upc ii – microbiologia aula prática 4 maria josé correia 19/10/15 2015/2016
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UPC II – MicrobiologiaAula prática 4
Maria José Correia19/10/15
2015/2016
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Sumário P4:
Identificação preliminar dos microrganismos isolados na aula anterior:
Observação das placas obtidas na aula anterior Coloração de Gram de uma das colónias isoladas. Repicagem da colónia escolhida correspondente a um
Streptococcus ou Staphylococcus.
Observação das placas obtidas na aula anterior
Houve crescimento? Houve contaminação? Há colónias isoladas?
Registe o seu aspeto e tamanho relativo,
Proceda à coloração de uma delas.
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Técnicas de coloração o Permitem revelar a forma, a dimensão e os
componentes das células bacterianas, bem como, os aspetos bioquímicos da sua estrutura.
o Permitem observar células bacterianas em microscopia de campo claro.
o Como o índice de refração do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, é difícil o exame direto de preparações não coradas, a não ser que se utilizem técnicas especiais de iluminação.
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Técnicas de coloração Preparação do esfregaço
Fixação do esfregaço
Coloração
Observação ao microscópio
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Preparação e fixação do esfregaçoo Preparado sobre uma gota de água
abrangendo uma superfície de 1 cm2
o As lâminas usadas devem ser limpaso Fixação pelo calor em movimentos circulares.o Evitar aquecer demasiado a preparação para
não destruir as células
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http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm
Coloração de Gram
Gram + Gram -
• Coloração diferencial• Distingue bactérias Gram + de bactérias Gram-• Indispensável na identificação bacteriana
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Bactérias Gram+ e Gram- Composição diferente da parede celular
Gram+: Parede homogénea e espessa, formada essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem de lipoproteínas.
Gram-: Parede fina, camada de peptidoglicano fina, camada externa complexa, formada por lipoproteínas e polissacarídeos
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Coloração de Gram
Violeta de cristal
60 segundos
Lugol (iodo)
1 minuto
Sol. Descolorante
10-15 segundos
Safranina
60 segundos
dH2O dH2O
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