centrifuga por 3 minutos 4 rpm 5) Desprezar as camadas, deixando o sedimento 6) Com basto de vidro ou ala de platina fazer esfregao circular do sedimento, de maneira que fique uma camada fina em duas lminas devidamente identificadas

7) Colocar as lminas em um suporte para colorao (dois bastes de vidro na quina da pia). Deixar secar um pouco 8) Colocar lcool clordrico com pipeta, para fixar (por 3 minutos) 9) Lavar a lmina para tirar o excesso de lcool 10) Colocar Safranina pronta para uso, e aquecer at a ebulio (utilizar chama de candeeiro embaixo das lminas) 11) Lavar para retirar o excesso 12) Colocar azul do metileno por 5 minutos (para dar o contraste) 13) Lavas as lminas para retirar o excesso, deixar secar e examinar Safranina (Corante Seg. gram. Mod. Soluo D Safranina) Comprar soluo pronta para uso (soluo estoque) ou o p * Preparao da soluo a partir do p: Sol. Estoque: 2,5 g de safranina 100 ml de Etanol a 95% Sol. Uso: Sol. estoque 10 ml H2O dest. 90 ml (S. Safranina 1%)

PARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 08: Demonstrao e execuo do mtodo de Hofmann, Pons e Janner (Sedimentao espontnea ou HPJ) / Identificao de parasitos intestinaisEXAME PARASITOLGICO DAS FEZES OBJETIVO: Compreender e executar todas as etapas do MTODO DE HOFFMANN, PONS E JANNER (HPJ) , OU LUTZ OU SEDIMENTAO ESPONTNEA Indicao: diagnstico das helmintoses: esquistossomose, ancilostomase (necatorose), ascaridase e tricurase, pela pesquisa dos respectivos ovos. Pode ser encontrados ovos e larvas de outros helmintos, bem como cistos de protozorios. Fundamento: sedimentao espontnea dos ovos, quando se faz suspenso das fezes em gua. Tcnica:

1. Colocar aproximadamente 5 a 10 ml de gua em um Borrel, ou similar, e dois a cinco gramas de fezes, sem tocar nas paredes internas. Triturar as fezes com basto de vidro, misturando-a na gua. Acrescentar mais 20 ml de gua; 2. Filtrar a suspenso em gaze cirrgica dobrada 4 vezes, em um clice de sedimentao de fundo afunilado, de 100 ml de capacidade; 3. Os detritos contidos na gaze so lavados com mais 20 ml de gua, agitando-se constantemente com o basto de vidro, devendo o lquido da lavagem ser recolhido no mesmo clice; 4. Essa suspenso de fezes deixada em repouso durante 2 a 24 horas; 5. Findo esse tempo, decantar o sobrenadante cuidadosamente para no levantar o sedimento; se o lquido sobrenadante estiver turvo, decantar e colocar gua ( a lavagem do sedimento), repousar por mais 60 minutos. Repetir a operao uma ou mais vezes, caso o lquido ainda continue turvo; 6. Pode-se, sem decantar o sobrenadante, colher o sedimento com ajuda de uma pipeta. Com o polegar e mdio, segura-se a pipeta e com o indicador, oblitera-se firmemente a extremidade superior ao introduzir a pipeta no clice, observando que os dedos fiquem fora do mesmo. S quando a extremidade inferior das pipeta atingir o fundo do clice, retirar o indicador e, antes de levant-la, voltar a obliterar. Assim evita-se entrada de gua e queda do sedimento. No levar a extremidade at o fundo do clice, com sedimento muito espesso. 7. Virando-se o clice cujo sobrenadante j foi desprezado ou utilizando a pipeta, colocar uma gota do sedimento sobre uma lmina.

8.

Pegar a lamnula com os dedos polegar e indicador na parte mdia dos bordos maiores, encostar um dos menores na lmina, formando um ngulo de 45 o , e deixar cair lentamente, a fim de evitar a formao de bolhas de ar. Os bordos maiores da lmina e lamnula devem ficar paralelos com discreta presso sobre a lamnula, o material se espalha uniformimente. 9. Para identificar cistos imprescindvel o uso de lugol que cora as estruturas dos mesmos; e 10.Examinar em microscpio com aumento de 10X e 40X. Material necessrio: fezes, gaze cirrgica, gua, Borrel, basto de vidro, clice de sedimentao, pipeta, lmina, lamnula, soluo de lugol, microscpio.

RESUMO:COLETA DO MATERIAL: Recipiente esterilizado / Rotular CONSERVAO: Frio: Geladeira (5 10) Exame 2 3 dias aps Formol 10% - Exame 1 ms

( HPJ, HOFFMAN OU SEDIMENTAO ESPONTNEA: 1 - Misturar com basto de vidro fezes com gua em borrel 2- Filtrar a suspenso para clice cnico com gaze dobrada em quatro 3- Completar com gua e deixar em repouso por 2 a 24 hs 4- Decantar o sobrenadante, colher uma gota de sedimento com uma pipeta, colocar em lmina com lamnula e examinar (aumento de 10X). Preparar no mnimo 3 lminas: uma sem e outra com Lugol (aumento de 10X) e a ltima com Lugol no aumento de 40X) PARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 09: Demonstrao e execuo do mtodo de Baermann e Rugai et al. / Identificao de helmintosEXAME PARASITOLGICO DAS FEZES

OBJETIVO: Compreender e executar todas as etapas dos mtodos de BAERMANN E RUGAI Indicao: diagnstico da estrongiloidose, pela pesquisa de larvas de Strongyloides stercoralis. Tambm pode ser detectado larvas de Ancilostomdeos, caso se examine fezes de indivduos que sofra de constipao intestinal. Fundamento: esse mtodo baseado no hidrotropismo e termotropismo positivo das larvas que saem do material, migrando para a gua quente e, por gravidade, se depositam no fundo do funil. 1Tcnica : Espalhar, com um basto de vidro, cerca de 10g. de fezes em gaze, dobrada 4 vezes, e colocar numa peneira ; 2- Colocar a peneira num funil de vidro, 10-12cm de dimetro, ligado a um tubo de borracha com uma pipeta na outra extremidade; fechar o tubo com presilha ou pina. Colocar o funil num suporte e encher com gua aquecida a 45 o C deixando as fezes parcialmente submersa (para maior comodidade, costuma-se construir um pequeno suporte de tbua, com vrios furos circulares para receberem os funis, facilitando o trabalho); 3Deixar uma hora em repouso; 4Abrir a presilha, coletar 5-10ml da gua em vidro relgio, onde estaro as larvas, e examinar; e 5Para identificao das larvas, pesc-las com pipeta, colocar numa lmina com 1 gota de lugol e cobrir com lamnula . Observaes : 1- A gaze deve tocar o fundo da peneira, facilitando o contato com a gua e o tubo de borracha que deve estar bem adaptado ao funil e pipeta . 2- Para examinar larvas de helmintos h necessidade de mat-las, e para isto coloca-se gotas de lugol (estando imveis, permitem a visualizao dos detalhes no diagnstico especfico). 3- Fezes diarricas no so adequadas para este mtodo, devendo-se mistur-las com p de serra . 4- Nas fezes envelhecidas, guardadas em temperatura ambiente ou de obstipados, podem surgir larvas de ancilostomdeos. O ideal so fezes frescas. Material: fezes, gaze, basto de vidro, peneira, funil, tubo de borracha, presilha, suporte, pipeta, gua, termmetro, bico de busen, vidro relgio, lmina, lamnula, lugol e microscpio.

RESUMO:COLETA DO MATERIAL: Recipiente esterilizado / Rotular CONSERVAO: Frio: Geladeira (5 10) Exame 2 3 dias aps Formol 10% - Exame 1 ms ( BAERMANN: 1- Colocar 10g de fezes em gaze dobrada em 4 no funil de vidro, devidamente acoplado a um suporte para Baermann 2- Acrescentar gua a 400C e deixar 1 hora de repouso 3- colher gua em vidro de relgio ou tubo de ensaio , abrindo-se a pina que obliterava o tubo de borracha colocado na haste do funil 4- examinar em lupa (vidro de relgio) ou preparar no mnimo trs lminas do material colhido do tubo de ensaio.

PARASITOLOGIA CLNICA

Profa. Cludia Calheiros

EXAME PARASITOLGICO DAS FEZES MTODO DE RUGAI OBJETIVO: Compreender e executar todas as etapas do mtodo de Rugai Indicao e Fundamento: semelhante ao mtodo de Baermann. Tcnica: 1- Colocar as fezes numa caixa sem tampa, ou aproveitar o recipiente condutor, envolv-la com gaze, prendendo com cordo ou pina; 2- Adicionar gua aquecida no clice de sedimentao; 3- Colocar o recipiente dentro do clice com abertura para baixo, de forma que as fezes fiquem submersas; 4- Aps 20 a 30 minutos, afastar o recipiente e colher material do fundo do clice e colocar em lmina, semelhana do mtodo de Hoffmann. Material: fezes, gaze cirrgica, pipeta, gua, termmetro, bico de bunsen, vidro relgio, lmina, lamnula, lugol, clice de sedimentao e microscpio.

EXAME PARASITOLGICO DAS FEZESMTODO DE HARADA - MORI OBJETIVO: Compreender e executar todas as etapas do mtodo de Harada - Mori

Indicao Identificao das larvas de Necator americanus, Ancylostoma duodenale, Trichostrongylus e Strongyloides stercoralis. Fundamento Hidrotropismo das larvas. Tcnica: a) Espalhar um pouco de fezes, 0,5g, numa tira de papel de filtro com 15 x 1,5cm (variveis na dependncia do tubo), deixando as extremidades livres cerca de 4cm. b) Introduzir a tira de papel num tubo de ensaio com gua, altura de 3cm, de maneira que a gua no toque nas fezes. Fechar o tubo (algodo, papel) e conservar em posio vertical temperatura ambiente. c) Examinar a gua no fundo do tubo com lupa, diariamente, para observar a evoluo das larvas, por 2 semanas. Capturar as larvas com pipeta, colocar em lmina, por 1 a 2 gotas de lugol e examinar. Observaes: O uso de lugol indispensvel para identificar as larvas. Pode-se mat-las em banho-maria a 50C, 15 minutos, e centrifugar a 1.500rpm, 1-2min. Identificar o tubo.

Material Necessrio Tubo de ensaio, tira de papel de filtro, esptula, basto de vidro, pipeta, lmina, lamnula, sol. de lugol, microscpio.PARASITOLOGIA CLNICA

Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 10: Demonstrao e execuo do mtodo de Kato Katz / Identificao de helmintosEXAME PARASITOLGICO DAS FEZESOBJETIVO: Compreender e executar todas as etapas do mtodo de KATO-KATZ Indicao: diagnstico das helmintoses: esquistossomose, ascaridase, tricurase e ancilostomose ( necatorose) , esta se o exame for procedido at 2 horas aps a preparao. Tcnica: 1- Depositar a tela sobre as fezes no recipiente ou em amostra colocada parte; fazer presso com esptula sobre a tela provocando passagem de fezes sem detritos pela malha; 2- Colocar a placa sobre a lmina, com os bordos paralelos. Recolher fezes em cima da tela com esptula e encher o orifcio, fazendo compresso; 3- Retirar o excesso de fezes, utilizando-se de um dos bordos maiores da esptula e arrastando em sentido contrrio ao dedo que a mantm fixa; 4- Levantar a placa, segurar pelos bordos maiores sem deslizar, 5- pr a lmina de celofone embebida em soluo de verde malaquita, sobre as fezes; no deixar dobras, distender a lamnula; 6- Inverter a preparao sobre o papel absorvente, liso, e fazer presso com o polegar a fim de espalhar uniformemente o material; 7- Aguardar alguns segundos, levantar a lmina, limpar os bordos laterais, deixar secar (30 minutos), 8- Examinar ao microscpio com a objetiva de 10 X (aumento de 100 vezes). Observaes: a) S apanhar fezes que tenham ultrapassado as malhas da tela. b) Fixar a placa na lmina com o polegar, de forma que o orifcio fique centralizado e no permita deslizamento. c) A soluo de verde malaquita conserva os ovos e clarifica o esfregao. As lamnulas devem ser nelas imersas 24 horas antes do uso. A lmina pode ser guardada durante meses, a temperatura ambiente. d) O mtodo no se presta para fezes diarricas, no detecta protozorios nem larvas. A quantidade de fezes examinada aproximadamente 47 mg. Multiplicando-se o total de ovos encontrados por 24, tem-se o total por grama de fezes, tornando-se assim, mtodo quantitativo. Material: fezes, tela metlica ou de nylon, esptula ou palito, placa perfurada, lmina de papel celofone semi-transparente, molhvel e absorvente, soluo verde malaquita e microscpio. Existe um Kit.

Reagentes e Solues: Soluo de verde malaquita glicerol: 1ml de verde malaquita 3% ( 3g do p p/ 100 ml de H2O dest.) + 100 ml de glicerol + 100 ml de H2O dest.

PARASITOLOGIA CLNICA

Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 11: Demonstrao e execuo dos mtodos: Graham, Tamizao e Willis/ Identificao de helmintosOBJETIVO: Compreender e executar todas as etapas dos mtodos de GRAHAN, TAMIZAO e WILLIS MTODO DA FITA GOMADA ( ANAL SWAB) Especfico p/ Enterobius vermicularis INDICAO: diagnstico de enterobiose pela pesquisa de ovos de Enterobius vermicularis . Pode-se encontrar ovos de ortros helmintos ( exemplo: Taenia ) FUNDAMENTO: as fmeas do Enterobius especialmente noite, devido as diversas causas( perda da capacidade de fixao mucosa intestinal, provocada pela presso dos ovos sobre o esfago e retrao dos lbios, movimento peristltico e posio de decbito do paciente) deixam seu habitat normal o ccum- e vem parte terminal do intestino grosso, ultrapassam o esfncter anal e, rotas ou por postura, liberam os ovos que ficam aderidos s regies anal e perineal. TCNICA: 1- tomar um pedao de fita adesiva transparente (tipo Durex), com 10 cm x 2 cm, colar numa das extremidades uma tira de papel, com 5cm x 2cm para anotao dos dados de identificao e resultado; 2- apoiar a fita, face adesiva para fora, no fundo de um tubo de ensaio ou similar, presa pelas extremidades com polegar e indicador; apoiar o tubo no primeiro espao interdigital, semelhana de uma caneta; 3- deitar o examinando em decbito ventral, membros inferiores em abduo e afastar os glteos deixando bem exposta a regio anal; 4- aplicar a parte adesiva da fita em torno do orifcio anal, trs a cinco vezes, exercendo suficiente presso para assegurar contato amplo e perfeito com a regio e, consequentemente, aderncia dos ovos fita; 5- colar a fita numa lmina fixando, primeiramente, uma das extremidades e extendendo-a a fim de no deixar dobras e bolhas de ar; 6- para clarificar e contrastar, por uma gota de lugol ou xilol, no centro de lmina, antes de fixar a fita; e 7- examinar com pequeno aumento, 100 X.

OBSERVAES: 1- proceder a coleta de material antes do examinando defecar, tomar banho ou fazer qualquer asseio anal ao despertar, 2- no usar , no dia anterior, nenhum produto nas regies anal e perianal; 3- na falta de tubo de ensaio, usar objeto de extremidade arredondada ou o indicador, prendendo a fita pelo polegar e mdio; 4- a preparao permite ser observada aps vrios meses.

MATERIAL: fita adesiva transparente, tira de papel, tubo de ensaio, lugol, xilol ou tolueno, lmina e microscpio.

PARASITOLOGIA CLNICA

Profa. Cludia Calheiros

EXAME PARASITOLGICO DAS FEZES

MTODO DE TAMIZAO

FUNDAMENTO: LAVAGEM E TAMIZAO DAS FEZES DE TODA UMA EVACUAO E PESQUISA DAS PROGLTES DE TAENIA PARA O DIAGNSTICO ESPECFICO.

TCNICA: 1) Utilizar um basto de vidro e despejar o material fecal em uma peneira (Tamiz); 2) Colocar a peneira em baixo de uma torneira, e sob ao da gua corrente lavar as fezes, procurando por progltes com o auxlio do basto; 3)Fixar e corar as progltes encontradas. 4) FIXAO DE PROGLOTES DE TAENIA: a) Antes de fixar, colocar os vermes com soro fisiolgico na geladeira por 24 horas; b) As proglotes devero ser achatadas uma a uma, por presso, entre duas lminas mergulhadas em placa de petri com o fixador AFA; c) Fixar os vermes durante 30 min a 3 horas. Aps, so retirados do fixador e lavados em gua destilada antes de serem corados; 5) Corar as proglotes por 10 a 24 horas com Carmim Clordrico.

REAGENTES E SOLUES: FIXADOR AFA: 50ml de lcool a 90% + 10ml de formol absoluto + 2ml de cido actico glacial + 40ml de gua destilada.

CARMIM CLORDRICO: 5g de carmim + 5ml de cido clordrico + 5ml de H 2o de gua destilada + 200 ml de lcool a 90%. Triturar o carmim junto com a gua e o cido. Juntar o lcool 1 hora depois. Ferver em banho maria durante uma hora, completando o volume depois de resfriado p/ 200ml com mais lcool a 90%.

PARASITOLOGIA CLNICA

Profa. Cludia Calheiros

EXAME PARASITOLGICO DAS FEZES

MTODO DE WILLIS

1) INDICAO

Diagnstico de helmintoses: Principal, ANCILOSTOMOSE (NECATOROSE); Secundrias, ASCARIDIOSE, TRICURASE, HOMENOLEPASE e TENASE, pela pesquisa dos ovos. 2) FUNDAMENTO Os ovos desses helmintos, por sua baixa densidade, tendem a flutuar quando as fezes so suspensas em soluo aquosa saturada de cloreto de sdio ou acar. 3) TCNICA a) Fazer uma suspenso de fezes em soluo aquosa saturada de cloreto de sdio, filtrar e colocar num recipiente (de vidro, metal ou plstico) com 3-4cm de dimetro e altura mnima de 2cm (a latinha das fezes) at atingir a borda superior. b) Colocar uma lmina sobre a boca do recipiente de modo a atingir a pelcula superficial da suspenso. Deixar em repouso, 1-5 minutos, tempo necessrio para os ovos ascenderem e aderir lmina. c) Levantar a lmina, presa entre o polegar e mdio, pelas suas extremidades, e inverter rapidamente suas faces, com cuidado para no cair o meterial. Colocar lamnula e examinar. d) Pode-se utilizar um frasco (tipo penicilina) e trocar a lmina por lamnula, que no ser invertida, mas colocada sobre a lmina. 4) OBSERVAES a) Utilizar recipiente com borda superior regular, plana. b) Caso a lmina no fique em contato com a suspenso, colocar mais soluo, com cuidado para no cair sobre a lmina nem transbordar.

c) No ultrapassar o tempo de retirar a lmina, a fim de evitar que os ovos, aumentando de peso, percam a aderncia lmina. d) Ao suspender a lmina, rpido mas no bruscamente, deix-la em posio horizontal. O movimento deve ser executado exclusivamente com o punho: pronao-suspirao. 5) MATERIAL Fezes, recipiente, basto de vidro, gua, clice, soluo aquosa saturada de cloreto de sdio, lmina, lamnula, microscpio.

PARASITOLOGIA CLNICA

Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 12: Demonstrao e execuo do mtodo de MIF ou Blagg / Identificao de parasitos intestinaisEXAME PARASITOLGICO DAS FEZES OBJETIVO: Compreender e executar todas as etapas do mtodo de MIF Indicao: diagnstico das protozooses pela pesquisa de trofozotos e cistos, bem com de helmintoses pela pesquisa de ovos e larvas. Fundamento: sedimentao das formas parasitrias existentes nas fezes, conservadas em MIF, aps adio de ter e centrifugao. O ter retira as gorduras. Tcnica: 1- Filtrar em gaze dobrada em quatro a soluo de fezes em MIF e colocar em tubo de centrifugao at 2/3 do tubo; 2- Adicionar 4 ml de ter sulfrico, tampar com rolha de borracha e agitar fortemente durante 30 segundos; 3- Retirar a rolha com cuidado e centrifugar a 1500 rpm durante 1 minuto; formar-seo quatro camadas: ter - detritos - MIF- sedimento; 4- Soltar a camada de detritos com um basto em movimento rotatrio entre a camada e a parede do tubo;

5- Decantar as trs camadas superiores e remover da parede os restos de detritos com basto envolvido em algodo; 6- Suspender o sedimento com 2 gotas de gua, depositar 2 gotas na lmina e mais 1 a 2 gotal de lugol; misturar bem com ajuda da lamnula e examinar com aumento de 100 a 400 vezes. Observaes: a) Marcar os tubos, quando de vrios exames. Preparado o primeiro, prend-lo entre o polegar e o indicador, encostar o segundo (parelha) pela parte externa, apoiando-os em superfcie plana, completando o segundo at o nvel do primeiro (base). b) Na centrfuga os tubos devem ficar em pontos opostos. Ligar a centrfuga em velocidade intermediria e depois aumentar at a velocidade desejada. S ento marcar o tempo. Observar os mesmos cuidados ao desligar. c) Na decantao, pegar o tubo bem prximo de sua borda, encost-la de um vaso e, lentamente, escoar o sobrenadante. No balanar para evitar que o sedimento, sempre vista, se desprenda e caia. Uma vez entornado o tubo, no retroceder. d) Ao desfazer o sedimento, o basto, em movimento de rotao subindo e descendo, deve ir at o fundo do tubo sem bater. O rompimento da pelcula superficial provocar a queda dos cistos. O Lugol imprescindvel pois cora as estruturas, permitindo a identificao. Material: fezes, basto de vidro, MIF, gaze, clice, tubo de centrifugao, centrfuga, ter sulfrico, rolha de borracha, algodo, lpis cera, lmina, lamnula, Lugol, microscpio. Reagentes e Solues: Conservador MIF: 250 ml de gua dest. + 200 ml de soluo de mercurocromo a 2% + 25 ml de formol a 20% + 5 ml de glicerina.

PARASITOLOGIA CLNICA

Profa. Cludia Calheiros

ROTEIRO DE AULA PRTICA N 13: Demonstrao e execuo dos mtodos: Faust e Ritchie / Identificao de parasitos intestinais EXAMEPARASITOLGICO DAS FEZES OBJETIVOS: Compreender e executar todas as etapas dos mtodos de Faust e Ritchie

MTODO DE FAUSTINDICAO: Diagnstico das protozooses pela pesquisa de cistos. Podem ser encontrados ovos e larvas de helmintos, mas ovos de S. mansoni e Ascaris lumbricoides infrtil, que so pesados, excepcional. FUNDAMENTO: Flutuao das formas parasitrias existentes nas fezes em soluo aquosa de sulfato de zinco a 33%.

TCNICA: 1) Colocar 10 ml de gua em um borrel e 2-5gr de fezes. Amolecidas as fezes, juntar mais 50-90ml de gua, filtrar em gaze, dobrada 4X, e encher um tubo de centrifugao at a altura de o,5cm da borda livre. Centrigugar a 2.500 rpm, durante 1 minuto. 2) Decantar o sobrenadante, colocar gua, 1/3 do tubo, e ressuspender o sedimento utilizando-se de basto de vidro fino. Completar com gua at 0,5cm da borda livre. a lavagem do sedimento, repetida at o lquido ficar claro. Voltar a centrifugar. 3) Decantar o sobrenadante e repetir a 2 operao, substituindo a gua pela soluo de sulfato de zinco a 33%. Nova centrifugao. 4) Com ala de platina, em posio vertical, colher material na pelcula superficial, em pontos diferentes, 2-5 vezes, e colocar no centro de uma lmina. Adicionar 1 2 gotas de lugol, misturar, cobrir com lamnula e examinar: 1 Lmina 10 X e 40 X e outra lmina 40 X. OBSERVAES: Marcar os tubos, quando de vrios exames e nivel-los para centrifugao; Ligar a centrfuga em velocidade intermediria e depois a 2.500, s ento marcando o tempo, observando os mesmos cuidados ao desligar; Na decantao, pegar o tubo bem prximo de sua borda, encost-la borda de um vaso e, lentamente, escoar o sobrenadante. No balanar para evitar que o sedimento, sempre vista, se desprenda e caia. Uma vez entornado o tubo no retroceder. Ao desfazer o sedimento, o basto, em movimento de rotao, subindo e descendo, deve ir at o fundo do tubo, sem bater. O rompimento da pelcula superficial provocar queda dos cistos. MATERIAL: Borrel, basto de vidro, gua, gaze, clice(ou funil de vidro), tubo p/ centrifugao, centrfuga, soluo de sulfato de zinco a 33%, lpis marcador, estante, ala de platina, lmina, lamnula, lugol, microscpio. REAGENTES E SOLUES: Soluo de sulfato de zinco a 33%: 33.0g de sulfato de zinco + 100 ml de gua dest. Aps a diluio, filtrar a soluo p/ que se torne lmpida. RESUMO: ETAPAS: Misturar uma parte de fezes p/ 10 de H 2O Coar c/ gaze, utilizando o funil em tubo centrifugar ( 60 seg.; 2500 rpm) Decantar o sobrenadante Misturar H2O ao sedimento Novas centrifugaes, decantaes e lavagens Sobrenadante claro Decantar o sobrenadante e adicionar sulfato de zinco Centrifugar Colher o material em ala de platina, colocando-o em uma gota de lugol sob lmina e lamnula Examinar ao microscpioPARASITOLOGIA CLNICA Profa. Cludia Calheiros

EXAME PARASITOLGICO DAS FEZES

MTODO DE RITCHIE