analise fitoquimica preliminar

7/24/2019 Analise fitoquimica preliminar

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Anlise FitoqumicaPreliminar

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO JOO DEL-REICURSO DE FARMCIA

DISCIPLINA: FITOQUMICA

Professora: Luciana Alves R. dos Santos Lima


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Introduo

Anlise Fitoqumica Preliminar

Avaliar a presena de algumas classes de metablitossecundrios em uma planta


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Introduo

Para algumas substncias, em certos vegetais, pode-se realizarreaes de caracterizao diretamente sobre os tecidos do materialvegetal.

A caracterizao de um determinado grupo de substncias presentesem um vegetal s pode ser feita aps sua extrao com um solventeadequado.

A caracterizao dos principais grupos de substncias nos vegetaistem sido conseguida pela realizao de reaes qumicas queresultem no desenvolvimento ou mudana de colorao e/ouprecipitao caractersticos.


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Introduo

Para algumas reaes, o extrato pode ser empregadodiretamente, enquanto para outras, o solvente deve ser

previamente retirado.

As reaes podem ser realizadas em tubos de ensaio ou pordeteco cromatogrfica em placas com reagentesespecficos.


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Introduo

As reaes feitas diretamente com o extrato bruto podemascarar o resultado.

O fracionamento do extrato e o teste com as fraes obtidaspossibilita reaes mais ntidas.

Alguns metablitos podem no ser detectados no extrato, massim nas fraes.


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Introduo

Um dos primeiros roteiros de anlise sistemtica de misturascomplexas, foi proposto em 1850 pelo qumico belga J. S. Stase modificado pelo farmacutico alemo F. J. Otto.

Partio de substnciasentre duas fasesimiscveis, uma aquosa eoutra orgnica

Formao de sais comdiferenas de solubilidade emrelao s bases ou aoscidos que lhes deram origem


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Introduo

O mtodo proposto porStas e Otto adequado

para substncias comoalcaloides, por exemplo

Muitas substncias sosensveis a cidos e bases, o

que impede o uso destemtodo (cumarinas)

Atualmente, com o avano dos mtodos de extrao eisolamento, na maioria das vezes, desnecessrio submeterextratos vegetais a tratamentos qumicos preliminares


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Caracterizao de algumas classes

de compostos por mtodos qumicos

1. Cumarinas:O O O

O

O

O1

2

3

45

6

7

8

3

5

6

8

1

2

4

7

2

3

45

6

7

81

AB

Cumarinas Cromonas Xantonas

Aparecem manchas de cores como azul, amarela e roxa, sobao da luz UV (365 nm), que podem ser realadas apsexposio ao vapor de amnio, ou revelao com KOH a 5% emMeOH

Deteco em cromatografia em camada delgada (CCD)


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1. Cumarinas:O O O

O

O

O1

2

3

45

6

7

8

3

5

6

8

1

2

4

7

2

3

45

6

7

81

AB


Figura 1: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para as amostras vegetais (A, B, C e Dp) e tinturas (D,

E, F e Tp). Pc: cumarina padro. Eluente: Tolueno-DCM-Acetona (45:25:30). Revelador: KOH a 5% emMeOH / UV365nm.


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1. Cumarinas:O O O

O

O

O1

2

3

45

6

7

8

3

5

6

8

1

2

4

7

2

3

45

6

7

81

AB


O O OH

OH

O

O O

HO- H+

amarela

Em solues alcalinas, desenvolvem colorao amarela, devidoao rompimento do anel lactnico, que revertida pela adio de

soluo cida.


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2. Polifenis:

Substncias oxidantes podem ser empregadas para acaracterizao de polifenis, tais como o cloreto frrico (FeCl3),que d a colorao azul ou verde-azulada.

So substncias redutoras e, portanto, oxidam-se com facilidade,resultando em substncias coradas devido ao elevado grau deconjugao.


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a) Flavonoides:

Ensaios cromticos:

Reao de cianidina, Shinoda ouhidrogenao: consiste em adicionar umpequeno pedao de magnsio a soluoalcolica cida da substncia.

Ncleo fundamentaldos flavonoides

O

O

2

3

45

6

7

89

10

1'2'

3'

4'

5'

6'

A

B

C2. Polifenis:


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a) Flavonoides:

Ensaios cromticos:

- Reao citro-bricaou Reativo de Wilson:

acetona

anidridoactico


O

O

2

3

45

6

7

89

10

1'2'

3'

4'

5'

6'

A

B

C2. Polifenis:


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a) Flavonoides:

Ensaios cromticos:

- Reao com H2SO4 concentrado:os compostos flavnicos formamsais de oxnio com cido sulfricoconcentrado.

flavonasflavonis

flavanonas

chalconasauronas


O

O

2

3

45

6

7

89

10

1'2'

3'

4'

5'

6'

A

B

C

2. Polifenis:


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a) Flavonoides:

Ensaios cromticos:

- Reao de Marini-Bettolo:o pentacloreto de antimnioem tetracloreto de carbonoforma precipitados.

chalconas

flavonas


O

O

2

3

45

6

7

89

10

1'2'

3'

4'

5'

6'

A

B

C2. Polifenis:


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a) Flavonoides:

Ensaios cromatogrficos em CCD:


O

O

2

3

45

6

7

89

10

1'2'

3'

4'

5'

6'

A

B

C2. Polifenis:

A presena de flavonoides no extrato vegetal bruto pode sercaracterizada pelo aparecimento de fluorescncias sob a

incidncia de luz UV (254 e 365 nm)

O adsorvente pode ser slica gel, poliamida ou celulose.


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a) Flavonoides:



O

O

2

3

45

6

7

89

10

1'2'

3'

4'

5'

6'

A

B

C

Figura 2: Fluorescncias de

flavonoides no UV aps aplicaodo revelador NP/PEG.

NP / PEG: intensificaas fluorescncias dosflavonoides quandoobservadas no UV a254 nm.

2. Polifenis:


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a) Flavonoides:


Reagente de Folin-Ciocalteau seguido da exposio aos vapores deamnia serve para a deteco de flavonoides, aparecendo manchasazuladas ou acinzentadas.


O

O

2

3

45

6

7

89

10

1'2'

3'

4'

5'

6'

A

B

C2. Polifenis:


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b) Taninos:

OOH

OH

OH

OOG

OG

OG

OG

OG

OH

OH

OH

O

OOH

OH

2

6

2'

6'

A

B

C

R1

R2

R3

R4

2

6

2'

6'

A

B

C

R1

R2

R3

R4

G =

2

6

2'

6'R1

Taninos hidrolisveis Taninos condensados

2. Polifenis:


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b) Taninos:

Vrios mtodos conhecidos e tradicionais so usados para oreconhecimento de taninos.

Teste com soluo degelatina a 1%, contendo 10%de NaCl: fornece precipitadoou mesmo turvao.

Precipitao com alcaloides,podendo ser usado solues decinchonina, cafena ou estricninaa 1-2%.

2. Polifenis:


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b) Taninos:

Ensaios cromticos:

Reao com cloretofrrico (FeCl3):

taninoshidrolisveis

ou glico

taninoscondensadosou catquico

2. Polifenis:


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b) Taninos:

Ensaios cromticos:

Reativo de Stiasny: uma

soluo de taninos mantida sob refluxo com HClconcentrado e formol por 30minutos.

Tanino condensadoou catquico:

precipita

Tanino hidrolisvelou glico: filtrado

2. Polifenis:


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c) Antraquinonas:

O

O

2

3

45

6

7

8 1

9,10-antraquinona

Ensaios cromticos:

Reao de Borntragr: em solues alcalinasos compostos antraquinnicos adquiremintensa colorao violeta a prpura, inclusivecom bases fracas como NH4OH.

Pode-se tambm borrifar uma soluo aquosa alcalina sobre asuperfcie do vegetal, para caracterizar a presena de derivados

hidroxiantracnicos.

2. Polifenis:


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3. Alcaloides:

Como os resultados falso-positivos so bastante comuns paraessas reaes, previamente o material a ser analisado deve sersubmetido a extraes cido-base.

As reaes gerais para alcaloides baseiam-se na formao decomplexos insolveis (precipitados).


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3. Alcaloides:

Os alcaloides podem ser detectados por diversos mtodos:

Observao da extinode luz UV em 254 nm, emplacas de slica gel comindicador de fluorescncia.

Deteco de fluorescncia em 365nm pode ser muito til para diversosalcaloides, como por exemplo, osalcaloides do esporo-de-centeio.


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3. Alcaloides:

As reaes geraisempregam

Reagente deDragendorff :

precipitados laranja-avermelhados

Reagente de Mayer:precipitados brancos

Iodo-platinato depotssio: manchas

violeta a azulacinzentadas


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Figura 3: Reaes com o reagente de Dragendorff em placa e em tubo de ensaio.O aparecimento de manchas em tons laranja em CCD e a presena deprecipitados laranja-avermelhados indicam a presena de alcaloides.

3. Alcaloides:


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- Alcaloides tropnicos:

3. Alcaloides:

Reao desenvolvida por Vitali e Gerard

0,0001 mg de atropina, hiosciamina eescopolamina tratada com HNO3concentrado e ao resduo, adiciona-se soluo de KOH em EtOH.

Desenvolve-se coloraoprpura, passando avermelho escuro e,finalmente incolor.


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- Alcaloides tropnicos:

O

OH

HO

NH

O

ONO2

HO

NH

O2N

O

OH

O

NH

O2N

K+

-

HNO3(95%)

KOH/EtOH

prpura

Reao de Vitali, mecanismo segundoAuterhoff (1981).

3. Alcaloides:


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- Alcaloides indlicos:

3. Alcaloides:

Desenvolve-se colorao laranja a marrom.

Reagente de Ehrlich, que consiste na soluo de cloreto dep-dimetilaminobenzaldedo a 5% em etanol.


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Figura 4: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para alcaloides. Eluente: AcOEt-Ciclohexano-MeOH(70:15:15). Reveladores: UV254nm,, Soluo de iodo-KI (revelador A), Reagente de Ehrlich (revelador B).Pontos: 1. cafena, 2. lidocana, 3. cocana, 4. fenacetina, 5. benzocana, 6. amostra.

3. Alcaloides:


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Figura 5: Perfis cromatogrficos, obtidos por CCD, para alcaloides. Eluente: AcOEt-Ciclohexano-MeOH(70:15:15). Reveladores: UV254nm,, Soluo de iodo-KI (revelador A), Reagente de Ehrlich (revelador B),Iodo-platinato acidificado (revelador C). Pontos: 1. cafena, 2. lidocana, 3. cocana, 4. fenacetina, 5.benzocana, 6. amostra.

3. Alcaloides:


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4.Triterpenos e esteroides:

Para a deteco de esteroides insaturados, tambm pode serempregada a reao de Salkowsky (cido sulfrico concentrado).

Reao de Liebermann-Burchard: anidrido actico e cidosulfrico concentrado.

Colorao verde ou azulpara esteroides.

Colorao vermelha, rosa,prpura ou violeta para terpenos.


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a) Saponinas:

O

OHH

N

H

H

RO

COOR

Saponina esteroidal

Grupo espirosolano

Saponina triterpnica

Tipo b-amirina



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a) Saponinas:

Para detectar a presena de saponinas,emprega-se o teste de formao de

espuma, estvel na presena de cidosminerais diludos.

Agitao



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b) Glicosdeoscardiotnicos:

OH

CH3 OH

CH3

CH3

OH

OH

H

O

O

O

O

O

O O

HO

A B

C D1

4 6

9

11

13

15

17

Resduos de acar

Ncleo esteroidal

Anellactnico

Estrutura glicosdeoscardiotnicos(Digoxina)



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b) Glicosdeos cardiotnicos:

A deteco da presena de glicosdeos cardiotnicos:


Ncleo esteroidal(Liebermann-Burchard)

Lactona insaturadaem C-17

Acares


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Caracterizao de algumas classesde compostos por mtodos qumicos


Figura 6: Lactona a, b-insaturadaaps revelao com reagente deKedde.


Reagente de Kedde (soluo etanlica docido 3,5-dinitrobenzoico e soluoetanlica de KOH a 10%):

Aparecimento demanchas rosadasna placa de CCD.

Deteco da lactonainsaturada.


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Caracterizao de algumas classesde compostos por mtodos qumicos



Reagente de Keller-Killiani (cido acticoglacial, cloreto frrico e cido sulfricoconcentrado):

Forma-se um anel vermelho pardo e asoluo actica colorao azul-esverdeada

Deteco de acares.


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Referncias

SIMES, C. M. O. et al. Farmacognosia: da planta aomedicamento. Rio Grande do Sul: UFRGS, 2004.

ABREU MATOS, F. J. Introduo fitoqumica experimental.Fortaleza: Edies UFC.

WAGNER, H. & BLADT, S. Plant Drug Analysis. Berlin:Springer, 1996.

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