Amoxicilina Tri-hidratada

1- Farmacopéia Brasileira

IDENTIFICAÇÃO

O teste de identificação A. pode ser omitido se forem realizados os testes B. e C.

A. O espectro de absorção no infravermelho (5.2.14) da amostra, dispersa em brometo de potássio, apresenta máximos de absorção somente nos mesmos comprimidos de onda e com as mesmas intensidades relativas daqueles observados no espectro de amoxicilina tri-hidratada SQR, preparado de maneira idêntica.

B. O espectro de absorção no ultravioleta (5.2.14), na faixa de 200 a 400 nm, de solução a 0,02% (p/v), em etanol, exibe máximos em 230 nm e em 274 nm, idênticos aos observados em solução similar de amoxicilina tri-hidratada SQR.

C. Proceder conforme descrito em Cromatografia em camada delgada (5.2.17.1), utilizando sílica-gel G 60, como suporte, e mistura de metanol, clorofórmio, água e acetona (9:8:3:1), como fase móvel. Aplicar, separadamente, à placa, 5 µL de cada uma das soluções descritas a seguir, que devem ser usadas em, no máximo, 10 minutos após sua preparação:

Solução (1): solução a 4 mg/mL da amostra em ácido clorídrico 0,1 M.

Solução (2): solução a 4 mg/mL de amoxicilina trihidratada SQR em ácido clorídrico 0,1 M.

Desenvolver o cromatograma. Remover a placa, deixar secar ao ar. Nebulizar com ninidrina SR. Aquecer a placa em estufa a 110 ºC por 15 minutos. A mancha principal obtida com a Solução (1) corresponde em posição, cor e intensidade àquela obtida com a Solução (2).

IDENTIFICAÇÃO

De acordo com a FB podem ser realizados testes de identificação através do espectro de absorção do IV, assim como na USP (Procurar métodos gerais USP), porém na FB apresenta ainda outros testes de identificação através do espectro de absorção no ultravioleta e através de cromatografia em camada delgada descritos na monografia. Na BP apresenta um teste de identificação com espectro de absorção no IV, descrito conforme a seguir.

IDENTIFICATION

First identification A.

Second identification B, C.

 A. Examine by infrared absorption spectrophotometry (2.2.24), comparing with the spectrum obtained with amoxicillin trihydrate CRS.

 B. Examine by thin-layer chromatography (2.2.27), using TLC silanised silica gel plate R.

Test solution Dissolve 25 mg of the substance to be examined in 10 ml of sodium hydrogen carbonate solution R.

Reference solution (a) Dissolve 25 mg of amoxicillin trihydrate CRS in 10 ml of sodium hydrogen carbonate solution R.

Reference solution (b) Dissolve 25 mg of amoxicillin trihydrate CRS and 25 mg of ampicillin trihydrate CRS in 10 ml of sodium hydrogen carbonate solution R.

Apply to the plate 1 µl of each solution. Develop over a path of 15 cm using a mixture of 10 volumes of acetone R and 90 volumes of a 154 g/l solution of ammonium acetate R, the pH of which has been adjusted to 5.0 with glacial acetic acid R. Allow the plate to dry in air and expose it to iodine vapour until the spots appear. Examine in daylight. The principal spot in the chromatogram obtained with the test solution is similar in position, colour and size to the principal spot in the chromatogram obtained with reference solution (a). The test is not valid unless the chromatogram obtained with reference solution (b) shows 2 clearly separated spots.

 C. Place about 2 mg in a test-tube about 150 mm long and 15 mm in diameter. Moisten with 0.05 ml of water R and add 2 ml of sulphuric acid-formaldehyde reagent R. Mix the contents of the tube by swirling; the solution is practically colourless. Place the test-tube in a water-bath for 1 min; a dark yellow colour develops.

ENSAIOS DE PUREZA

Cristalinidade. Suspender algumas partículas da amostra em óleo mineral, transferir para uma lâmina de vidro e examinar por meio de microscópio dotado de luz polarizada. As partículas exibem birrefringência, que se extingue ao movimentar a amostra por meio de ajuste micrométrico.

pH (5.2.19). 3,5 a 6,0. Determinar em solução aquosa a 0,2% (p/v).

Água (5.2.20.1). 11,5% a 14,5%. Determinar em 0,3 g de amostra.

Cinzas sulfatadas (5.2.10). Determinar em 1 g de amostra. No máximo 1%.

PUREZA

pH – Descritos da mesma maneira na FB e USP, já na BP a faixa de pH descrita encontra-se entre 3,5 e 5,5.

Água - Descritos da mesma maneira na FB e USP, já na BP percentual de água é o mesmo porém determinado em 0,100g.

Cinzas Sulfatadas – Descrito na FB e na BP pela mesma técnica.

Dimetilanilina – Descrito na USP e BP. (Olhar métodos gerais USP)

Solução S – Descrito pela BP, com auxílio do ultrassom ou gentle heating, dissolver 0,100g de reagente dióxido de carbono desidratado e diluir para 50,0mL com o mesmo solvente.

Aparência da solução – Descrito pela BP. Dissolver 1,0g em 10mL de ácido hidroclorídrico 0,5M. Dissolver separadamente 1,0g em 10mL de Reagente de amônia diluída. Imediatamente após a dissolução, a solução não fica mais turva que a suspenção de referência II.

Rotação Otica Específica – Descrito pela BP. + 290 to + 315, determinada pela solução S e calculada com a referência da substancia anidra.

Related substances – Descrito pela BP.

Examine by liquid chromatography (2.2.29) adjusting the ratio A:B of the mobile phase and the attenuation as described under Assay. Inject reference solution (d). Inject a freshly prepared test solution (b) and start the elution isocratically with the chosen mobile phase. Immediately after elution of the amoxicillin peak start a linear gradient elution to reach a mobile phase A:B of 0:100 over a period of 25 min. Continue the chromatography with mobile phase B for 15 min, then equilibrate the column for 15 min with the mobile phase chosen originally. Inject mobile phase A and use the same elution gradient to obtain a blank. In the chromatogram obtained with test solution (b), the area of any peak, apart from the principal peak and any peak observed in the blank chromatogram, is not greater than the area of the principal peak in the chromatogram obtained with reference solution (d) (1 per cent).

DOSEAMENTO

Empregar um dos métodos descritos a seguir. A. Proceder conforme descrito em Ensaio microbiológico de antibióticos (5.5.3.3.1) pelo método de difusão em ágar, utilizando cilindros. Micro-organismo: Micrococcus luteus ATCC 9341.

Meios de cultura: meio número 1, para manutenção dos micro-organismos; solução salina estéril, para a padronização do inóculo e meio número 11, para a camada base e camada de inóculo na placa.

Solução amostra: pesar quantidade da amostra equivalente a 100 mg de amoxicilina e transferir para um balão volumétrico de 100 mL. Completar com água e agitar por cerca de 30 minutos. Transferir 1 mL desta solução para balão volumétrico de 100 mL, completar com solução tampão fosfato de potássio, estéril, pH 8,0 (solução 2) e agitar. Diluir, sucessivamente, até as concentrações de 0,05 µg/mL, 0,10 µg/mL e 0,20 µg/mL, utilizando solução tampão fosfato de potássio, estéril, pH 8,0 (solução 2) como diluente.

Solução padrão: pesar quantidade de amoxicilina trihidratada SQR equivalente a 25 mg de amoxicilina e transferir para balão volumétrico de 50 mL. Completar o volume com água. Transferir 1 mL desta solução para balão volumétrico de 100 mL, completar o volume com solução tampão fosfato de potássio, estéril, pH 8,0 (solução 2) e agitar. Diluir, sucessivamente, até as concentrações de 0,05 µg/mL, 0,10 µg/mL e 0,20 µg/mL, utilizando solução tampão fosfato de potássio, estéril, pH 8,0 (solução 2) como diluente. Procedimento: adicionar 21 mL de meio de cultura número 11 em cada placa, esperar solidificar, adicionar 4 mL de inóculo a 0,5% e proceder conforme descrito em Ensaio microbiológico de antibióticos (5.5.3.3.1), adicionando aos cilindros, 0,2 mL das soluções recentemente preparadas. Calcular a potência da amostra, em µg de amoxicilina por miligrama, a partir da potência do padrão e das respostas obtidas com as Soluções padrão e amostra.

B. Por método iodométrico. Dissolver e diluir padrão e amostra de amoxicilina tri-hidratada em água, até aconcentração de, aproximadamente, 1,25 mg/mL. Transferir 2 mL da solução padrão para erlenmeyer com tampa esmerilhada e adicionar 2 mL de hidróxido de sódio M. Agitar e deixar em repouso por 15 minutos. Adicionar 2 mL de ácido clorídrico 1,2 M e 10 mL de iodo 0,01 M SV. Deixar em repouso, por 15 minutos, ao abrigo da luz. Titular com tiossulfato de sódio 0,01 M SV. Próximo ao ponto final,

adicionar tres gotas de amido SI e prosseguir com a titulação até o desaparecimento da cor azul. Proceder ao mesmo ensaio com a solução amostra. Realizar prova em branco, da amostra e do padrão, por meio da titulação de 2 mL de ambas soluções, adicionadas de 10 mL de iodo 0,01 M SV e 0,1 mL de ácido clorídrico M. Próximo ao ponto final, adicionar tres gotas de amido SI e prosseguir com a titulação até o desaparecimento da cor azul. Titular com tiossulfato de sódio 0,01 M SV. Calcular a potência da amostra segundo a fórmula a seguir:

Em que: P = potência da amostra (µg/mg); Vba = volume de titulante gasto na titulação do branco da amostra (mL); Va = volume de titulante gasto na titulação da amostra (mL); Vbp = volume de titulante gasto na titulação do branco do padrão (mL); Vp = volume de titulante gasto na titulação do padrão (mL); Pó = potência do padrão (µg/mg); Pp = peso do padrão (mg); Pa = peso da amostra (mg).

Doseamento USP (Olhar na USP)

Diluente – Dissolver 13,6g de fosfato de potássio monobásico em 2000mL de água, e ajustar para 45% (v/v) de solução de hidróxido de potássio para pH de 5.0 ± 0,1.

Fase Móvel -

Doseamento

A FB utiliza um método microbiológico de potência de antibiótico e outro teste através de titulação empregando iodo. Já a BP e a USP utilizam cromatografia líquida de alta eficiência e dois métodos diferente para obtenção do doseamento.

ASSAY

Examine by liquid chromatography (2.2.29).

Test solution (a) Dissolve 30.0 mg of the substance to be examined in mobile phase A and dilute to 50.0 ml with the same mobile phase.

Test solution (b) Dissolve 30.0 mg of the substance to be examined in mobile phase A and dilute to 20.0 ml with the same mobile phase.

Reference solution (a) Dissolve 30.0 mg of amoxicillin trihydrate CRS in mobile phase A and dilute to 50.0 ml with the same mobile phase.

Reference solution (b) Dissolve 4.0 mg of cefadroxil CRS in mobile phase A and dilute to 50 ml with the same mobile phase. To 5.0 ml of this solution add 5.0 ml of reference solution (a) and dilute to 100 ml with mobile phase A.

Reference solution (c) Dilute 1.0 ml of reference solution (a) to 20.0 ml with mobile phase A. Dilute 1.0 ml of this solution to 50.0 ml with mobile phase A.

Reference solution (d) Dilute 2.0 ml of reference solution (a) to 20.0 ml with mobile phase A. Dilute 5.0 ml of this solution to 20.0 ml with mobile phase A.

The chromatographic procedure may be carried out using:

 

 —a stainless steel column 0.25 m long and 4.6 mm in internal diameter packed with octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 µm),

 —as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min:

Mobile phase A A mixture of 1 volume of acetonitrile R and 99 volumes of buffer solution pH 5.0,

Mobile phase B A mixture of 20 volumes of acetonitrile R and 80 volumes of buffer solution pH 5.0,

Prepare the buffer solution as follows: to 250 ml of 0.2 M potassium dihydrogen phosphate R add dilute sodium hydroxide solution R to pH 5.0 and dilute to 1000.0 ml with water R,

 —as detector a spectrophotometer set at 254 nm,

 —a 50 µl loop injector.

Equilibrate the column with a mobile phase with ratio A:B of 92:8. Inject reference solution (b). The assay is not valid unless the resolution between the 2 principal peaks is at least 2.0. If necessary, adjust the ratio A:B of the mobile phase. The mass distribution ratio for the 1st peak (amoxicillin) is 1.3 to 2.5. Inject reference solution (c). Adjust the system to obtain a peak with a signal-to-noise ratio of at least 3. Inject reference solution (a) 6 times. The test is not valid unless the relative standard deviation for the area of the principal peak is at most 1.0 per cent. Inject alternately test solution (a) and reference solution (a).