UPC II – Microbiologia

Aula prática 4

Maria José Correia7/10/2013

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Sumário P4:

Observação de bactérias do biofilme oral Preparação de esfregaço Técnicas de coloração:

Colorações diferenciais (Coloração de Gram)

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Técnicas de coloração o Permitem revelar a forma, a dimensão e os componentes das células bacterianas, bem como, os aspetos bioquímicos da sua estrutura.

o Permitem observar células bacterianas em microscopia de campo claro.

o Como o índice de refração do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, é difícil o exame direto de preparações não coradas, a não ser que se utilizem técnicas especiais de iluminação.

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Técnicas de coloração

Preparação do esfregaço

Fixação do esfregaço

Coloração

Observação ao microscópio

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Preparação e fixação do esfregaço

o Preparado sobre uma gota de água abrangendo uma superfície de 1 cm2

o As lâminas usadas devem ser lavadas com uma mistura de álcool-éter (1:1)

o Fixação pelo calor em movimentos circulares.

o Evitar aquecer demasiado a preparação para não destruir as células

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Em caso de incêndio….

Cobertor

Extintor

NÃO APAGAR O FOGO COM ÁGUA

Manter a calma!!… os movimentos rápidos alimentam a combustão

Tapar o frasco e a lamparina

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http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm

Coloração de Gram

Gram + Gram -

• Coloração diferencial

• Distingue bactérias Gram + de bactérias Gram-

• Indispensável na identificação bacteriana

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Bactérias Gram+ e Gram- Composição diferente da parede celular

Gram+: Parede homogénea e espessa, formada

essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem

de lipoproteínas.

Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina,

camada externa complexa, formada por lipoproteínas e

polissacarídeos

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Coloração de Gram

Violeta de cristal1 minuto

Lugol (iodo)

1 minuto

Álcool

30-60 segundos

Safranina

30-60 segundos

dH2O dH2O

Objetivo desta coloração

Usar as colónias isoladas na aula anterior para fazer a coloração de Gram e distinguir se são Streptococcus.

Só depois fazer a repicagem das colónias.

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Trabalho a realizar:

o Observação das placas feitas na aula anterior.

o Registo das características das colónias.

o Isolamento de colónias (biofilme oral):

• Repicagem (riscado em placa).

• Usar uma placa nova e repicar uma colónia da placa anterior.

• Coloração de Gram das cplónias para escolher streptococcus.