UPC II – MicrobiologiaAula prática 4

Maria José Correia21/10/2014

2014/2015

5/01/2014 UPC II - Microbiologia 2014/2015 2

Sumário P4:

Identificação preliminar dos microrganismos isolados na aula anterior:

Observação das placas obtidas na aula anterior Coloração de Gram de uma das colonias isoladas. Repicagem da colónia escolhida correspondente a um

Streptococcus ou Staphylococcus.

Observação das placas obtidas na aula anterior

Houve crescimento? Houve contaminação? Há colónias isoladas?

Registe o seu aspeto e tamanho relativo,

Proceda à coloração de uma delas.

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Técnicas de coloração o Permitem revelar a forma, a dimensão e os componentes das células bacterianas, bem como, os aspetos bioquímicos da sua estrutura.

o Permitem observar células bacterianas em microscopia de campo claro.

o Como o índice de refração do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, é difícil o exame direto de preparações não coradas, a não ser que se utilizem técnicas especiais de iluminação.

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Técnicas de coloração Preparação do esfregaço

Fixação do esfregaço

Coloração

Observação ao microscópio

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Preparação e fixação do esfregaçoo Preparado sobre uma gota de água

abrangendo uma superfície de 1 cm2

o As lâminas usadas devem ser limpaso Fixação pelo calor em movimentos circulares.o Evitar aquecer demasiado a preparação para

não destruir as células

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http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm

Coloração de Gram

Gram + Gram -

• Coloração diferencial• Distingue bactérias Gram + de bactérias Gram-• Indispensável na identificação bacteriana

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Bactérias Gram+ e Gram- Composição diferente da parede celular

Gram+: Parede homogénea e espessa, formada essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem de lipoproteínas.

Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina, camada externa complexa, formada por lipoproteínas e polissacarídeos

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Coloração de Gram

Violeta de cristal1 minuto

Lugol (iodo)

1 minuto

Álcool

30-60 segundos

Safranina

30-60 segundos

dH2O dH2O

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