Interaes Antgeno-AnticorpoAna Cludia Carvalho Gouveia

Interaes Ag - Ac Ligaes no covalentesReversveis

Caractersticas das interaes Ag-AcAfinidade

Fora de interao entre um nico stio de ligao Ag-Ac (em um nico eptopo).

Caractersticas das interaes Ag-Ac

Avidez

- Fora de interaes total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos eptopos envolvidos

Especificidade

- Capacidade do Ac distinguir seu imungeno de outros Ags.

Caractersticas das interaes Ag-AcReao cruzada

- Dois Ag diferentes apresentam eptopos estruturalmente semelhantes

- Ac especficos para um eptopo se ligam a um eptopo no relacionado, mas com propriedades qumicas similares.

MtodosReagentes no marcados(A ligao do Ac altera o estado fsico do Ag)Reao de aglutinaoReao de precipitao

Reagentes marcadosRIAELISA IF, citometria de fluxoWestern Blotting

Reao de aglutinaoDireta eritrcitos (hemaglutinao), bactrias, fungosPassiva ltex(Ag insolvel)

Inibio da Aglutinao

Quantidades de Ag solvel so adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac.

Precipitado visvelReao de precipitaoA medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado tambm aumenta at um mximo, para depois diminuir.

Precipitao em soluo

Precipitao em gelImunodifuso Radial

Precipitao em gelImunodifuso Dupla

Reagentes marcados Enzimas, fluorocromos, istopos Tipos: RIAELISA IF, citometria de fluxoWestern Blotting

Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com radioistopos para quantificar os ensaios. Vantagens: Alta sensibilidade Permite medidas rpidas e precisas Desvantagens: Custo Vida mdia dos reagentes Risco operacional (radiao)

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)- Baseia-se na quantificao de uma reao enzimtica associada com complexos imunes.

Imunofluorescncia- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a molculas reveladoraschamadas fluorocromos.

Visualizao em microscpio de fluorescncia

Isotiocianato de fluorescena (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA

Imunofluorescncia DiretaAplicaes: Deteco direta de microrganismos (secrees, urina, cortes de tecidos); Identificao de subpopulaes de linfcitos; Fenotipagem de clulas tumoraisEx.: Deteco de Chlamydia trachomatis em secreo uretral

Ex.: Deteco de Ac anti- T. cruziAplicaes: Deteco de anticorpos especficos contra diversos microrganismos; Diagnstico de doenas auto-imunes; Deteco de Ac anti-nuclearImunofluorescncia Indireta

Citometria de fluxo Detecta, separa e quantifica clulas contendo um antgeno particular, marcadas com um fluorocromo; Cada anticorpo marcado com um fluorocromo diferente; As clulas so ento analizadas no citmetro de fluxo.

As clulas saem de uma clula de fluxo e so iluminadas por um raio laser; Citometria de fluxo A quantidade de raios laser que dispersa para fora das clulas durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informao a respeito do tamanho das clulas.

- O laser pode tambm excitar o fluorocromo nas clulas e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.

Aplicaes:

Caracterizao de populaes celulares;

Contagem de microrganismos;

Separao de populaes celulares de acordo com a densidade dos antgenos, tamanho e granulosidade das clulas;

- Anlise de proliferao celular.

Western Blot

Ensaios imunocromatogrficos

Tcnicas de Biologia Molecular

Reao da Polimerase em Cadeia

RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)

Termociclador

Deteco da AmplificaoProduto (PCR ou RT-PCR)Eletroforese em gel de poliacrilamida

Qual a principal diferena entre os mtodos de ELISA e imunofluorescncia?

2. Em uma tipagem sangunea houve aglutinao ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguneo e faa um esquema explicando a reao ocorrida.

Quais as caractersticas do anticorpo que podem influenciar a sua ligao ao antgeno?

Ao realizar os exames pr-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como voc interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reao ocorrida.

Qual imunoensaio voc escolheria para o acompanhar o prognstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.Relatrio

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