Microbiologia Clnica

Diagnstico diferencial de cocos Gram positivos: Staphylococcus spp, Streptococcus spp, Enterococcus sppMicrobiologia ClnicaCGP em cachos, anaerbios facultativosPatgenos humanos e de animaisGnero destaque absoluto: StaphylococcusStaphy divide-se em 2 grupos com base na sua capacidade de coagular o plasma (reao de coagulase) Staphy Coag + = S. aureus (principalmente) Staphy Coag - = + de 30 sp(Destaque S. epidermidis e S. saprophyticcus)StaphylococcusMorfologiaClulas esfricas que se dispem em cachos irregulares, cocosisolados, aos pares, em ttrades.Cocos jovens so fortemente Gram ( + ) e com o envelhecimentotornam-se Gram ( - )So imveisNo formam esporosStaphylococcus

CulturaCrescimento rpido em condies aerbicas ou microaerfilas.Em meios slidos, as colnias so redondas, lisas, elevadas ebrilhantes.As colnias de S.aureus so acinzentadas a amarelo dourado intenso.As colnias de S.epidermidis apresentam colorao de cinza a branca.StaphylococcusStaphylococcus

S. aureus

S. epidermidisCaracterstica de crescimentoFermentam carboidratos produzindo cido lctico (no gs!!!)So relativamente resistentes ao ressecamento e ao calor.Apresentam sensibilidade varivel a muitos agentes antimicrobianos(produo de B-lactamases, resistncia meticilina e oxacilina,tolerncia e plasmdios )StaphylococcusComensais comuns da peleOportunistasS. aureus (narinas e pele)S. epidermidis (narinas e pele)S. saprophyticcus (pele)

Cepas multirresistentesS. aureus MRSA (meticilina/oxacilina resistente)S. aureus VISA (sensibilidade reduzida vancomicina)Staphylococcus

Restritos porta de entradaFolculo piloso e vias areasLeses, suturas, catteres

Causador das seguintes infeces: Furunculose, conjuntivites,infeces epiteliais, pneumonias, abscessos profundos, endocardites, mastites, meningites, ITU (infeco trato urinrio), infeces Hospitalares.

Doenas causadas pelas toxinas como sndrome do choque txicoStaphylococcus aureusS. aureus: PatogneseProtenas de superfcie e extracelulares sendo potentes fatores deVirulncia

Produo de laminina e fibronectina que so protenas que promovema sua ligao ao hospedeiro.

Fibronectina tambm atua como componente do cogulo.S. aureus: PatogneseToxinas e enzimasCatalaseConverso do perxido de hidrognio em gua e oxignio.

CoagulaseImpede a cascata normal da coagulao do plasma.Deposio de fibrina na superfcie dos estafilococos.

Hialuronidase enzima que quebra acido hialurnico.Toxinas e enzimasEstafiloquinaseAo semelhante a estreptoquinase, resultando em fibrinlise.ProteinasesLipasesB-lactamasesExotoxinas: Causam necrose na peleS. aureus: PatogneseToxinas e enzimasExotoxinasContm hemolisinas solveis (toxina alfa - protena capaz de lisar eritrcitos e lesar plaquetas; ao sobre musculatura lisa vascular;toxina beta; toxina gama e delta).

LeucocidinaPode destruir leuccitos.So termoestveis.O gene que sintetiza essa substancia pode estar localizado no cromossomo ou ser transportado por plasmdios.S. aureus: PatogneseS. aureus: defesasPolissacardeo capsular (cpsula): funo de dificultar afagocitoseProtena A: protena de superfcie que se liga s molculas de IgGimpedindo a fagocitoseLeucocidina: toxina que age nos PMN causando danos aosleuccitosHemolisinas: causam lise nos eritrcitosStaphylococcus Coagulase negativaS. epidermidis: infeco Prteses, cateteres e o mais frequente mcgoencontrado em hemoculturas.

S. saprophyticcus: ITU em mulheresGeralmente infeces subclnicas e/ou crnicas devido pequenasquantidades de fatores de virulncia e toxinas (mulheres jovens)Streptococcus e EnterococcusCocos Gram positivos com 0,5 - 1 mImveis Crescimento na faixa de 37CCrescem com dificuldade nos meios usuaisS. pneumoniae se dispe como diplococos lanceolados e infectaexclusivamente o homemNo possuem a enzima catalaseMaioria anaerbios facultativos e alguns anaerbios obrigatrios emicroaerfilosStreptococcus e EnterococcusDestaques:Streptococcus pyogenisStreptococcus agalactieaeEnterococcus Cocos gram + em cadeias, imveis, no esporulados

Streptococcus pyogenes

Streptococcus agalactiaeHemlise no Agar SangueAlfa hemlise parcialBeta hemlise totalGama ausncia

Rebecca Lancefield classificou os strep. beta-hemolticos em grupos de Aa G de acordo com antgenos encontrados em casa um deles.

Preferencialmente usa-se sangue de carneiro, pois em sangue humano alguns Strep Grupo D produzem beta-hemlise* e no produzem em sangue de carneiro.

*GRUPO D no so beta-hemoliticos.Streptococcus e Enterococcus

Fatores de virulnciaProtena R e T: marcador epidemiolgicoProtena M: impede a fagocitose, existem mais de 50 tiposCpsula: anti-fagocitria (S. pneumoniae)Estreptolisina O: citolisina lbil ao oxignioEstreptolisina S: citolisina estvel ao oxignio (Ambasleucotxicas)Estreptoquinase: lise da fibrinaFatores de virulnciaExotoxinas pirognicas : A, B e C provocam a erupo cutnea da escarlatina.Difosfopiridina- nucleotidase : Relacionada com a capacidade de destruir leucocitos.Estreptoquinase (fibrinolisina) Transforma o plasminognio em plasmina (enzima que digeri a fibrina )Estreptodornase : Despolimeriza o DNA dando viscosidade aos exsudatos.Hialuronidase : Cliva o cido hialurnicoStreptococcus e EnterococcusStrep B, C e G patgenos e FBN, muito associados a sepse em RN (Pesquisa-se Strep B na vagina da gestante antes do parto)

Strep C, D (Enterococcus), F e G, causam doenas humanas moderadas e severas, mais associadas com infeces disseminadas profundas, endocarditesStreptococcus e EnterococcusStrep Grupo viridans: infeces orais, gastrointestinais, ITU, endocardites, placa dental, (S. mutans e S. sanguis = cariognicos)

Strep A: febre reumtica, erisipela

DIAGNSTICOLABORATORIAL

CatalaseEnzima que os Staphylococcus possuem que degrada o perxido de hidrognio

Colocar uma gota de gua oxigenada (10 volumes) na lmina Pescar uma colnia da bactria e homogeneizar com a guaoxigenada Ocorrendo borbulhamento, a reao positiva. Desprendimento de oxignio e guaCoagulaseEnzima que o S. aureus possui e realiza a coagulao na presenade plasma sanguneo Colocar uma gota de plasma sanguneo na lmina ou tubo Pescar uma colnia da bactria e homogeneizar com o plasmasanguneo Ocorrendo aglutinaes, a reao positiva e confirma S.aureusCoagulase

Novobiocina e OptoquinaDiscos de antibiticos Para Coagulase negativa, realizar a novobiocina Resistente: Staphylococcus saprophyticcus Sensvel: Staphylococcus epidermidis

Para lise parcial, realizar a optoquina Resistente: Streptococcus grupo viridans Sensvel: Streptococcus pneumoniaeNovobiocina e Optoquina

HemliseAlfa: lise parcial das hemcias ao redor da colnia no gar sangueBeta: lise total das hemcias ao redor da colnia no gar sangueGama: ausncia de lise ao redor da colnia no gar sangue

PYR (pyrolidonyl aminopeptidase) O teste da PYR um procedimento qualitativo para determinao da capacidade dos estreptococos beta hemoliticos e Enterococcus parahidrolisarem enzimaticamente a L- pirrolidonil-B-Naftilamida (PYR).

Kit que utiliza a reao de mudana de cor em papel filtro quando napresena de Strep. pyogenis beta hemoltico

Quando ocorre a mudana de cor do papel filtro para rosa trata-se de um Strep. Beta hemolticoPYR

Identificao - EstreptococosTeste da BacitracinaSemear em Agar sangueIncubar a 35CQualquer zona de inibio positivoIdentificao de S. pyogenes (grupo A)

Teste do Sulfametoxazol Trimeptoprina (SXT)Agar sangue + disco STXSe sensvel a essa droga streptococcus no pertencente aosgrupos A,B ou D de LancefieldTeste da bile esculina e do NaCl 5,6%O gar bile-esculina um meio seletivo e diferencial recomendadopara a diferenciao de bacterias do grupo D (enterococos e Streptococcus bovis)

A esculina hidrolisada produzindo esculetina e glicose. A esculetina reage com o citrato frrico da frmula formando um complexo marrom escuro ou negro (+).

NaCl 6,5% somente enterococos so (+) Identificao - EstreptococosHidrolise do HipuratoS. agalactiae (grupo B) so capazes de hidrolizar hipurato em glicina+ acido benzico.

Identificao presuntiva dos estreptococos beta-hemolticos grupo A, B e D. Identificao Estreptococos beta-hemolticosSomente estreptococos dos grupo B (S. agalactiae) e D (Enterococcus sspe Streptococcus bovis) podem no apresentar hemlise, denominadagama hemlise.Identificao Estreptococos gama-hemolticosIdentificao no deve ser feito por mtodos sorolgicos, pois amaioria no possui antgenos de Lancefield.

Teste da optoquinaEm gar sangue semear a bactria teste (35C) e colocar o disco deoptoquina zona de inibio 14mm ou mais S. pneumoniae

Teste da Bile solubilidadeIndica presena de S. pneumoniae Incubar caldo + bactria teste a 35C por 3 horasInocular suspenso de desoxicolato 10%Clareamento reflete lise bacteriana resultado +Identificao Estreptococos alfa-hemolticos