Setor 01.03 - Neuroquímica

01.03.001

ESTUDO DA EXPRESSÃO DA PROTEÍNA FOS NO SISTEMA NERVOSO CENTRAL DE ROEDORES, APÓS ADMINISTRAÇÃO DA 6-HIDROXITRIPARGINA. Marcondes Cesar, L. M. **; Elias, C. F.; Palma, M. S.; Bittencourt, J. C.; Anatomia - ICB III, USP; Lab. Neuroanatomia Química, USP.

Objetivo: As ß-carbolinas são compostos alcalóides com propriedades alucinógenas, encontrados em plantas e também presentes em tecidos de mamíferos e fluídos corpóreos. Sabe-se que algumas ß-carbolinas endógenas têm sido consideradas como neuromoduladores em humanos, devido à capacidade de regulação dos níveis das aminas endógenas por meio do controle de sua liberação, recaptação e metabolismo.

Métodos e Resultados: A ß-carbolina usada nesse trabalho (6-hidroxitripargina) foi extraída e isolada da peçonha da aranha Parawixia bistriata, sendo sintetizada pelo protocolo de síntese de tetrahidrocarbolinas (Chem. Pharm. Bull. 30:(3), 909 – 914, 1982). Experimentos de injeção da 6-hidroxitripargina intracerebroventricularmente, na concentração de 1µg/µl, foram realizados em ratos wistars machos adultos (n=18). Essa ß-carbolina induziu a expressão da proteína fos em algumas regiões do sistema nervoso central (SNC), tais como: epêndima dos ventrículos, núcleo septal lateral, córtex sensorial, núcleos paraventricular e dorsomedial do hipotálamo. Para evidenciar a expressão de fos foram realizados procedimentos imunohistoquímicos, utilizando anticorpo primário anti-fos e reação de imunoperoxidase, sendo os cortes posteriormente intensificados com ósmio, para melhor visualização das áreas marcadas.

Conclusões: Estes resultados abrem caminhos para um possível estudo de interação da 6-hidroxitripargina com algumas áreas específicas do SNC de roedores, áreas essas relacionadas aos estados de atenção e alerta dos animais. O estudo da ação desse composto possibilitará compreender melhor uma possível aplicabilidade para esta ß-carbolina.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPESP

01.03.002

A ATIVIDADE DA K+-P-NITROFENILFOSFATASE EM REGIÕES DO SISTEMA NERVOSO CENTRAL (SNC) DE RATOS. Benedito, M. A. C.; Carvalho, J. G. B. de **; Psicobiologia, UNIFESP.

Objetivo: A Na+/K+-ATPase controla a excitabilidade do SNC. Neste trabalho verificou-se a atividade de fosfatase da Na+/K+-ATPase estimulada pelo [K+] em regiões do SNC.

Métodos e Resultados: Ratos machos, Wistar, adultos, foram sacrificados e regiões do SNC dissecadas (córtex cerebral = CC; hipocampo = HIP; córtex temporal + amígdala = CT+AM; Striatum = STR e tronco cerebral = TC). A atividade da K+-PNPPase (nmol de p-nitrofenol/mg proteína/min) foi determinada fotometricamente em homogenatos das regiões cerebrais. Resultados: A análise estatística ANOVA de uma via detectou diferenças entre os grupos (F1,35 = 25,4, p < 0,001). Análise posterior comparando as médias (Bonferroni’s Multiple comparison Test) mostrou que o CC (198,8 ± 4,0, N = 8, média ± EPM) tem a maior atividade enzimática comparada as outras regiões (TC: 152,3 ± 3,6; CT+AM: 135,9 ± 4,9; HIP; 150,6 ± 6,6; STR: 147,0 ± 3,2, p < 0,001 para todas regiões).

Conclusões: Em ratos não submetidos a tratamentos há uma distribuição desigual na atividade da K+-PNPPase.

Apoio Financeiro: AFI Psicofarmacologia

01.03.003

RATOS SUSCEPTÍVEIS A CONVULSÕES CLÔNICAS PRODUZIDAS PELA PICROTOXINA DIFEREM NA ATIVIDADE DA K+-P-NITROFENILFOSFATASE HIPOCAMPAL. Carvalho, J. G. B. de **; Benedito, M. A. C.; Psicobiologia, UNIFESP.

Objetivo: Verificar se ratos susceptíveis a convulsões clônicas induzidas pela picrotoxina, um antagonista não competitivo do GABA no receptor GABAA, difere na atividade da K+-p-nitrofenilfosfatase (K+-PNPPase).

Métodos e Resultados: Ratos machos, Wistar, adultos, receberam uma injeção de picrotoxina (PIC, 2,8mg/Kg, I.P.) que produz 50% de convulsões clônicas. Dois grupos foram formados, convulsivos (CONV) e não convulsivos (NCONV). A atividade da K+-PNPPase foi determinada fotometricamente no hipocampo (HIP) e córtex temporal + amígdala (CT+AM). Resultados: Os dados obtidos mostraram diferenças estatisticamente significativas entre os grupos na atividade da enzima (nmol p-nitrofenol/mg proteína/min) no HIP (CONV: 150,8 ± 2,6; média ± EPM, n = 8; NCONV: 128,70 ± 4,3, N = 8; p = 0,009, bicaudal, teste "t" de Student). Não houve diferença na atividade enzimática no CT+AM (CONV: 217,7 ± 9,9; N = 8; NCONV: 207,3 ± 5,3, N = 7).

Conclusões: Os dados sugerem uma relação entre a atividade da K+-p-PNPPase hipocampal e o receptor GABAA do hipocampo.

Apoio Financeiro: AFI Psicofarmacologia

01.03.004

DIFERENÇA NA ATIVIDADE DA K+-P-NITROFENILFOSFATASE HIPOCAMPAL EM RATOS SUSCEPTÍVEIS A CONVULSÕS CLÔNICAS

INDUZIDAS PELA DMCM (METIL-6,7-DIMETOXI-4-ETIL-β-CARBOLINA-CARBOXILATO). Carvalho, J. G. B. de **; Benedito, M. A. C.; Psicobiologia, UNIFESP.

Objetivo: Verificar se ratos susceptíveis e não susceptíveis a convulsões clônicas induzidas pela DMCM, um agonista inverso benzodiazepínico, diferem na atividade da K+-p-nitrofenilfosfatase (K+-PNPPase) de regiões do Sistema Nervoso Central.

Métodos e Resultados: Ratos machos, adultos, Wistar foram tratados com a dose convulsivante 50 % da DMCM para a convulsão clônica. Dois grupos, convulsivos (CONV) e não convulsivos (NCONV) foram formados. A atividade da K+-PNPPase (nmol p-nitrofenol/mg proteína/min) foi determinada em homogenatos do hipocampo (HIP) e córtex temporal + amígdala (CT+AM). Resultados: A análise estatística dos resultados (teste "t" de Student, bicaudal) mostrou haver diferença estatística (p = 0,01) no HIP, os ratos CONV (133,7 ± 12,8, média ± EPM, N = 6) apresentaram uma menor atividade enzimática comparados aos NCONV (185,1 ± 10,8). Na região cerebral CT+AM não houve diferença (CONV: 140,8 ± 4,5, N = 7; NCONV: 141,9 ± 4,4, N = 8).

Conclusões: Os dados sugerem o envolvimento da K+-PNPPase na susceptíbilidade a convulsões clônicas induzidas pela DMCM.

Apoio Financeiro: AFI Psicofarmacologia

01.03.005

CARACTERIZAÇÃO NEUROQUÍMICA DOS NEURÔNIOS QUE EXPRESSAM O CART NO NÚCLEO ACESSÓRIO DO NERVO OCULOMOTOR. Duarte dos Santos Junior, E. **; Bittencourt, J. C.; Elias, C. F.; Anatomia, USP; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: O núcleo acessório do oculomotor, também conhecido como núcleo de Edinger-Westphal (EW), abriga o primeiro neurônio do sistema parassimpático pré-ganglionar ciliar e sua principal função está associada ao fechamento do diâmetro pupilar através da musculatura intrínseca do olho. Recentemente dois novos neuropeptídeos foram descritos na região do núcleo: o Transcrito Regulado pela Cocaína e Anfetamina (CART) e Urocortina (UCN). No entanto, a exata localização e relação entre os neurônios que expressam esses peptídeos e outros também encontrados na região do oculomotor não são conhecidas. Portanto, o objetivo deste trabalho é caracterizar a neuroquímica dos neurônios que expressam CART no EW através de imunohistoquímica e hibridação in situ.

Métodos e Resultados: Foram usados ratos adultos jovens da espécie Wistar (n=4) e peso entre 280-300 g. Os animais foram perfundidos e em seguida cortados em micrótomo de congelação (30 mm). Através do método de coloração de Nissl foi feito o estudo da citoarquitetura do núcleo. Utilizamos a técnica de dupla marcação com imunofluorescência e hibridação in situ. Para a imunofluorescência foram usados anticorpos anti-colina acetil transferase (anti-ChAT, enzima sintetizadora da acetil colina) e anti-CART feitos em espécies diferentes e secundários marcados com fluoróforos distintos (Cy3 e FITC). Para a hibridação in situ utilizamos sondas marcadas com digoxigenina e 35S para identificação dos RNAm do CART e da UCN, respectivamente. Os dados foram analisados através de microscopia em campo claro, escuro e de fluorescência.

Conclusões: Observamos que as duas populações de células imunorreativas ao CART (CART-ir) e ao ChAT (ChAT-ir) perfazem grupamentos neuronais distintos, enquanto que células CART-ir e UCN-ir se colocalizam nos vários níveis rostro-caudais do EW.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.006

AVALIAÇÃO DE 2-FURANONAS E ISOXAZOLINAS DERIVADOS SOBRE A ATIVIDADE DA ENZIMA ACETILCOLINESTERASE. Corrêa, M. de C. *; Obregon, A. D. C. **; Schintongler, R. M. C.; Morsch, V. M.; Zanatta, N.; Bonacorso, H. G.; Martins, M.; Schneider, J. M.; Barichello, R.; Bioquímica, UFSM; NUQUIMHE, UFSM; Química, UFSM.

Objetivo: Furanonas e Isoxazolinas sintetizadas pelo Núcleo de Química de Heterocíclos (NUQUIMHE), foram testados a fim de avaliar a atividade, in vitro, da enzima Acetilcolinesterase (AChE) de estriado e hipocampo de ratos.

Métodos e Resultados: A atividade da AChE foi obtida por método colorimétrico segundo Ellman (1961). Os compostos 1 e 2 (3-aminometilenodihidrofuran-2-onas) foram diluídos em etanol e o composto 3 (brometo de 5-hidroxi- 5-trifluormetil- 4,5-dihidroisoxazol- 3-metil piridinium) em água, numa faixa de concentração de 10µM a 100mM. Os três compostos mostraram inibição altamente significativa (100mM); no Estriado [comp1 (F(5,12)=21,45; p<0,0001)], [comp2 (F(5,18)=18,27; p<0,0001)] e [comp3 (F(5,6)=39,06; p<0,0001). No hipocampo, [comp1 (F(5,12)=19,84;p<0,0001)], [comp2 (F(5,18)=14,47; p<0,0001)] e [comp 3 (F(5,6)=36,40; p<0,0001)]. Quando utilizado 10mM foi observado uma redução proporcional dos resultados com p<0,005, sendo que as concentrações inferiores não mostraram nenhum efeito sobre a atividade da AChE.

Conclusões: Os resultados demonstraram que esses compostos interagem com a enzima, porém somente produzem inibição em concentrações muitos elevadas.

Apoio Financeiro: CAPES, FAPERGS

01.03.007

EFEITOS DO ALUMINIO SOBRE O AUMENTO DAS SUBSTÂNCIAS REATIVAS AO ÁCIDO TIOBARBITÚRICO (TBARS) E NA ATIVIDADE DA CATALASE EM CAMUNDONGOS ADULTOS. Kaizer, R. R. *; Silva, A. C.; Schetinger, M. R. C.; Morsch, V. M.; Mazzanti, C. M. **; Corrêa, M. de C. *; Oliveira, L.. M.; Química, UFSM.

Objetivo: Este estudo tem como objetivo avaliar os efeitos do Al3+ sobre a produção de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) em diferentes

estruturas cerebrais, rim e fígado, e a atividade da catalase em rim e fígado de camundongos adultos tratados cronicamente.

Métodos e Resultados: Camundongos adultos machos receberam, via oral por gavagem Al3+ (0,1mmol/Al3+) por 5 dias da semana totalizando 60 administrações. Os animais foram separados em grupo controle, grupo citrato, grupo alumínio, grupo citrato/alumínio. Após o término do tratamento, os animais foram sacrificados, as estruturas cerebrais, o fígado e o rim foram separadas para as respectivas dosagens. Os dados obtidos estão demonstrados abaixo.

nmol MDA/h/por mg de proteína

controle Citrato Al3+/H2O Al3+(Citrato)

Córtex 18,6± 3,0 28,0± 3,0

26,4± 2,6* 22,2± 6,8

Hipocampo 24,3± 3,0 31,4± 5,5

46,3± 11,2 ** 48,8± 8,8***

Estriado 43,3± 9,6 53,5± 12 43,8± 1,62 37,8± 3,0*

Fígado 11,3± 2,6 13,9± 2,4

20,4± 2,3*** 18,3± 0,5**

Rim 16,9± 4,3 17,8± 4,2

23,1± 1,7 24,7± 4,1*

P< 0.05 *, p<0.01 **, p<0.001 ANOVA, n=5. A atividade da catalase aumentou 70,6 % (***p<0.001) em fígado no grupo alumínio e 103% (***p<0.0001)no grupo Al3+(Citrato). No rim houve um aumento de 38% (*p<0.05) com Al3+e 69,3% Al3+(Cit)(***p<0.001). Conclusões: Os resultados demonstram que o Al3+ aumenta a produção de TBARS em diferentes estruturas cerebrais, rim e fígado e também altera a atividade da catalase em rim e fígado de ratos. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq 01.03.008 EFEITOS DO ALUMINIO SOBRE A DEGRADAÇÃO DA ACETILCOLINA EM DIFERENTES ESTRUTURAS DO CÉREBRO DE CAMUNDONGOS ADULTOS. Kaizer, R. R. *; Silva, A. C.; Schetinger, M. R. C.; Morsch, V. M.; Mazzanti, C. M. **; Corrêa, M. de C. *; Oliveira, L.. M.; Química, UFSM. Objetivo: O presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos do Al3+ sobre a atividade da enzima acetilcolinesterase (AChE, EC 3.1.1.7) em diferentes estruturas cerebrais de camundongos adultos tratados cronicamente. Métodos e Resultados: Camundongos adultos machos receberam, via oral por gavagem Al3+ (0,1mmol/Al3+) por 5 dias da semana totalizando 60 administrações. Os animais foram separados em grupo controle, grupo citrato, grupo alumínio, grupo citrato/alumínio. Após o término do tratamento, os animais foram sacrificados e as estruturas cerebrais separadas em: córtex, cerebelo,

estriado e hipocampo, para dosagem da atividade da acetilcolinesterase (AChE), utilizando método colorimétrico. Os dados obtidos estão demonstrado abaixo.

AcSCh/h/mg de proteína

H2O Citrato Al3+/H2O Al3+(Cit.)

Córtex 5,9± 0,8 5,8± 0,6 8,5± 0,9*** 6,68± 0,45

Hipocampo 3,2± 0,1 3,1± 0,4 4,4± 0,3 ** 3,70± 0,56

Estriado 17,1± 3,7 17,6± 2, 26,4± 2,5** 21,69± 0,38

Cerebelo 4,0± 1,0 4,7± 1,1 3,2± 0,3 3,40± 0,29

Hipotálamo 4,5± 0,2 4,5± 0,1 5,5± 0,2*** 3.7± 0,56***

P< 0.01 **, p<0.01 ***, ANOVA(Tukey-Kramer Test), n=5 Conclusões: Os resultados demonstram que o Al3+ aumenta a atividade da AChE quando administrado sozinho. No entanto, inibiu a atividade da AChE em hipotálamo quando administrado com citrato. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq 01.03.009 D,L-CIS-2,3-PDC REDUZ A LIGAÇÃO DE [3H]-L-GLUTAMATO SÓDIO-INDEPENDENTE IN VITRO. Sinhorin, V. D. G. **; Roehrs, C. **; Freire Zimmer, M. *; Sauzem, P. D. *; Carpes, M. J. S. **; Rubin, M. A.; Correia, C. R. D.; Mello, C. F. de; Química, UFSM. Objetivo: O glutamato e o aspartato são os principais neurotransmissores excitatórios no sistema nervoso central e podem se ligar em receptores e transportadores em conformações distintas. Visando melhor caracterizar e identificar os receptores glutamatérgicos foram sintetizados vários análogos do glutamato, que apresentam uma estrutura mais rígida, sem modificação de conformação. Assim, estes análogos são utilizados para caracterizar as propriedades de receptor/canal e mostrar a ativação de receptores visando os processos intracelulares. Este estudo investigou se o d,l-cis-2,3-dicarboxilato de pirrolidina (d,l-cis-2,3-PDC), análogo do glutamato, altera a ligação de [3H]-L-glutamato em preparações de membranas plasmáticas de córtex de ratos. Métodos e Resultados: As preparações de membranas de ratos Wistar machos adultos foram realizadas de acordo com Emanuelli et al. (Biochem. Mol. Biol. Int. 44: 1265-1272,1998). A ligação de [3H]-L-glutamato foi determinada de acordo com Rao and Murthy (Biochem. Mol. Biol. Int. 30: 861-866, 1993). O d,l-cis-2,3-PDC (0 - 500 mM) reduziu a ligação de [3H]-L-glutamato sódio-independente nas concentrações 50 mM (54,2±7,6; n=3), 500 mM (20,2±6,6; n=3) quando comparado com o controle (100±0; n=3), [F(5,12)=28.1; p<0,001], ANOVA de medidas repetidas, considerando o fator dose de d,l-cis-2,3-PDC como “ within subject factor” e não teve efeito sobre a ligação de [3H]-L-glutamato sódio-dependente. Conclusões: O d,l-cis-2,3-PDC diminui a ligação de [3H]-L-glutamato sódio-independente, porém não alterou a ligação de [3H]-L-glutamato sódio-

dependente. Isto sugere que este composto não interage com sítios de captação de glutamato sódio-dependente. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, CAPES, UFSM 01.03.010 MECANISMOS GLUTAMATÉRGICOS ENVOLVIDOS NA MODULAÇÃO DA FOSFORILAÇÃO DA GFAP NO SNC. Eickhoff Battú, C. **; Barth, A. C. *; Wofchuk, S. T.; Kommers, T. C.; Bioquímica, Centro Universitário Lasalle; Bioquímica, UFRGS. Objetivo: A modulação da fosforilação da proteína ácida fibrilar glial (GFAP) consiste em um importante mecanismo de regulação do desenvolvimento do SNC. Sabe-se que o glutamato regula o nível de fosforilação da GFAP em diferentes estruturas do SNC durante o período sinaptogênico. Neste trabalho temos como objetivo comparar os efeitos modulatórios do glutamato em hipocampo, cerebelo e bulbo olfatório de animais jovens, tendo como propósito uma melhor caracterização ontogenética do SNC. Métodos e Resultados: Foram utilizados hipocampo, cerebelo e bulbo olfatório de ratos Wistar (p12-16). As estruturas foram fatiadas e incubadas com [32P] fosfato, na presença ou ausência de agonistas glutamatérgicos. Após a incubação as amostras foram analisadas por eletroforese bidimensional e os géis expostos a filmes autorradiográficos os quais foram quantificados pelo programa Optiquant. A analise estatística foi feita pelo Teste t pareado de Student. Nossos resultados mostraram que o glutamato aumenta significativamente o nível de fosforilação da GFAP em fatias de hipocampo de ratos jovens através de um mecanismo envolvendo receptores mGluR3. Em cerebelo e bulbo olfatório, assim como em hipocampo, o glutamato estimula a fosforilação da GFAP, no entanto, nestas estruturas os mecanismos envolvidos não envolvem receptores mGluR. Em cerebelo, nossos resultados mostraram que a modulação glutamatérgica da fosforilação da GFAP envolve receptores iGluR, tipo NMDA. Os resultados preliminares em bulbo olfatório indicam que, assim como em cerebelo, receptores mGluR não estão envolvidos na estimulação glutamatérgica da fosforilação da GFAP. Conclusões: Os resultados obtidos reforçam a idéia de que a GFAP sofre modulação glutamatérgica ao longo do desenvolvimento do SNC e que provavelmente o nível de fosforilação da proteína esteja relacionado com a estruturação do citoesqueleto glial durante o período de intensa proliferação sináptica e glial. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS 01.03.011 SIMULTANEOUS DETERMINATION OF PHOSPHOLIPIDS IN PLATELETS BY HPLC USING AN EVAPORATIVE LIGHT-SCATTERING DETECTOR Talib, L. L.; Barbosa, N. R. **; Gattaz, W. F.; -, HCFMUSP; Psiquiatria, USP. Objetivo: In biological tissues, lipids occur as complex mixtures that include neutral and polar lipids from several subclasses. The availability of an efficient method to quantify phospholipid (PL) class would aid in our understanding of the vital functions that these membrane structural components. In this study, we optimized and validated a high performance liquid chromatography (HPLC) method with evaporative light-scattering detection (ELSD) for the simultaneous

separation and quantification of PLs at concentration levels suitable for routine analysis of these compounds in human platelets. Métodos e Resultados: Phospholipids were extracted from platelets (200mL) using two steps: liquid-liquid (chloroform: methanol, 3:1, v/v) and solid phase (Bond Elut-NH2 - 500 mg) extractions. This HPLC method provided sufficient reproducibility and linearity of calibration curves (0.5 to 15 mg/mL) for the quantification of the phospholipids constituents tested. Within and between-run precision studies demonstred C.V.[ 20% at tested concentrations. A betasil diol column (250 x 4.6 mm) was used at 30ºC and the separation was performed by gradient elution using solvent systems A (chloroform 80 mL, methanol 19.5 mL, 25% ammonia solution 0.5 mL) and B (chloroform 60 mL, methanol 34 mL, 25% ammonia solution 0.5 mL, ultrapure water 5.5 mL). Total run time was 40 min. The following linear gradient was used 0 to 100% B from 0-14 min and returning to 0% B from 23 to 30 min. The flow-rate was of 1 mL/min. The ELSD was set a 50ºC evaporation temperature. Results of absolute retention times (in minutes) of these PLs were: phosphatidylcholine (18), phosphatidylinositol (14), phosphatidylethanolamine (13), lysophosphatidylcholine (22) and they demonstrate the appropriate selectivity of the betasil diol column for PLs determination. Conclusões: This method may be usefully applied to evaluate platelets PLs levels in patients with neuropsychiatric disorders. Apoio Financeiro: FAPESP 01.03.012 MK-801 BLOQUEIA A REDUÇÃO DA LIPOPEROXIDAÇÃO ESPONTÂNEA INDUZIDA POR ESPERMINA EM TECIDO NERVOSO DE RATOS Fonini, G. *; Bellé, N. A. V. **; Rocha, J. B. T. da; Rubin, M. A.; Quimica, UFSM; Química, UFSM. Objetivo: O receptor N-metil-D-aspartato (NMDA) é um complexo com vários sítios de ligação, entre eles, existem sítios de ligação para as poliaminas, substâncias com uma interessante capacidade antioxidante. O MK-801 é um antagonista clássico dos receptores NMDA que, ao ligar-se num dos sítios deste receptor, bloqueia sua ativação. Com isso, o presente trabalho tem como objetivo testar o efeito de duas poliaminas, a espermina (SPM) e a espermidina (SPD), na ausência e presença do MK-801 sobre a lipoperoxidação (LP) espontânea em homogeneizados de cérebro de ratos. Métodos e Resultados: A LP espontânea no homogeneizado de cérebro de ratos Wistar (N = 4 animais por grupo) foi medida pela produção de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As concentrações testadas de SPM foram de 30; 100; 300 e 1000 µM. As concentrações de SPD foram: 100; 300; 1000 e 2000 µM. Na ausência de MK-801 (218,9±17,1; média±desvio padrão), somente a SPM mostrou ser capaz de reduzir significativamente a produção de TBARS, de maneira dose-dependente [SPM (30 – 1000 µM) 197,5±39,7; 174,9±26,9; 159,4±21,3; 134±22,9]. No entanto, a SPD não reduziu a produção de TBARS [SPD (100 – 2000 µM) 209,4±16,4; 189,4± 18,4; 184,4±37,1; 160,6±23,5]. O MK-801 [(1,0 mM) (196,9±25,9)] bloqueou o efeito da SPM, ou seja, esta não foi capaz de diminuir a LP espontânea [SPM (30 – 1000 µM) 181,3±17,9; 184,3±14,3; 197,9±30,5; 177,4±24,9]. Conclusões: A SPM mostrou sua capacidade antioxidante uma vez que ela reduziu a LP espontânea no homogeneizado de cérebro de ratos. Contudo, o MK-

801 reverteu a diminuição da produção de TBARS induzida por esta poliamina, sugerindo que as poliaminas atuem no receptor NMDA. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS 01.03.013 ESPERMINA DIMINUI A LIPOPEROXIDAÇÃO INDUZIDA POR ÁCIDO QUINOLÍNICO, MAS NÃO A INDUZIDA POR NITROPRUSSIATO DE SÓDIO Bellé, N. A. V. **; Dalmolin, G. *; Fonini, G. *; Rubin, M. A.; Rocha, J. B. T. da; Quimica, UFSM; Química, UFSM. Objetivo: A espermina (SPM) é uma poliamina com diversas funções nas células, dentre elas, potencial antioxidante e capacidade de remoção de radicais livres (RL). O ácido quinolínico (QUIN) é conhecidamente um agente produtor de RL, através da super ativação dos receptores N-metil-D-aspartato (NMDA). Já o nitroprussiato de sódio (SNP), um doador de óxido nítrico, pode exercer papel neurotóxico por desencadear processos que levam à lipoperoxidação (LP). Com isso, o objetivo deste trabalho é determinar o potencial neuroprotetor da SPM contra o aumento da LP induzido pelo QUIN e SNP. Métodos e Resultados: Foi realizada a determinação do grau de lesão (LP) espontânea e induzida pelo QUIN (2 mM) e SNP (5 µM) em homogeneizados de cérebro de ratos Wistar (N = 5 animais por grupo) através da dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Foi determinado o efeito de algumas concentrações de SPM: 33; 330; 500; 1000; 1500; 2000 e 2500 µM. Tanto o QUIN quanto o SNP aumentaram a produção de TBARS. A SPM mostrou ser capaz de reduzir significativamente a produção de TBARS tanto na LP espontânea [controle 143,4±13,3; SPM (33 – 2500 µM; média±desvio padrão) 130,5±13; 100,6±13,8; 99,9±23; 88,2±14; 79,4±18,3; 82,6±16,1; 79,5±22,1] quanto na LP induzida por QUIN [controle 320,6±38,5; SPM (33 – 2500 µM) 258,4±50,7; 129±59; 125,4±37,2; 68,6±53,3; 48,3±27,7; 54,6± 33,7; 44,42±23,1]. Já na LP induzida por SNP (331,5±21,4), a SPM não foi capaz de reverter o aumento da produção de TBARS. Conclusões: A SPM mostrou ter um bom potencial antioxidante sobre a LP espontânea e sobre a LP induzida pelo QUIN. Contudo, a SPM não atuou como antioxidante quando a LP foi induzida por SNP. Provavelmente, a SPM exerça suas propriedades antioxidantes por ligar-se aos fosfolipídios da membrana impedindo a LP e podendo, além disto, atuar após a superestimulação dos receptores NMDA pelo QUIN, atuando como removedora dos RL formados. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS 01.03.014 ESPERMIDINA DIMINUI A LIPOPEROXIDAÇÃO INDUZIDA POR ÁCIDO QUINOLÍNICO, MAS NÃO A INDUZIDA POR NITROPRUSSIATO DE SÓDIO Bellé, N. A. V. **; Dalmolin, G. *; Fonini, G. *; Rocha, J. B. T. da; Rubin, M. A.; Quimica, UFSM; Química, UFSM. Objetivo: Existem alguns relatos na literatura descrevendo o potencial antioxidante e protetor das poliaminas. A espermidina (SPD) é uma poliamina que desempenha importantes funções nas células, juntamente com outras poliaminas. Uma vez que a SPD possui características químicas diferentes das outras poliaminas, este trabalho tem por finalidade avaliar o efeito da SPD sobre a

lipoperoxidação (LP) induzida por ácido quinolínico (QUIN) e nitroprussiato de sódio (SNP) em cérebro de ratos. Métodos e Resultados: Foi avaliado o efeito da SPD sobre a LP espontânea e sobre a induzida pelo QUIN (2mM) e pelo SNP (5µM) em homogeneizado de cérebro de ratos Wistar (N = 4 animais por grupo). Para tanto, utilizou-se a metodologia de dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que mede a concentração de malondialdeído (MDA) formada. Foi avaliado o efeito de algumas concentrações de SPD sobre a LP espontânea e induzida por QUIN, sendo elas 30, 100, 330, 1000 e 2000 µM. A SPD não foi capaz de reduzir a produção de MDA sobre a LP espontânea [controle 176,6±43,4; SPD (30 – 2000 µM; média±desvio padrão) 175,6±46,7; 161,7±25,5; 171,4±32,1; 137±20,2; 127,2±18,3]. No entanto, ela reduziu significativamente a concentração de MDA formada na LP induzida pelo QUIN [controle 377±40,3; SPD (30 – 2000 µM) 352,4±53,6; 335,1±41; 284,7±50,2; 209,7±46,5; 157,2±52,5]. Sobre a LP induzida por SNP foram testadas as seguintes concentrações de SPD: 330, 1000, 2000, 10000 e 20000 µM. Nenhuma destas concentrações foi capaz de reverter a produção de MDA aumentada pelo SNP (342,8±22,8). Conclusões: Os resultados mostraram que a SPD teve um efeito protetor sobre o tecido nervoso, ou seja, ela reverteu o aumento na produção de MDA quando este foi induzido pelo QUIN. Neste caso, a SPD mostrou ter um bom potencial antioxidante, de maneira dose-dependente. Contudo, na LP induzida por SNP, a SPD não foi capaz de atuar como antioxidante. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS 01.03.015 O ÁCIDO α-CETOISOCAPRÓICO ATIVA A FOSFORILAÇÃO DE PROTEÍNAS DO CITOESQUELETO VIA PROTEÍNA QUINASE A E PROTEÍNA QUINASE DEPENDENTE DE CÁLCIO E CALMODULINA DO TIPO II EM RATOS DE 21 DIAS. Funchal, C. **; Meyer Rosa, A. *; Almeida, L. M. V. **; de-Lima-Pelaez, P. *; Oliveira Loureiro, S. *; Vivian, L. *; Wajner, M.; Pessoa-Pureur, R.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Neste trabalho nós investigamos a participação da proteína quinase A (PKA) e da proteína quinase dependente de cálcio e calmodulina (PKCaM do tipo II) sobre os efeitos causados pelo ácido α-cetoisocapróico (CIC) na fosforilação nas subunidades de neurofilamentos (NF-M e NF-L), vimentina e proteína glial fibrilar ácida (GFAP) de córtex cerebral de ratos de 21 dias. Métodos e Resultados: Fatias de tecido foram incubadas com 32P ortofosfato na presença ou na ausência de CIC 1 mM, e dos inibidores de quinases (H-89 10 mM para a PKA e KN-93 10 µM para a PKCaM do tipo II). A fração citoesquelética citoesquelética enriquecida em filamentos intermediários foi isolada e posteriormente analisada em SDS-PAGE. O 32P ortofosfato incorporado nas proteínas estudadas foi quantificado e os resultados foram analisados estatisticamente. Os resultados foram expressos como porcentagem de controle ± erro padrão médio. No tratamento das fatias com CIC observamos um aumento na fosforilação das subunidades estudadas NF-M [129,4 ± 2,5 (n=8)], NF-L [124,8 ± 2,5 (n=8)], vimentina [127,8 ± 4,6 (n=8)] e GFAP [125,7 ± 1,50 (n=8)]. Quando essas fatias eram incubadas com CIC e com KN-93 o efeito de aumento da fosforilação não é mais observado NF-M [94,6 ± 4,1 (n=8)], NF-L [95,8 ± 5,4 (n=8)], vimentina [92,3 ± 6,5 (n=8)] e GFAP [92,9 ± 5,4 (n=8)], o mesmo acontece no tratamento das fatias com CIC e com H-89 NF-M [76,4 ± 6,8

(n=8)], NF-L [78,2 ± 6,1 (n=8)], vimentina [79,9 ± 5,0 (n=8)] e GFAP [77,7 ± 6,0 (n=8)]. Conclusões: Nosso resultados sugerem que a alteração de fosforilação destas proteínas possa ser um dos fatores associados com a neurodegeneração e atrofia cerebral característica dos pacientes com Doença do Xarope do Bordo. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PRONEX, PROPESQ 01.03.016 ESTUDO ONTOGENÉTICO DOS EFEITOS DOS ALFA-CETOÁCIDOS DE CADEIA RAMIFICADA QUE SE ACUMULAM NA DOENÇA DO XAROPE DO BORDO SOBRE A CAPTAÇÃO DE GLUTAMATO EM FATIAS DE CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS. Funchal, C. **; Meyer Rosa, A. *; Almeida, L. M. V. **; Vivian, L. *; de-Lima-Pelaez, P. *; Oliveira Loureiro, S. *; Wajner, M.; Wofchuk, S. T.; Pessoa-Pureur, R.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: O presente trabalho tem como objetivo investigar os efeitos dos cetoácidos de cadeia ramificada ácido α -cetoisocapróico (CIC), ácido α -ceto-β -metilvalérico (CMV) e ácido α -cetoisovalérico (CIV) sobre a captação de glutamato em fatias de córtex cerebral de ratos. Métodos e Resultados: Foram utilizados ratos Wistar de 09, 21 e 60 dias. Fatias de tecido foram pré-incubadas com CIC nas concentrações de 1 e 5 mM ou CMV ou CIV 1 mM por 23 minutos e incubadas com 3H-glutamato e os cetoácidos por 7 minutos. As fatias foram lisadas e a radioatividade incorporada medida por cintilação líquida. Os resultados foram expressos como porcentagem de controle ± erro padrão médio. Observamos que a captação de glutamato foi diminuída quando as fatias de tecido dos animais de 9 dias eram tratadas com CIC 1 mM [78,6 ± 5,7 (n=7)] e 5 mM [70,1 ± 6,2 (n=7)] e nenhum efeito foi observado quando essas fatias eram tratadas com CMV 1 e CIV 1 mM. Nos ratos de 21 dias verificamos uma diminuição na captação de glutamato nas fatias tratadas com CIC 1 mM [62,2 ± 3,3 (n=6)], CIC 5 mM [62,7 ± 3,3 (n=6)], CMV 1 mM [79,8 ± 1,0 (n=6)] e CIV 1mM [81,4 ± 1,5 (n=6)]. Nos animais adultos observou-se uma diminuição na captação de glutamato com CIC 5 mM [71,0 ± 4,5 (n=6)], CMV 1 mM [61,4 ± 7,9 (n=6)] e CIV 1 mM [70,06± 7,5 (n=6)]. Não foram observadas alterações na captação de glutamato quando as fatias dos animais adultos foram tratadas com CIC 1 mM. Conclusões: Nossos resultados sugerem que a diminuição da captação de glutamato poderia representar um dos mecanismos pelos quais estes metabólitos atuem, causando neurotoxicidade, um fato relacionado com a neuropatologia da Doença do Xarope do Bordo. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PRONEX, PROPESQ 01.03.017 ANÁLISE NEUROQUÍMICA DOS EFEITOS DA L-HISTIDINA E DA CLORFENIRAMINA SOBRE OS NÍVEIS CEREBRAIS DE MONOAMINAS EM PEIXES DA ESPÉCIE Carassius auratus. Medalha, C. C. **; Santangelo, E. M.; Mattioli, R.; Fisioterapia, UFSCar; Neurociências, UFSCar; Fisioterapia, UNIT. Objetivo: O objetivo deste estudo foi verificar a interação entre os sistemas histaminérgico, dopamimérgico e serotonérgico em peixes da espécie Carassius auratus através da quantificação de monoaminas cerebrais. Os efeitos dose-dependentes da adminstração i.p. de clorfeniramina (CPA) e L-histidina (LH) sobre os níveis de monoaminas nas regiões telencefálica e diencefálica foram

estudados, utilizando-se um método de Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC), acoplado a um sistema de detecção eletroquímica. Métodos e Resultados: Cinqüenta e oito peixes adultos da espécie Carassius auratus, de sexo indeterminado, foram utilizados. Após 20 min. da administração de 4,0 (n=10), 8,0 (n=9) mg/kg de CPA, 50 (n=10), 100 (n=10) mg/kg de LH ou salina fisiológica (n=10) os animais foram sacrificados por decapitação, e o telencéfalo e diencéfalo foram dissecados. Um grupo não- injetado (n=9) também foi utilizado para controle do procedimento de injeção. O material foi então analisado por HPLC. Níveis mais altos de 5-HIAA (64,99±6,79) e da relação 5-HIAA/5HT (0,137±0,03) foram obtidos no diencéfalo após administração de salina, comparados ao grupo não- injetado (38,48±4,09; 0,067±0,00; Teste-t, P=0,0033; P=0,0061). Valores menores de HVA foram observados no telencéfalo (370,73±82,64; ANOVA, P=0,0127) e diencéfalo (119,89±28,56; Teste-t, P=0,0036) após tratamento com 100 mg/kg de LH, comparados ao grupo salina (879.49±130.17 e 503.29±89.5). No diencéfalo, animais tratados com 4,0 (47,39±5,43) e 8,0 (42,29±6,38) mg/kg de CPA tiveram valores mais baixos de 5-HIAA que o grupo salina (64,99±6,79; ANOVA, P=0,0116). Conclusões: Sugere-se que a L-histidina apresentou efeito inibitório sobre a atividade dopaminérgica e os resultados obtidos nos grupos tratados com CPA indicam um possível efeito ansiolítico desta droga nesta espécie. Apoio Financeiro: FAPESP 01.03.018 DEFICIÊNCIA SUB-CLINICA DE TIAMINA E CONSUMO CRÔNICO DE ETANOL INDUZEM ALTERAÇÕES NA MEMÓRIA ESPACIAL E NA ATIVIDADE DA ACETILCOLINESTERASE DO HIPOCAMPO Oliveira Silva, I. **; Ribeiro, A. M.; Pittella, J. E. H.; Ávila Fernandes, P.; Menezes Campos, N. *; Rejane Castanheira Pereira, S.; Anatomia Patologica e Medicina Legal, UFMG; Bioquímica - ICB, UFMG; Bioquímica e Imunologia, UFMG; Faculdade de Farmácia, UFMG; PSICOLOGIA EXPERIMENTAL, UFMG. Objetivo: Em animais submetidos ao tratamento crônico com etanol associado ou não à deficiência moderada de tiamina (DT), avaliar: (I) aspectos da memória espacial; (II) a atividade da acetilcolinesterase (AChE) no córtex cerebral e hipocampo; (III) a densidade, área e diâmetro nuclear dos neurônios das subregiões do hipocampo e, IV) a correlação entre os parâmetros determinados. Métodos e Resultados: Ratos Wistar adultos foram divididos em dois grupos: C (controle) e E (etanol). Após 6 meses, cada um dos grupos foi redividido em dois: CP e EP tratados com ração padrão e CD e ED tratados com ração deficiente em tiamina. Após o episódio de deficiência aspectos da memória espacial foram avaliados e em seguida, os animais foram sacrificados. Não foram encontradas alterações significativas em nenhum dos parâmetros morfológicos estudados. Observamos diminuição significativa (p<0.05) da atividade da AChE solúvel do córtex cerebral de animais dos grupos CD e ED quando comparados ao grupo EP. A atividade total da AChE do hipocampo dos animais do grupo CD foi diferente dos demais grupos (p<0.05). No teste de memória espacial, os animais do grupo CD apresentaram desempenho inferior ao do grupo CP. Esses dados apresentaram correlação significativa com a atividade da AChE hipocampal. Os animais ED aumentaram (p<0,05) o consumo de etanol após o episódio de DT. Conclusões: A ausência de alterações morfológicas indica que o modelo experimental utilizado se refere a um estágio inicial do processo patológico, sendo que o déficit comportamental observado é devido, pelo menos em parte, à disfunção no processo de neurotransmissão que envolve a AChE do hipocampo.

Os dados também sugerem que a associação da ingestão crônica de etanol na fase inicial de DT minimiza o efeito provocado pela DT isolada. Apoio Financeiro: FAPEMIG, CNPq 01.03.019 ESTUDO ONTOGENÉTICO DOS EFEITOS DO ÁCIDO ALFA-CETO-BETA-METILVALÉRICO SOBRE A FOSFORILAÇÃO DE FILAMENTOS INTERMEDIÁRIOS DE CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS. Funchal, C. **; Almeida, L. M. V. **; Dall Bello Pessutto, F. *; Oliveira Loureiro, S. *; de-Lima-Pelaez, P. *; Vivian, L. *; Meyer Rosa, A. *; Wajner, M.; Pessoa-Pureur, R.; Biochemistry, UFRGS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: A Doença do Xarope do Bordo (DXB) é um distúrbio do metabolismo dos aminoácidos de cadeia ramificada (AACR) causado pela deficiência na atividade do complexo desidrogenase dos cetoácidos de cadeia ramificada. Caracteriza-se bioquimicamente pelo acúmulo dos AACR, leucina, isoleucina, valina e dos seus α -cetoácidos, ácido α -cetoisocapróico (CIC), α -ceto-β -metilvalérico (CMV) e α -cetoisovalérico (CIV). Neste trabalho nós investigamos os efeitos do CMV na incorporação in vitro de 32P ortofosfato nas subunidades de neurofilamentos (NF-M e NF-L), vimentina e proteína glial fibrilar ácida (GFAP) de córtex cerebral de ratos durante o desenvolvimento. Métodos e Resultados: Foram utilizados ratos Wistar de 09, 12, 17 e 21 dias de idade. Fatias de tecido foram incubadas com 32P ortofosfato na presença ou na ausência de CMV 1 mM. A fração citoesquelética enriquecida em filamentos intermediários foi isolada em tampão de alta força iônica contendo 1% de Triton X-100 e posteriormente analisada em SDS-PAGE 10%. O 32P ortofosfato incorporado nas proteínas estudadas foi quantificado e os resultados foram analisados estatisticamente. Os resultados foram expressos como porcentagem de controle ± erro padrão médio. No tratamento das fatias com CMV observamos um aumento na fosforilação das subunidades estudadas, NF-M [120,16 ± 2,41 (n=8)], NF-L [120,15 ± 1,01 (n=8)], vimentina [122,35 ± 2,99 (n=8)] e GFAP [122,75 ± 2,63 (n=8)] somente nos animais de 12 dias. Conclusões: Os mecanismos de dano cerebral em pacientes com DXB ainda são desconhecidos, contudo, nossos resultados fornecem suporte para o envolvimento da fosforilação de filamentos intermediários nessa doença neurodegenerativa. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PRONEX, PROPESQ 01.03.020 EFEITO DO EBSELEN SOBRE A FOSFORILAÇÃO DE FILAMENTOS INTERMEDIÁRIOS DE CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS. Moretto, M. B.; Funchal, C. **; Zeni, G.; Pessoa-Pureur, R.; Rocha, J. B. T. da; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Análises Clínicas e Toxicológicas, UFSM; Bioquímica, UFSM; Química, UFSM. Objetivo: O citoesqueleto neural é constituído por uma rede protéica formada por filamentos intermediários (FI), microtúbulos e microfilamentos, interagindo entre si e com uma variedade de proteínas acessórias. O ebselen é um derivado organocalcogênio que apresenta propriedades antioxidantes, antinflamatórias e neuroprotetoras. Neste trabalho investigamos os efeitos do ebselen na incorporação in vitro de 32P ortofosfato nas subunidades de neurofilamentos (NF-M e NF-L), vimentina e proteína glial fibrilar ácida (GFAP) de córtex cerebral de ratos. Métodos e Resultados: Foram utilizados ratos Wistar de 17 dias de idade. Fatias de tecido foram incubadas com 32P ortofosfato na presença de ebselen na concentrações de 5, 15, 30, 50 e 100 µ M. A fração citoesquelética enriquecida em filamentos intermediários foi isolada e a

radioatividade incorporada nas subunidades de FI foi medida. Os resultados foram expressos como porcentagem de controle ± erro padrão médio. O tratamento das fatias com ebselen 5, 50 e 100 µ M não alterou a fosforilação das proteínas do citoesqueleto, entretanto foi observado um aumento da fosforilação destas proteínas quando incubadas com ebselen 15 µ M, NF-M [120,28 ± 2,19 (n=8)], NF-L [120,40 ± 4,40 (n=8)], vimentina [122,24 ± 3,68 (n=8)] e GFAP [122,99 ± 3,83 (n=8)] e 30 µ M, NF-M [120,93 ± 2,51 (n=8)], NF-L [125,51 ± 6,20 (n=8)], vimentina [125,00 ± 4,10 (n=8)] e GFAP [125,18 ± 4,12 (n=8)]. Conclusões: Como a fosforilação regula a polimerização e a interação dos FI com outros elementos do citoesqueleto, estes resultados sugerem que o ebselen altera a dinâmica destas proteínas, podendo estar relacionado com os mecanismos de ação deste composto. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, PRONEX, PROPESQ 01.03.021 PRETREATMENT WITH VITAMINS E AND C PREVENT NA+, K+- ATPASE REDUCTION CAUSED BY PROLINE. Franzon, R. *; Lamers, M. L. *; Wyse, A. T. S.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Tissue accumulation of proline (Pro) occurs in hyperprolinemia type II, an inborn error of metabolism. Epilepsy and mental retardation are clinical features of this disease. Na+, K+- ATPase is decreased in human and experimantal model of epilepsy. Considering that the mechanisms by which this occurs are poorly understood and that Pro induces free radical formation, the aim of this study was to investigate the effect of acute administration of Pro and the influence of pretreatment of vitamins E and C on the effects elicited by Pro administration on Na+, K+- ATPase activity in rat hippocampus. Métodos e Resultados: Six-day-old rats were pretreated for 1 week with daily i.p. administration of vitamins E (40 mg/kg) and C (100 mg/kg) or saline (control). Twelve hours after the last injection the rats received one s.c. injection of Pro (12.8 µmol/g body weight) or saline (control) and were killed 1 h later. Synaptic membrane were used for the determination of Na+,K+-ATPase activity. Our results showed that chronic treatment with vitamins E and C prevented the inhibitory effects of Pro on Na+, K+- ATPase activity (control: 1260±95.65; Pro: 879.6±104.55; Vit E+C: 1223.6±106.82; Pro + Vit E+C: 1335.4±150.85, n=5). Data are expressed as mean ± SD. Conclusões: Present data indicate that Pro administration reduces Na+,K+-ATPase, an effect probably mediated by oxidative stress since treatment with vitamins E and C prevented it. Assuming the possibility that this might occur in the human condition, our findings might support a novel therapeutic strategy to slow the progression of neurodegeneration in hyperprolinemia. Apoio Financeiro: CNPq, PRONEX, PRÓ-REITORIA DE PESQUISA, FAPERGS 01.03.022 INGESTÃO MATERNA DE CAFEÍNA DIMINUI A HIDRÓLISE DE NUCLEOTÍDEOS EM FATIAS HIPOCAMPAIS DE RATOS RECÉM NASCIDOS. Da Silva, R. S. **; Nejar Bruno, A. **; Battastini, A. M. O.; Sarkis, J. J. F.; Rizzato Lara, D.; Bonan, C. D.; Ciências Fisiológicas, PUC-RS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: O mecanismo bioquímico que baseia a ação da cafeína é o bloqueio dos receptores adenosinérgicos. Estes receptores são ativados fisiológicamente principalmente pela adenosina proveniente do catabolismo de nucleotídeos da adenina realizado pela via das ecto-nucleotidases. Esta via é constituída por uma

ecto-ATPase, uma ATP difosfohidrolase e uma 5´-nucleotidase. Estudos recentes têm considerado a importância dos receptores adenosinérgico no desenvolvimento do sistema nervoso. Entretanto, não existem estudos sobre os efeitos da cafeína na hidrólise de nucleotideos em ratos recém nascidos. Portanto, o objetivo do presente estudo foi verificar o efeito da ingestão materna na hidrólise de nucleotídeos em ratos recém nascidos. Métodos e Resultados: Ratas prenhas receberam cafeina (1g/L) em sua água de beber durante a gestação e lactação. Ratos controle receberam água normal. No 14 ou 23 dia pós-natal, os recém nascidos foram sacrificados e fatias do hipocampo feitas. Foram feitos ensaios enzimáticos a fim de avaliar a hidrólise de nucleotídeos nesta estrutura através do método de determinação de fosfato inorgânico lriberado. Foi detectado um forte decréscimo das atividades de hidrólise de ATP (82%), ADP (75%) e AMP (62%) das fatias de hipocampo dos ratos de 14 dias. Os ratos tratados analisados aos 23 dias não apresentaram diferença significativa na hidrólise de nucleotídeos quando comparado ao controle. Conclusões: Portanto, os resultados sugerem que a ingestão materna de cafeína diminui a hidrólise de nucleotídeos aos 14 pós-natal, um efeito que foi reparado aos 23 dias de desenvolvimento pós-natal. Este efeito poderia promover um decréscimo nos níveis de adenosina e, conseqüentemente prejudicar a ativação dos receptores de adenosina e o desenvolvimento neural. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PRONEX 01.03.023 EFEITO IN VIVO DO ÁCIDO OCTANÓICO SOBRE A ATIVIDADE DA NA+,K+-ATPASE EM MEMBRANA PLASMÁTICA CEREBRAL DE RATOS JOVENS. Maria, R. de C. *; Reis de Assis, D. **; Wyse, A. T. S.; Wajner, M.; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Ciências Biológicas - Bioquímica, UFRGS. Objetivo: A deficiência da desidrogenase de acilas de cadeia média (MCAD) é um erro inato do metabolismo de freqüência alta (1:10000), caracterizado bioquimicamente pelo acúmulo de ácidos graxos de cadeia média nos tecidos dos pacientes e predominantemente do ácido octanóico (AO). O quadro clínico dos pacientes caracteriza-se por sintomas neurológicos (convulsões, hipotonia e coma). O presente trabalho avaliou os efeitos "in vivo" da injeção aguda do ácido octanóico sobre a atividade da Na+,K+-ATPase de córtex e ponte cerebral de ratos jovens. Métodos e Resultados: Ratos Wistar de 30 dias de idade foram injetados intraperitonealmente com 15 µ mol/g de AO ou solução salina e sacrificados 5 minutos após. O córtex e a ponte cerebral foram separados e as membranas plasmáticas sinápticas destas estruturas foram preparadas para a realização das dosagens da atividade de Na+,K+-ATPase. Os animais injetados com AO desenvolveram hipotonia, acompanhada por hiperventilação e coma (após ≅ 2 min. da injeção), bem como tiveram diminuída a atividade da Na+,K+-ATPase na ponte cerebral [média controles=1615,4 nmol Pi / min. mg proteína σ =269,43 / média testes=948,2 nmol Pi / min. mg proteína σ =359,18; t(1,8)=3,323; p<0,02]. A atividade da enzima no córtex cerebral foi normal. Conclusões: A inibição causada pelo AO na atividade dessa importante enzima responsável pela manutenção dos principais gradientes iônicos no cérebro pode estar envolvida, ao menos em parte, com a fisiopatologia envolvida na deficiência de MCAD. Apoio Financeiro: FAPERGS, PRONEX, PROPESQ, CNPq

01.03.024 VITAMINA E PROTEGE CONTRA AS CONVULSÕES E O DANO OXIDATIVO INDUZIDOS PELO ÁCIDO METILMALÔNICO (MMA) NO ESTRIADO DE RATOS. Ribeiro, M. C. P. **; Schneider Matiauda, C. Y. **; Silva de Ávila, D. *; Stahl Hermes, F. *; Oliveira Silveira, S.; Ferreira da Silveira, A.; Mello, C. F. de; Histologia, UFSM; Química, UFSM. Objetivo: Acidemia metilmalônica é um erro inato do metabolismo caracterizada por acúmulo tecidual de ácido metilmalônico (MMA), convulsões e comprometimento neurológico. A produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e a lipoperoxidação podem estar envolvidas na gênese das convulsões presentes nesta patologia. A vitamina E é um antioxidante limitante da cadeia de ROS, assumindo, assim, um papel neuroprotetor das células do tecido nervoso. No presente estudo investigamos se o tratamento com vitamina E (α-tocoferol) protege os animais das alterações comportamentais e dos efeitos oxidativos da injeção intraestriatal de MMA. Métodos e Resultados: Ratos Wistar foram divididos em 4 grupos e tratados, por 7 dias, com NaCl (0,9%) ou vitamina E (25, 75, 225 mg/Kg, i.p.). No 4° dia, os animais foram canulados, unilateralmente, nas coordenadas do núcleo estriado. No último dia de tratamento, os animais foram injetados com NaCl (0,9 %) ou vitamina E e, 30 min depois receberam uma injeção intraestriatal de 2,0 µL de MMA (3 µmol) ou NaCl (3 µmol) e observados em campo aberto para o aparecimento de convulsões. Após, os animais foram decapitados e foram retirados o estriado do hemisfério direito (injetado) e hemisfério esquerdo (controle) para dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) que foi medido colorimetricamente (Ohkawa et al., 1979). A análise estatística revelou que o tratamento com vitamina E diminuiu o número [F(3;49)=3,9540; p=0,013] e a duração das convulsões [F(3;49)=5,4331; p=0,003]), assim como diminuiu a produção de TBARS induzida pelo MMA, segundo análise do hem. injetado[F(3;52)=9,6829; p<0,001]. Não houve efeito do tratamento, nem da injeção de MMA sobre o hemisfério não injetado. Conclusões: Os resultados sugerem que o tratamento com vitamina E atenua o efeito convulsivante e reduz a lipoperoxidação induzidos pelo MMA. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, UFSM 01.03.025 INGESTÃO MATERNA DE CAFEÍNA ATENUA A HIPERLOCOMOÇÃO INDUZIDA POR MK-801 EM RATOS JOVENS Hoffmann, A. *; Da Silva, R. S. **; Rizzato Lara, D.; Bonan, C. D.; Ciências Fisiológicas, PUC-RS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Bioquímica - ICBS, Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Objetivo: A Cafeína, através do bloqueio dos receptores de adenosina, pode provocar mudanças no comportamento, como hiperlocomoção e ansiedade. O efeito da adenosina na atividade locomotora é exercido em associação com a modulação dos receptores dopaminérgicos e glutamatérgicos. Agonistas dos receptores de glutamato liberam adenosina, produzindo depressão motora, e antagonistas dos receptores de glutamato, como o MK801, previne esse efeito. Considerando o importante papel exercido pela adenosina no desenvolvimento

neural, nosso objetivo foi investigar os efeitos comportamentais da exposição de ratos à cafeína durante a gestação e lactação. Métodos e Resultados: Ratas grávidas receberam cafeína (1g/L) na água ou apenas água (controle) durante a gestação e lactação. Os filhotes (21 dias) foram randomicamente colocados em caixas individuais e a atividade motora foi registrada por um sistema vídeo-computadorizado. Os filhotes foram observados por 130 minutos, com os dados divididos em blocos de 10 minutos. Depois do período de habituação (primeiros 60 minutos), MK801 (0,2 mg/kg, i.p.) ou salina (i.p.) foram administrados. MK801 causou aumento significativo da locomoção nos ratos controle depois de 20 minutos de sua administração (P &lt; 0,05). Contudo, os ratos tratados com cafeína tiveram o efeito hiperlocomotor induzido por MK801 atenuado. Conclusões: Uma vez que a adenosina tem importante influência no desenvolvimento neural e o efeito locomotor do MK801 envolve tanto transmissões glutamatérgicas quanto dopaminérgicas, nós podemos sugerir que a atenuação da hiperlocomoção induzida pelo MK-801 foi devido a: 1) o antagonismo dos receptores de adenosina pela cafeína durante os períodos embrionário e pós-natal poderia impedir a suscetibilidade do receptor NMDA ao MK801 e 2) a remoção do tônus inibitório exercido pela adenosina poderia alterar o efeito locomotor induzido pelo bloqueio dos receptores NMDA. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PRONEX 01.03.026 EFEITO DA VITAMINA E SOBRE AS CONVULSÕES E SOBRE O DANO OXIDATIVO INDUZIDOS PELO PENTILENOTETRAZOL (PTZ) NO ESTRIADO DE RATOS. Ribeiro, M. C. P. **; Schneider Matiauda, C. Y. **; Silva de Ávila, D. *; Stahl Hermes, F. *; Silveira, S.; Silveira, A.; Mello, C. F. de; Morfologia, UFSM; Química, UFSM. Objetivo: O Pentilenotetrazol (PTZ) é um antagonista de receptores de δ-aminobutírico do tipo A (GABAA), o qual está associado a alterações comportamentais, neurofisiológicas e neuroquímicas. A produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e a lipoperoxidação podem estar envolvidas na gênese das convulsões induzidas pelo PTZ. A vitamina E é um antioxidante limitante da cadeia de ROS, assumindo, assim, um papel neuroprotetor das células do tecido nervoso. No presente estudo investigamos se o tratamento com vitamina E (α-tocoferol) protege os animais das alterações comportamentais e dos efeitos oxidativos da injeção intraestriatal de PTZ. Métodos e Resultados: Ratos Wistar foram divididos em 4 grupos e tratados, por 7 dias, com NaCl 0,9% ou vitamina E (25, 75, 225 mg/Kg, i.p.). No 4° dia, os animais foram canulados, unilateralmente, nas coordenadas do núcleo estriado. No último dia de tratamento, os animais foram injetados com NaCl (0,9%) ou vitamina E e, 30 min depois receberam uma injeção intraestriatal de 2,0 µL de PTZ (1,63 µmol) ou NaCl (1,63 µmol) e observados em campo aberto para o aparecimento de convulsões. Após, os animais foram decaptados e foram retirados o estriado do hemisfério direito (injetado) e hemisfério esquerdo (controle) para dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) que foi medido colorimetricamente (Ohkawa et al., 1979). A análise estatística revelou que o tratamento com vitamina E diminuiu o número [F(3;57)=5,552; p=0,002] e a duração das convulsões [F(3;57)=3,634; p=0,018]), assim como diminuiu a produção de TBARS induzida pelo PTZ, segundo análise do hem.

injetado[F(3;43)=8,631; p<0,001]. Não houve efeito do tratamento, nem da injeção de MMA sobre o hem. controle. Conclusões: Os resultados sugerem que o tratamento com vitamina E atenua o efeito convulsivante e reduz o aumento da lipoperoxidação induzidos pelo PTZ. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, UFSM 01.03.027 EFEITO IN VITRO DOS ALFA-CETOÁCIDOS DE CADEIA RAMIFICADA SOBRE AS DEFESAS ANTIOXIDANTES NÃO-ENZIMÁTICAS EM CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS. Bridi, R. **; Araldi, J. *; Durigon, K. *; Wannmacher, C. M. D.; Dutra Filho, C. S.; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Ciências Biológicas - Bioquímica, UFRGS. Objetivo: A doença do xarope do bordo (MSUD, Maple Syrup Urine Disease) é um erro inato do metabolismo causado pela deficiência na atividade do complexo da desidrogenase dos cetoácidos de cadeia ramificada. A inabilidade deste complexo em oxidar L-2-cetoisocapróico (KIC), L-2-ceto-3-metilvalérico (KMV) e L-2-cetoisovalérico (KIV) leva ao acúmulo destes metabólitos, bem como de seus aminoácidos precursores, nos tecidos e fluidos biológicos dos afetados. Distúrbios neurológicos e convulsões são os sintomas mais proeminentes na MSUD, porém os mecanismos básicos de sua neurotoxicidade ainda não estão completamente esclarecidos. Neste estudo, foi investigado o efeito destes α -cetoácidos sobre as defesas antioxidantes não-enzimáticas em córtex cerebral de ratos. Métodos e Resultados: Utilizou-se como parâmetros a medida do potencial antioxidante total (TRAP) e a reatividade antioxidante total (TAR). O homogeneizado de córtex cerebral de ratos Wistar com 30 dias de idade foi incubado com KIC, KMV e KIV a 37° C durante 1 hora nas concentrações de 1,0; 2,5 e 5,0mM. Verificou-se uma diminuição significativa do TRAP nas concentrações de 5mM de KIC [F(3,16)=3,33 p<0,05; n=5; 21,55%], KMV [F(3,16)=3,19 p<0,05; n=5; 13,42%] e KIV [F(3,16)=3,96 p<0,05; n=5; 16,64%] e uma diminuição significativa do TAR na concentração de 5mM de KMV [F(3,20)=3,44 p<0,05 n=6; 31,30%] e em todas as concentrações de KIV testadas [F(3,16)=8,55 p<0,001 n=5; 22,54% - 38,76%]. Conclusões: A diminuição das defesas antioxidantes não-enzimáticas provocada pelos α -cetoácidos indica uma capacidade deficiente do tecido para regular os danos associados com o aumento de espécies reativas de oxigênio, sugerindo que o estresse oxidativo pode estar envolvido na fisiopatologia dos sintomas neurológicos que afetam os pacientes com MSUD. Apoio Financeiro: PRONEX, CNPq, FAPERGS, PROPESQ, UFRGS 01.03.028 AÇÃO DA CROTOXINA NA LIBERAÇÃO DE ATP EM JUNÇÃO NEUROMUSCULAR SOB DIFERENTES CONDIÇÕES DE ESTIMULO. ASSIS SANTOS, D. *; Salgado, A. H. I.; Fisiologia e Biofísica, UFMG; Fisiologia e Biofísica ICB1, UFMG. Objetivo: INTRODUÇÃO E OBJETIVOS: A ESTIMULAÇÃO NERVOSA AUMENTA A CONCENTRAÇÃO DE ATP NA JUNÇÃO NEUROMUSCULAR DE FORMA CÁLCIO-DEPENDENTE. PROPOR ESCLARECIMENTOS SOBRE A ORIGEM E A AÇÃO NEUROMODULATÓRIA DO ATP NO CONTROLE DA TRANSMISSÃO NEUROMUSCULAR É O PRINCIPAL OBJETIVO DESTE TRABALHO.

Métodos e Resultados: MÉTODOS: O HEMIDIAFRAGMA ERA RETIRADO DE RATOS WISTAR, JUNTAMENTE COM O NERVO FRÊNICO E SUBMETIDO A CONDIÇÕES QUE VIESSEM A INFLUENCIAR A LIBERAÇÃO DE ATP: -ESTIMULAÇÃO DO NERVO SOB DIFERENTES VALORES DE FREQÜÊNCIA; PRESENÇA DE TUBOCURARINA, CÁLCIO, A -BUNGAROTOXINA E CROTOXINA. A MEDIDA DA QUANTIDADE DE ATP LIBERADA FOI FEITA POR ENSAIOS DE LUMINOMETRIA UTILIZANDO LUCIFERINA-LUCIFERASE (SALGADO, A, GOMEZ, M.V., ROMANO,-SILVA, M.A.,PRADO,M.A.M. 1996. NEUROSCIENCE LETTER 204, 37-40). RESULTADOS: NOS EXPERIMENTOS-CONTROLE FORAM VERIFICADOS QUE O AUMENTO DA FREQÜÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO PROMOVEU UM AUMENTO NA QUANTIDADE DE ATP LIBERADO NA PREPARAÇÃO. NA PRESENÇA DE TUBOCURARINA 1M M, OBSERVOU-SE UMA REDUÇÃO NA LIBERAÇÃO DE ATP DE 55% QUANDO A FREQÜÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO FOI DE 1 HZ, E DE 53% QUANDO A FREQÜÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO FOI DE 5 HZ. NAQUELES EXPERIMENTOS EM QUE O CÁLCIO FOI RETIRADO DO BANHO, OBSERVOU-SE UMA REDUÇÃO DE 47% DA LIBERAÇÃO DE ATP SOB A FREQÜÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO DE 1 HZ, E DE 43% QUANDO A FREQÜÊNCIA FOI DE 5 HZ. QUANDO ADICIONOU-SE CROTOXINA 0,3 NM AO BANHO, OBSERVOU-SE QUE HOUVE UMA INIBIÇÃO DE 26% QUANDO SE UTILIZOU A FREQÜÊNCIA DE 1 HZ, E DE 74% QUANDO A FREQÜÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO FOI DE 5HZ. Conclusões: CONCLUSÕES: OS DADOS APRESENTADOS INDICAM QUE A CROTOXINA 0,3 NM INIBIU A LIBERAÇÃO DE ATP DE MANEIRA DIFERENTE DAQUELA OBSERVADA QUANDO SE UTILIZOU A TUBOCURARINA 1 M M OU QUANDO SE RETIROU O CÁLCIO DO MEIO. O AUMENTO DA FREQÜÊNCIA DE ESTIMULAÇÃO DA PREPARAÇÃO DE 1 HZ PARA 5 HZ NÃO AUMENTOU A LIBERAÇÃO DE ATP COMO VERIFICADO NA PRESENÇA DE TUBOCURARINA OU EM DIFERENTES SITUAÇÕES ESTUDADAS. ESTES RESULTADOS E EM CONJUNTO COM OUTROS JÁ OBTIDOS, COMO A AUSÊNCIA DE EFEITO PÓS-SINÁPTICO DO ATP E A CAPACIDADE DESTE ATUAR COMO MODULADOR PRÉ-SINÁPTICO ABREM A POSSIBILIDADE DE QUE O ATP POSSA ATUAR COMO MENSAGEIRO RETRÓGADO NA JUNÇÃO NEUROMUSCULAR. Apoio Financeiro: CNPq, FAPEMIG 01.03.029 SEROTONINA MODULA PROLIFERAÇÃO DE CÉLULAS DE RETINA DE EMBRIÃO DE GALINHA IN VITRO Costa, D. M. R. *; Herculano, A. M. **; do Nascimento, J. L. M.; fiisologia, UFPa; Fisiologia, UFPa; Fisiologia - CCB, UFPa. Objetivo: Avaliar o papel dos receptores serotoninérgicos 5-HT1A e 5-HT2 na proliferação de células de retina de embrião de galinha in vitro. Métodos e Resultados: Culturas de células da retina de embrião de galinha no 7º dia de desenvolvimento foram mantidas em meio DMEM com 10% de soro bovino fetal em estufa de CO2 à 37°C por 6-8h. Após este período, as células foram tratadas por 15 minutos com 8-OH-DPAT (8-hidrodipropilaminotetralina), Pindolol (1-[1H-Indol-4-iloxi]-3-[isopropilamino]-2-propanol) e Mianserina (Hexahidro-2-metildibenzo [c,f]-pirazino[1,2-a]azepina). Foi utilizada a concentração de 100µM em todos os experimentos. O 8-OH-DPAT e o Pindolol atuam respectivamente como agonista e antagonista do receptor serotoninérgico 5-HT1A. A Mianserina atua como um antagonista serotoninérgico do receptor 5-HT2. A proliferação celular nas culturas de células de retina foi avaliada pela taxa

de incorporação de [H3]-Timidina (1µCi/ml). Os resultados demonstraram que a Mianserina não promoveu mudança significativa na incorporação de [H3]-Timidina quando comparada com as células controles. O tratamento com Pindolol promoveu um aumento de 60%± 18,7 na incorporação de [H3]-Timidina, enquanto que o 8-OH-DPAT diminuiu a taxa de incorporação em 27%± 4,0. O co-tratamento das culturas com 8-OH-DPAT e Pindolol não alterou significativamente a proliferação em relação ao grupo controle. Conclusões: Nossos resultados sugerem que os receptores serotoninérgicos do tipo 5-HT1A estão envolvidos na regulação da proliferação de células de retina de embrião de galinha mantidas em cultura. Apoio Financeiro: SECTAM, FINEPE, PROPESP, CNPq 01.03.030 A NEW XANTHONE FROM KIELMEYERA CORIACEA PROTECTS HUMAN GL-15 GLIOBLASTOMA CELLS AGAINST 4-METHYLCATECHOL-INDUCED TOXICITY El-Bachá, R. dos S.; Pereira, M. R. G. *; Silva, A. R.; Hughes, J. B. **; de Souza, V. R. **; Costa, S. L.; Cruz, F. G.; Biofunção, UFBa; Instituto de Química, UFBa; Neuroquímica Molecular e Celular, UFBa; Química de Produtos Naturais, UFBa. Objetivo: AIM: The compound 1,7,8-trihydroxy-6’,6’-dimethylpyrano (2’,3’:3,2) xanthone (K-1) is a new xanthone that was extracted from "Pau Santo", Kielmeyera coriacea (Guttifereae), a tree that is fairly widespread in Chapada Diamantina (Bahia), and is known for its medicinal properties. The main objective of this work was to study the protective effects of K-1 against the 4-methycatechol (4MC)-induced toxicity towards human GL-15 glioblastoma cells. Métodos e Resultados: METHODS AND RESULTS: The compound was extracted with hexane from dried ground trunks, then purified by chromatographic methods. The new xanthone was characterized by UV-Vis spectrophotometry, IR, 1H and 13C NMR, and mass spectrometry. 4MC autoxidizes in 50 mM phosphate buffer, pH 7.4, and the rate of the autoxidation followed by the consumption of oxygen using a Clark electrode was used to test the antioxidant activity of K-1. The toxicity of 4MC and K-1 towards GL-15 cells was studied by the MTT assay. K-1, a yellow crystalline solid mp 225-227 °C (acetone), has a molecular formula, C18 H14 O6, that was deduced by EI mass spectrometry, [M]+ m/z 326 as well as 13C NMR data. The UV spectrum showed intense absorptions at 224 and 290 nm and two bands of lower intensities at 328 and between 380-440 nm, suggesting the xanthone skeleton. The rate of oxygen consumption during the oxidation of 1 mM 4MC (2.61 ± 0.07 µM.min-1) was inhibited by 23.8 % in the presence of K-1. K-1 (50 - 200 µM) showed no toxicity towards GL-15 cells treated for 72 h. Moreover, 200 µM K-1 protected these cells against the toxicity induced by 200 µM 4MC. Conclusões: CONCLUSIONS: The data obtained in this work suggest that K-1 protects GL-15 cells against 4MC-induced toxicity because it inhibits the oxidation of this catechol. Apoio Financeiro: CNPq, FAPESB 01.03.031 CARACTERIZAÇÃO DO TRANSPORTE DE GLUTAMATO EM CÉLULAS DA RETINA MANTIDAS EM CULTURA. Oliveira, K. R. M. *; Herculano, A. M. **; do Nascimento, J. L. M.; Fisiologia, UFPa; Fisiologia - CCB, UFPa. Objetivo: Caracterizar farmacologicamente o transporte de glutamato em células da retina mantidas em cultura.

Métodos e Resultados: A captação de glutamato foi medida em cultura de células da retina obtidas de embrião de galinha com sete dias de desenvolvimento. Culturas mistas e neuronais foram mantidas em meio DMEM com 10% de soro bovino fetal (SBF) e meio 199 com 1% de SBF, respectivamente. A captação foi analisada utilizando-se 3H-L-glutamato (1µCi) e medida por cintilação líquida, sendo os resultados expressos em contagem por minuto (CPM). Em meio contendo sódio, observou-se uma diferença na captação entre as culturas mistas e de neurônios. Desta forma, quando foi feita a substituição do sódio extracelular por LiCl (128mM), observamos uma diminuição de 40% do transporte em culturas mistas e 42% nas culturas de neurônios. Em ambas as culturas, a adição de L-cisteína (5mM) no meio não interferiu no transporte de glutamato dependente de Na+. Contudo a combinação de LiCl e L-cisteína promoveu uma diminuição de 61% na captação de glutamato nas culturas mistas e 74% nas culturas de neurônios. Quando utilizamos L-trans-Pyrrolidine-2,4-dicarboxilato (PDC) nas culturas mistas e de neurônios observamos inibição tanto no transporte dependente quanto no transporte independente de sódio. Conclusões: Existem dois mecanismos de transporte de glutamato nas culturas de retina, um dependente de Na+ e outro independente Na+, sendo que o PDC inibe ambos os sistemas e a L-cisteína atua somente no transporte independente Na+, mostrando que ambos os transportes apresentam mecanismos de regulação diferentes. Apoio Financeiro: PROPESP, CNPq, SECTAM, FINEP 01.03.032 EFEITO IN VITRO DOS ALFA-CETOÁCIDOS DE CADEIA RAMIFICADA SOBRE A LIPOPEROXIDAÇÃO EM CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS. Dutra Filho, C. S.; Bridi, R. **; Sgarbi, M. B. *; TESTA, C. G. *; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Ciências Biológicas - Bioquímica, UFRGS. Objetivo: A doença do xarope do bordo (MSUD, Maple Syrup Urine Disease) é uma desordem metabólica causada pela ausência ou diminuição da atividade do complexo da desidrogenase dos cetoácidos de cadeia ramificada. Este bloqueio leva a um acúmulo dos aminoácidos de cadeia ramificada e de seus correspondentes α -cetoácidos L-2-cetoisocapróico (KIC), L-2-ceto-3-metilvalérico (KMV) e L-2-cetoisovalérico (KIV) nos tecidos e fluidos biológicos dos afetados. A MSUD se caracteriza clinicamente por severas alterações neurológicas cujos mecanismos fisiopatológicos ainda não estão completamente esclarecidos. Neste estudo, foi investigado o efeito destes α -cetoácidos sobre a lipoperoxidação (LPO) em córtex cerebral de ratos. Métodos e Resultados: Utilizou-se as medidas de quimioluminescência (QL) e a dosagem substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS). O homogeneizado de córtex cerebral de ratos Wistar com 30 dias de idade foi incubado com KIC, KMV e KIV a 37° C durante 1 hora nas concentrações de 1,0; 2,5 e 5,0mM. Verificou-se um aumento significativo da QL nas concentrações de 5mM de KIC [F(3,16)=5,65 p<0,01; n=5; 14,49%], KMV [F(3,16)=5,06 p<0,01; n=5; 19,29%] e KIV [F(3,16)=4,01 p<0,05; n=5; 20,77%], e um aumento nas TBA-RS na concentração de 5mM de KIC [F(3,16)=4,81 p<0,05; n=5; 13,77%]. Conclusões: O aumento na LPO provocado por estes α -cetoácidos sugere que o estresse oxidativo pode estar envolvido na fisiopatologia dos sintomas neurológicos que afetam os pacientes com MSUD. Apoio Financeiro: PRONEX, CNPq, FAPERGS, PROPESQ, UFRGS 01.03.033

PARTICIPAÇÃO DE ECTONUCLEOTIDASES HIPOCAMPAIS NA EVOCAÇÃO DE UMA TAREFA DE APRENDIZADO NÃO-ASSOCIATIVO EM RATOS. Pedrazza, E. L. *; Riboldi, G. *; Bonan, C. D.; Izquierdo, I. A.; Battastini, A. M. O.; Sarkis, J. J. F.; Pereira, G. S. **; Biochemistry, PUC-RS; Bioquímica, PUC-RS; Ciências Fisiológicas, PUC-RS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Evidencias mostram o envolvimento do ATP extracelular e da adenosina na consolidação da memória. Os níveis de ATP extracelular e a produção de adenosina, são regulados por um conjunto de enzimas chamadas ectonucleotidases, que inclui uma ecto-ATPase, uma ATP difosfoidrolase e uma ecto-5´-nucleotidase. Estudos realizados em nosso laboratório mostraram que a atividade destas enzimas foi alterada em hipocampo, córtex entorrinal, córtex cingulado e córtex pré-frontal após a exposição a esquiva inibitória, que é uma tarefa aversiva. Entretanto, não há estudos sobre a atividade das ectonucleotidases em outros tipos de tarefas. O objetivo do estudo é verificar a atividade das ectonucleotidases em hipocampo de ratos expostos a uma tarefa de aprendizado não-associativo, como a exposição a um campo aberto. Métodos e Resultados: Foram usados ratos Wistar machos, onde os animais eram sacrificados imediatamente e 1h pós-teste. Os sinaptossomas foram isolados, a proteína foi determinada (Anal. Biochem. 72: 218-254, 1976) e as atividades de hidrólise do ATP, ADP e AMP foram determinadas a partir do fosfato inorgânico liberado (Anal. Biochem. 157, 375-380, 1986). Imediatamente após a sessão de teste, ocorreu um aumento na hidrólise do ATP (46%) e uma diminuição na hidrólise do ADP(33%) em sinaptossomas de hipocampo de ratos. Entretanto, foi observado uma significativa ativação do ATP(70%), ADP(58%) e AMP(43%) em sinaptossomas de hipocampo de ratos sacrificados 1h após a sessão de teste. Conclusões: Estes resultados sugerem que as ectonucleotidases são diferentemente moduladas de acordo com o tipo de aprendizado e de acordo com a fase do processamento da memória. Apoio Financeiro: PUC - RS, PIBIC | iniciação científica, CNPq, PRONEX, FAPERGS 01.03.034 L-PYROGLUTAMIC ACID REDUCES ANTIOXIDANT CAPACITY IN RATS BRAIN. Pederzolli, C. D. **; Giordani Testa, C. *; Araldi, J. *; Durigon, K. *; Sgarbi, M. B. *; Dutra Filho, C. S.; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: L-pyroglutamic acid (L-PGA) is an endogenous molecule formed from glutamic acid in γ-glutamyl cycle, which is related to the synthesis and degradation of glutathione. High levels of L-PGA in blood, cerebrospinal fluid and other tissues, in addition to its high urinary excretion occur in a variety of inborn metabolic defects involving different enzymes in the γ-glutamyl cycle. These disorders are clinically characterized by hemolytic anemia and severe neurological disorders. L-PGA was already shown to be neurotoxic: its excitotoxicity, its inhibition of NA+-K+-ATPase activity and its brain energy impairment were already demonstrated. In the present study, we investigated the possible role of oxidative stress in L-PGA’s neurotoxicity. The in vitro effect of L-PGA was then studied on some oxidative stress parameters, such as Total Radical Antioxidant Potencial (TRAP) and Total Antioxidant Reactivity (TAR). Métodos e Resultados: Cerebral cortex and cerebellum homogenates from 15-day-old rats were incubated in the presence or absence (controls) of L-PGA (at final concentrations ranging from 0.5 to 3.0 mM) at 37º for 1 hour. After incubation, TRAP and TAR were measured. TRAP was significantly reduced at the

higher concentrations in cerebral cortex [F(3,20)=15,911; p<0,001; n=6; 16 to 26%] and also in cerebellum [F(3,20)=23,185; p<0,001; n=6; 21 to 25%]. TAR was significantly reduced at all concentrations tested in cerebral cortex [F(3,20)=53,596; p<0,001; n=6; 18 to 46%] and cerebellum [F(3,20)=37,196; p<0,001; n=6; 16 to 44%]. Conclusões: These results suggest that L-PGA may reduce both antioxidant quantity and reactivity in rats brain. Further studies, however, appear to be worthwhile in order to better characterize the role of free radicals in the neurotoxicity of L-PGA. Apoio Financeiro: CNPq, PRONEX, PROPESQ, FAPERGS 01.03.035 O ESTRESSE ALTERA OS DANOS CAUSADOS PELA PRIVAÇÃO DE OXIGÊNIO E GLICOSE EM FATIAS HIPOCAMPAIS DE RATOS. Cimarosti, H. I. **; Fontella, F. U. **; Crema, L. *; Fochesatto, C. *; Netto, C. A.; Dalmaz, C.; Salbego, C.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Ciências, UFRGS; Fisiologia, UFRGS; Bioquímica - ICBS, Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Objetivo: Em condições normais, o metabolismo aeróbico é a principal fonte de energia no cérebro, mas este sistema pode ser comprometido em situações como a isquemia cerebral. O dano resultante da isquemia pode variar em função de fatores como os maiores níveis circulantes de hormônios liberados pelo estresse. O objetivo foi verificar o efeito do estresse agudo (EA) e crônico (EC) sobre a morte celular em fatias hipocampais de ratos submetidas a um modelo in vitro de isquemia. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos adultos foram submetidos a EA (1h de imobilização) ou EC (1h de imobilização/dia, 40 dias). 24h após estes tratamentos, os animais foram decapitados, os cérebros dissecados e fatias hipocampais pré-incubadas em solução de Krebs-Henseleit modificada (KHm), por 15min a 37°C em atmosfera com 5% de CO2. Em seguida, as fatias controle foram incubadas nesta mesma solução, enquanto as fatias a serem lesionadas foram submetidas à privação de oxigênio e glicose (POG) por 45min. A seguir, as fatias controle e POG foram incubadas em solução de KHm, por 3h a 37°C em atmosfera com 5% de CO2. Após este período, a viabilidade mitocondrial foi medida pelo ensaio do MTT e a lise celular pela quantificação da LDH liberada. Em relação a fatias controle de ratos controle (100%), a POG diminuiu a viabilidade mitocondrial (22±4%) e aumentou o dano celular (25±8%). As fatias de ratos submetidos a EC apresentaram maior viabilidade mitocondrial (17±7%) do que as fatias de ratos controle, suficiente para reverter os efeitos da POG (EC 95±6% e C 77±4%). No entanto, o dano celular provocado pela POG foi maior com este tratamento (EC 41±8% e C 25±8%). Nenhum efeito significativo foi observado 24 h após EA. (ANOVA/Duncan, p<0,05, n=7). Conclusões: Os resultados sugerem que o efeito da POG pode ser influenciado pelo estado prévio das células e pode ser alterado de forma diferente pela exposição a EA ou EC. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PRONEX, PROPESQ 01.03.036 ENVOLVIMENTO DE RECEPTORES IONOTRÓPICOS E METABOTRÓPICOS E DAS VIAS DE ERK-2 E P38MAPK NA EXCITOTOXICIDADE INDUZIDA POR

GLUTAMATO Decker, H. *; Molz, S. **; Cremonez, C. *; Cordova, F. **; Bainy Leal, R.; Tasca, C. I.; Bioquímica - CCB, UFSC. Objetivo: Glutamato (Glu) desempenha importante papel fisiológico no SNC via interação com seus receptores ionotrópicos e metabotrópicos. O aumento na concentração extracelular de glutamato pode desencadear morte neural como a observada na patogênese de doenças neurodegenerativas. A excitotoxicidade é mediada por diversas vias de sinalização celular, incluindo as quinases ativadas por mitógenos (MAPKs). Neste estudo, avaliamos a modulação do dano celular e a participação da via das MAPKs, ERK-1/2 e p38MAPK, em fatias de hipocampo de ratos submetidas à toxicidade induzida por glutamato. Métodos e Resultados: Fatias de hipocampo foram incubadas com Glu (10µM, 1mM ou 10mM) por 1h a 37oC na presença ou ausência de um modulador endógeno, GMP (1 mM), antagonistas de receptores ionotrópicos, MK-801 e GAMS (50µM), ou antagonista de receptores metabotrópicos, M-CPG (0,5 mM) e mantidas por 6 h em meio de cultura. A viabilidade celular foi avaliada pela redução do MTT e a fosforilação de ERK-1/2 e p38MAPK por imunodetecção. Glu 10µM não alterou a viabilidade celular e a fosforilação de ERK-1/2 e p38MAPK. Glu 1 mM e 10 mM diminuíram a viabilidade celular em 33% e 40% em relação ao controle (n=4, p<0.05), respectivamente, a qual foi revertida pela adição de MK-801 e GAMS. A redução da viabilidade celular induzida por Glu 10 mM foi parcialmente revertida com a adição de M-CPG. Glu 1 e 10 mM inibiram a fosforilação da ERK2 e Glu 10 mM inibiu a fosforilação da p38MAPK. GMP não alterou a redução de viabilidade e inibição da fosforilação das MAPKs induzida por Glu. Conclusões: Receptores ionotrópicos do sub-tipo NMDA e Kainato estão envolvidos na redução de viabilidade celular induzida por Glu 1mM e receptores ionotrópicos e metabotrópicos na toxicidade induzida por Glu 10 mM. Neste modelo, GMP não bloqueia a interação de glutamato com seus receptores. Glu 10 µM não alterou a viabilidade celular e a fosforilação das MAPKs (ERK 1/2 e p38MAPK). No entanto, concentrações tóxicas de Glu inibem as vias da ERK 2 e da p38MAPK em fatias de hipocampo de ratos. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PRONEX 01.03.037 DERIVADOS DA GUANINA MODULAM O TRANSPORTE DE GLUTAMATO EM SINAPTOSSOMAS E VESÍCULAS SINÁPTICAS Santos, T. G. **; Souza, D. G. *; Petrocchi, K. B. **; Souza, D. O.; Tasca, C. I.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - CCB, UFSC. Objetivo: O transporte de glutamato (Glu) através da membrana plasmática e em vesículas sinápticas envolve mecanismos distintos. Os carreadores de membrana, com alta afinidade para Glu e dependência de íons sódio, regulam a concentração extracelular de Glu no cérebro. A captação de Glu por vesículas sinápticas é dependente de um gradiente próton-eletroquímico gerado por uma H+-ATPase. Os derivados da guanina (DG), agindo extracelularmente, inibem a união de Glu a seus receptores e modulam os transportadores astrocitários de Glu. Neste estudo, avaliamos o efeito dos DG sobre o transporte de Glu em terminais pré-sinápticos e em vesículas sinápticas. Métodos e Resultados: A região anterior do cérebro de ratos Wistar adultos foi utilizada para preparar sinaptossomas em gradiente descontínuo de Percoll. Vesículas sinápticas foram isoladas como descrito em J. Neurochem. 50:1237, 1988. Os sinaptossomas foram carregados com 500nM de L-[3H]Glu por 15 min e

a liberação foi realizada na presença ou ausência de DG (guanosina, GMP e GTP). A captação vesicular foi realizada na presença de 2mM ATP e 50µM de L-[3H]Glu e finalizada por filtração à vácuo. O transporte de Glu foi avaliado por cintilação líquida. O potencial transmembrana (∆Ψ) e gradiente de prótons (∆pH) vesicular foram avaliados por espectrofluorometria. Em vesículas sinápticas, a captação de L-[3H]Glu foi inibida pelos DG de maneira dependente de concentração (a partir de 0,1mM) e tempo de incubação. Os DG inibiram a captação vesicular em seu estágio inicial (1,5 min), sem alterar o estado estacionário (10 min). GTP (1mM) reduziu parcialmente o gradiente de prótons e aboliu o potencial transmembrana vesicular. Guanosina e GMP não alteraram o gradiente próton-eletroquímico. A liberação sinaptossomal basal de Glu foi aumentada em 87%, 70%, 95% e a estimulada por despolarização, em 52%, 69%, 85%, na presença de 1mM de guanosina, GMP e GTP (n=4, p<0,05), respectivamente. Conclusões: Os DG podem modular a atividade dos transportadores de Glu vesiculares e de membrana plasmática, promovendo regulação da transmissão glutamatérgica. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PRONEX 01.03.038 EFEITO IN VITRO DE L-CITRULINA E AMÔNIA SOBRE A CAPACIDADE ANTIOXIDANTE EM CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS. Carvalho Prestes, C. **; Araldi, J. *; Durigon, K. *; Sgarbi, M. B. *; TESTA, C. G. *; Wyse, A. T. S.; Dutra Filho, C. S.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: A citrulinemia, um erro inato do ciclo da uréia, é uma doença autossômica recessiva causada pela deficiência da enzima argininossuccinato sintetase. Esta deficiência provoca acúmulo de L-citrulina e amônia no plasma, liquor e demais tecidos. A fisiopatologia dos sintomas neurológicos da citrulinemia ainda permanece incerta. Neste trabalho, foi estudado o efeito da L-citrulina e amônia sobre parâmetros de avaliação da capacidade antioxidante em córtex cerebral de ratos jovens. Métodos e Resultados: Para medir a capacidade antioxidante tecidual, utilizou-se como parâmetros as medidas do potencial antioxidante total (TRAP) e a reatividade antioxidante total (TAR). O homogeneizado de córtex cerebral de ratos Wistar com 30 dias de idade foi incubado com L-citrulina a 37° C por 1 hora nas concentrações de 0,1; 0,5; 1,0; 3,0 e 5,0mM ou amônia nas concentrações 0,01; 0,05; 0,1; 0,5 e 1,0mM. O TRAP foi diminuído significativamente (até 33,63%) na presença de L-citrulina de maneira dose dependente [F=8,99; β =-0,54; p< 0,01; n=4], enquanto a amônia não afetou este parâmetro [F=0,084; p> 0,05; n=5]. O TAR não foi alterado pela L-citrulina [F=0,714; p> 0,05; n=7] ou amônia [F=0,956; p> 0,05; n=5]. Conclusões: Estes resultados mostram que a L-citrulina in vitro diminui a capacidade antioxidante de córtex cerebral de ratos, sugerindo um possível envolvimento de espécies reativas na neurotoxicidade de L-citrulina. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, PRONEX 01.03.039 ATIVAÇÃO DE RECEPTORES MUSCARÍNICOS M2 REGULA A FOSFORILAÇÃO DE ERKS 1/2 EM CÉLULAS DE RETINA DE EMBRIÃO DE PINTO Freitas, R. C. C. **; Ventura, A. L. M.; Neurobiologia, UFF.

Objetivo: Neste trabalho, estudamos a internalização de receptores muscarínicos induzida por carbacol na retina de pinto e o envolvimento deste fenômeno na regulação das MAP cinases deste tecido. Métodos e Resultados: A incubação de células de retina com carbacol induziu uma diminuição máxima e reversível de ~ 40 % na ligação de [3H]-NMS. Este efeito não foi bloqueado por monodasilcadaverina, inibidor da endocitose mediada clatrina, sugerindo que esta via de internalização não esteja envolvida no sequestro destes receptores. Entretanto, a diminuição da ligação de [3H]-NMS foi bloqueada por nistatina, um inibidor de endocitose via caveolas, sugerindo que a internalização de receptores muscarínicos induzida pelo agonista seja dependente dessa via de internalização. Este fenômeno também foi bloqueado por genisteína e herbimicina A, inibidores de tirosinas quinases e por metocritamina, um antagonista de receptores do tipo M2 sugerindo que a internalização de receptores muscarínicos M2 envolva a ativação dessas enzimas. A incubação das culturas com carbacol promoveu a fosforilação das ERKs 1/2. Essa ativação foi inibida pelo antagonista pirenzepina, sugerindo que receptores M1 ativem essas enzimas. Entretanto, a ativação induzida por carbacol foi potencializada por metocritamina e por genisteína sugerindo que o bloqueio dos receptores do tipo M2 e/ou do sequestro destes sítios favoreçam a ativação das ERKs 1/2 nessas culturas. Conclusões: Nossos dados sugerem que o seqüestro de receptores M2 induzido por carbacol regule negativamente a atividade das ERKs 1/2 enquanto que a estimulação de receptores M1 pelo mesmo agonista induza a ativação dessas enzimas em culturas de células de retina de pinto. Apoio Financeiro: CAPES, FAPERJ 01.03.040 INHIBITION OF CREATINE KINASE ACTIVITY FROM RAT CARDIAC MUSCLE BY D-2-HYDROXYGLUTARIC ACID IN VITRO. Schuck, P. F. *; Silva, C. G. da **; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: D-2-Hydroxyglutaric acid is the biochemical hallmark of patients affected by the neurometabolic disorder known as D-2-hydroxyglutaric aciduria. Although the patients affected by this disorder present predominantly severe neurological findings, as well as hypotonia, muscular weakness, hypothophy and miocardiopathy, the underlying mechanisms of muscle injury in this disorder is virtually unknown. In the present study, we investigated the effect of D-2-hydroxyglutaric acid, at 0.25 to 5 mM concentrations, on total (tCK), cytosolic (CyCK) and mitochondrial (MiCK) creatine kinase activities in cardiac muscle of 30-day-old Wistar rats. Métodos e Resultados: Total creatine kinase activity was measured in tissues homogenates, whereas cytosolic and mitochondrial activities were measured in the cytosolic and mitochondrial fractions from skeletal and cardiac muscle. We verified that all activities were significantly inhibited by D-2-hydroxyglutaric acid (tCK: up to 22 %, p<0.01, n=8; CyCK: up to 30% at concentrations of 2.5 mM and higher, p<0.05, n=7; MiCK: up to 24% at concentrations of 1.0 mM and greater, p<0.01, n=7). We also observed that this inhibition was fully prevented by pre-incubation of the homogenates with reduced glutathione ([F(7,23) = 9.087, p<0.0001, n=3), suggesting that the inhibitory effect of DGA on CK activity is possibly mediated by modification of essential thiol groups of the enzyme. Conclusões: Considering the importance of creatine kinase activity for the tissue metabolism homeostasis, our results suggest that inhibition of this enzyme activity by

increased levels of D-2-hydroxyglutaric acid may be an important mechanism involved in the miopathy and miocardiopathy of patients affected by D-2-hydroxyglutaric aciduria. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PRONEX, PROPESQ 01.03.041 NON-ENZYMATIC ANTIOXIDANT DEFENCES ARE REDUCED BY 3-HYDROXYGLUTARIC ACID IN RAT CEREBRAL CORTEX Scussiato, K. *; Latini, A. S. **; Leipnitz, G. *; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Glutaric aciduria type I (GAI) is a neurometabolic disease biochemically characterised by a deficient activity of the glutaryl-CoA dehydrogenase leading to the tissue accumulation of glutaric and 3-hydroxyglutaric (3HGA) acids. Patients affected by this disorder commonly present severe neurological alterations whose pathophysiology is still not completely clear. Objective: To investigate the in vitro effect of 3HGA, at concentrations ranging from 0.01 to 1.0 mM, on total radical-trapping antioxidant potential (TRAP), total antioxidant reactivity (TAR) and on the activities of the antioxidant enzymes catalase, glutathione peroxidase and superoxide dismutase in cerebral cortex homogenates from young rats. Métodos e Resultados: TRAP and TAR were measured by using a scintillation counter and the activities of the antioxidant enzymes by using a double-bean spectrophotometer with temperature control. 3HGA significantly diminished TRAP measurement from 29% to 34% [F(3,16)=9.19, p<0.001] at all tested concentrations. TAR measurement was also reduced by the acid from 15.5% to 30.3% [F(3,12)=4.77, p< 0.05]. The activities of the antioxidant enzymes were not altered by the acid. Conclusões: These data suggest that 3HGA decreases the tissue non-enzymatic antioxidant defences and provokes a reduction of the brain capacity to handle an enhanced level of reactive species. In case these findings also occur in the human condition, it is feasible that oxidative stress might be involved in the pathophysiology of the brain injury observed in patients with GA I. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PROPESQ 01.03.042 3-HYDROXYGLUTARIC ACID INHIBITS THE ACITIVITIES OF COMPLEX II AND SUCCINATE DEHYDROGENASE IN RAT CEREBRAL CORTEX Borba Rosa, R. **; Latini, A. S. **; Scussiato, K. *; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: 3-Hydroxyglutaric acid (3HGA) accumulates in glutaryl-CoA dehydrogenase deficiency (glutaric aciduria type I; GA I), an autosomal recessive inherited neurometabolic disorder characterised by severe neurological symptoms and cerebral atrophy. Considering that the pathophysiology of the neurological dysfunction is poorly understood, the purpose of this study was to investigate the in vitro effect of 3HGA, at concentrations ranging from 0.01 to 1.0 mM, on the activities of the complexes of the respiratory chain namely, complex I - III, complex II - III, complex II and complex IV, and on the activity of the succinate dehydrogenase (SDH) in cerebral cortex homogenates of young rats. Métodos e Resultados: The enzyme activities were measured by using spectrophotometric methods. 3HGA significantly inhibited the Krebs cycle enzyme SDH (17.3%) at 1.0 mM concentration [F(3,20)=3.04, p < 0.05]. Furthermore,

the activity of complex II showed an inhibition of 18.6% respect to controls [F(3,16)=3.42, p < 0.05], while the others evaluated complex activities were not modified by the acid. Conclusões: These data suggest that an impaired brain energy metabolism might be involved in the pathology of the neurological damage observed in patients affected by GA I. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PROPESQ 01.03.043 3-HYDROXYGLUTARIC ACID INDUCES OXIDATIVE STRESS IN STRIATUM FROM YOUNG RATS Latini, A. S. **; Leipnitz, G. *; Scussiato, K. *; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Glutaryl-CoA dehydrogenase deficiency (glutaric acidemia type I; GAI) is an autosomal recessive inherited neurometabolic disorder characterised by severe neurological dysfunction and tissue accumulation of 3-hydroxyglutaric (3HGA) and glutaric acids. The pathophysiology of the brain damage is still obscure. The objective of this study was to investigate the in vitro effect of 3HGA, at concentrations ranging from 0.01 to 1.0 mM, on parameters of oxidative stress namely, thiobarbituric acid-reactive species (TBA-RS), dichlorofluorescein diacetate (DCF) fluorescence, total radical-trapping antioxidant potential (TRAP) and total antioxidant reactivity (TAR) in striatum homogenates of young rats. Métodos e Resultados: TBA-RS and DCF were measured by using spectrophotometric and fluorescent methods respectevely. TRAP and TAR were evaluated by using a Wallac 1409 scintillation counter. It was observed that 1.0 mM 3HGA significantly increased TBA-RS [F(3,20)=5.84, p < 0.01; 27.7%] and DCF [F(3,12)=3.60, p < 0.05; 43.7%] measurements. In contrast, a marked diminution of 40% was observed in TRAP measurement [F(3,16)=3.30, p<0.05] and a reduction of 44.8% in the TAR value [F(3,15)=3.87, p< 0.05] when compared to controls. Conclusões: The data indicate that 3HGA induced lipid peroxidation and production of reactive species. Furthermore, the acid reduced the tissue non-enzymatic antioxidant defences and the brain capacity to modulate an enhanced level of free radicals. These findings strongly suggest that oxidative stress might be involved in the brain injury of GA I patients. Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PROPESQ 01.03.044 EFEITO DE DROGAS ATIVAS EM RECEPTORES DE ADENOSINA NA NOCICEPÇÃO DE RATOS SUBMETIDOS A ESTRESSE REPETIDO POR IMOBILIZAÇÃO. Bonan, C. D.; Torres, I. L. da S. **; Crema, L. *; Nunes, M. L. *; Dalmaz, C.; Battastini, A. M. O.; Sarkis, J. J. F.; Ferreira, M. B. C.; Ciências Fisiológicas, PUC-RS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Farmacologia - ICBS, UFRGS. Objetivo: Após exposição de ratos a estresse repetido por imobilização são observadas hiperalgesia e alteração na atividade de enzimas envolvidas na hidrólise de nucleotídeos. Neste trabalho, nós investigamos o efeito de agonista no receptor A1 de adenosina, CPA (N6-cyclopentyladenosina), e de bloqueador da recaptação de adenosina, dipiridamole (DP), na nocicepção de ratos controles e estressados repetidamente por imobilização.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar adultos divididos em: grupo controle (mantidos em suas caixas moradia durante todo tratamento) e grupo estressado (foram imobilizados em um cilindro de diâmetro regulável 1h/dia/40 dias). Nocicepção foi avaliada utilizando tail-flick, medindo-se a latência de retirada da cauda; utilizou-se três medidas: basal, 30 e 60 min após administração das drogas. As drogas, CPA (10 mmol/kg) e DP (5 mg/kg), foram dissolvidas em 0.9% NaCl, pH 4.0, e administradas i.p. a um volume de 1.0 mL/kg. Somente o grupo controle apresentou um aumento na latência de retirada da cauda 60 min após a administração de CPA (média+EPM para o controle, 1,67+0,54 com salina e 2,72+1,4 com CPA; para o estressado, 0,2+0,23 com salina e 0,29+0,39 com CPA; ANOVA de medida repetida, seguida de Student-Newman-Keuls test, P<0.01), e de DP em 30 e 60 min (ANOVA de medida repetida, seguida de Student-Newman-Keuls test, P<0.0001 e P<0.05, respectivamente) (para 60 min, controle, 0,78+0,43 com salina e DP 2,97+0,9; estressado, 1,24+0,46 com salina e 0,69+0,62 com DP). Conclusões: Demonstramos a ausência de efeito antinociceptivo da adenosina em ratos repetidamente estressados. Estes resultados sugerem que a sinalização de dor induzida pelo estresse crônico apresenta modulação alterada em relação ao sistema adenosinérgico. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, PROPESQ, UFRGS, PUC - RS 01.03.045 ACÚMULO DE AMPC DURANTE O DESENVOLVIMENTO DO COLÍCULO SUPERIOR DE ROEDORES. Brandão Maia, F. *; Campello-Costa, P.; Ventura, A. L. M.; Serfaty, C. A.; Neurobiologia, UFF. Objetivo: O colículo superior é um dos principais centros subcorticais de processamento visual em ratos, recebe aferências retinianas, talâmicas e corticais entre outras. A projeção retinotectal tem sido amplamente utilizada como modelo experimental e foi demonstrado que ela se desenvolve ao longo dos 10 primeiros dias pós-natal. Estudos anteriores mostraram plasticidade destas conexões em um grande período do desenvolvimento após diversas manipulações experimentais tais como lesões seletivas do sistema visual ou após o bloqueio sistêmico de neurotransmissores (serotonina) ou mensageiros retrógrados (óxido nítrico e ácido araquidônico). O AMPc é um importante segundo mensageiro relacionado com estabilização seletiva de sinapses no sistema nervoso, incluindo a observada durante a consolidação de memória. Neste trabalho, estudamos a ontogênese do AMPc nas camadas superficiais do colículo superior, com o objetivo de correlacionar a expressão desta molécula com os eventos celulares que sustentam o refinamento sináptico observado durante o desenvolvimento e a plasticidade das conexões retinotectais. Métodos e Resultados: Utilizamos ratos Lister Hooded em diferentes etapas do desenvolvimento. Os animais foram sacrificados por decaptação, o colículo superior foi dissecado em meio de cultura BME suplementado com Hepes. O tecido foi incubado a 37oC em meio contendo inibidor da fosfodiesterase (RO - 200 µM) e agonista da adenosina (Neca - 0.2 mM) ou forskolina (50 µM). A reação foi interrompida com a adição de ácido tricloroacético 50%. A dosagem de AMPc foi realizada como previamente descrito (Gilman, Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1970). Nossos resultados demonstram níveis diferentes de AMPc ao longo do desenvolvimento do colículo superior.

Conclusões: Os resultados demonstram que os níveis de AMPc são regulados durante o desenvolvimento do colículo superior e ainda apontam para a adenosina como um possível modulador em determinadas fases da formação dos circuitos do colículo, indicando que estas moléculas desempenham algum papel nos eventos que levam a maturação das conexões sinápticas neste núcleo. Apoio Financeiro: PRONEX-MCT, CNPq 01.03.046 PERFIL ONTOGENÉTICO DA CAPTAÇÃO DE GLUTAMATO EM CONDIÇÕES BASAIS E NA PRESENÇA DE GUANOSINA EM FATIAS DE ESTRIADO E HIPOCAMPO DE RATOS Godinho, G. *; Thomazi, A. P. **; Duarte Schwalm, F. *; Rodrigues, J.; Frizzo, M.; Wofchuk, S. T.; Souza, D.; Bioquímica, UFRGS. Objetivo: O glutamato é o principal neurotransmissor excitatório do SNC. Em elevadas concentrações pode agir como uma excitotoxina, efeito relacionado a muitas doenças agudas e crônicas do SNC. A manutenção dos níveis extracelulares de glutamato abaixo dos neurotóxicos é realizada principalmente pelas células gliais, particularmente por astrócitos, através de transportadores de alta afinidade dependentes de sódio. A guanosina, uma base púrica, modula importantes eventos intracelulares e extracelulares no SNC. Estudos anteriores utilizando cultura de astrócitos e fatias de córtex de ratos P10 demonstraram que a guanosina aumenta a captação basal de glutamato, assim como exerce um papel neuroprotetor em animais submetidos a algum tipo de injúria. Esse trabalho tem por objetivo investigar in vitro o perfil ontogenético da captação de glutamato em condições basais e na presença de guanosina utilizando fatias de estriado e hipocampo de ratos. Métodos e Resultados: Foram utilizadas fatias estriatais e hipocampais de ratos Wistar machos (P10; P21; P60; 15 e 26 meses), as quais foram pré-incubadas por 30min com guanosina em meio HBSS a 35°C e em seguida incubadas com L-[³H]-glutamato. Após lise, alíquotas foram retiradas para dosagem de proteína e a radioatividade foi quantificada por cintilação. A captação de glutamato diminuiu significativamente a partir de animais jovens até animais velhos (15 meses). Animais com 26 meses mostraram uma recuperação na captação de glutamato em ambas estruturas. Conclusões: Essa diminuição na captação em animais de 15 meses pode estar relacionada à perda de funções que levam a desordens neurológicas que ocorrem geralmente nesta idade. O aumento parcial na capacidade de captação em ratos de 26 meses parece ser uma forma de compensação adaptativa para enfrentar estas desordens. Utilizando fatias estriatais e hipocampais de ratos de diversas idades concluimos que a captação basal de glutamato varia com a idade e que a presença de guanosina não afeta esse parâmetro em ambas estruturas. Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS, PROPESQ, UFRGS 01.03.047 EFEITOS IN VITRO DO ÁCIDO METILMALONICO EM PARAMETROS BIOQUIMICOS DE ESTRESSE OXIDATIVO EM ESTRIADO E HIPOCAMPO DE RATOS Ferreira Pettenuzzo, L. **; Schuck, P. F. *; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Ciências Biológicas - Bioquímica, UFRGS.

Objetivo: A acidemia metilmalonica é uma desordem metabolica caracterizada bioquimicamente pelo acumulo tecidual de ácido metilmalonico (MA) e clinicamente por deterioração neurológica progressiva, cuja patofisiologia ainda não é bem estabelecido. Portanto, o objetivo deste trabalho é determinar o efeito da incubação (60 minutos) de preparações de hipocampo e estriado de ratos com ácido metilmalonico nas concentrações de 0.5 e 2.5 mM sobre parametros bioquimicos de estresse oxidativo. Métodos e Resultados: Os métodos utilizados foram: avaliação do potencial antioxidante total do tecido (TRAP), avaliação da reatividade antioxidante do tecido (TAR) e medida das substâncias sensíveis ao ácido tiobarbiturico (TBA-RS). O MA reduziu significativamente o TRAP em estriado (controle = 3,55 ± 0,171; MA 0,5mM=3,01 ± 0,174 e MA 2,5mM= 1,98 ± 0,242) [F(2,15)=15,75 p<0,01] de modo dose dependente (β = - 0,703; p<0,01), porém não reduziu este parâmetro em hipocampo (controle= 6,73 ± 0,495; MA 0,5mM= 6,62 ± 0,513; MA 2,5 mM= 5,47 ± 0,505) [F(2,15)= 1,96, p>0,05]. O mesmo ocorreu com o TAR, o qual foi significativamente reduzido pelo MA em estriado (controle= 45,9± 3,69; MA 0,5mM= 44,7 ± 2,42; MA 2,5 mM= 34,3 ± 2,81) [F(2,15)= 4,65, p<0,05], de modo dose dependente (β = - 0,659; p<0,01), novamente nenhum efeito do MA foi encontrado em hipocampo (controle= 54,6 ± 5,23; MA 0,5mM= 50,0 ± 7,53; MA 2,5 mM= 42,7 ± 6,66) [F(2,15)= 1,0, p>0,05]. Além disso, o MA aumentou a presença de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBA-RS) em estriado (controle= 3,22 ± 0,19; MA 0,5mM= 3,37 ± 0,238; MA 2,5 mM= 3,98 ± 0,144) [F(2,15)= 7,42, p<0,01] e hipocampo (controle= 3,03 ± 0,258; MA 0,5mM= 3,27 ± 0,319; MA 2,5 mM= 3,19 ±,333) [F(2,15)= 4,65, p<0,05]. Conclusões: Com base nos presentes resultados podemos concluir que o estriado pode ser mais vulneravel ao estresse oxidativo induzido pelo MA do que o hipocampo, um fato que pode explicar os achados neurológicos encontrados nos pacientes portadores desta acidemia. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, PROPESQ, PRONEX 01.03.048 DIFFERENT MARKERS IN CULTURED MULLER CELLS OF THE AVIAN RETINA: EXPRESSION OF BIOSYNTETIC ENZYMES, RECEPTORS AND CAMP ACCUMULATION. Kubrusly, R. C. C. **; Caldas da Cunha, M. C. *; Schitine, C. de S. *; Soares, H. C. **; Reis, R. A. de M.; Ventura, A. L. M.; Kurtenbach, E.; Mello, M. C. F.; Mello, F. G. de; Neurobiologia, UFF; Biofísica CCS, UFRJ; Bioquímica Médica - CCS, UFRJ; Bioquímica Médica - ICB - BL. E, UFRJ; IBCCF, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, UFRJ; Neurobiologia - IBCCF, UFRJ. Objetivo: In embryonic chick (White Leghorn eggs) retina, dopamine-mediated responses are observed in early stages of development (E7) mainly on neurons. CNS development and function depends on glial cells, as they guide the migration of neuronal somata and axons, promote the survival, differentiation and insulation and nourishment of neurons. We developed a purified Muller glia culture to investigate the expression of different phenotypes markers on these cells (dopaminergic, gabaergic, cholinergics, and PACAP expression). Métodos e Resultados: Purified Muller cell culture was obtained from E8 embryonic chick. After 1 week in culture, retinal cells were treated with ascorbic acid (4mM) for 5h to eliminate all the neurons. E8C15 glia culture expressed D1a and D1b receptors mRNAs, but not D1d, as detected by RT-PCR. Dopamine(100mM), PACAP(10nM) and VIP(30nM) induced a 50, 10 and 10 fold cAMP accumulation, respectively, on glial cells. Dopaminergic effect was blocked by 1µM SCH 23390. Western blot analysis also revealed the expression of

Glutamic Acid Descarboxylase(GAD), Dopa-decarboxylase(DDC), PAC-1 receptors and nicotinic receptors(b2) by these cells. Conclusões: These results indicate that several markers are found in cultured Muller cells, indicating that glial cells, under appropriate conditions, can develop different functional properties. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX 01.03.049 DOPAMINERGIC COMMUNICATION IN THE NEURO RETINA AT THE EARLY STAGES OF EMBRYONIC DEVELOPMENT DEPENDS ON EXOGENOUS L-DOPA SUPPLY. Kubrusly, R. C. C. **; Guimaraes, M. Z. P.; Vieira, A. P. B. *; Schitine, C. de S. *; Hokoç, J. N.; Mello, M. C. F.; Mello, F. G. de; Biofísica CCS, UFRJ; IBCCF, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, UFRJ; Neurobiologia, UFRJ; Neurobiologia - IBCCF, UFRJ. Objetivo: In embryonic chick retina (White Leghorn), dopaminergic responses are observed in early stages of development (E7). However, Tyrosine Hydroxilase (TH), the rate limiting enzyme in dopamine (DA) biosynthesis, appears at late stages (E12-E13). The imunocytochemical analysis of retina sections revealed that dopa decarboxylase(DDC), an enzyme that converts L-dopa to dopamine, is absent in retinas from 5 day old chicken embryos (E5) but is expressed in retina of E8 embryos, in the presumptive outer plexiform layer. We investigated the possibility that L-dopa from the pigmented epithelium could fuel the retina in early developmental stages and be a substrate for DA synthesis by DDC present in the tissue. Métodos e Resultados: The dopamine content of E9/10 and E15/16 retinas, pre-incubated with L-dopa for 1 hour, increased 250 and 600 fold, respectively, showing that DDC is active since early in development. Intercellular communication, measured by endogenous cyclic AMP accumulation, was observed when retinas from E9/10 to E15/16 were pre-incubated for 1 hour with 1mM L-dopa, washed and followed by incubation in the presence of 0.5mM 3-isobutyl-1-methylxanthine, a phosphodiesterase inhibitor. Cyclic AMP accumulation was prevented when pre-incubation with L-dopa was carried out in the presence of carbidopa. Moreover, the accumulation of cyclic AMP was inhibited by SCH 23390 (2µM). The incubation of retinas in medium previously conditioned by retina-pigmented epithelium (RPE) also increased its cyclic AMP content with the characteristics described for L-dopa. Conclusões: Our results show that functional dopaminergic communication take place in the embryonic avian retina, prior to the expression of tyrosine hydroxilase, provided that L-dopa is supplied to the tissue. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX 01.03.050 AVALIACAO DO PERFIL DA CAPTACAO DE GLUTAMATO E DA PEROXIDACAO DE LIPIDEOS EM CORTEX PARIETAL DE RATOS JOVENS SUBMETIDOS A CONVULSAO INDUZIDA PELO ACIDO QUINOLINICO Horn, J. F. *; Lösch de Oliveira, D. **; Souza, D. O. G. de; Wofchuk, S. T.; Bioquímica, UFRGS. Objetivo: A formação de radicais livres está intimamente ligada à apoptose celular, indução da expressão gênica, além da ativação de muitas cascatas celulares de sinalização; porém, está ainda envolvida igualmente com diversos processos neurodegenerativos. Neste trabalho foi investigado o efeito de doses convulsivantes de ácido quinolínico, um agonista de receptores NMDA e indutor

de formação de radicais livres, sobre a captação de glutamato e peroxidação de lipídeos em córtex parietal de ratos jovens. Métodos e Resultados: Observamos que a dose de 250 nmol de ácido quinolínico i.c.v. causa uma redução significativa na captação de glutamato (0,106 + 0.007 nmol mg-1 min-1; p < 0,05), quando comparado com o grupo controle (0,134 + 0,005 nmol mg-1 min-1), nos animais sacrificados 10 minutos após as infusões. No que se refere a lipoperoxidação não verificamos diferenças significativas entre os grupos basal (0,774 + 0,015 nmol MDA/mg proteína), salina 10 minutos (0,568 + 0,109 nmol MDA/mg proteína), salina 60 minutos (0,784 + 0,049 nmol MDA/mg proteína), salina 120 minutos (0,779 + 0,026 nmol MDA/mg proteína) quinolínico 10 minutos (0,628 + 0,037 nmol MDA/mg proteína), quinolínico 60 minutos (0,613 + 0,037 nmol MDA/mg proteína) e quinolínico 120 minutos (0,603 + 0,087 nmol MDA/mg proteína). Conclusões: Apesar de não ter sido observado um aumento na peroxidação de lipídeos nos animais tratados com o ácido quinolínico, existem fortes indícios que houve a formação de radicais livres, já que observamos uma redução significativa na captação de glutamato e esta é sabidamente sensível à ação dos radicais livres. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, UFRGS 01.03.051 EFEITO DA GUANOSINA P.O. SOBRE CONVULSOES INDUZIDAS POR PICROTOXINA EM RATOS JOVENS. Lösch de Oliveira, D. **; Souza, D. O. G. de; Wofchuk, S. T.; Horn, J. F. *; Barth, A. *; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Os nucleotídeos da guanina, GTP e GDP, são conhecidos principalmente por regular a atividade intracelular de proteínas G, modulando assim a sinalização celular transmembrana. Mais recentemente, foi demonstrado que GMP e guanosina exercem efeitos in vitro e in vivo sobre o sistema glutamatérgico. GMP antogoniza o efeito facilitatório do glutamato na tarefa de esquiva inibitória e previne lesões estriatais induzidas pelo ácido quinolínico, um agonista de receptores NMDA. Recentemente, demonstramos que GMP e guanosina i.p. previnem convulsões induzidas por ácido quinolínico. Guanosina p.o. na dose de 7,5 mg/kg previne convulsões induzidas pela hiperestimulação do sistema glutamatérgico (QA e alfa-dendrotoxina) em comundongos e ratos jovens. O objetivo deste trabalho é investigar se o efeito anticonvulsivo in vivo da guanosina sobre convulsões induzidas pela hiperestimulação do sistema glutamatérgico deve-se a uma ação inibitória específica sobre este sistema ou se este efeito deve-se a uma hiperestimulação do sistema gabaérgico. Métodos e Resultados: Foram usados ratos Wistar (P12-14), os quais foram divididos em 4 grupos: 1) grupo salina-salina, grupo salina-picrotoxina, grupo fenobarbital-picrotoxina e grupo guanosina-picrotoxina. Os animais foram observados durante 30 min para ocorrência de convulsões clônicas seguidas de status epilepticus. Em doses menores (0.8, 1.6 e 2 mg/kg), a picrotoxina induziu convulsões em 43, 67 e 80% dos animais. Em doses maiores (2.4 e 3.2 mg/kg) induziu convulsões em todos os animais testados. O agonista de receptores GABAA, fenobarbital, previniu as convulsões induzidas por picrotoxina (2,4 mg/kg). Nas doses de 20, 40 e 50 mg/kg protegeu 0, 20 e 60% dos animais. Na dose de 60 mg, o fenobarbital protegeu 100% dos animais, visto que a guanosina (7,5 mg/kg) e MK-801 (0.5 mg/kg) não tiveram efeito. Conclusões: Nossos resultados demonstram que a guanosina não possui efeito anticonvulsivo contra convulsões induzidas pela picrotoxina. Estes dados, juntamente com resultados anteriores obtidos em nosso laboratório, demonstram que a guanosina possui um

certo grau de especificidade para o sistema glutamatérgico no que diz respeito a sua ação anticonvulsiva. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, UFRGS 01.03.052 ESTUDO SOBRE O EFEITO NEUROPROTETOR DA GENISTEÍNA NUM MODELO IN VITRO DE MORTE CELULAR: ENVOLVIMENTO DA FOSFORILAÇÃO PROTÉICA EM TIROSINA Zamin, L. L. *; Cimarosti, H. I. **; Frozza, R. *; Buzin, L. *; Calegaro Nassif, M. *; Cechin, S. **; Salbego, C.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: A genisteína é uma isoflavona derivada da soja com estrutura química similar ao estrógeno e é um inibidor da fosforilação de tirosina. O uso da reposição hormonal por fitoestrógenos vem sendo difundido devido ao seu potencial preventivo de doenças cardiovasculares, preservação das funções cognitivas e seu efeito antiproliferativo e antioxidante. O objetivo deste trabalho é investigar o efeito neuroprotetor da genisteína num modelo de fatias hipocampais submetidas à privação de oxigênio e glicose (POG) e sua ação sobre a fosforilação de proteínas em tirosina. Métodos e Resultados: Foram utilizadas fatias hipocampais (400 µ M) de ratos Wistar machos. A genisteína foi adicionada ao meio nas doses 1, 10, 25 e 100 µ M durante a indução da lesão (60 minutos) e no período de recuperação (3 horas pós-insulto). Após este período, a perda da integridade da membrana celular foi medida através da quantificação da liberação de LDH no meio extracelular (n=12). Para quantificar a fosforilação protéica em tirosina, fez-se eletroforese seguida de blotting e imunodetecção para fosfo-tirosina (n=6). Analisou-se os dados estatisticamente e os resultados foram expressos como porcentagem das fatias POG ± erro padrão. Os resultados mostraram um aumento significativo na liberação de LDH nas fatias expostas à POG (95± 5) quando comparadas com as fatias controles (18± 3). Nas fatias tratadas com genisteína nas doses 1 (71± 10) e 10µ M (75± 9) houve uma diminuição significativa na liberação da LDH. Quanto a fosforilação protéica em tirosina não foi detectada diferença significativa entre os tratamentos. Conclusões: Os resultados sugerem um provável efeito neuroprotetor da genisteína nas doses 1 e 10µ M. Mais estudos deverão ser realizados e se comprovada a eficácia da droga esta poderá se utilizada no tratamento e/ou prevenção das lesões isquêmicas. Apoio Financeiro: PROPESQ, FAPERGS-BIC, CNPq 01.03.053 DESNUTRICAO PROTEICA REDUZ LATENCIA EM CRISES CONVULSIVAS INDUZIDAS POR PICROTOXINA, AUMENTA A SENSIBILIDADE EM CONVULSOES E A CAPTACAO DE GABA EM CORTEX CEREBRAL DE RATOS. Lösch de Oliveira, D. **; Souza, D. O. G. de; Wofchuk, S. T.; Scheibel, F. *; Perry, M. L.; Schweigert, I.; Bioquímica, UFRGS; Farmacologia - ICBS, UFRGS; Bioquímica, UNIJUI. Objetivo: O Ácido γ -aminobutírico (GABA) é o principal neurotransmissor inibitório do SNC, envolvido na patofisiologia das epilepsias. A picrotoxina é um antagonista específico do sistema gabaérgico e quando administrada, por via subcutânea, induz convulsões em ratos. A desnutrição causa alterações bioquímicas, fisiológicas e estruturais do SNC, sendo que, uma delas, é a diminuição do mRNA de subunidades de receptores GABA - A. Nosso objetivo foi investigar o efeito da desnutrição sobre a ação da picrotoxina, como

convulsivante, em ratos Wistar (P25), submetidos a dietas normoprotéicas (25%) e hipoprotéicas (7%). Métodos e Resultados: Foram utilizadas doses diferentes de picrotoxina (3,2/4,0/4,8/5,6/6,0 mg/kg), verificando o tempo de latência das convulsões (curva tempo-concentração) e a menor dose que convulsionou 100% dos animais. Em seguida, os ratos foram sacrificados por decaptação e o córtex cerebral retirado para verificação do efeito da picrotoxina e da desnutrição sobre a captação de GABA. Constatou-se que a concentração de picrotoxina de 4,8 mg/kg foi a menor dose para obter 100% de convulsões nos ratos desnutridos, diferindo dos normonutridos que foi de 5,6 mg/kg, mostrando a sensibilidade aumentada do primeiro grupo. O tempo de latência do grupo normonutrido em comparação ao desnutrido mostra diminuição do último em relação ao primeiro. A picrotoxina não mostrou efeito sobre a captação de GABA em relação ao controle (salina), enquanto que a desnutrição aumentou a captação. Conclusões: É provável que o efeito da captação de GABA evidenciada nos desnutridos se relacione com o efeito na sensibilidade a picrotoxina. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, UFRGS, AACEA-HSE/R.J. 01.03.054 IN VITRO EFFECT OF 4-HYDROXYBUTYRIC ACID ON ANTIOXIDANT CAPACITY IN CEREBRAL CORTEX OF RATS. Sgaravatti, A. M. **; Giordani Testa, C. *; Sgarbi, M. B. *; Durigon, K. *; Araldi, J. *; Wannmacher, C. M. D.; Wajner, M.; Wyse, A. T. S.; Dutra Filho, C. S.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: 4-Hydroxybutyric Aciduria (4-HBA) is an inherited metabolic disease caused by the deficiency of succinic semi-aldehyde dehydrogenase activity. It is characterized by tissue accumulation of 4-hydroxybutyric acid (4-HB) and by severe neurological dysfunction, whose pathophysiology is poorly known. In the present study, we investigated the in vitro effect of 4-HB on antioxidant capacity in cerebral cortex of rats, in order to evaluate the involvement of oxidative stress on the neurological dysfunction present in this disease. Métodos e Resultados: Brain homogenates from 15-day-old Wistar rats were incubated in the presence or absence (controls) of 4-HB (at final concentrations ranging from 0.1 to 1.0 mM) at 37 ºC for 1 hour. After incubation, total antioxidant potential (TRAP) and total antioxidant reactivity (TAR) were measured. TRAP [F(3.16)=5.381; p<0.01] was significantly decreased by 4-HB in a dose-dependent way (β=-0.68; p<0.001). TAR [F(3.8)=4.65; p<0.05] was significantly decreased by 4-HB in a dose-dependent way (β=-0.77; p<0.01). Conclusões: These results suggest that 4-HB may decrease non-enzymatic antioxidants defenses in rats cerebral cortex in vitro. If these effects also occur in humans, it is possible that oxidative stress may be involved in the neuropathology of patients affected by 4-HBA. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PRONEX, PROPESQ 01.03.055 ACTION OF VITAMINS E AND C ON THE EFFECTS OF ARGININE OVER BRAIN ENERGY METABOLISM OF RATS. Delwing, D. **; Chiarani, F. *; Wannmacher, C. M. D.; Wajner, M.; Wyse, A. T. S.; Biochemistry, UFRGS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS.

Objetivo: Hyperargininemia is an inherited metabolic disease biochemically characterized by tissue accumulation of arginine (Arg). Mental retardation and other neurological features are common symptoms in hyperargininemic patients. We have previously demonstrated that Arg administration increases oxidative stress and lactate release and decreases glucose uptake, as well as succinate dehydrogenase and complex II activities. In the present study, our goal was to evaluate the effect of pretreatment with vitamins E and C on the effects elicited by Arg administration on the same parameters of brain energy metabolism previuosly studied. Métodos e Resultados: Sixty-day-old Wistar rats were pretreated during one week with i.p. injection (once a day) of saline 0.9 % (control) or vitamins E and C (vit. E 40 mg/Kg, vit. C 100 mg/Kg). Twelve hours after the last injection, the animals received one injection of arginine (0.8 g/Kg) or saline and were killed 1 h later. Our results showed that vitamin E plus C per se did not alter the parameters studied, but prevented the increased of lactate release (C: 4.24± 0.67; Arg: 6.08± 0.25; Vit E&amp;C: 4.99± 0.15; Arg+Vit E&amp;C: 4.78± 0.48; n=4) and the reduction of glucose uptake (C: 18.53± 1.21; Arg: 14.73± 0.59; Vit E&amp;C: 17.25± 2.66; Arg+Vit E&amp;C: 17.16± 1.29; n=4), as well as succinate dehydrogenase (C: 16.50± 0.64; Arg: 12.02± 1.26; Vit E&amp;C: 16.52± 0.68; Arg+Vit E&amp;C: 17.11± 0.72; n=4) and complex II (C: 12.58± 1.56; Arg: 6.39± 0.93; Vit E&amp;C: 12.43± 2.60; Arg+Vit E&amp;C: 13.45± 1.11; n=4) caused by Arg administration. Data are expressed as mean+S.D. Conclusões: Our results indicate that Arg administration impairs energy metabolism in rat hippocampus, an effect probably mediated by oxidative stress since treatment with vitamins E and C prevented it. If these energy alterations also occur in the human condition, our findings might support a novel therapeutic strategy using antioxidants as treatment. Apoio Financeiro: FAPERGS, PROPESQ, CNPq, PRONEX 01.03.056 EFEITO IN VITRO DOS ÁCIDOS ETILMALÔNICO E METILSUCCÍNICO SOBRE A CAPTAÇÃO DE L-[3H]GLUTAMATO POR FATIAS DE CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS. Borges Dalcin, K. *; Pulrolnik, V. **; Borba Rosa, R. **; Vasques, V. de C.; Buffon, V. *; Figueiredo Bueno, A. R. *; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Ciências Biológicas - Bioquímica, UFRGS. Objetivo: A deficiência da enzima desidrogenase de acil-CoA de cadeia curta (SCAD) é um erro inato do metabolismo que afeta a oxidação de ácidos graxos, levando ao acúmulo predominante dos ácidos etilmalônico (EMA) e metilsuccínico (MSA) nos tecidos e fluidos biológicos dos pacientes. Os indivíduos afetados apresentam sintomatologia de caráter neurodegenerativo, que pode estar relacionada à excitotoxicidade. Em vista disto, investigamos o efeito in vitro do EMA e MSA sobre a captação de L-[3H]glutamato por fatias de córtex cerebral de ratos jovens. Métodos e Resultados: Foi utilizado fatias de córtex cerebral de ratos Wistar de 30 dias, de 0,4 mm. Aos controles adicionou-se solução salina de glicose-Hank´s balanceada (HBSS). Aos testes adicionaram-se HBSS e EMA ou MSA (0,01-1,0 mM), com pré-incubação de 23 min. A captação foi iniciada pela adição de glutamato 1,5 mM contendo 0,33 µ CimL-1 de L-[3H]glutamato. A incubação foi interrompida após 7 min por lavagens com HBSS gelado, seguida pela adição de

NaOH 0,5 N para lisar o tecido. A determinação de conteúdo intracelular de L-[3H]glutamato foi feita através de contador de cintilação líquida. Os resultados são apresentados como média ± desvio padrão [(nmol de glutamato/min).mg de proteína]. O EMA diminuiu a captação de L-[3H]glutamato [F(3,20)=3,962, p<0,01] nas concentrações de 0,01 mM a 1,0 mM de 8% a 45% em relação ao controle (0,69 ± 0,14). O MSA também diminuiu significativamente a captação de L-[3H]glutamato [F(3,12)=10,845, p<0,001] de 24% a 31% nas mesmas concentrações (controle: 0,67 ± 0,14). Conclusões: Nossos resultados sugerem que uma alteração no sistema glutamatérgico pelo EMA e MSA possa estar envolvida na fisiopatogenia da deficiência da SCAD. Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS, PRONEX, PROPESQ 01.03.057 NUDEL, A LIS1-INTERACTING PROTEIN INVOLVED IN NEURONAL MIGRATION AND AXONAL OUTGROWTH IS THE ENDOOLIGOPEPTIDASE A, FOUND IN THE CYTOSOL OF NERVOUS TISSUE. dos Santos Gorrão, S. **; Portaro, F. C. V. **; Gomez D., A.; Bastos, M. **; Guerreiro, J. R. *; Fernandes, B. L.; Hayashi, M. A. F.; Camargo, A. C. M. de; Bioquímica e Biofísica, BUTANTAN; Farmacologia, BUTANTAN; Bioquímica, INSTITUTO BUTANTAN; Bioquímica e Biofísica, INSTITUTO BUTANTAN; Bioquímica e Biologia Molecular, INSTITUTO BUTANTAN; Bioquímica, UNIFESP; Microbiologia - ICB II, USP. Objetivo: Recently, a Lis1-interacting protein named NUDEL was shown to be essential for brain development and cortical organization. It belongs to a family of vertebrate coiled-coil proteins, which associated to other neuronal proteins, promotes nucleokinesis and axonal outgrowth. Any impairment affecting this association results in serious pathologies, such as lissencephaly and schizophrenia. In this study, we demonstrate, using immunologycal and enzymatic assays, that the NUDEL not only has identical amino acid sequence, but also displays the same enzymatic and immunological features of the brain endooligopeptidase A, isolated from the cytosol of rabbit brain in the early 70s. Our studies also show that the NUDEL-oligopeptidase activity is predominant in the central nervous tissue of the rat, while substantial activity was also detected in the cytosol of testes, skeletal muscle and liver. Métodos e Resultados: In this study, we attempt to distinguish rNUDEL from rTOP (thimet oligopeptidase) and rNL (neurolisin) using a series of internally quenched fluorescence substrates derived from bradykinin. The results showed that, for most amino acid substitutions, the changes in the specificity of the rat rEOPA were similar to those observed for the rTOP and the rNL. However, NUDEL could be unambiguously identified in tissue extracts, using aNUDEL, thus allowing distinguishing NUDEL from TOP and NL. Conclusões: We concluded that NUDEL displays the same enzymatic and immunological features of the brain endooligopeptidase A. Apoio Financeiro: CAPES, FAPESP 01.03.058 MODULAÇÃO DA SÍNTESE DE NEUROPEPTÍDEOS NOS NÚCLEOS DO TRACTO SOLITÁRIO E PARAVENTRICULAR DE RATOS SUBMETIDOS À

ALCOOLIZAÇÃO AGUDA E CRÔNICA. Silveira, G. A. da **; Fior-Chadi, D. R.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP; Fisiologia - IB, USP. Objetivo: Este estudo analisou os efeitos da ingestão aguda e crônica do álcool na síntese de neuropeptídeos nos núcleos do tracto solitário (NTS) e do paraventricular do hipotálamo (NPV) de ratos. Métodos e Resultados: Ratos adultos jovens foram divididos em dois grupos pareados por peso. Os animais do grupo álcool (dieta líquida hiperprotéica ad libitum contendo 37,5% de valores calóricos em etanol) e animais do grupo controle (quantidade isocalórica de dieta líquida contendo maltose dextrina em substituíção ao etanol) por 3 ou 28 dias. Ao término do período dos tratamentos os animais foram submetidos ao registro da pressão arterial de cauda. Técnicas de imunohistoquímica e de hibridização in situ foram utilizadas e quantificadas por análise microdensitométrica de imagem. Resultados: A Alcoolização crônica elevou a pressão arterial de cauda dos ratos em 21,5% (p< 0,01) enquanto a alcoolização aguda não. Reduções de 11% (p<0,01) na área e de 14% (P<0,01) nos tons de cinza da imunorreatividade (IR) da proteína relacionada ao gene da calcitonina (CGRP) no NTS foram observadas no grupo álcool em 3 dias de alcoolização. Não foram observadas alterações no grupo de 28 dias. O sinal do RNA mensageiro (RNAm) não alterou no NTS dos animais experimentais. A análise da ga lanina revelou aumento de 37% (p<0,05) na área de IR e de 89% (p<005) no sinal do RNAm no NPV dos animais alcoolizados por 28 dias. Foi observado aumento de 52% (p<0,05) na área e tendência de aumento de 13% (p=0,05) nos tons de cinza específicos da IR da substância P no NTS do grupo álcool 28 dias. Aumentos de 25% (p<0,05) na área e de 12% (p<0,01) nos tons de cinza da IR da substância P foram encontrados no NPV dos ratos cronicamente alcoolizados. Conclusões: O alcoolismo agudo e crônico altera a neurotransmissão peptidérgica nas áreas centrais envolvidas com o controle cardiovascular. Apoio Financeiro: FAPESP 01.03.059 EFEITOS DO TRATAMENTO CRÔNICO COM AMANTADINA NO COMPORTAMENTO SEXUAL DE RATOS E EXPRESSÃO DA TIROSINA HIDROXILASE NO SISTEMA NERVOSO CENTRAL. Ferraz, M. M. D. **; Almeida, O. M. M. S. de; de Oliveira Skinner, G. *; Fernandes dos Santos, D. *; Ferraz, M. R.; Farmacologia e Psicobiologia, UERJ. Objetivo: O sistema dopaminérgico está implicado no controle central da resposta sexual. O presente estudo tem por objetivo investigar os efeitos do tratamento crônico com amantadina, fármaco que aumenta a liberação de dopamina no sistema nervoso central, na resposta sexual de ratos e na expressão da enzima tirosina hidroxilase (TH) no mesencéfalo. Métodos e Resultados: Utilizou-se sessenta ratos machos Wistar, adultos, mantidos em condições controladas de temperatura e iluminação. Os animais foram divididos em três grupos, respectivamente tratados com veículo ou amantadina (2,5 ou 25 mg/kg) durante 21 dias. Foram realizados quatro testes comportamentais com intervalo de 7 dias, antes e durante o tratamento farmacológico (T 7, T14 e T21 dias). Imediatamente após o último teste, os animais foram anestesiados, e perfundidos com PA 4%, sendo os cérebros removidos e cortados em criostato. Após estes procedimentos, anticorpos contra TH foram empregados com técnicas imunohistoquímicas para revelar o seu padrão de expressão na substância nigra. Os resultados foram analisados estatisticamente através do teste ANOVA, seguido do teste Student Newman-Keuls. O tratamento crônico com amantadina (21 dias) reduziu as latências de

intromissão (75,5 ± 18 e 37,1 ± 3) e de ejaculação (5,2 ± 0,5 e 4,2 ± 0,4), e elevou a eficiência copulatória (48,5 ± 4 e 61,4 ± 3). Nos animais tratados com amantadina observou-se uma redução no número de corpos celulares marcados para TH na substância nigra, e um aumento na marcação em plexos. Conclusões: Os resultados apresentados sugerem que o tratamento crônico com amantadina facilita ambos os componentes motivacional e consumatório da resposta sexual de ratos, e que este efeito está provavelmente relacionado ao aumento na atividade dopaminérgica central. Apoio Financeiro: FAPERJ 01.03.060 INIBIÇÃO DA COLINA ACETILTRANSFERASE (CHAT) POR AMINOÁCIDOS EXCITATÓRIOS (AAE): POSSÍVEL EFEITO PROTETOR POR AGENTES ANTIOXIDANTES. Nunes-Tavares, N.; Brandão Vieira, A. P. *; Loureiro dos Santos, N.; Fialho de Mello, M. C.; Garcia de Mello, F.; Biofísica, UFRJ; Biofísica - BL C, UFRJ; Biofísica CCS, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, UFRJ. Objetivo: Culturas mistas, de células retinianas são resistentes à ação tóxica de AAEs. Entretanto, quando essas culturas são mantidas na presença desses aminoácidos por algumas horas, observa-se uma redução da atividade da ChAT, enzima responsável pela síntese de acetilcolina no sistema nervoso. Esse efeito não parece ser devido à destruição de neurônios colinérgicos e sim a uma inativação da enzima. Evidências recentes mostram também que peptídeos amiloidogênicos (Aß), envolvidos com a doença de Alzheimer, quando colocados em culturas de neurônios retinianos parecem aumentar o teor de AEE no meio de cultivo. Neste trabalho estudamos o efeito de AAEs e Aß sobre a atividade da ChAT em culturas densas de células de retina embrionária. Métodos e Resultados: Culturas foram preparadas a partir de embriões com 8 dias pós-fecundação na densidade de 40 X 106 células /placa de 35mm. Após 7 dias de cultivo, as culturas foram tratadas com AAE ou com Aß fibrilar na presença ou ausência de antagonistas seletivos de receptores de AAEs. Aß1-40 reduziu em cerca de 85% a atividade da enzima. Da mesma forma, o tratamento de culturas com AAEs resultou em uma redução de 80% da atividade enzimática. Esse efeito foi inteiramente bloqueado quando o tratamento com o peptídeo ou AAEs foi feito na presença dos antagonistas MK801 (10 µM) e DNQX (100 µM), indicando que o efeito de Aß1-40 se dá por intermédio da ativação de receptores de AAEs. O efeito de AAE sobre a ChAT foi parcialmente reduzido quando as culturas foram expostas a ascorbato ou a vitamina E. Conclusões: Esses dados constituem evidências de que peptídeos amiloidogênicos e AAEs têm papel importante na disfunção colinérgica no SNC, sendo esta uma das características da doença de Alzheimer. Apontam também para um possível efeito protetor do ascorbato e Vit.E sobre a ação de AAEs e Aß em neurônios colinérgicos. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX, CEPEG/UFRJ 01.03.061 ANTIOXIDANTES PREVINEM O EFEITO DO ÁCIDO OCTANÓICO SOBRE A ATIVIDADE DA NA+,K+-ATPASE EM CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS

JOVENS. Reis de Assis, D. **; Maria, R. de C. *; Wyse, A. T. S.; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; Ciências Biológicas - Bioquímica, UFRGS. Objetivo: Ácido octanóico (AO) é o principal metabólito que se acumula nos tecidos de pacientes com deficiência da desidrogenase de acilas de cadeia média (MCAD). Essa doença caracteriza-se predominantemente por sintomas neurológicos. Trabalhos anteriores demonstraram que o AO inibe a atividade da Na+,K+-ATPase (J. Neurochem. 52(4): 1197, 1989; Pediatr. Res. 14: 844, 1980), mas não demonstraram os mecanismos envolvidos neste efeito. Nosso objetivo foi investigar os mecanismos envolvidos no efeito inibitório do AO sobre a atividade da Na+,K+-ATPase de córtex cerebral de ratos jovens. Métodos e Resultados: Determinamos as atividades da Na+,K+-ATPase em homogeneizado e em membrana plasmática sináptica de córtex cerebral de ratos Wistar de 30 dias de idade na presença de AO (3mM), glutationa (1 mM) (GSH) ou AO (3 mM)+ trolox (1mM). Em homogeneizado verificamos que o AO inibe a enzima e que tal efeito foi parcialmente prevenido por glutationa e totalmente prevenido por trolox [média controles=100% (4,06 µ mol Pi/h. mg proteína) / média GSH=103,5% σ =9,2 /média trolox=94,3% σ =11,5 / média AO=86,4% / média AO+GSH=89,2% / média AO+trolox=101,72% F(5,24)=2,863 p < 0,05], o mesmo ocorrendo em membrana plasmática isolada [ média controles=100% (1632,5 nmol Pi/h. mg proteína) / média GSH=93,96% σ =9,2 / média trolox=83,20% σ =11,9 / média AO=69% σ =4,5 / média AO+GSH=78,6% σ =13,9 / média AO+trolox=87,3 % σ =6,4 F(5,29)=2,993 p < 0,05]. Conclusões: Nossos dados sugerem que o AO poderia inibir a Na+,K+-ATPase via formação de radicais livres e/ou oxidar grupos SH necessários à atividade da enzima. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, PRONEX 01.03.062 EFEITO DE GMP E GLUTAMATO NA MORTE CELULAR POR APOPTOSE EM ASTRÓCITOS CEREBELARES EM CULTURA Francisco, S. R. S. **; Mendes de Aguiar, C. B. N. **; Costa-Silva, B. *; Gabilan, N. H.; Trentin, A. G.; Tasca, C. I.; Biologia, UFSC; Biologia Celular - Embriologia e Genética, UFSC; Biologia Molecular, UFSC; Bioquímica - CCB, UFSC. Objetivo: Os nucleosídeos e nucleotídeos da guanina desempenham diversas ações extracelulares, como a interação com receptores e modulação da transmissão glutamatérgica, e indução de efeitos tróficos em neurônios e astrócitos. Sendo os astrócitos responsáveis pela retirada de glutamato da fenda sináptica e a principal fonte cerebral de purinas, nós investigamos se guanosina 5`-monofosfato (GMP) exerce ação protetora contra a toxicidade induzida pelo glutamato (Glu) em astrócitos. Métodos e Resultados: Culturas de astrócitos cerebelares obtidas de ratos recém-nascidos foram tratadas com Glu 1 ou 10mM, GMP 1µM, 100µM ou 1mM, ou Glu 10mM + GMP 1mM (Glu+GMP) por 24 ou 48 horas, em DMEM/F12. A alteração da permeabilidade de membrana foi avaliada pela liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH) e a análise morfológica realizada por microscopia por contraste de fase. A morte celular por apoptose foi observada pela condensação da cromatina visualizada e fotografada após coloração com Hoescht 33342. Glu e GMP não induziram liberação da LDH, em nenhuma das concentrações utilizadas. Glu 1 ou 10mM induziram aumento em relação aos controles, no número de

células apoptóticas após 24h de tratamento. Astrócitos tratados com Glu 1mM e 10mM por 48h, apresentaram uma redução de 45% e 50% (n=4, p<0,05) no número de células apoptóticas em relação ao observado em 24h, respectivamente. O tratamento com GMP 1µM, 100µM ou 1mM não alterou a porcentagem de células apoptóticas em relação ao controle. Em astrócitos tratados com Glu+GMP por 24h, observou-se uma redução de 48% (n=4, p<0,05) no número de células apoptóticas em relação aos astrócitos tratados com Glu 10mM. Conclusões: Glu não induz alteração na permeabilidade da membrana de astrócitos, mas promove apoptose em astrócitos tratados por 24h. GMP (1mM) reverte a morte celular por apoptose induzida por Glu (10mM) em culturas de astrócitos cerebelares. Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PROCAD 01.03.063 CORRELAÇÃO ENTRE A ATIVIDADE DA ORNITINA DESCARBOXILASE E A PROLIFERAÇÃO DO TOXOPLASMA GONDII EM CULTURAS DE CÉLULAS RETINIANAS. Pessôa, C. N. **; Moraes, A. M. M. **; Vommaro, R. C.; De Souza, W.; Garcia de Mello, F.; Hokoç, J. N.; Biofísica - BL C, UFRJ; Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, UFRJ; Neurobiologia - IBCCF, UFRJ. Objetivo: O Toxoplasma gondii é a maior causa de retinocoroidite em humanos, sendo na maioria dos casos, resultado de uma infecção congênita. Este protozoário, parasita intracelular obrigatório, depende do microambiente da célula hospedeira para proliferar. O T. gondii não apresenta atividade da ornitina descarboxilase (ODC). Esta enzima é a principal via da produção de putrescina e poliaminas, substancias necessárias à proliferação de qualquer tipo celular. Neste estudo investigamos a habilidade do Toxoplasma gondii em infectar tecidos retinianos durante o desenvolvimento, período no qual normalmente ocorrem mudanças nas concentrações de poliaminas e putrescina. Métodos e Resultados: Em nossos experimentos foram utilizadas retinas de embrião de galinha (White leghorn) de 5 a 9 dias, mantidas em estufa a 37°C por 2 a 6 dias, até a confluência. Foram realizadas culturas densas em monocamada e culturas de explante, as quais foram mantidas em meio DMEM com 5% de soro fetal bovino. As culturas foram infectadas com 4x105 taquizoítas por uma hora, e a proliferação foi medida através da incorporação de [3H]-timidina após 72 horas. A atividade da enzima ornitina descarboxilase (ODC) foi determinada pela medida da produção de CO2 [1-14C]-ornitina. Nossos resultados demonstraram que a proliferação do taquizoíta foi maior nas idades que expressaram maior atividade da ODC. A adição de inibidores da enzima 48h antes e alguns minutos após a interação com o parasita foi capaz de reduzir a proliferação. Conclusões: Nossos dados sugerem uma correlação direta entre a biossíntese de poliaminas na retina e a proliferação do T. gondii. Isto está de acordo com a observação de que a maioria dos casos de retinocoroidite em pacientes imunocompetentes é de origem congênita, periodo no qual a concentração de poliaminas e putrescina esta mais elevada na retina do embrião. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX 01.03.064

IMPORTANCE OF THE PRPC-STI1 INTERACTION FOR THE NEURONAL PLASTICITY MECHANISM Lopes, M. H. **; Noeli Maroso Hajj, G. **; Muras, A. G. **; Martins, V.; Brentani, R. R.; Bioquímica e Biologia Molecular, INST.LUDWIG; Inflamação, INST.LUDWIG; Biologia Celular, LUDWIG INST.FOR CANCER RESEARCH; Bioquímica e Biologia Molecular, LUDWIG INST.FOR CANCER RESEARCH. Objetivo: Prions are infectious agents responsible for transmissible spongiform encephalopathies (TSE), which are derived by a poorly understood post-translational mechanisms from the normal host encoded PrPc. We have found that PrPc binds laminin (LN), and this interaction affects neuronal cell adhesion, neurite formation and maintenance (Mol. Brain. Res.76:85-92, 2000: FEBS Letters, 482(3):257-60, 2000). Recently, we have also shown that the PrPc binds STI1 (stress inducible protein 1) and this interaction induces neuroprotective signals that rescue cells from apoptosis (EMBO J. 21(13):3307-16, 2002). Murine STI1 is a co-chaperone protein, first described in a macromolecular complex with Hsp-70 and Hsp90 chaperone family proteins. Herein, our objective is to investigate the participation of PrPc-STI1 on neuronal differentiation. Métodos e Resultados: Recombinant PrPc and STI1 showed specific and high affinity binding both in vitro (Kd 0,8x10-7M) and at the cellular level. The interactions sites were mapped to amino acids 113-128 from PrPc and 230-245 from STI1 (EMBO J. 21(13):3307-16, 2002). To investigate whether STI1 participates in the neuronal plasticity, we added recombinant STI1 and anti-PrPc antibodies to primary cultures of hippocampal neurons from either wild-type or PrPc ablated (Prn-p-/-) mice. STI1 was able to elicit neuritogenesis in wild-type hippocampal neurons which can be inhibited by anti- PrPc. However no neuritogenesis was observed when cells from Prn-p-/- animals were plated in the presence of STI1. Conclusões: We provide evidence for the capacity of PrPc to bind STI1 and mediate neuritogenesis. Further work is required to determine the role of STI1 in PrPc -LN complex and the intracellular signaling pathway triggered by the PrPc-STI1 interaction responsible for neurite outgrowth. Apoio Financeiro: FAPESP 01.03.065 EFEITOS DOS TRATAMENTOS COM ESTRESSE CRÔNICO E LÍTIO SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO EM DIFERENTES ESTRUTURAS CEREBRAIS. Vasconcellos, A. P. S. de **; Battistella Nieto, F. *; Crema, L. *; Prediger, M. E. **; Rocha, E. R. da; Dalmaz, C.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Neurociências, UFRGS. Objetivo: Visto que a exposição prolongada a situações de estresse pode desencadear danos neurais via hiperestimulação do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal e aumento da secreção de glicocorticóides, sugerindo-se que haja envolvimento de radicais livres nesta patogenicidade, e considerando que os sais de lítio tem sido apontados como potenciais agentes neuroprotetores, especialmente por sua ação moduladora de fatores envolvidos com estresse oxidativo, o objetivo deste trabalho é verificar a presença de estresse oxidativo em cérebro de ratos estressados e um possível efeito do tratamento crônico com lítio. Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos e adultos foram divididos em dois grupos, Controles (C) e Estressados (E), e sub-divididos em grupos tratados com ração padrão ou ração especial contendo cloreto de lítio por 40 dias. O modelo de estresse utilizado foi o de Estresse Crônico Variável. Ao final do tratamento,

foram obtidas e homogeneizadas amostras de córtex cerebral e hipocampo, e a avaliação do estresse oxidativo foi feita pelas medidas de Reatividade Antioxidante Total; modificação oxidativa do "probe" exógeno, 2’7’-diclorofluoresceína diacetato, que ocorre via ação de radicais livres; e através da avaliação da Peroxidação Lipídica pela reação com o Ácido Tiobarbitúrico. A análise estatística foi feita por ANOVA de duas vias. Não foram observados efeitos significativos em córtex cerebral (P>0,05 para todos os ensaios e grupos, n=6 animais/grupo). Observou-se um aumento significativo nas Espécies Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico no hipocampo de ratos estressados (médias + EPM (em pmolMDA/mg proteína): C = 0,330 + 0,048; E = 0,376 + 0,032, n=6, P<0,05). Conclusões: Estes resultados sugerem que os danos neuronais relatados em situações de estresse crônico podem envolver estresse oxidativo, em especial peroxidação lipídica, não sofrendo influência do tratamento crônico com lítio. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS 01.03.066 DIFFERENT TIME OF NMDA PRECONDITIONING PREVENT SEIZURES INDUCED BY QUINOLINIC ACID IN MICE. Ganzella, M. *; Rodrigues Boeck, C. **; Lottermann, A. *; Souza, D. O.; Vendite, D.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Glutamate is the main excitatory neurotransmitter in the mammalian CNS and has been implicated in many important physiological process, as well as in pathological conditions including seizures and epilepsy. Preconditioning with a sub toxic concentrations of NMDA (N-methyl-D-Aspartate) protected neurons against the apoptotic death induced by high doses of this agonist. In this study, we have investigated the effectiveness of the NMDA preconditioning treatment on seizures induced by Quinolinic Acid (QA - a potent endogenous glutamatergic NMDA receptor agonist) in mice, in different time of preconditioning. Métodos e Resultados: Male adult albino (30–40 g) mice were used. In a stereotaxic apparatus a cannula for intracerebroventricular (i.c.v.) infusion was implanted (0 hour). Saline (0,9%) or NMDA (75 mg/kg) in a low non-subconvulsant dose, were administrated (24 hours) intraperitoneally (i.p.) and the behaviors of the mice were observed for 30 min QA (4 ml, 9 mM) was infused i.c.v. (30 min, 1, 8, 24 and 48 hours after administration of NMDA) and the mice were observed for 10 min for the occurrence of behavior seizures. The mice were decapitated, the hippocampus was dissected out and micro sliced to analyze the cells viability (24 hours after QA infusion). The 30 min (n=10), 1 hour (n=10), and 8 hours (n=7) NMDA pretreatments had no effects against the seizures induced by QA. The 24 hours (n=13) and 48 hours (n=10) of NMDA preconditionig showed neuroprotection againts the seizures, with 54% and 50% of protection, respectively (P < 0.005). Beside this, the NMDA preconditioning (24 and 48 hours) protected the cellular death evoked by convulsivante dose of QA in hippocampal slice from mice treated. Conclusões: The NMDA preconditioning (24 and 48 hours) neuroprotected and had effect against seizures evoked by QA in mices, but had no effect in acute treatment (30 min, 1 and 8 hours). Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FINEP, PRONEX 01.03.067

THE EXTRACELLULAR MATRIX PROTEIN VITRONECTIN IS ABLE TO INTERACT WITH THE CELLULAR PRION PROTEIN PROMOTING AXONAL GROWTH Noeli Maroso Hajj, G. **; Marques Zanata, S.; Lopes, M. H. **; Veiga, S. S.; Martins, V.; Bioquímica e Biologia Molecular, INST.LUDWIG; Biologia Celular, LUDWIG INST.FOR CANCER RESEARCH; Bioquímica e Biologia Molecular, LUDWIG INST.FOR CANCER RESEARCH; Biologia Celular, UFPR; Patologia, UFPR. Objetivo: The cellular prion protein (PrPc) is the normal isoform of the infectious protein (PrPsc), which has been involved in a number of neurodegenerative diseases. The physiological functions of PrPc include protection against oxidative stress and cellular signaling (EMBO J. 21(13):3317-26, 2002; EMBO J., 21(13): 3307-16, 2002). The protein localization, in elongating axons and in the synapse, suggests a role for PrPc in axonal growth, and its has been also shown that the interaction with laminin promotes neurite outgrowth and maintenance (Mol. Brain Res., 76:85-92, 2000; FEBS Letters, 482(3):257-60, 2000). We evaluated the association of PrPc with vitronectin, another extracellular matrix protein. The neurotrophic proprieties of this protein include neurite growth in PC12 cell lineage, motoneuron and cerebellar granule cell differentiation. Métodos e Resultados: We have established binding between PrPc and vitronectin in vitro with a Kd of 12 nM. We have also mapped in vitro the interaction sites in both molecules, between residues 105-119 in the PrPc and residues 309-322. There is a high level of co- localization of both proteins, as demonstrated by immunohistochemistry, in the brain, medulla and dorsal root ganglia. Furthermore, we show that vitronectin is able to promote axonal growth in dorsal root ganglia, a phenomenon that can be inhibited by anti-PrPc antibody. Vitronectin peptide 309-322, which represents the PrPc binding site in the vitronectin molecule is also able to elicit the same response as the whole molecule. Besides that, this phenomenon is not observed in PrPc ablated DRG. Conclusões: We can conclude that PrPc is able to bind the extracellular matrix protein vitronectin through specific binding sites. In addition, both proteins co- localize in the DRG and the interaction between them can mediate axonal growth. Apoio Financeiro: FAPESP 01.03.068 EFEITO IN VITRO DE DROGAS ANTICONVULSIVANTES SOBRE AS ATIVIDADES ECTONUCLEOTIDÁSICAS DE HIPOCAMPO E CÓRTEX CEREBRAL EM RATOS. Cognato, G. de P. **; Da Silva, R. S. **; Bruno, A. N. **; Battastini, A. M. O.; Sarkis, J. J. de F.; Bonan, C. D.; Ciências Fisiológicas, PUC-RS; Bioquímica - ICBS, UFRGS. Objetivo: Estudos têm demonstrado que a adenosina pode agir como um anticonvulsivante endógeno. A adenosina é produzida através da degradação do ATP extracelular na fenda sináptica pela ação das enzimas ecto-ATP difosfoidrolase (apirase) e ecto-5′ -nucleotidase. Atualmente, existem muitas drogas antiepilépticas, como a fenitoína, o valproato e a carbamazepina. Estudos mostraram que a ação antiepiléptica dessas drogas pode ser aumentada por agonistas dos receptores adenosinérgicos. Considerando estas informações, torna-se interessante investigar o efeito in vitro destas drogas antiepilépticas sobre as atividades enzimáticas que produzem adenosina na fenda sináptica. Métodos e Resultados: Os sinaptossomas do córtex cerebral e do hipocampo de ratos foram isolados após a decapitação dos animais. A atividade enzimática foi determinada pelo fosfato inorgânico liberado. As drogas antiepilépticas foram adicionadas ao meio de reação em diferentes concentrações (1 a 1000µ M). Os resultados da fenitoína e do valproato mostram que estes não possuem influência sobre as atividades apirásica e 5′ -nucleotidásica em sinaptossomas de

hipocampo e córtex cerebral de ratos. Resultados preliminares da carbamazepina indicam uma ativação da atividade 5′ -nucleotidásica do córtex cerebral de ratos (1000µ M), entretanto estudos adicionais utilizando o córtex cerebral e o hipocampo de ratos serão feitos para melhor elucidar o efeito deste composto sobre estas enzimas. Conclusões: A fenitoína e o valproato foram incapazes de modificar as atividades ectonucleotidásicas testadas, enquanto que a carbamazepina parece aumentar a atividade 5′ -nucleotidásica. Este efeito talvez indique uma provável modulação dos níveis de adenosina na fenda sináptica pela carbamazepina. Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PUC - RS 01.03.069 NOVO ESTABELECIMENTO DE ENSAIOS RADIORECEPTORES D1 E D2 EM SUBSTÂNCIA CINZENTA DE CÉREBRO HUMANO. Souza Alcântara Jardim, L. **; Singer, A.; Gattaz, W. F.; Psiquiatria, FMUSP; Psiquiatria, USP. Objetivo: A ligação de um radioligante a seu receptor específico depende do tecido utilizado no ensaio, assim, pretende-se estabelecer ensaios radioreceptores D1 e D2 em córtex frontal, temporal e em estriado humano, devido ao grande interesse destas áreas no estudo da Esquizofrenia. Métodos e Resultados: Os radioligantes usados foram: 3H-SCH23390 (D1) e 3H-Spiperone/Sulpiride (D2). Os ensaios foram realizados utilizando filtração a vácuo através de filtros de fibra de vidro para a separação do excesso de radioligante do complexo receptor-radioligante, e os cálculos de parâmetros e constantes foram feitos com o uso do programa GraphPad®Prism. A densidade dos receptores de dopamina é muito baixa em córtex frontal e temporal. Nestas áreas, a densidade de receptores de serotonina (5-HT2A) é maior que os de dopamina. Para prevenir a interação com receptores 5-HT2A é necessário usar ketanserine (antagonista de 5-HT2A), então fizemos uma curva de inibição para encontrar a melhor concentração para bloquear os receptores 5-HT2A. Para ambos receptores, D1 e D2, a melhor concentração foi de 100 nM (em tecido estriatal não é necessário). A concentração ótima de proteína em córtex frontal foi de 10 mg ww/mL (D1) e 10-12 mg ww/mL (D2), e em estriado foi de 5 mg ww/mL (D1) e 8 mg ww/mL (D2). Medidas de densidade de receptores (Bmax) e de constante de afinidade (KD) mostraram para D1 KD = 1,60 nM (córtex frontal) e 0,96 nM (estriado); para D2 KD = 8,5 nM (estriado); os experimentos em córtex frontal mostraram que é necessário usar concentrações maiores de radioligante para possibilitar o cálculo correto de Bmax e KD. Conclusões: Os ensaios são reprodutíveis e fáceis de realizar, exceto D2 em regiões corticais, onde ainda não foi possível determinar os valores de KD e Bmax. Todos estes experimentos têm sido feitos para encontrar as melhores condições dos ensaios radioreceptores para investigar as relações entre atividade da PLA2, fluidez de membrana e afinidade/densidade de receptores D1 e D2 das áreas cerebrais acima mencionadas. Apoio Financeiro: FAPESP 01.03.070 MEDIDA DAS CONCENTRAÇÕES INTRACELULARES DE CA2+ E NA+ E DOS VALORES DE PH EM PLAQUETAS HUMANAS USANDO SONDAS

FLOURESCENTES. A. Zainaghi, I.; Souza Alcântara Jardim, L. **; Singer, A.; Gattaz, W. F.; Psiquiatria, FMUSP; Psiquiatria, USP. Objetivo: Vários estudos revelaram alterações nos valores de pH e Ca2+ intracelular em plaquetas de pacientes com desordens psiquiátricas como depressão e doença de Alzheimer. Nesta última, a alteração do Ca2+ seria bifásica, com uma diminuição dos níveis intracelulares nos estágios iniciais e um aumento nos estágios avançados da doença. Entre outros fatores, a acidificação do citoplasma e a liberação de ácido araquidônico levam a ativação do trocador Na+/H+, que por sua vez participa da regulação do influxo de Ca2+. O Ca2+ intracelular é fundamental para a cognição, já que processos como a neurotransmissão e a formação da memória são altamente dependente de Ca2+. Dessa forma, pretende-se desenvolver metodologia para medida intracelular dos íons Ca2+, Na+ e do pH, em plaquetas de sujeitos sadios para posterior aplicação em pacientes psiquiátricos. Métodos e Resultados: Foi utilizado como amostra, 10 mL de sangue fresco colhido com citrato e centrifugado para a obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP). O PRP foi incubado com os marcadores de fluorescência Fura-2/AM, BCECF/AM e SBFI/AM a 37° C para determinar a concentração intracelular de Ca2+, H+ (pH) e Na+, respectivamente. Para ativar as plaquetas foram usados trombina, e os ionóforos nigericina (K+/H+) e monansina (Na+/H+). As leituras de fluorescência correspondentes a concentração dos íons foram realizadas em espectrofotômetro de dupla emissão da Photon Technology International (PTI). Nossos resultados preliminares mostraram níveis basais de Ca2+ em plaquetas em torno de 32,9 nM; e Na+ em torno de 25,3 mM e valores de pH em torno de 7,24. Conclusões: Os experimentos com diferentes estimuladores de plaquetas produziram alterações nas concentrações dos íons estudados coerentes com os encontrados na literatura e valores basais também em concordância com a literatura. Apoio Financeiro: FAPESP 01.03.071 ANÁLISE DE MIOSINA-V E CAM-QUINASE II EM CÉREBRO DE APIS MELLIFERA. Moraes, V. R. A. de **; Calábria, L. K. *; Teixeira, R. R. *; Espíndola, F. S.; Genética e Bioquímica, UFU. Objetivo: Identificar miosina V e proteína quinase dependente de cálcio e calmodulina (CaM-Quinase II) em cérebro de Apis mellifera e quantificar a expressão destas proteínas no cérebro de abelha em relação aos cérebros de pintainho, rato e coelho. Métodos e Resultados: Trinta cérebros de abelha operária Apis mellifera, um cérebro de coelho, dois cérebros de rato e seis cérebros de pintainho foram congelados em nitrogênio líquido e armazenados em freezer a -80ºC. Os cérebros foram homogeneizados (H) em tampão HEPES pH 7.7 contendo EDTA/EGTA/ATP/DTT e coquetel de inibidores.Centrifugou-se 40.000 g por 40 minutos a 4º C para obtenção do sobrenadante (S). Proteínas de H e S, na mesma concentração, foram separadas em eletroforese com gel de poliacrilamida (SDS-PAGE, 5-22%) e transferidas por Western Blot para membranas de nitrocelulose. As membranas foram sondadas com anticorpo policlonal gerado contra o domínio cabeça da miosina-V de cérebro de pintainho e com um anticorpo monoclonal contra a subunidade alfa da CaM-quinase II (Transduction Labs, TL# C31620) e revelaram uma banda de 190kDa (cadeia pesada de miosina V) e 60 kDa (CaM-quinase II). O resultado da análise desintométrica (Image Master, Pharmacia) é mostrada na tabela. A quantificação revela que

miosina é mais solubilizada pelo tampão usado quando comparado com CaM-quinase com exceção do cérebro de coelho. Esses valores podem ser usados para indicar a quantidade relativa de miosina V expressa em cérebro de abelha em comparação com outros animais.

Abelha Pintainho Rato Coelho

H 9,5 38 28 35 Miosina-V

S 20 33 43 59

H 37 13 55 97 CaM-Quinase II

S 13 4 15 99

Conclusões: Os anticorpos reconhecem essas proteínas em himenópteros e podem ser ferramentas úteis na caracterização da miosina V no sistema nervoso de abelha. Com relação à sua função de motor molecular para transporte de vesículas e organelas, a miosina V é provavelmente regulada por fosforilação via CaM-quinase II.

Apoio Financeiro: UFU, FAPEMIG, Apiários Girassol

01.03.072

INFLUÊNCIA DA NICOTINA E DA MECAMELAMINA EM TESTE DE PREFERÊNCIA CONDICIONADA POR LUGAR EM PEIXES CARASSIUS AAURATUS. Brasileiro, O. S. M. **; Mattioli, R.; Fisioterapia - CCBS, UFSCar; Neurociências, UFSCar.

Objetivo: Investigar a influência da nicotina e da mecamelamina no mecanismo de aprendizagem e memória em peixes.

Métodos e Resultados: Foram utilizados 98 animais; um aquário retangular, com dimensões de 30 cm de comprimento, 10 cm de largura e 17 cm de altura, dividido ao meio em dois compartimentos, um escuro e outro claro. O experimento foi realizado em cinco dias: dia I-habituação, para atividade exploratória; dia II-preferência, para observar preferência natural do animal; dia III–treino 1, os animais receberam o reforço no compartimento branco; dia IV–treino 2, os animais receberam o reforço no compartimento branco e em seguida foram injetados; dia V–teste, foi observada a preferência do animal entre os dois compartimentos. Quatro grupos de animais foram formados de acordo com a droga administrada: veículo (n=25); nicotina 2mg/kg (n=24); mecamelamina 1mg/kg (n=25); e mecamelamina 2mg/kg (n=24). A análise estatística foi feita através da ANOVA de 2 vias seguida do teste Student-Newman-Keuls. A variável

submetida à análise foi o tempo de permanência (TP) em cada compartimento. Resultados: Em relação ao TP pós-treino, os grupos veículo (XVP=306±EPM=25;XVB= 294 ± EPM=25) e Meca1mg/kg(XM1P=293±EPM=25; XM1B=307±EPM=25) reduziram a preferência pelo compartimento preto. O grupo nicotina (XNP=363±EPM=21;XNB=237±EPM=20,75) manteve preferência pelo compartimento preto. O grupo Meca2mg/kg (XM2P=253±EPM=20;XM2B=347±EPM=20,28), inverteu a preferência entre os compartimentos, indicando facilitação da aprendizagem em relação ao grupo veículo.

Conclusões: Os resultados dos grupos veículo e Meca 1 indicam que o procedimento possibilita a aprendizagem e que a Mecamelamina na dose de 2mg/kg facilitou e a nicotina prejudicou a aprendizagem neste teste. Estes resultados podem ser conseqüência do envolvimento colinérgico no comportamento alimentar.

Apoio Financeiro: CAPES

01.03.073

EFEITO DO TRATAMENTO AGUDO E CRÔNICO COM 17 B -ESTRADIOL EM FATIAS HIPOCAMPAIS DE RATAS OVARIECTOMIZADAS SUBMETIDAS A ESTRESSE E EXPOSTAS A UM MODELO IN VITRO DE ISQUEMIA Calegaro Nassif, M. *; Cimarosti, H. I. **; Balk, R. **; Zamin, L. L. *; Frozza, R. *; Buzin, L. *; Dalmaz, C.; Salbego, C.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Neurociências, UFRGS.

Objetivo: Estudar o efeito de diferentes tratamentos com 17 β -estradiol em fatias hipocampais de ratas ovariectomizadas (ovx) submetidas a estresse e expostas a um modelo in vitro de isquemia (privação de oxigênio e glicose - POG).

Métodos e Resultados: Ratas adultas, ovx, receberam implantes subcutâneos de cápsulas de sillastic contendo 10 µ L de 17 β -estradiol a 5% ou veículo (óleo), sendo sub-dividas em controles e estressadas (estresse por contenção 1 h/dia, por 35 dias). Fatias hipocampais dessas ratas (400 µ m) foram expostas à POG. Para o tratamento agudo, utilizou-se fatias de ratas ovx, em que o 17 β -estradiol foi adicionada ao meio nas concentrações de 0,1, 0,5 e 1 µ M e permaneceu durante (1h) e após (3h) a lesão isquêmica. O dano na membrana celular foi quantificado pela liberação de lactato desidrogenase (LDH). Com o tratamento crônico com estradiol, houve uma redução significativa (19%+5) da liberação de LDH pós-insulto, em relação às fatias de ratas controle, indicando um efeito neuroprotetor (n=10). Com o estresse, observou-se uma tendência a um aumento (11%) da liberação de LDH pós-insulto em relação aos respectivos controles. No tratamento agudo, o 17 β -estradiol, na dose de 0,1 µ M, reduziu significativamente (22%+5) a liberação de LDH (n=10). Testes ANOVA-DUNCAN, P<0,05.

Conclusões: Esses resultados sugerem que o 17 β -estradiol tem efeitos neuroprotetores em um modelo in vitro de isquemia cerebral tanto em um tratamento crônico como em um agudo. Mais estudos serão realizados no sentido de esclarecer o envolvimento do estresse neste modelo e para tentar elucidar os mecanismos pelos quais o hormônio neuroprotege.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PROPESQ

01.03.074

THE IMUNOSSUPRESSANT FK506 AND ITS EFFECTS ON SPINAL CORD CONTUSION. Andrade, M. S. R. de **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Substantial functional and morphological impairments after spinal cord lesion is promoted by secondary degeneration. Manipulation of inflammatory responses i.e. by means of imunossupressant FK506 may be of interest.

Métodos e Resultados: Adult male rats were submitted to a moderate spinal cord injury by dropping a 10g rod (25mm distance) using the NYU Impactor (Lesion Group). A group of animals were submitted to a sham operation (Sham Group). Some animals from both groups received FK506 intramuscular injection (0.5 mg/kg) daily on first week and every 48 hours on second week, while other rats received saline solution in the same fashion. The animals of Lesion Group had their bladders emptied by method of Credé and its distension checked. Motor and sensory evaluations were made using BBB Score, Combined Behavioral Score (CBS) and computerized infrared motion sensor activity monitor. The rats were sacrificed 14 or 85 days after contusion and their spinal cords frozen and sectioned. The Cresyl Violet stained sections were submitted to stereological analysis. Number of remaining neurons (RN), lesion volume (LV), total spinal cord volume (TV), lesion area (LA) and total spinal cord area (TA) were quantified. The bladder function of the animals with lesion plus FK506 returned to normal earlier than animals with lesion plus saline solution. The BBB Score showed significant difference between Sham and Lesion Groups and also between Lesion Plus FK506 Group and Lesion Plus Saline Group (p<0.001, Anova). The CBS showed differences between Lesion Plus FK506 Group and Lesion Plus Saline Group in some specific time points: 21, 28, 63 and 70 days post injury (p<0.001, Anova). The Infrared Motion Sensor demonstrated that animals treated with FK506 moved less until 28th day post injury. That pattern was inverted after this period. The lesion index (Chadi et al., Intern. J. Neuroscience, 111:137-16, 2001), which is calculated multiplying the number of remaining neurons by the lesion volume fraction (LV/LT), was not different in groups that received FK506. The same occurred with other morphological parameters analyzed like lesion volume and areal fraction (LA/TA).

Conclusões: FK506 does not alter morphological parameters of lesioned spinal cord, however it seems to accelerate the recovery after spinal cord injury by improving bladder and sensory-motor recovery.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.075

TREADMILL RUNNING PROTECTS SPINAL CORD CONTUSION FROM SECONDARY DEGENERATION Andrade, M. S. R. de **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Physical activity exerts effects on central nervous system (CNS) since exercise triggers expression of neurotrophic molecules and stimulates CNS plasticity. Furthermore, it is possible that potential protective effects promoted by physical activity on lesioned CNS depend on the injury type.

Métodos e Resultados: Adult rats, trained on a treadmill for 4 weeks, and sedentary rats were submitted to a moderate spinal cord injury by dropping a 10g rod (25mm distance) using the NYU Impactor. A group of sedentary rats were submitted to a sham operation. Rats received methypredinisolone just after the contusion and 2 hours later. Trained group has continued running on treadmill after spinal cord lesion for 4 weeks. The motor behavior was evaluated by BBB score and by a computerized infrared motion sensor activity monitor. After that period, animals were sacrificed and their spinal cords sectioned. The number of remaining neurons (RN), lesion areal fraction and lesion volume were obtained by stereological analysis methods. Decreased BBB scores were found in lesioned rats at the time-points, however a spontaneous recovery occurred post surgery. BBB score was smaller in the sedentary group compared to trained rats by 7 days post lesion (p<0.001 Anova), however no further differences were found between lesioned groups after 7 days. The infrared monitor also showed significant differences between lesioned sedentary and trained rats only at 7 days post spinal cord lesion (p<0.001, Anova). There are no significant differences in number of remaining neurons between sedentary (39x104 ± 3.84x104) and trained groups (44x104 ± 3.85x104). However, both groups are different when compared with sham group (56x104 ± 3.55x104). The lesion volume fraction [lesion volume (LV)/ total volume (TV)] were smaller in trained group than sedentary one (p<0.01, Anova Test) as well as the lesion and fraction per section (p<0.01, Anova). The lesion index (LI) was calculated multiplying the number of remaining neurons by the lesion volume fraction [LI = (LV/TV) • RN] (Chadi et al., Intern. J. Neuroscience, 111:137-16, 2001) and was more pronounced in sedentary group.

Conclusões: Physical activity may protect lesioned spinal cord from secondary degeneration and may be important for functional recovery.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.076

MODULATION OF PHOSPHOLIPASE A2 ACTIVITY IN PRIMARY CULTURES OF RAT CORTICAL NEURONS Teixeira Mendes, C. **; Forlenza, O.; Schaeffer, E. L. **; Gattaz, W. F.; Psychiatry, HCFMUSP; Psiquiatria, USP.

Objetivo: We have further investigated the modulation of the enzymatic activity in primary cortical neurons, namely the inhibition of PLA2 with MAFP and the activation with mellitin.

Métodos e Resultados: Brains of Wistar rat embryos were obtained at gestational days E18/E19 and dissected in order to isolate cortical brain tisue. Neural samples were dissociated into single cell suspensions and cultured for 3 to 4 days in Neurobasal medium prior to radio-enzymatic determination of PLA2 activity. Cultured neurons were treated with different doses of MAFP (rawging from 1µ M to 250µ M) or mellitin (1µ g/ml to 20µ g/ml) for different times. MAFP inhibited PLA2 activity in a dose-dependent fashion (maximum inhibition at concentratios of 100µ M and 250µ M). Mellitin stimulated PLA2 activity in a dose-dependent effect.

Conclusões: This study reinforces previous evidence that PLA2 plays an important role in the early development of the nervous system, and further suggests that it may be implicated in neurodevelopmental processes and the in vitro survival of neurons. The in vitro modulation of neuronal PLA2 is a useful model for the study of PLA2 metabolism and biochemistry, which can be further addressed to the investigation of the biology of neurodegenerative and neuropsychiatric disorders.

01.03.077

SPONTANEOUS WHEEL RUNNING PROTECTS NIGRAL STRIATAL DOPAMINE SYSTEM FROM 6-HYDROXYDOPAMINE NEUROTOXICITY Gomide, V. C.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Brain neurotransmission and trophism are influenced by physical activity. The effects of the spontaneous wheel running on neuronal and glial response to the experimental parkinsonism were analysed in Wistar rat.

Métodos e Resultados: Young male Wistar rats (3 weeks) were placed in individual cages with running wheels to allow spontaneous activity (running wheel group, RW, n=7) during 4 weeks. Control rats were placed in individual cages without wheels (sedentary group, Sed, n=8). After this period, rats from both groups were submitted to a striatal injection of 6-hydroxydopamine (6-OHDA, 8mg/4ml) in the left side. Lesioned rats from running wheel group continued spontaneous running during 5 weeks. Thirty-five days later, all rats were tested for apomorphine-induced rotation (APO, 0.05mg/kg-1, 75 min test), sacrificed by transcardiac perfusion and their brains were processed for tyrosine hydroxylase (TH, marker for dopamine cells and terminals), OX-42 (marker for microglia) and basic fibroblast growth factor (bFGF) immunohistochemistry. The RW increased contralateral turns (p<0.05, ANOVA, two-factor) as showed in the figure.

There is not difference in the number of TH positive neurons in the ipsilateral pars compacta of the substantia nigra (SNc) of the trained and sedentary rats. The volumeal fraction (10-2) of the nigral TH immunoreactive (ir) neuropil increased ipsilaterally (64.2±1.8 [Sed] and 75.2±1 [RW], p<0.001; 71.6±0.7 [Sed] and 75.8±_0.3 [RW], p<0.001, t-test; respectively in lateral and medial region of the SNc) and contralaterally (75.5±1.9 [Sed] and 82.2±0.6 [RW], p<0.01; 77.3±0.7 [Sed] and 80.9±=0.7 [RW], p<0.01, t-test; also respectively in lateral and medial region of the SNc) to the striatal lesion. Furthermore, physical exercise elevated the estimated total number of glial bFGF ir profiles (7115±90 [Sed] and 9468±418 [RW], p<0.001, t-test, ipsilateral and 5755±270 [Sed] and 8824±361 [RW], p<0.001, t-test, contralateral to the striatal 6-OHDA injection) as obtained by stereological measurements in the SNc.

Conclusões: The spontaneous running may protect dopaminergic system from secondary degeneration induced by 6-OHDA intrastriatal injection and promote nigral plasticity. The neurotrophic factor bFGF may participate in the trophic and plastic mechanisms.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.078

EFFECTS OF SPONTANEOUS RUNNING ON GLIAL AND NEUROCHEMICHAL PLASTICITY IN RAT BRAIN Gomide, V. C.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Physical activity triggers the expression of neurotrophins in the hipocampal formation (HF) and other brain areas which may favor local plasticity, a necessary molecular event for learning, memory and general cognitive functions. This work analysed the effects of spontaneous activity in the running wheels in the state of astroglial and microglial activation as well as in the content of nitric oxide synthase (NO) immunoreactivities (IRs).

Métodos e Resultados: Young male rats were placed in individual cages with running wheels to allow spontaneous activity (running wheel group RW, n=16) during 4 or14 days. Control rats were placed in individual cages without wheels (sedentary group SED, n=16). Immunohistochemistry was employed and quantified by means of morphometric image analysis (KS400, Zeiss). The

distance (m)/12h was: about 600 in the 4 day and 400 in the 14 day groups. The VO2 (ml/kg) was: about 6000 in the 4 day and in the 14 day groups. The VCO2 was: about 5000 in the 4 day and in the 14 day groups. The area of the GFAP IR increased (p<0.05, indication of astroglial reaction) in the CA1, CA2, dentate gyrus (DG) and stratus lacunosun (SL) of the HF of the 14 day RW rats but not in the frontal region of the cerebral cortex (FroCo) and nucleus caudate putamen (CP) of these animals. Furthermore, GFAP IR did not change in the above studied regions of the 4 day RW rats. The area of the OX42 IR increased (p<0.05, indication of microglial reaction) in the CA1, CA2, DG, SL, FroCo and CP of the 14 day trained rats. OX42 IR was also found to be elevated (p<0.05) in the CA2, DG, SL and CP, but not in the FroCo of 4 day RW rats. NOS immunoreactive (ir) neurons were observed in the subregions of the HF, CP, neocortex and Acc. Many NOS ir terminals were seen in the Acc. Quantitative analysis demonstrated a decreased number of NOS ir neurons in the CP and Acc of 4 days RW trained rats.

Conclusões: The results indicated that RW running interferes with the glial and neurochemical plasticity in rat brain.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.079

INTRAHIPOCAMPAL ADMINISTRATION OF ALPHA-KETO-BETA-METHYL-N-VALERIC ACID CAUSES BEHAVIORAL DEFICITS IN RATS IN A DOSE-DEPENDENT MANNER Figueiredo Bueno, A. R. *; Brinco, F. *; Mallmann, F. *; Vasques, V. **; Wajner, M.; Bioquímica, UFRGS; -, ULBRA.

Objetivo: Maple syrup urine disease (MSUD) is an inborn metabolic defect characterized by tissue elevation in the levels of the branched chain alfa-keto acids, hydroxy acids and amino acids. In the present study we investigated the effect of various doses (0.5-2.5M) of the α-keto-β-methyl-n-valeric acid (KMV), a metabolite accumulating in MSUD, on the performance of memory retention in rats through non aversive and aversive behavioral tasks.

Métodos e Resultados: KMV was infused into the dorsal hippocampus of Wistar adult male rats 10 min. before the 1st session (training) on the inhibitory avoidance (IA) and the open field habituation tasks. The test sessions were performed 24 h later. In the IA (39 animals), all tested doses of KMV provoked deficits in the performance of rats (step-down latencies) at testing session. In the open field, rats treated with KMV did not present habituation, i.e. they did not decrease the number of rearings (exploratory activity) in the testing session (KMV 0.5 training=19.6± 6.8; testing=18.3± 8.4; KMV 1.0 training= 22.5± 8.8; testing= 21.8± 8.8; KMV 2.5 training=11.4± 5.1; testing=16.2± 5.0) [F(3,38)=3.851, p<0.05].

Conclusões: The results indicate that the intrahipocampal injection of KMV provokes a deficit of learning/memory in aversive and non aversive behavioral tasks, which was dose-dependent in the open field habituation task. It is

proposed that increased brain concentrations of KMV may be involved in the learning disabilities of MSUD patients.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, PRONEX

01.03.080

EBSELEN PROTEGE CONTRA A INIBIÇÃO DA CAPTAÇÃO DE GLUTAMATO INDUZIDA POR METILMERCÚRIO EM FATIAS DE CÓRTEX DE CAMUNDONGOS ADULTOS Duarte Schwalm, F. *; Farina, M. **; Frizzo, M.; Soares, F. A. A. **; Oliveira Dietrich, M. *; Zeni, G.; Rocha, J. B. T. da; Souza, D. O.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; ICB, UFRGS; Bioquímica, UFSM; Química, UFSM.

Objetivo: O glutamato é o principal neurotransmissor excitatório no sistema nervoso central de mamíferos. A modulação dos níveis extracelulares de glutamato é realizada principalmente pelos astrócitos. O metilmercúrio (MeHg) é um composto neurotóxico e a inibição da captação astrocitária de glutamato tem sido apontada como um mecanismo importante envolvido neste efeito. O ebselen é um composto orgânico de selênio que possui atividade anti-oxidante. O principal objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da exposição oral de camundongos adultos ao MeHg na captação de glutamato por fatias de córtex cerebral e avaliar o possível efeito protetor do ebselen contra as ações do MeHg.

Métodos e Resultados: Camundongos adultos foram separados em seis grupos e tratados oralmente com MeHg (0, 10 ou 40 mg MeHg/L) e/ou ebselen (uma dose diária e subcutânea de 20 mg/Kg,). As fatias do córtex cerebral esquerdo (0,4 mm) foram incubadas durante 7 minutos com glutamato marcado e, após, quantificado no cintilador. O hemisfério cerebral direito foi homogenizado para contagem da atividade da glutationa peroxidase e da catalase. O MeHg causou uma diminuição dose-dependente na captação do glutamato e o ebselen, que não apresentou efeito per se, reverteu esse efeito. O MeHg diminuiu a atividade da enzima glutationa peroxidase e aumentou a atividade da catalase, efeitos que foram prevenidos pelo ebselen.

Conclusões: Este estudo indica que a inibição da captação de glutamato in vivo pelo MeHg esteja relacionado com o aumento da produção de H2O2 e o efeito protetor do ebselen contra esta inibição pode estar relacionado com a sua habilidade de detoxificar H2O2.

Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PRONEX, PIBIC

01.03.081

EFEITO DO METILMERCÚRIO NA CAPTAÇÃO DE GLUTAMATO EM CÉREBRO DE RATOS EM IDADE LACTENTE Duarte Schwalm, F. *; Farina, M. **; Frizzo, M.; Brusque, A. M. da C. **; Souza Dahm, K. C. de *; Zeni, G.; Rocha, J. B. T. da; Souza, D. O.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; ICB, UFRGS; Bioquímica, UFSM; Química, UFSM.

Objetivo: Durante o período pós-natal, o cérebro é extremamente sensível a agentes externos. Neste estudo, foi investigado o efeito de injeções subcutâneas de metilmercúrio (MeHg) na captação de glutamato por fatias de córtex cerebral e na liberação de glutamato por sinaptossomas de ratos em idade lactente. Além disso, foi estudado o possível papel protetor do ebselen contra os efeitos neurotóxicos do MeHg.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar foram tratados diariamente com injeções subcutâneas de MeHg (2 mg/kg) por um período de 7, 14 ou 21 dias, a partir do terceiro dia de vida. As fatias de córtex cerebral foram incubadas durante 7 minutos com glutamato marcado, o qual foi quantificado no cintilador. As preparações sinaptossomais foram carregadas com glutamato marcado e, após centrifugação, quantificou-se o glutamato liberado nas situações basal e estimulada com K+. A captação basal (0,152 nmol mg-1 min-1) foi aumentada significativamente em 56% nos animais tratados durante 21 dias, p < 0,05. A exposição ao MeHg causou um aumento significativo (28%, p< 0,05) na liberação basal de glutamato aos 21 dias de tratamento em relação ao controle (31% do total). A liberação de glutamato estimulada não foi afetada pelo tratamento com MeHg. Ambos os efeitos do MeHg foram revertidos pela administração simultânea com ebselen.

Conclusões: Sugerimos que o efeito do MeHg na liberação de glutamato pode estar envolvido em sua toxicidade e que o aumento na captação de glutamato pode representar uma resposta fisiológica ao prévio aumento de sua liberação. Além disso, o efeito inibitório de ebselen na liberação de glutamato induzida por MeHg pode estar relacionado às suas propriedades neuroprotetoras.

Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PRONEX, PIBIC

01.03.082

ADMINISTRAÇÃO SISTÊMICA DE CREATINA PRÉ- TREINO PIORA A MEMÓRIA DE RATOS. Freire Royes, L. F. **; de Carvalho Myskiw, J. *; Schneider Oliveira, M. *; Furian, A. F. *; Fighera, M. R. *; Mello, C. F. de; Bioquímica, UFSM; Química, UFSM.

Objetivo: A creatina é um suplemento alimentar amplamente utilizado na prática desportiva de alto nível, assim como agente neuroprotetor em modelos experimentais de isquemia. Contudo, pouco se sabe sobre os efeitos deste aminoácido sobre funções cerebrais, como aprendizado e memória. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da administração sistêmica de creatina sobre o aprendizado e memória de ratos, utilizando o teste de esquiva inibitória.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos adultos (250-300 g) foram utilizados. Os animais foram treinados num aparelho de esquiva inibitória utilizando choque (0,7 mA) nas patas. Os ratos foram injetados com creatina [2; 4; 7,5 ou 15 mg/Kg ou veículo (NaCl 0,9%), i.p.] 15 minutos pré-treino, ou imediatamente pós-treino. No mesmo aparelho, 24 horas após o treino, os animais foram submetidos ao teste sem a utilização do choque. As diferenças entre as latências de treino e teste em cada grupo foram utilizadas como parâmetro de retenção de memória. A administração de creatina em baixas doses

(2 mg/kg) imediatamente pós-treino diminuiu [F(4;71)=2,90; P< 0,05] a latência na esquiva inibitória. A administração pré-treino de creatina não alterou a performance dos animais no teste.

Conclusões: Os resultados sugerem que a administração de creatina (2 mg/Kg) imediatamente pós-treino (fase de consolidação), diminui o desempenho dos animais na tarefa de esquiva inibitória. A creatina não alterou a aquisição da tarefa.

Apoio Financeiro: FAPERGS, CAPES, PIBIC, CNPq, UFSM

01.03.083

EFEITO DA ATIVIDADE FÍSICA ESPONTÂNEA POR RATOS NA RODA DE CORRIDA NOS MECANISMOS DE MEMÓRIA E ANSIEDADE AVALIADOS PELO LABIRINTO EM T-ELEVADO Pedroso, J. P. C. **; Bernardi, M. M.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Demonstra-se experimentalmente que a atividade física pode estimular a produção de fatores neurotróficos e plasticidade hipocampais, e promove reduções nos sintomas de depressão e ansiedade em humanos. O objetivo deste estudo foi determinar se atividade física espontânea na roda de corrida contribui para os mecanismos de aprendizagem, memória e ansiedade, avaliados pelo labirinto em T-elevado em ratos.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos jovens foram randomicamente divididos em 2 grupos: grupo treinado (animais com acesso à roda de corrida) e grupo sedentário (animais sem acesso à roda de corrida). Após 4 semanas de treinamento, os animais foram submetidos ao teste no labirinto em T-elevado para avaliar memória e ansiedade. Avaliou-se a esquiva inibitória e a fuga; na esquiva inibitória o rato era colocado no final do braço fechado e o tempo em que o animal se retirava deste era mensurado por 3 vezes sucessivas (latência basal, LB; esquiva 1, E1; esquiva 2, E2); na fuga, o animal foi colocado no final do braço aberto e o tempo gasto para entrar no braço fechado foi mensurado (Fuga 1, F1). Para avaliar a memória, a esquiva inibitória e a fuga foram mensuradas novamente após 3 dias (esquiva 3, E3; fuga 2, F2). Os resultados demonstram aumentos significativos nas latências da esquiva entre 1° e o 3° dia nos grupos treinado (447%; p<0,001) e sedentário (200%; p<0,001), sugerindo que ambos aprendem e memorizam. Os resultados também demonstram que o grupo treinado apresenta latências de esquiva inferiores as apresentadas pelo grupo sedentário (LB, 190% menor no grupo treinado, p<0,05; E3, 57% menor no grupo treinado, p=0,06). Na avaliação da Fuga (F1 e F2) não foram encontradas diferenças entre os grupos sedentário e treinado.

Conclusões: A atividade física espontânea na roda de corrida interfere principalmente com os níveis de ansiedade, tornando-se benéfico para as funções cognitivas.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.084

RESTRIÇÃO ALIMENTAR ALTERA O COMPORTAMENTO EXPLORATÓRIO DE RATOS WISTAR MAS NÃO AFETA A ATIVIDADE DA ACETILCOLINESTERASE CENTRAL Santos Neto Machado Pinto, L. *; Augusto Souza Gualberto, F. *; Pereira, S. R. C.; C. Franco, G.; Ribeiro, A. M.; Vinícius de Paula, A. *; Bioquímica e Imunologia, UFMG; Estatística, UFMG; Psicologia, UFMG.

Objetivo: Verificar se existe interação entre os efeitos da restrição alimentar (RA) e do consumo crônico de etanol sobre a atividade da acetilcolinesterase em regiões do sistema nervoso central (SNC) e sobre aspectos comportamentais de ratos.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar adultos, machos, foram divididos em quatro grupos (n=18 cada): controle-água (CA), controle-etanol (CE), restrito-água (RA) e restrito-etanol (RE). Todos os animais foram avaliados quanto a memória espacial no labirinto aquático e comportamento exploratório em campo aberto. Em 12 dos 18 animais de cada grupo a atividade da acetilcolinesterase (AChE) hipocampal e cortical foi determinada por espectrofotometria. Também foram registrados: consumo de ração e líquido, peso do animal, peso de órgãos e albumina sérica. Os animais do grupos RA apresentaram peso corporal, do coração e figado significativamente menores, mas não apresentaram diferenças nas concentrações séricas de albumina. Todos os animais aprenderam a tarefa espacial no labirinto aquático e não houve diferença estatística entre os quatro grupos. Na situação de campo aberto, os animais do grupo RE apresentaram uma freqüência do comportamento exploratório, levantar-se sobre as patas traseiras, maior comparado aos grupos CA e CE (p<0.05). Não houve diferenças significativas na atividade da AChE em nenhuma das regiões do SNC estudadas.

Conclusões: O consumo de etanol associado à restrição alimentar provocou alterações crônicas no comportamento exploratório. Não existe correlação entre essa alteração e o parâmetro colinérgico avaliado.

Apoio Financeiro: FAPEMIG, CNPq

01.03.085

ATIVIDADE DA ÓXIDO NITRICO SINTASE NEURAL E COMPORTAMENTO EXPLORATORIO SÃO ALTERADOS EM ANIMAIS SUBMETIDOS `A RESTRIÇÃO ALIMENTAR ISOLADA OU ASSOCIADA AO CONSUMO CRÔNICO DE ETANOL Augusto Souza Gualberto, F. *; Santos Neto Machado Pinto, L. *; Pereira, S. R. C.; C. Franco, G.; Ribeiro, A. M.; Vinícius de Paula, A. *; Bioquímica e Imunologia, UFMG; Estatística, UFMG; Psicologia, UFMG.

Objetivo: Avaliar se a restrição alimentar (R) interfere nos efeitos do etanol sobre aspectos comportamentais e sobre a atividade da óxido nítrico sintase neural (nNOS).

Métodos e Resultados: Ratos Wistar adultos, machos, foram divididos em quatro grupos (n=18 cada): controle-água (CA), controle-etanol (CE), restrito-água (RA) e restrito-etanol (RE). Todos os animais foram submetidos aos testes de comportamento exploratório em campo aberto. A determinação da atividade da nNOS no cerebelo e córtex foi realizada através da dosagem de nitrito usando-se o método espectrofotométrico. Também foram registrados: consumo de ração e líquido, peso do animal, peso de órgãos e albumina sérica. Os animais do grupo RA tiveram peso corporal, peso do fígado e do coração menores (p<0,05) quando comparados com os animais controles. O peso do cérebro não foi alterado por nenhum dos tratamentos. O grupo RE apresentou uma freqüência do comportamento exploratório, levantar-se sobre as patas traseiras, maior comparado aos grupos CA e CE (p<0.05). A atividade da nNOS no cerebelo dos animais submetidos à restrição alimentar foi menor (p<0,014) quando comparada a dos animais controle. Não houve diferença significativa entre os grupos com relação à atividade dessa enzima no córtex cerebral. Os dados da atividade da nNOS no cerebelo apresentaram uma tendência de correlação negativa com a freqüência de levantar-se sobre as patas traseiras (p<0,06).

Conclusões: A restrição alimentar interfere com a produção de óxido nítrico no cerebelo e quando associada aos efeitos crônicos do etanol altera o comportamento exploratório dos animais.

Apoio Financeiro: FAPEMIG, CNPq

01.03.086

REGULAÇÃO DA EXPRESSÃO DA DESCARBOXILASE DO ÁCIDO GLUTÂMICO (GAD) EM RETINA DE AVE: POSSÍVEL PAPEL DE GABA SOBRE O PROCESSO DE TRADUÇÃO DA ENZIMA. Schitine, C. de S. *; Yamasaki, E. N.; Rumjanek, F. D.; Garcia de Mello, F.; Biofísica - BL C, UFRJ; Bioquímica - CCS, UFRJ; IBCCF, UFRJ.

Objetivo: Estudos anteriores do nosso laboratório indicam que o tratamento de culturas de agregados de retina com GABA (acido γ amino butírico) inibe tanto atividade de sua enzima de síntese GAD (descarboxilase do acido glutâmico) quanto a expressão da proteína correspondente. Essa inibição não ocorre por um aumento da degradação da proteína, mas, provavelmente por uma influência desse neurotransmissor na transcrição ou tradução do gene que codifica a enzima. Neste trabalho, investigamos pela técnica de RT-PCR a ontogênese das duas isoformas da GAD (GAD-65 e GAD-67) em retinas de pinto em diferentes estágios embrionários. Investigamos também a regulação da expressão do RNAm das enzimas em explantes de retinas embrionárias tratadas com GABA.

Métodos e Resultados: A análise da ontogênese das duas isoformas da GAD por RT-PCR, mostrou que o RNAm para GAD-67 só aparece a partir de E15.

Aparentemente, o RNAm de GAD 65 só começa a ser detectado após o 15o dia embrionário. O tratamento dos explantes retinianos com GABA, em estágios já diferenciados,que elimina a expressão das proteínas GAD, não interferiu com a expressão de RNAm das duas isoformas da enzima.

Conclusões: Nosso estudo mostra que, durante o desenvolvimento, a expressão dos RNAs mensageiros de GAD ocorre de forma semelhante ao aparecimento das proteínas correspondentes. Confirma ainda resultados prévios do laboratório de que GAD-67 é expressa antes de GAD-65 e a partir de E15.Alem disso os resultados sugerem que o efeito de GABA sobre a inibição da expressão de GAD não parece ocorrer por redução de seus RNAs mensageiros, sugerindo uma possível interferência de GABA sobre o processo de tradução das enzimas.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX

01.03.087

ALTERAÇÕES AGUDAS NO COMPORTAMENTO MOTOR DE RATOS SUBMETIDOS À ATIVIDADE FÍSICA ESPONTÂNEA NA RODA DE CORRIDA. Oliveira, T. P. **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Analisar os parâmetros de motricidade em ratos submetidos a 5 dias atividade física espontânea na roda de corrida.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos jovens tiveram acesso à roda de corrida por 5 períodos de 12 horas por dia. Animais controles sedentários permaneceram em caixas individuais desprovidas da roda, nas mesmas situações. O comportamento motor dos animais foi registrado por 30 minutos, em campo aberto, através de sistema automatizado de análise da atividade motora por interrupção de feixes infravermelhos. Parâmetros como tempo (TSM) e número (NSM) de eventos sem movimento, tempo (TPM) e número (NPM) de eventos de pequenos movimentos (movimentos contínuos por 0,01s) e tempo (TGM) e número (NGM) de eventos de grandes movimentos (movimentos contínuos com duração igual ou superior a 1s) foram registrados. O registro foi realizado ao término dos 5 dias de treino e os resultados analisados em 3 períodos: de 0 a 10 minutos (1° período), 11 a 20 minutos (2° período) e 21 a 30 minutos (3° período). A análise dos 30 minutos de registro mostrou aumento crescente no TSM nos animais treinados (61%, p<0,001) e nos animais sedentários (102%, p<0,05), entretanto, o TSM foi 71% (p<0,01) e 78% (p<0,01) maior nos animais treinados em relação aos sedentários nos 1° e 2° períodos de registro, respectivamente. O NSM foi maior nos animais treinados apenas nos 10 minutos iniciais de registro (27%, p<0,05). O NPM foi maior nos ratos treinados nos 1°(62%, p<0,05) e 2°(47%, p<0,05) períodos, em relação aos sedentários. Verificou-se diminuição no TGM do 1° ao 3° período (44%, p<0,001) apenas no grupo treinado, além disso, a atividade física espontânea na roda de corrida promoveu redução no TGM do grupo treinado em relação ao controle, nos 3 períodos: 1°(22%, p<0,01), 2°(38%, p<0,01) e 3°(49%, p<0,001). Os ratos treinados apresentaram diminuição gradativa do NGM durante os 30 minutos do

teste (29%, p<0,001), enquanto que os animais sedentários não apresentaram alterações neste parâmetro.

Conclusões: A atividade física espontânea na roda de corrida aumenta a performance motora e a habituação de ratos ao campo aberto.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.088

EFEITOS DA ATIVIDADE FÍSICA ESPONTÂNEA PROLONGADA NA RODA DE CORRIDA NO COMPORTAMENTO MOTOR E NÍVEIS DE ANSIEDADE EM RATOS. Pedroso, J. P. C. **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Analisar os parâmetros do comportamento motor em ratos submetidos ao regime prolongado de atividade física espontânea na roda de corrida.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos jovens tiveram acesso à roda de corrida por períodos de 12 horas por 34 dias. Animais controles sedentários permaneceram em caixas individuais desprovidas de roda, nas mesmas situações. O comportamento motor dos animais foi registrado por 30 minutos, em campo aberto, através de sistema automatizado de análise da atividade motora por interrupção de feixes infravermelhos. Parâmetros como tempo (TSM) e número (NSM) de eventos sem movimento, tempo (TPM) e número (NPM) de eventos de pequenos movimentos (movimentos contínuos por 0,01s) e tempo (TGM) e número (NGM) de eventos de grandes movimentos (movimentos contínuos com duração igual ou superior a 1s) foram registrados. Os resultados foram registrados em 3 períodos: 0 a 10 minutos (1° período), 11 a 20 minutos (2° período) e 21 a 30 minutos (3° período). A atividade física alterou a maioria dos parâmetros do comportamento motor dos animais nos 3 períodos analisados como segue. A atividade física aumentou (p<0,001) o TSM (34% no 1° período; 28% no 2° período; 30% no 3° período), o NSM (25% no 1° período; 18% no 2° período; 11% no 3° período), o TPM (73% no 1° período; 41% no 2° período; 33% no 3° período) e o NPM (46% no 1° período; 35% no 2° período; 31% no 3°período). A atividade física reduziu (p<0,001) o TGM (17% no 1° período; 25% no 2° período; 40% no 3° período). O NGM foi maior (p<0,001) no grupo treinado durante o 1° período (8,6%); já no 2° período, os grupos apresentaram a mesma média do NGM, enquanto que no 3° período, o NGM foi menor no grupo treinado (14,2%; p<0,01).

Conclusões: A atividade física espontânea na roda de corrida melhora a performance motora dos animais. Os resultados do TGM e NGM mostram que os animais treinados apresentam maior comportamento exploratório no período inicial do registro, bem como maior capacidade de habituação nas fases seguintes do campo aberto, indicando que a atividade física também atua no processo central da ansiedade.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.089

AVALIAÇÃO DO POTENCIAL NEUROPROTETOR DO LÍTIO EM FATIAS HIPOCAMPAIS EXPOSTAS A UM MODELO DE ISQUEMIA IN VITRO Buzin, L. *; Cimarosti, H. I. **; Frozza, R. *; Calegaro Nassif, M. *; Zamin, L. L. *; Siqueira, I. R. **; Ferreira, O. **; Tavares, A. A. *; Horn, A. P. *; Netto, C. A.; Rocha, E. R. da; Salbego, C.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Ciências, UFRGS; Fisiologia, UFRGS; Neurociências, UFRGS.

Objetivo: Avaliar o efeito neuroprotetor do lítio em fatias hipocampais expostas à privação de O2 e glicose (POG–isquemia in vitro).

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos de 3 meses foram divididos em 2 grupos: controles (C)- receberam ração comercial e tratados crônicos (TC)-receberam ração com lítio por 1 mês. Os ratos foram decapitados, os hipocampos dissecados e fatias (400) incubadas em 2 placas segundo os tratamentos: (1) controle sem tratamento, (2) controle com lítio agudo (0,8mM- adicionado ao meio de incubação), (3) tratado crônico (fatia de animal TC) e (4) tratado crônico com lítio agudo (fatia de animal TC e lítio agudo). Uma placa foi exposta à POG por 1h e a outra foi mantida em condições normais de O2 e glicose a 37ºC. Após a POG, as fatias "isquêmicas" foram incubadas em meio com glicose, em presença ou não da droga, por 3h em atmosfera com O2. Foram realizados testes para avaliar a morte celular (LDH), a formação de radicais livres (DCFH-DA) e a captação de glutamato. Comparado ao controle, a POG aumentou significativamente a liberação de LDH (imediatamente e 3h pós-lesão) e a formação de radicais livres e diminuiu significativamente a captação de glutamato. De uma forma geral, o tratamento com lítio, tanto agudo quanto crônico, aumentou significativamente a liberação de LDH nas fatias expostas à POG, imediatamente e 3h pós-lesão. O lítio não alterou significativamente a produção de radicais livres e nem a captação de glutamato.

Conclusões: Apesar de vários estudos em diversos modelos, tanto in vivo quanto in vitro, terem verificado o efeito neuroprotetor do lítio em diversos tipos de lesão, tal efeito não foi constatado no presente trabalho. Mais estudos serão realizados em outros modelos a fim de continuar a investigação do potencial protetor do lítio e estudar os possíveis mecanismos de ação, incluindo as vias de sinalização celular.

Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, PROPESQ, UFRGS

01.03.090

HIPERTIREOIDISMO MODIFICA AS ATIVIDADES ECTONUCLEOTIDÁSICAS DE SINAPTOSOMA DE HIPOCAMPO E CÓRTEX CEREBRAL DE RATOS EM DIFERENTES FASES DO DESENVOLVIMENTO. Bruno, A. N. **; Da Silva, R. S. **; Bonan, C. D.; Battastini, A. M. O.; Barreto-Chaves, M. L. M.; Sarkis, J. J. F.; Ciências Fisiológicas, PUC-RS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: A via das ecto-nucleotidases, composta pela ATP difosfoidrolase e 5´-nucleotidase, realizam a hidrólise completa de ATP até adenosina, que exerce efeitos neuromodulatórios e neuroprotetores através da interação com os receptores inibitórios A1. Considerando que o transporte e receptores de adenosina podem ser influenciados pelos hormônios da tireóide, o presente trabalho pretende investigar o efeito do hipertireoidismo sobre as atividades destas enzimas em sinaptosssoma de hipocampo e córtex cerebral de ratos em diferentes fases do desenvolvimento.

Métodos e Resultados: Hipertireoidismo foi induzido em ratos macho Wistar de 5, 30, 60 e 330 dias de idade através de injeções i.p diárias de T4 (25ug/100g) durante 14 dias enquanto os animais controle recebiam apenas solução salina 0.9%. Os animais foram decapitados 24 horas após a última injeção, seus cérebros removidos e o córtex e hipocampo obtidos. Os sinaptossomas foram preparados conforme Nagy e Delgado-Escueta (J. Neurochem. 43: 1114-23, 1984). A liberação de Pi foi dosada pelo método de Chan (Anal. Biochem. 157: 375-80, 1986) e a concentração de proteína pelo método de Bradford (Anal. Biochem. 72: 218-254, 1976). Os resultados demonstraram uma inibição significativa de 20-45% das hidrólises de ATP, ADP e AMP em hipocampo e córtex cerebral em ratos de todas as idades testadas, ecxeto em cortex cerebral de ratos de 330 dias onde a hidrólise de AMP foi aumentada 37% em relação aos controles.

Conclusões: Estes resultados demonstram que o hipertireoidismo afeta o balanço cerebral de nucleotídeos extracelulares, interferindo assim, em processos como a neurotransmissão, excitabilidade celular, neuroproteção e neuromodulação.

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS, PRONEX

01.03.091

EFEITOS SOBRE A ATIVIDADE NTPDÁSICA E DE 5’-NUCLEOTIDASE EM CÉREBRO E SORO DE RATOS SUBMETIDOS A ADMINISTRAÇÃO DE HOMOCISTEÍNA. Böhmer, A. E. *; Streck, E. L. **; Stefanello, F.; Wyse, Â. T. S.; Sarkis, J. J. F.; Bioquímica - ICBS, UFRGS.

Objetivo: Homocistinúria é um erro inato do metabolismo de aminoácidos sulfurosos e caracteriza-se predominantemente por disfunções no sistema nervoso e vascular, incluindo isquemia cardiovascular e cerebral, convulsões e retardo mental. O objetivo deste trabalho é investigar os efeitos da administração de homocisteína sobre as atividades NTPDásica e de 5’-nucleotidase em frações de sinaptossoma e soro de ratos Wistar.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar adultos machos foram divididos em dois grupos: controle, que recebeu solução salina (0.9 % NaCl); e tratado, que recebeu uma única injeção i.p. de homocisteína (0.6 µmol/g) para induzir níveis plasmáticos similares àqueles de pacientes com homocistinúria. As atividades NTPDásica e de 5’-nucleotidase foram determinadas em frações sinaptossomais

de hipocampo e no soro dos ratos. Os resultados mostram que em hipocampo de ratos tratados a hidrólise de ATP e ADP encontra-se aumentada aproximadamente 20% (estatísticamente significante) e a hidrólise do AMP encontra-se aumentada 48%, sempre quando comparados ao controle. Em soro, a hidrólise de ATP e ADP está aumentada em 136% e 107%, respectivamente, e a hidrólise do AMP está aumentada em 95%, quando comparados ao controle.

Conclusões: Os resultados indicam que a administração de homocisteína in vivo altera a atividade de enzimas envolvidas na hidrólise de nucleotídeos no sistema nervoso central bem como em soro. Certamente este aumento nas atividades de hidrólise de nucleotídeos está relacionado ao efeito neuroprotetivo.

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS, PRONEX, UFRGS

01.03.092

CARACTERIZAÇÃO CINÉTICA DA ENZIMA ACETILCOLINESTERASE EM HIPOCAMPO DE RATOS. Amoras, C. da G. *; Aguiar, S. J. L. *; Maues, L. A. L.; do Nascimento, J. L. M.; Centro de Ciências Biológicas, UFPa; Fisiologia, UFPa.

Objetivo: Acetilcolinesterase é responsável pela degradação da acetilcolina transformando-a em colina e acetato. Acetiltiocolina foi usada como substrato, tendo como produto formado o ácido acético e tiocolina. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar cineticamente a enzima Acetilcolinesterase em Hipocampo de ratos.

Métodos e Resultados: Ratos wistar (220-240 g) foram sacrificados, o hipocampo retirado e homogeneizado em 50 mM de tampão TRIS-HCl, pH 8,4 e centrifugado para separação de fração sinaptossomal, posteriormente analisado pelo método Ellman (Ellman, et. al., 1961. B. Pharmacol. 7, pp. 88–95.) modificado. A atividade da colinesterase pode ser medida pela adição de um reativo de cor (DTNB), o qual reage com a tiocolina produzindo um complexo amarelo. A intensidade da cor é proporcional a atividade enzimática e pode ser medida por fotocolorimetria. A atividade específica da Acetilcolinesterase é obtida em U/mg de proteína. A especificidade do método foi demonstrada pelo uso da Eserina, que é um inibidor específico da reação. Os valores obtidos seguem a cinética michaeliana com Vmax = 1,57 U/mg ptn e o Km= 140 µM.

Conclusões: De acordo com os resultados podemos inferir que é possível medir a atividade da enzima Acetilcolinesterase no Hipocampo por um método simples e sensível. Esta técnica poderá ser útil para medir alterações no sistema Colinérgico em Neuropatologias.

Apoio Financeiro: CNPq, FINEP, SECTAM, FUNTEC, PROPESP, PROINT, UFPa

01.03.093

ATIVIDADE DA ENZIMA ACETILCOLINESTERASE EM SANGUE PERIFÉRICO DE RATOS APÓS CONVULSAO INDUZIDA POR EXTRATO AQUOSO DE CLIBADIUM SYLVESTRE. Aguiar, S. J. L. *; Amoras, C. da G. *; Hamoy, M. **; do Nascimento, J. L. M.; Centro de Ciências Biológicas, UFPa; Fisiologia, UFPa; Physiology, UFPa.

Objetivo: Acetilcolinesterase é a enzima responsável pela degradação da acetilcolina transformando-a em colina e acetato. O status epilépticus pode estar relacionado a alterações no sistema colinérgico. O objetivo deste trabalho foi medir a atividade da Acetilcolinesterase (marcador da transmissão colinérgica) em sangue periférico de animais tratados com o extrato aquoso da planta Clibadium sylvestre utilizada em nosso laboratório como modelo experimental de epilepsia.

Métodos e Resultados: Ratos wistar (220-240 g) foram tratados com uma dose de 4 ml (i.p) de extrato aquoso da planta. Os ratos foram sacrificados em diferentes tempos da crise convulsiva. O sangue periférico foi retirado e analisado pelo método Ellman (Ellman, et. al., 1961. B. Pharmacol. 7, pp. 88–95.) modificado. O método consiste na hidrólise da tiocolina que reagirá com o DTNB (reativo de cor) e o produto medido por espectrofotometria. Utilizamos para os experimentos quatro grupos (n=6). A atividade específica foi medida em UI/ml. O grupo controle apresentou uma atividade de 0,626 UI/ml (Sx ± 0,060 UI/ml). Durante a crise convulsiva a atividade da Acetilcolinesterase aumentou 50% em relação ao controle. Este aumento foi estatisticamente significativo.

Conclusões: Nossos resultados demonstram que ocorre um aumento da atividade da enzima Acetilcolinesterase durante a convulsão induzida por Clibadium sylvestre. Portanto, a medida da atividade da enzima acetilcolinesterase pode ser útil como marcador das alterações colinérgicas no SNC em doenças convulsivas.

Apoio Financeiro: CNPq, FINEP, SECTAM, FUNTEC, PROPESP, UFPa-PROINT

01.03.094

EFEITOS DA ATIVIDADE FÍSICA ESPONTÂNEA NO COMPORTAMENTO MOTOR DE RATOS E INFLUÊNCIA DA LESÃO ESTRIATAL ISQUÊMICA PELA ENDOTELINA-1 Oliveira, T. P. **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Analisar a evolução dos parâmetros de motricidade em ratos submetidos à atividade física espontânea na roda de corrida e suas alterações após lesão estriatal isquêmica pela endotelina-1(ET-1).

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos tiveram acesso à roda de corrida por 7 períodos de 12 horas por dia. Animais controles sedentários permaneceram em caixas individuais desprovidas de roda, nas mesmas situações. Após, os animais foram submetidos à lesão estereotáxica isquêmica por ET-1 no corpo estriado e, então, o protocolo de atividade física foi mantido por 30 dias. O comportamento motor dos animais foi registrado por 10 minutos, em campo aberto, através de sistema automatizado de análise por interrupção de feixes

infravermelhos. Parâmetros como tempo (TSM) e número (NSM) de eventos sem movimento, tempo (TPM) e número (NPM) de eventos de pequenos movimentos (movimentos contínuos por 0,01s) e tempo (TGM) e número (NGM) de eventos de grandes movimentos (movimentos contínuos com duração igual ou superior a 1s) foram registrados. Os registros foram realizados ao término do período de atividade física, no 4° dia de treino antes da lesão e nos 5°, 14°, 21°e 28°dias após lesão. A 1ª semana de acesso à roda de corrida promoveu aumentos no TSM (71%, p<0,01), no NSM (27%, p<0,05) e no NPM (62%, p<0,05), bem como diminuição no TGM (28%, p<0,01) em relação aos animais sedentários. Estas diferenças desapareceram na 1ª semana após a lesão. Na 2ª semana após lesão, as diferenças entre sedentários e treinados tornaram-se novamente evidentes: aumentos no TSM (118%, p<0,001), no NSM (39%, p<0,001), no TPM (154%, p<0,001) e no NPM (112%, p<0,001) e diminuição no TGM (65%, p<0,001) em relação aos sedentários. Diferenças nos parâmetros do comportamento motor entre os animais sedentários e treinados continuaram presentes na 3ª e 4ª semanas após a lesão.

Conclusões: Ratos com acesso à atividade física espontânea na roda de corrida possuem comportamento motor, registrado por sistema específico, diferente dos animais sedentários. Tal efeito é abolido na fase aguda da lesão estriatal isquêmica pela ET-1, mas reaparece diante da manutenção da atividade física.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.095

EFFECTS OF TREADMILL TRAINING ON MOTOR BEHAVIOR, INCLINED PLANE AND REFLEX RESPONSE IN RATS Medina, E. C. **; de Paula, R. C. A. **; Bochi, M. L. **; Andrade, M. S. R. de **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Locomotor training leads to improvement of stepping ability in animals. We demonstrate the time-course of the effects of moderate treadmill running in the behaviour of rats.

Métodos e Resultados: Male Wistar rats (3 month old) were submitted to a twice a day, 5 day per week session on a treadmill: 10.5m/min for 20 min during 8 weeks. The spontaneous motor behaviour of trained (TR) and sedentary (SD) rats were analized weekly by a computerized Infrared motion sensor activity monitor for 30min per day, twice a week during 8 weeks. The spontaneous motor behaviour was analized by the following parameters: time without movements (movement time bellow 0.01s), time of small (movement time in the range of 0.01s and 1.0s long) and large movements (movements time than 1.0s). The statistical analysis was performed using t.-test, to compare data of the training and sedentary rats. Trained rats showed increment in the time (seconds) without movement (p< 0.0001), decreases of the number of events without movements (p< 0.01), decreases of the time of larger movements (p<0.0001), decreases in the number oflarge movements (p< 0.0001) from first week to eight weeks of training. After 8 weeks the motor behaviour was evaluated by Behavioral Analysis that included evaluation of simple and complex reflexes as well as spontaneous

and evoked motor patterns. On the basis of this analysis, we measured functional deficits by following CBS (Combined Behavioral Score). Decreased in the withdrawal reflex, in responses to pressure score [SD = 3 ± 0; TR = 2.71 ± 0.14] and in the angle of inclined plane were found in trained rats [SD= 54.28 ± 2.06; TR= 50.28 ± 0.28]. The CBS showed differences between trained and sedentary rats [SD= 7.14 ± 1.01; TR= 15 ± 4.22].

Conclusões: The preliminary results indicated that treadmill running interferes with spontaneous motor behaviour in rats detected by open field motion sensor activity monitor.

Apoio Financeiro: FAPESP

01.03.096

EFFECT OF PROPIONIC ACID ON THE IN VITRO PHOSPHORYLATION OF INTERMEDIATE FILAMENTS FROM CEREBRAL CORTEX OF 21 DAY-OLD RATS. Vieira Almeida, L. M. **; Funchal, C. **; Pessutto, F. D. B. *; de Lima Pelaez, P. *; Oliveira Loureiro, S. *; Vivian, L. *; Wajner, M.; Pessoa Pureur, R.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Bioquímica e Neurociências, UFRGS; Neurociência, UFRGS; Bioquímica, Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

Objetivo: Propionic acidemia is an inherited neurometabolic disorder of the propionate pathway biochemically characterized by tissue accumulation of propionic acid (PA). In this study we investigated the effects of PA on the in vitro phosphorylation of intermediate filament (IF) proteins in cerebral cortex of 21 day-old rats. We also studied the involvement of serine/threonine protein kinases mediating the effect of PA on the phosphorylation of the same cytoskeletal proteins.

Métodos e Resultados: The 21 day-old rats were killed by decapitation and cerebral cortex was removed and cut into 400 mm slices. Tissue slices were incubated with 32P-orthphosphate in the presence of 2.5mM PA and/ or 10µm of KN-93, a PKCaMII inhibitor or 10 µM H-89, a PKA inhibitor. The IF-enriched cytoskeletal fraction was extracted and the radioactivity incorporated into neurofilament subunits (NF-M and NF-L), vimentin (Vim) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) was measured. Our results demonstrated that PA increased the radioactivity incorporated into the intermediate filament proteins NF-M [125.09 ± 3.49], NF-L [121.72 ± 4.66], Vim [124.96 ± 4.36] and GFAP [120.78 ± 3.85] at day 21. In addition, when tissue slices were incubated with PA in the presence of KN-93 [NF-M: 83.81 ± 8.45; NF-L: 84.30 ± 10.87; Vim: 89.97 ± 4.59 and GFAP: 91.00 ± 4.90] or H-89 [NF-M: 73.90 ± 7,19; NF-L: 72.64 ± 6.56; Vim: 76.35 ± 6.38 and GFAP: 79.54 ± 5.78] the effect of the acid on the in vitro phosphorylation of proteins studied was totally prevented, therefore indicating that PA stimulatory effect on IF protein phosphorylation in cerebral cortex of 21-day-old rats is mediated by PKA and PKCaMII.

Conclusões: Considering that aberrant phosphorylation/dephosphorylation of cytoskeletal proteins has been related to neurodegeneration, it is feasible that the alteration of cytoskeletal protein phosphorylation caused by PA may be related to the neurological dysfunction characteristic of propionic acidemia.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PRONEX, FAPERGS, PROPESQ, UFRGS

01.03.097

COMPUTER ASSISTED NYU IMPACTOR SYSTEM TO PROMOTE DIFFERENT DEGREES OF CONTUSION LESION IN THE RAT SPINAL CORD. de Paula, R. C. A. **; Bochi, M. L. **; Medina, E. C. **; Andrade, M. S. R. de **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Different degrees of partial contuse experimental lesion in the rat spinal cord may be necessary in the study regarding local degenerative/regenerative events.

Métodos e Resultados: Adult male Wistar rats were submitted to different degrees of spinal cord contusion lesion to demonstrate experimental models of local injury by means of a NYU Impactor System. The spinous process and the vertebral lamina at T9-10 level were removed to expose a circular region of the dura. To promote the lesions, a 10g rod was dropped to the dorsal surface of the exposed spinal cord from distances of 12.5 mm, 25 mm or 50 mm, which characterize three intensities of lesion: slight (SL), moderate (MD) or severe (SV), respectively. The Impactor registered different variables: impact velocity (ImpV), compression distance (Cd), compression time (Ct), and compresion rate (Cr=Cd/Ct). Impact velocity was measured from a regression line fit to the rod trajectory during the 2 msec before it contacts the spinal cord. Compression distance was the maximum distance below the baseline. Compression time was the time (msec) required for the rod to reach the maximum compression distance. Compression rate (Cr) was the calculated parameter (Cd/Ct). Impact curve was calculated by the system and the parameters of the trauma, like impact velocity, cord compression distance and cord compression rate were obtained in order to demonstrate the severity of the trauma. The following results were obtained with the three intensities of the lesion: Cd [SL= 1.957 ± 0.097; MD= 2.582 ± 0.0257; SV= 3.302 ± 0.0326, p=0.01]; ImpV [SL= 3707.2 ± 92.59; MD= 2793.34 ± 60.75; SV= 2062.63 ± 50.14, p=0.02] and Cr [SL= 3.64x10-4 ± 036x10-4; MD= 5.73x10-4 ± 0.35x10-4; SV= 7,9. 10-4 ± 0,23.10-4, p=0.0001].

Conclusões: The results indicated that the computer assisted Impactor System is a device capable to reproduce different degrees of spinal cord contusion in rats and to provide measurements with precision.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.098

BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR IMMUNOREACTIVITY AFTER DIFFERENT DEGREES OF SPINAL CORD CONTUSION. Bochi, M. L. **; de Paula, R. C. A. **; Medina, E. C. **; Andrade, M. S. R. de **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Central nervous system induces a particularly rapid increase in the production of basic fibroblastic growth factor (bFGF) close to the site of lesion. This macromolecule helps to protect and to maintain neurons from secondary neurodegeneration. Here, we analyzed bFGF expression in the lesioned rat spinal cord following different degrees of local contusion.

Métodos e Resultados: Adult male Wistar rats were submitted to different degrees of spinal cord contuse lesion. To promote the lesions, a 10g rod was dropped to the dorsal surface of the exposed spinal cord from distances of 12.5 mm, 25 mm or 50 mm, which characterize three groups: slight (SL), moderate (MD) or severe (SV) lesion, respectively. A group of rats was submitted to sham operation. After 90 days, animals were sacrificed and their spinal cords sectioned, and processed for immunohistochemistry. bFGF immunoreactivity was detected by the avidin-biotin peroxidase technique and quantified in anterior horn of cranial and caudal spinal cord sections close to the injury by means of semiquantitative morphometric image analysis. In cranial levels, the bFGF immunoreactivity was found to be elevated (p<0.01) following the MD (6%) and SV (5%) lesions compared to sham operated rats. Furthermore, no difference was observed in the cranial levels of the SL lesioned group compared to sham. In the caudal levels bFGF immunoreactivity increased (p<0.05) in the anterior horn of the rats that have received MD (7%) and SV (6%) lesion compared to sham rats; SL lesion did not trigger bFGF express.

Conclusões: The results indicated that the expression of bFGF was increased in moderate and severe spinal cord contuse lesion at 90 days, which demonstrated that this neurotrophic factor may be involved in the local process against secondary neuronal degeneration as well as regenerative events.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.099

ESTUDO DA CAPTAÇÃO DE GLUTAMATO EM CONDIÇÕES BASAIS E NA PRESENÇA DE GUANOSINA UTILIZANDO FATIAS DE CÓRTEX DE RATOS: UM PERFIL ONTOGENÉTICO Thomazi, A. P. **; Godinho, G. *; Rodrigues, J.; Schwalm, F. *; Frizzo, M.; Souza, D.; Wofchuk, S. T.; Bioquímica, UFRGS.

Objetivo: Glutamato é o principal neurotransmissor excitatório do SNC de mamíferos estando envolvido em funções normais do cérebro, desenvolvimento e envelhecimento. Quando em altas concentrações na fenda sináptica, exerce um efeito neurotóxico que tem sido relacionado a diversas doenças neurodegenerativas. A manutenção dos níveis extracelulares de glutamato abaixo dos excitotóxicos é feita por transportadores de alta afinidade dependentes de sódio presentes principalmente em células gliais, particularmente astrócitos. Bases púricas derivadas da guanina modulam importantes eventos intracelulares e extracelulares no SNC. Trabalhos realizados por nosso grupo demonstraram que a guanosina aumenta a captação basal de glutamato em cultura de astrócitos e fatias de córtex de ratos P10, assim como exerce um papel neuroprotetor em ratos convulsionados com ácido quinolínico quando administrada tanto por via oral ou intraperitoneal. Esse trabalho tem por objetivo investigar in vitro o perfil

ontogenético da captação de glutamato em condições basais e na presença de guanosina utilizando fatias de córtex de ratos.

Métodos e Resultados: Foram utilizadas fatias corticais de ratos Wistar machos (P10; P21; P60; 15 e 26 meses), as quais foram pré-incubadas por 30min com guanosina em meio HBSS a 35°C e em seguida incubadas com L-[³H]-glutamato. Após lise, alíquotas foram retiradas para dosagem de proteína e a radioatividade foi quantificada por cintilação. A captação de glutamato diminuiu significativamente de ratos P21 para P60. Animais com 15 e 26 meses mostraram uma recuperação nessa captação, a qual pode ser uma forma compensatória adaptativa para enfrentar desordens que ocorrem geralmente nesta faixa etária. A guanosina aumentou significativamente a captação basal de glutamato em animais P10, não tendo efeito nas demais idades.

Conclusões: Utilizando fatias corticais de ratos de diversas idades concluimos que a captação basal de glutamato varia com a idade e que a presença de guanosina aumenta essa captação somente em ratos P10.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS, PROPESQ, UFRGS

01.03.101

LOCAL DIFFERENCES IN GABA RELEASE INDUCED BY EXCITATORY AMINO ACIDS DURING CHICK DEVELOPMENT: SELECTIVE ACTIVATION OF NMDA RECEPTORS BY ASPARTATE IN THE INNER RETINA. Calaza, K. da C.; Fialho de Mello, M. C.; Garcia de Mello, F.; Gardino, P. F.; Neurobiologia, UFF; Biofísica - BL C, UFRJ; Neurobiologia - IBCCF, UFRJ.

Objetivo: GLU is involved with processing of visual information from photoreceptors to ganglion cells. This flow of information is modulated by GABAergic inputs from horizontal and amacrine cells in the outer and inner plexiform layers, respectively. GLU and aspartate (ASP) are able to induce GABA release by the selective activation of NMDA receptors, and dopamine (DA) partially inhibits the release of GABA induced by NMDA but not by non-NMDA receptors. The used biochemical methodologies did not allow the identification of the different subpopulations of GABAergic cells involved in the lateral processing axis of the retina. The discrimination of the specific GABA-containing cell types that respond to distinct glutamatergic agonists has been possible by the use of an immunohistochemical approach.

Métodos e Resultados: Using GABA immunohistochemistry, we compared the effects of excitatory amino acids (EAAs) on GABA release and its modulation by dopamine at different retinal sites. In addition, the developmental changes on the modulation of GABA release were also investigated in the chick retina. In the chick retina, at embryonic day 14 (E14), GLU and kainate (KA) were able to induce the release of GABA from amacrine and horizontal cells as detected by GABA-immunoreactivity. NMDA also induced GABA release restricted to amacrine cell population and its projections to the inner plexiform layer (E14 and E18). Although ASP reduced GABA immunoreactivity, specifically in amacrine cells of

E18 retinas, it was not efficient to promote GABA release from retinas at E14. As observed in differentiated retinas, DA inhibited the GABA release promoted by NMDA and ASP but not by KA.

Conclusões: Our data show that different retinal sites respond to distinct EAAs via different receptor systems.

Apoio Financeiro: PRONEX, CNPq, FAPERJ

01.03.102

ATIVIDADE ACETILCOLINESTERASE E NADPH-DIAFORASE NO SISTEMA CENTRÍFUGO VISUAL DO PINTO. Calaza, K. da C.; Schmal, A. R.; Gardino, P. F.; Neurobiologia, UFF; Neurobiologia, UFRJ; Neurobiologia - IBCCF, UFRJ.

Objetivo: o sistema centrífugo visual (CVS) é composto pelo Núcleo do Istmo Óptico (NIO) e pelos neurônios ectópicos (EcN). Grande é a quantidade de trabalhos anatômicos e eletrofisiológicos do CVS, mas pouco se sabe sobre suas propriedades neuroquímicas. Existem dados controversos sobre o status colinoceptivo do CVS. Utilizamos um marcador de atividade de neurônios colinoceptivos em pintos pós-eclosão, a histoquímica para AchE. Como a liberação de acetilcolina, em diferentes regiões do SNC, é modulada pelo óxido nítrico (NO) e como, durante desenvolvimento há atividade NADPH-diaforase no CVS, averiguamos se o NO poderia estar correlacionado com a atividade colinérgica do CVS em pinto pós-eclosão, pela histoquímica para NADPH-diaforase.

Métodos e Resultados: Utilizamos a toxina colérica (TxC) como traçador neuronal. Após a fixação, os cérebros foram seccionados e os cortes submetidos à reação de imunohistoquímica para TxC. Em seguida, os cortes foram reagidos para histoquímica para AchE ou NADPH-diaforase. Os resultados mostraram marcação de TxC em corpos celulares localizados tanto no NIO como em EcN no hemisfério contralateral à injeção monocular. A histoquímica para a AchE revelou células marcadas em ambos NIO e em EcN. Além disso, a maioria das celúlas do NIO contralateral eram duplamente marcadas para AchE e TxC. Entretanto, a marcação para NADPH-diaforase revelou, em ambos NIO, apenas marcação na neurópila. As células na região do EcN eram positivas para NADPH-diaforase no soma, dendritos e axônios porém sem co-localização com a TxC.

Conclusões: nossos resultados indicam que devido a presença de células duplamente marcadas para AchE e TxC, no NIO, o CVS possui um componente colinoceptivo funcionalmente ativo. Sugerem também que o NO faça parte de um circuito intrínseco no NIO e não do sistema retinopetal.

Apoio Financeiro: PRONEX-MCT, CNPq, FAPERJ

01.03.103

CONTRIBUIÇÃO RELATIVA DA DEFICIÊNCIA GRAVE DE TIAMINA E CONSUMO CRÔNICO DE ETANOL SOBRE ALTERAÇÕES DE PARÂMETROS COLINÉRGICOS E DISTÚRBIOS COMPORTAMENTAIS EM RATOS. Gomes Wanderley Pires, R. **; Rejane Castanheira Pereira, S.; Ribeiro, A. M.; Bioquímica e Imunologia, UFMG; PSICOLOGIA EXPERIMENTAL, UFMG.

Objetivo: Avaliar a contribuição relativa da deficiência grave de tiamina e do consumo crônico de etanol sobre a atividade da acetilcolinesterase (AChE); a liberação basal e estimulada de acetilcolina (ACh) e sobre aspectos morfológicos e comportamentais. Verificar se existem correlações entre os dados colinérgicos e algum déficit cognitivo específico.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar foram submetidos a uma deficiência grave de tiamina e seu desempenho em tarefas espaciais foi avaliado em labirinto aquático de Morris. A atividade da AChE no córtex cerebral e hipocampo e a liberação de ACh no córtex foram determinadas por espectofotometria e luminometria, respectivamente. Verificamos que: (i) a deficiência grave de tiamina induziu uma diminuição (p<0.05) na atividade da AChE tanto no córtex quanto no hipocampo; (ii) o tratamento crônico com etanol não tem efeito na atividade da AChE cortical, mas produz diminuição (p<0,05) na atividade da enzima hipocampal; (iii) tanto o etanol quanto a deficiência grave de tiamina induziram uma diminuição (p<0.05) na liberação de ACh no córtex, sendo que a associação entre eles provocou uma diminuição ainda maior. A deficiência grave de tiamina associada ou não ao consumo crônico de etanol provocou déficits no processo de aprendizagem e memória de referencia espacial, os quais são negativamente relacionados (p<0,05) à liberação basal de ACh. Todos os animais submetidos à deficiência grave de tiamina apresentaram alterações morfológicas visíveis à microscopia óptica, nas regiões do tálamo e corpos mamilares.

Conclusões: O consumo crônico de etanol associado a um episódio de deficiência grave de tiamina provoca alterações colinérgicas mais pronunciadas do que qualquer um dos tratamentos isolados. A liberação basal de ACh no córtex parece envolvida na aquisição e retenção de informação espacial.

Apoio Financeiro: FAPEMIG, CNPq

01.03.104

IN VIVO AND IN VITRO EFFECTS OF AMINO ACID ACUMULATING IN HYPERPROLINEMIA ON OXIDATIVE STRESS IN RAT BRAIN. Delwing, D. **; Bavaresco, C. S. **; Chiarani, F. *; Dutra-Filho, C. S.; Wannmacher, C. M. D.; Wajner, M.; Wyse, A. T. S.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS.

Objetivo: Hyperprolinemia type II is an autosomal recessive disorder of amino acid metabolism caused by the deficiency of D 1–pyrroline-5-carboxilic acid dehydrogenase activity, resulting in tissue accumulation of proline (Pro). Epilepsy and mental retardation are clinical features of this disease. Considering that Pro is epileptogenic and that oxidative stress is related to epilepsy, in the present study we determined the in vivo and in vitro effects of Pro on some oxidative stress

parameters (Chemiluminescence–CHEM and Total Radical-Trapping Antioxidant Parameter–TRAP) in cerebral cortex of rats.

Métodos e Resultados: For acute administration, 29-day-old-rats received subcutaneous injection of Pro correspondent to 18.2 µ mol/g body weight or saline solution (controls). For chronic treatment, Pro was injected subcutaneously into rats twice a day at 10 h intervals from the 6th to the 28th day of life, whereas control rats received saline. For in vitro studies, cerebral cortex homogenates of 29-day-old untreated rats were incubated at 37° C for 1 h with one of various concentrations of Pro (3.0 µ M–1.0 mM). Results showed that chronic administration of Pro did not alter CHEM and TRAP (CHEM: C: 137±13.2; Pro: 126±12.7, n=6; TRAP: C: 8.7±2.1; Pro: 9.0±1.2, n=5). However, acute administration of Pro significantly increased CHEM (C: 110±13.5; Pro: 135±20.5,n=7) and decreased TRAP (C: 12.8±2.2; Pro: 7.6±1.4, n=8). In vitro Pro also increased CHEM (C: 217±27.1; Pro 3.0µ M: 246±34.9; Pro 30.0µ M: 271±42.7; Pro 0.5mM: 279±33.3; Pro 1.0mM: 437±103.5, n=4) and decreased TRAP (C: 6.9±0.58; Pro 3.0µ M: 6.5±0.87; Pro 30.0µ M: 6.1±0.81; Pro 0.5mM: 4.3±1.65; Pro 1.0mM: 2.8±0.86, n=4). Results are expressed as mean+S.D.

Conclusões: Our results suggest that oxidative stress induced by Pro may be involved in the brain dysfunction observed in hiperprolinemia type II.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PROPESQ, PRONEX

01.03.105

HIPERTIREOIDISMO AFETA A HIDRÓLISE DE NUCLEOTÍDIOS DA ADENINA EM MEDULA ESPINHAL DE RATOS EM DIFERENTES FASES DO DESENVOLVIMENTO Machado Crema, L. *; Nejar Bruno, A. **; Fontella, F. U. **; Barreto-Chaves, M. L. *; Dalmaz, C.; Sarkis, J. J. F.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Fisiologia, UFRGS; Bioquímica - ICBS, Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

Objetivo: Nucleotídeos extracelulares como o ATP, possuem efeitos como neurotransmissão excitatória e aumento das rotas envolvidas na formação da dor. O ATP pode ser hidrolizado por nucleotidases como ATP difosfoidrolase e 5-nucleotidase até adenosina, um neuromodulador com propriedades antinociceptivas via receptores A1 em medula espinhal. Desde que os hormônios da tireóide podem modular o transporte de adenosina e seus receptores, o presente estudo pretende investigar o efeito de um modelo de hipertireoidismo sobre as atividades ectonucleotidásicas em sinaptosssomas de medula espinhal de ratos em diferentes fases do desenvolvimento, bem como relacionar estes resultados com os eventos de nocicepção.

Métodos e Resultados: Hipertireoidismo foi induzido em ratos machos Wistar de 5, 60 e 330 dias através de injeções i.p. diárias de T4 (25ug/100g) durante 14 dias. Os sinaptossomas foram preparados conforme Nagy e Delgado-Escueta (J. Neurochem. 43: 1114, 1984). Nocicepção foi verificada através do aparato de tail-flick (TFL). Foram utilizados teste t de Student para análise da atividade enzimática e teste de Mann-Whitney para o TFL (P<0,05 foi considerado como

diferença significativa). Foi observado um aumento na hidrólise de ADP (22%) e de AMP (61%) em ratos de 5 dias de idade, enquanto que em ratos de 330 dias a hidrólise de ATP, ADP e AMP foram significantemente inibidas em 21, 30 e 25% respectivamente. Ratos tratados de 5 dias apresentaram uma diminuição da resposta nociceptiva enquanto os animais tratados de 330 dias mostraram um aumento desta resposta quando comparados aos seus respectivos controles.

Conclusões: O hipertireoidismo afeta o balanço de nucleotídeos extracelulares na medula espinhal de forma diferente em relação aos estágios de desenvolvimento, afetando assim diferentes processos incluindo os relacionados com a nocicepção.

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, PRONEX, FAPERGS

01.03.106

PAPEL DO GLUTAMATO NA MODULAÇÃO DA EXPRESSÃO DE APP EM CULTURAS DE RETINAS DE AVES Faria, A. **; Klein, W.; Hokoç, J. N.; Garcia de Mello, F.; -, Northwestern University; Biofísica - BL C, UFRJ; Instituto Biofísica Carlos Chagas Filho - BL. C, UFRJ; Neurobiologia - IBCCF, UFRJ.

Objetivo: APP, proteína precursora de amilóide, é uma glicoproteína transmembrana, cujo processamento origina o peptídeo b-amilóide, um marco patológico da doença de Alzheimer. Em estudos prévios, demonstramos que APP está presente em retinas de aves durante o desenvolvimento, tanto no tecido intacto quanto em sistemas de cultura de células, sofrendo um decréscimo em retinas pós-eclosão. A perda neuronal característica da doença de Alzheimer é acompanhada por um decréscimo significante em múltiplos sistemas de neurotransmissores do SNC, dentre eles o sistema glutamatérgico. Com base nestes achados, demonstramos anteriormente que culturas tratadas com 500µM de glutamato apresentavam um aumento de 100% na expressão da APP. Nosso objetivo é caracterizar, farmacologicamente, a participação de receptores de aminoácidos excitatórios no aumento da expressão da APP.

Métodos e Resultados: Culturas de retinas de aves com seis dias mantidas em cultura por um dia (E6C1) foram tratadas com diferentes agentes por 24 horas. Avaliamos a expressão da APP, por imunoblot, após o tratamento com diversos agonistas e antagonistas de receptores glutamatérgicos não-NMDA e metabotrópicos. Em culturas tratadas com 100µM de kainato e de AMPA (agonistas não-NMDA), um aumento semelhante ao visto com o tratamento com 500µM de glutamato foi encontrado. 100µM de DNQX (antagonista não-NMDA), adicionado nas culturas, impediu o aumento da expressão da APP observado com os aminoácidos excitatórios. O tratamento com 40µM de Àcido Quisquálico (agonista metabotrópico mGlu1a) também revelou um aumento na expressão de APP o qual foi bloqueado com 1mM de AÌDA (antagonista metabotrópico mGlu1a).

Conclusões: Nossos dados sugerem que o aumento na expressão de APP causado por glutamato seja mediado tanto por receptores glutamatérgicos ionotrópicos quanto por receptores metabotrópicos.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX

01.03.107

NEURÔNIOS DO NÚCLEO PRÉ-MAMILAR VENTRAL CO-EXPRESSAM O RECEPTOR DE ANDRÓGENO E O PEPTÍDEO CART. Cavalcante, J. C. **; Martins, J.; Bittencourt, J. C.; Elias, C. F.; Anatomia - ICB III, USP; Anatomia Humana, USP.

Objetivo: O núcleo pré-mamilar ventral (PMv) é um núcleo da zona medial do hipotálamo que mantém amplas conexões com os núcleos do "circuito sexualmente dimórfico". O PMv apresenta uma grande quantidade de receptor de andrógeno (RA) sendo que parte destes neurônios co-expressam óxido nítrico e substância P, ambos envolvidos com modulação de funções reprodutivas. Neurônios do PMv também expressam o RNAm do receptor de leptina (OB-Rb), um hormônio secretado pelo tecido adiposo branco cuja ausência é associada a hipogonadismo, esterilidade e obesidade mórbida entre outros efeitos. Parte destes neurônios contém o transcrito regulado pela cocaína e anfetamina (CART), um neuropeptídeo relacionado à mediação da ação da leptina em vias neurais relacionadas aos comportamentos alimentar e reprodutivo. Além disto, fibras imunorreativas a Urocortina 3 (Ucn3), um peptídeo recém-descrito, são observadas no PMv. O objetivo deste estudo é investigar a ocorrência de co-localização entre CART e RA e a relação entre estes neurônios e as fibras Ucn3 no PMv.

Métodos e Resultados: Foram utilizados ratos machos adultos Wistar (n=4, 280-300g).Os animais foram perfundidos com paraformaldeído 4%, os encéfalos foram dissecados e cortados em micrótomo de congelação (30mm). Séries contendo o hipotálamo de cada animal foram submetidas a dupla reação de imunohistoquímica para detecção de CART (anti-CART, Phoenix) e RA (anti-RA, Upstate), e dupla hibridização in situ para detecção dos RNAms do CART e do RA nos neurônios do PMv. Outros cortes do hipotálamo foram submetidos à dupla marcação com imunoperoxidase para detecção de fibras Ucn3 e CART e/ou RA. Em seguida os cortes foram colocados em lâminas gelatinizadas, desidratados, deslipidificados, cobertos com lamínulas e analisados em microscópio óptico de campo claro.Observamos co-localização entre o neuropeptídeo CART e o receptor de andrógeno nos neurônios do PMv. Observamos também que fibras imunorreativas a Ucn3 fazem aparente contato sináptico com neurônios do PMv que expressam CART e RA.

Conclusões: Nossos dados sugerem que neurônios do PMv que expressam o neuropeptídeo CART são responsivos à leptina e a andrógeno circulante e podem ser modulados pela Ucn3. Estes dados indicam que CART e Ucn3 interagem no PMv e podem mediar a ação da leptina sobre o comportamento reprodutivo.

Apoio Financeiro: FAPESP

01.03.108

EFEITO DA CREATINA (CR) SOBRE AS CONVULSÕES E A PRODUÇÃO DE TBARS EX VIVO INDUZIDAS POR METILMALONATO (MMA) Freire Royes, L. F. **; Furian, A. F. *; Schneider Oliveira, M. *; Fighera, M. R. *; de Carvalho Myskiw, J. *; Mello, C. F. de; Bioquímica, UFSM; Química, UFSM.

Objetivo: O MMA é o metabólito que se acumula na acidemia metilmalônica, erro inato do metabolismo caracterizado por distúrbios neurológicos e convulsões. Recentes estudos sugerem a participação dos radicais livres na gênese das convulsões induzidas pelo ácido metilmalônico (NeuroRep. 10:2039-2043, 1999). Entretanto, sabe-se que a suplementação com Cr tem ação antioxidante em modelos animais da doença de Huntington (J. Neurosci. 18:156-163, 1998). Este trabalho tem por objetivos investigar a influência da Cr sobre as convulsões e a produção de TBARS induzidas pelo MMA.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (300g) foram canulados nas coordenadas do estriado relativas ao bregma (AP 0 mm, ML 3,2 mm, V 3,0 mm da dura), utilizando um aparelho estereotáxico. Três dias após a cirurgia, os ratos foram pré-injetados com NaCl (0,9% i.p.) ou Cr (12, 36 e 120 mg/Kg i.p), 30 minutos antes da injeção intra-estriatal de 2 ml (6 mmol) de MMA ou NaCl (11 mmol). Logo após os animais foram observados quanto ao aparecimento de episódios convulsivos, durante 15 minutos. Imediatamente após o comportamento os animais foram decapitados e os estriados foram homogeneizados 1:10 (m/v) em Tris-HCl 10 mM (pH 7.4) contendo 10% de dodecil sulfato de sódio (SDS) e o TBARS foi determinado pelo método de Ohkawa (Anal. Biochem. 95:351-358; 1979). A análise estatística (ANOVA de uma via) revelou que a Cr diminuiu o número [F(3,32)= 3.55; p<0.05] e a duração das convulsões [F (3,32)= 4.6; p<0.01]. O MMA aumentou o conteúdo de TBARS [F(3,48)= 5,01, p< 0.05] e, a pré-administração de Cr diminuiu a produção de TBARS intra-estriatal [F(3,48)=2,84; p<0,05]; ( ANOVA de duas vias).

Conclusões: Sugerimos que a pré-administração de Cr (12, 36 e 120 mg/kg i.p) previne o aparecimento de convulsões e o aumento do conteúdo de TBARS estriatal induzidos pelo MMA ( 6µmol).

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS

01.03.109

EFEITO DA CREATINA (CR) SOBRE A PRODUÇÃO DE TBARS INDUZIDA POR ÁCIDO METILMALÔNICO (MMA) IN VITRO. Royes, L. F. F. **; Schneider Oliveira, M. *; Furian, A. F. *; Fighera, M. R. *; de Carvalho Myskiw, J. *; Mello, C. F. de; Bioquímica, UFSM; Química, UFSM.

Objetivo: O MMA é um metabólito que se acumula na acidemia metilmalônica, erro inato do metabolismo caracterizado por distúrbios neurológicos e convulsões. Recentes estudos sugerem a participação dos radicais livres na gênese das convulsões induzidas pelo ácido metilmalônico (NeuroRep. 10:2039-2043, 1999). Entretanto, sabe-se que a suplementação com Cr tem ação antioxidante em

modelos animais da doença de Huntington (J. Neurosci. 18:156-163, 1998). Nosso objetivo neste trabalho foi verificar se a Cr possui propriedades antioxidantes diretas contra a produção de TBARS induzida por MMA in vitro.

Métodos e Resultados: Ratos Wistar machos (300g) foram sacrificados e os estriados homogeneizados 1:10 (m/v) em Tris-HCl 10 mM (pH 7.4) contendo 10% de SDS. O meio de incubação foi composto de 200ml do homogeneizado mais MMA (5mM) ou não e/ou Cr (0,5-5mM) e foi mantido em banho-maria a 37°C por uma hora. A medida de TBARS seguiu o protocolo descrito por Ohkawa (Anal. Biochem. 95:351-358; 1979). A análise estatística (ANOVA de duas vias) revelou que o MMA induz produção de TBARS in vitro [(F3.32= 52.41, p<0.05)] e que a pré-incubação com Cr (1,5-5mM) reduziu o aumento do conteúdo de TBARS nos homogeneizados [(F3.32= 3.08, p<0.05].

Conclusões: Sugerimos que a pré-incubação com Cr (1,5-5mM) atenua a produção de TBARS induzida pelo MMA (5mM) in vitro.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS

01.03.110

SUCINATO AUMENTA A LIPOPEROXIDAÇÃO EX-VIVO. Roehrs, C. **; Sinhorin, V. D. G. **; Sauzem, P. D. *; Schneider Oliveira, M. *; Furian, A. F. *; Mello, C. F. de; Rubin, M. A.; Química, UFSM.

Objetivo: O sucinato acumula-se na acidemia metilmalônica e na acidemia malônica, erros inatos do metabolismo caracterizados por distúrbios neurológicos e convulsões. Este trabalho tem por objetivo investigar a influência do sucinato sobre a lipoperoxidação ex-vivo.

Métodos e Resultados: Camundongos albinos machos (30-40g) receberam sucinato intracerebroventricularmente (i.c.v.) nas seguintes doses: 0,7; 1; 1,7 mmol/ 5 mL (salina 0,85%, como veículo controle). Após 10 minutos de observação em um campo aberto, nos quais não foram observados sinais aparentes de convulsão, os animais foram decapitados e o encéfalo foi homogeneizado 1:10 (m/v) em Tris-HCl 10 mM (pH 7.4) contendo 10% de dodecil sulfato de sódio (SDS) e o TBARS foi determinado pelo método de Ohkawa, 1979. O sucinato aumentou a lipoperoxidação ex-vivo nas doses de 0,7 (0,0538 ± 0,0011) e 1 mmol (0,0539 ± 0,0022) - [F(3;12)= 15,61; p<0,0002], o tempo de imobilidade [F(3;16)= 4,36; p<0,02] e diminuiu a atividade locomotora [F(3;16)= 6,56; p<0,005] dos camundongos.

Conclusões: A produção exacerbada de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) sugere que nas doses não convulsivantes utilizadas neste estudo, pode ser um dos fatores envolvidos nas convulsões geradas pelo sucinato (Resumo nº 01.380, FeSBE 2002).

Apoio Financeiro: CAPES, UFSM, CNPq, PIBIC, FAPERGS

01.03.111

SUCINATO ALTERA POTENCIAIS EXCITATÓRIOS PÓS-SINÁPTICOS (PEPS) EM POPULAÇÕES DE NEURÔNIOS HIPOCAMPAIS PELA ATIVAÇÃO DE RECEPTORES GLUTAMATÉRGICOS N-METIL-D-ASPARTATO (NMDA). Roehrs, C. **; Garrido Sanabria, E. R.; da Silva, A. C. **; Faria, L. C. **; Cavalheiro, E. A.; Mello, C. F. de; Rubin, M. A.; Química, UFSM; Neurologia, UNIFESP; Neurologia e Neurocirurgia, UNIFESP; Neurologia Experimental, UNIFESP.

Objetivo: O sucinato é um análogo estrutural do glutamato, o qual tem a capacidade de aumentar os potenciais excitatórios pós-sinápticos de campo (PEPSc) (Resumo nº 01.357, FeSBE 2002). Neste estudo, resolvemos investigar o mecanismo de ação pelo qual o sucinato afeta os PEPSc em fatias hipocampais de ratos.

Métodos e Resultados: Fatias transversais da região CA1 do hipocampo (400 mm) foram incubadas com fluido cerebroespinhal artificial (30-33°C) por 1 hora. Os PEPSc foram evocados pela estimulação elétrica (3-15 V) das fibras aferentes (CA1), e as respostas basais registradas por 30 min. Sucinato (0,3; 0,5; 0,7; 1; 3; 6 ou 10 mM) mais CNQX (10 µM) e/ou AP-5 (50 µM) foram adicionados e as respostas evocadas registradas durante 20 min. A análise dos registros revelou que a adição de CNQX não alterou o aumento do PEPSc induzidos pelo sucinato. Por outro lado, a adição de AP-5 aboliu o PEPSc [F(6,204)=61,61; p<0,0001].

Conclusões: Os resultados do presente estudo sugerem que o mecanismo pelo qual o sucinato altera os PEPSc envolve diretamente a ativação dos receptores glutamatérgicos do tipo NMDA. Assim, o sucinato age como um modulador do receptor NMDA, provavelmente atuando no sítio do glutamato, devido a sua semelhança estrutural com este agonista.

Apoio Financeiro: CAPES, UFSM, CNPq, PIBIC, FAPERGS

01.03.112

MODERATE TREADMILL RUNNING DOES NOT CHANGE THE SIZE OF 6-OHDA INDUCED STRIATAL DOPAMINE NERVE TERMINAL DISAPPEARANCE BUT COUNTERACTS THE LOCAL ASTROGLIAL SCARS Heinz, G. *; Saavedra, M. *; Canterucci Gomide, V. **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP; Anatomy, USP.

Objetivo: Physical exercise influences brain trophism and plasticity. Moderate treadmill running triggers changes on the apomorphine-induced circling behaviour in the 6-hydroxydopamine (6-OHDA) model of Parkinsonism as well as on motor parameters detected by infrared motion sensor. In the present work we have investigated the effects of moderate treadmill running on degenerative events in the nigrostriatal system after striatal injection of 6-OHDA

Métodos e Resultados: Rats were submitted to 5 days per week session in the treadmill: 6m/min for 20 min (first week) and 12m/min for 30 min (second week); rats trained 12m/min for 45 min in the third week, a regime that was maintained after surgery. After 6 weeks, trained and sedentary rats were

submitted to unilateral striatal injection of 6-OHDA or solvent. The rats were sacrificed at 21 days and 50 days after dopamine lesion. After sacrifice, rat brains were processed for tyrosine hydroxylase, glial fibrillary acidic protein, OX-42 immunohistochemistry, markers for dopamine cells, astrocytes and microglia, respectively, and quantified using stereology. The volume of the striatal lesion and the microglia activation was not changed in the trained rats compared to the sedentary rats in the two time-points. However, the volume of the astroglial reaction was decreased by 39% (p<0.01, t test) in the striatum of the trained rats

Conclusões: The results indicate that moderate treadmill running does not protect striatum from 6-OHDA induced dopamine nerve terminal disappearance but may regulate later changes in astroglial reaction

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.113

EFEITO ESTIMULATÓRIO DOS ENXERTOS DE CÉLULAS DE SCHWANN EM ASSOCIAÇÃO COM O GDNF NO CRESCIMENTO DE FIBRAS NERVOSAS NA TRANSECÇÃO DA MEDULA ESPINHAL EM RATOS. Leme, R. J. de A. **; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Analisar o crescimento de fibras nervosas no enxerto de células de Schwann em associação ou não ao GDNF na lesão completa da medula espinhal de ratos.

Métodos e Resultados: 30 ratos Wistar adultos foram divididos em 3 grupos. Segmento de 3mm da medula espinhal foi retirado dos níveis T11-12, onde implantaram-se enxerto de fibrina (Grupo A) ou enxertos de fibrina e células de Schwann sem (Grupo B) ou com GDNF (Grupo C). Após 3 meses, os animais foram sacrificados e a região da medula espinhal, incluindo o enxerto, foi retirada e processada para a imunohistoquímica. Os seguintes marcadores foram utilizados: neurofilamento, proteína associada ao crescimento 43 (GAP-43) e Substância P (este último para fibras sensitivas). A secção do epicentro do enxerto foi quantificada por método estereológico específico. O teste Anova de comparações múltiplas foi aplicado. Resultados: Maior quantidade de fibras imunorreativas ao neurofilamento foi observada nos grupos que receberam células de Schwann (p variando de 0,001 a 0,0002). Tendência (0,08) de quantidade maior de fibras imunorreativas ao neurofilamento foi vista no grupo C em relação ao grupo B. Maior número de fibras GAP-43 foi vista nos grupos B e C em relação ao grupo A (p variando de 0,04 a 0,0002), porém não houve diferenças entre o grupo B e C. Ainda, número maior de fibras Substância P positivas foram vistas nos grupos que receberam apenas células de Schwann (p=0,003), porém esse número foi ainda maior na presença do GDNF (p=0,00007).

Conclusões: Enxertos de células de Schwann formam um ambiente propício para a regeneração de fibras lesadas da medula espinhal, efeito que é potenciado pela presença do fator GDNF.

Apoio Financeiro: FAPESP

01.03.114

EFEITO DE INIBIDORES DA SUCCINATO DESIDROGENASE (SDH) NA TRANSIÇÃO DE PERMEABILIDADE MITOCONDRIAL INDUZIDA POR CA2+. Maciel, E. N. **; Kowaltowiski, A. J.; Wajner, M.; Castilho, R. F.; Bioquímica, UFRGS; Patologia Clínica - FCM, UNICAMP; Bioquímica, USP.

Objetivo: A disfunção do metabolismo energético mitocondrial e a perda da homeostase intracelular de Ca2+ estão envolvidas na patogênese de doenças neurodegenerativas, incluindo acidemias metilmalônicas e doença de Huntington. O aumento da concentração de Ca2+ citosólico e intramitocondrial pode induzir a transição de permeabilidade mitocondrial, podendo resultar em morte celular (Science 281: 1309-1312, 1998). Objetivamos no presente trabalho estudar os mecanismos de neurodegeneração in vitro dos inibidores complexo II da cadeia respiratória: malonato (MA), metilmalonato (MMA) e ácido 3-nitropropiônico (3-NP) sobre o consumo de oxigênio, indução de transição permeabilidade mitocondrial e inchamento mitocondrial em organelas isoladas.

Métodos e Resultados: Verificamos que MA, MMA e 3-NP em concentrações suficientes para inibir (30-40%) a respiração mitocondrial na presença de ADP, diminuem o potencial elétrico transmembrana e estimulam o inchamento mitocondrial induzido por baixas concentrações de Ca2+ e,

estes efeitos foram totalmente inibidos por ciclosporina (CsA), um potente inibidor da transição de permeabilidade mitocondrial e, parcialmente inibidos por catalase e substratos do complexo I da cadeia respiratória mitocondrial.

Conclusões: Conclusões: Sugerimos que a transição permeabilidade mitocondrial, promovida pelos inibidores do complexo II da cadeia respiratória associados ao Ca2+, tem um papel importante na cascata de eventos que resulta em morte neuronal prematura em diversos modelos experimentais observados em isquemia, acidemias metilmalônicas e doença de Huntington.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.115

LEARNING CAUSES A REDUCTION OF NA+,K+-ATPASE IN RAT HIPPOCAMPUS. Wyse, A. T. S.; Bavaresco, C. S. **; Reis, E. A. dos **; Zugno, A. I. *; Tagliari, B. *; Calcagnotto, T. *; Alexandre Netto, C.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS.

Objetivo: Compelling evidence has indicated the involvement of Na+,K+-ATPase in the mechanisms of synaptic plasticity. In the present study we investigated the effect of inhibitory avoidance training on Na+,K+-ATPase activity in rat hippocampus at different times (0 and 30 min; 1, 2 and 6 h) after training.

Métodos e Resultados: Male adult Wistar rats were trained in a step-down inhibitory avoidance task or submitted to isolated foot-shock (0.4 mA) or placed directly over the platform. Na+,K+-ATPase activity was not altered in hippocampus of rats sacrificied 30 min, 1 and 2 h after training, but was decreased immediately (0 min) and 6 hr after training and immediately after shocked rats (C: 1254±278; 0min: 518±150; 30min: 1198±248; 1h: 1350±20,67; 2h: 1138±375; 6h: 481±109; n=4). We also verified that Na+,K+-ATPase activity did not alter when the rats were killed after placed on platform (C: 1237±255; Platform: 1336±225; n=4).

Conclusões: These findings suggest that Na+,K+-ATPase may be involved in the memory consolidation of step-down inhibitory avoidance in the hippocampus.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PROPESQ

01.03.116

INHIBITION OF NA+,K+-ATPASE ACTIVITY BY METABOLITE ACCUMULATING IN LESCH NYHAN DISEASE. Bavaresco, C. S. **; Tagliari, B. *; Wyse, A. T. S.; Bioquímica, UFRGS.

Objetivo: Lesch-Nyhan is an inherited disease of purine metabolism caused by a severe deficiency of enzyme hypoxanthine-guanine phosphoribosyl-transferase activity. Affected patients present spasticity, mental retardation and self-mutilation, whose pathophysiology is still obscure. Hypoxanthine (Hpx) is the major metabolite accumulated in tissue of patients with Lesch-Nyhan and in other neurological disorders, including hydrocephalus, ischemia and after subarachnoid haemorrhage. Na+,K+-ATPase, a membrane-embedded enzyme, is essential for cellular excitability and its activity is decreased in several neurological diseases, such as stroke, Alzheimer´s and Parkinson diseases. In the present study, we investigated the in vitro effect of hpx on Na+,K+-ATPase activity in rat striatum in the hope to identify a possible mechanism for the brain damage in Lesch-Nyhan disease.

Métodos e Resultados: Membranes from striatum of 6-day-old Wistar rats were used for Na+,K+-ATPase activity determination. Results showed that Hpx significantly inhibited Na+K+-ATPase activity in all concentrations tested (C= 889.08±166.63; Hpx 1.7µM= 566.39±60.58; Hpx 7.0µM=307.78±45.06; Hpx 8.5µM= 312.16±105.13; Hxp 10µM = 173.22±61.18; n=4).

Conclusões: Our findings suggest that inhibition of Na+,K+-ATPase activity may be one of the mechanisms involved in the neurological dysfunction observed in Lesch-Nyhan disease.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PROPESQ

01.03.117

S100B CONCENTRATION AND SOD ACTIVITY IN AMNIOTIC FLUID OF PREGNANCIES WITH DOWN SYNDROME Netto, C. **; Siqueira, I. **; Portela, L. **; Fochesatto, C. *; Souza, D. O.; Gonçalves, C. A. S.; Giugliani, R.; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Genética, UFRGS.

Objetivo: Introduction and objectives: S100B is a calcium binding protein expressed and secreted by astrocytes. High levels of S100B in serum and cerebrospinal fluid have been observed in many neurodegenerative diseases. Superoxide dismutase (SOD) is a metallo protein that plays a major role in protecting the cells against toxic oxygen derivatives, converting superoxide anion into H2O2. S100B and SOD genes are located at the long arm of chromosome 21, a critical region in the developent of Down syndrome. In order to verify a possible increase of S100B and SOD and its involvement in prenatal screening, the amniotic fluid was measured retrospectively in samples from normal and affected pregnancies

Métodos e Resultados: Material and Methods: Amniotic fluid samples from 26 normal and 71 Down syndrome fetuses, as diagnoses from karyotype analysis of cultured amniotic fluid cells, were included in this study. The amniotic fluid– S100B protein levels were determined using sensitive commmercial luminescence assay (BYK-Sangtec). SOD activity was carried out with the RANSOD kit (randox, USA). Results :Confirming a preliminary study, we observed higher levels of S100B in the Down group(mean of 1.69 ng/ml) than control group (mean 0.74 ng/ml). S100B concentration in the amniotic fluid of DS pregnancies increased progressively from the 13th ( 0.78 ± 0.2 ng/l) to the 18th (3.36 ± 1.25 ng/l) week of gestation and were positively correlated with gestacional age (p< 0.001). The amniotic fluid SOD activity in the DS group (21.69±15.69U/mg/prot) was significantly higher (p<0.001) than in the normal one (13.88±6.95U/mg/prot).

Conclusões: conclusion: This study indicates that S100B in amniotic fluid could be used as an additional parameter for prenatal diagnosis of trissomy 21 and its values could be correlated with the gestational age.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERGS

01.03.118

MELHORA DOS PARÂMETROS MOTORES EM RATOS COM LESÃO MEDULAR COMPLETA E ENXERTO DE FRAGMENTOS DE NERVO CIÁTICO EM PRESENÇA DO FATOR NEUROTRÓFICO DERIVADO DE CÉLULAS GLIAIS (GDNF) Pierdoná Guzen, F. **; Andrade, M. S. R. de **; Leme, R. J. de A.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Analisar a recuperação funcional após lesão medular completa em ratos adultos submetidos à enxerto de fragmentos de nervo ciático na presença ou não do GDNF

Métodos e Resultados: Métodos: 10 ratos Wistar adultos tiveram um segmento de 3mm da medula espinhal retirado dos níveis T11-12, onde implantaram-se enxerto de 2 fragmentos de nervo ciático mergulhados em fibrina na presença (Nervo+GDNF) ou ausência (Solvente) do fator neurotrófico GDNF (Nervo-GDNF). A análise comportamental foi feita por um sistema automático de monitoramento da atividade motora por interrupção de feixes de luz infravermelha que varrem o ambiente do animal 1 semana após a cirurgia por 3 meses, com 2 tomadas semanais de 30 minutos cada. Os parâmetros analisados foram: tempo sem movimentos, tempo de pequenos e grandes movimentos e o número da ocorrência de cada um destes. As tomadas foram agrupadas em registros

mensais. Os índices BBB de recuperação motora e CBS de déficits sensório motores também foram analisados semanalmente. Os dados foram tratados pelo teste Mann Whitney. Resultados: O índice de recuperação motora do BBB foi mais acentuado, enquanto que o índice CBS de déficit funcional foi menor no grupo Nervo+GDNF (p=0,0003). Índices como Tarlov, extensão dos dedos, colocação, reflexo da retirada à extensão e outros sempre foram melhores no grupo que recebeu enxerto de nervo em presença do GDNF. O número de eventos sem movimento e o tempo e número de pequenos movimentos foram menores nos animais do grupo Nervo+GDNF no 3º mês pós-operatório

Conclusões: Os dados comportamentais mostraram que o enxerto de fragmentos de nervo ciático na presença do GDNF foi mais efetivo na recuperação neurofuncional dos animais estudados que os enxertos desprovidos do fator neurotrófico

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.119

MAIOR CRESCIMENTO DE FIBRAS NERVOSAS NA REGIÃO DA LESÃO MEDULAR COMPLETA TRATADA COM ENXERTO DE FRAGMENTOS DE NERVO CIÁTICO EM PRESENÇA DO FATOR NEUROTRÓFICO DERIVADO DE CÉLULAS GLIAIS (GDNF). ESTUDO IMUNOHISTOQUÍMICO EM RATOS Pierdoná Guzen, F. **; Gomide, V. C.; Leme, R. J. de A.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP.

Objetivo: Analisar o crescimento de fibras nervosas na região do enxerto de fragmentos de nervo ciático na presença do GDNF colocado na medula espinhal transectada de ratos

Métodos e Resultados: Métodos: 10 ratos Wistar adultos tiveram um segmento de 3mm da medula espinhal retirado dos níveis T11-12, onde implantaram-se enxerto de 2 fragmentos de nervo ciático mergulhados em fibrina na presença (Nervo+GDNF) ou ausência (Nervo-GDNF) do fator neurotrófico GDNF. Após 3 meses, os animais foram sacrificados e a região da medula espinhal, incluindo o enxerto, foi retirada e processada para imunohistoquímica. Os seguintes marcadores foram utilizados: neurofilamento, proteína associada ao crescimento 43 (GAP-43) e proteína associada ao microtúbulo 2 (MAP-2). A secção histológica do epicentro do enxerto foi quantificada por método estereológico específico. Resultados: O grupo que recebeu o enxerto de nervo ciático em presença do GDNF apresentou um maior número de fibras imunorreativas ao neurofilamento (p<0,05), ao GAP-43 (p<0,05) e MAP-2 (p<0,01) na região do epicentro ao enxerto, comparado aos animais que receberam o enxerto de nervo sem o GDNF

Conclusões: Os dados mostraram que o enxerto de fragmentos de nervo ciático com GDNF na medula espinhal de ratos com transecção total promoveu um maior crescimento de fibras nervosas pelo enxerto que aqueles desprovidos do fator neurotrófico. Estes dados são concordantes com a análise do comportamento sensório-motor entre os grupos

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.120

EFFECTS OF ALCOHOL INTAKE IN THE CATECHOLAMINERGIC NEUROTRANSMITION IN CENTRAL CARDIOVASCULAR AREA Silveira, G. A. da **; Fior-Chadi, D. R.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP; Fisiologia - IB, USP.

Objetivo: Young male Wistar rats were given a high protein liquid diet ad libitum containing 37.5% ethanol derived calories (6.7% v/v) for 12 hours, 7 days or 21 days. Control rats received isocaloric amounts of liquid diet, however with maltose-dextrin substituted for ethanol in the same periods described above. After treatment, the animals were sacrificed and their brains processed for immunohistochemistry of dopamine β-hydroxilase (DBH) and phenyletanolamine N-methyltransferase (PNMT) for the visualization of noradrenaline and adrenaline neurons. The binding parameters of α2-adrenergic receptors were also analysed. The nucleus of the solitary tract (NTS), ventrolateral medulla and hipothalamic paraventricular nucleus (PVN) were studied. Amygdala and piriform cortex were also analysed. The immunohistochemistry of DBH and PNMT was quantified by means of stereology. Quantitative receptor radioautography by means of inibition and saturation experiments and data of IC50, B0, KD and BMAX, was used for the analysis of α2-adrenoceptors.

Métodos e Resultados: The results showed that alcohol intake for 12 hours increased IC50 value in the NTS and amygdala. The alcohol exposure for 7 days increased B0 value in the PVN and amygdala, and in the IC50 value in the piriform cortex. At this time DBH immunoreactivity was decreased in the A2 noradrenergic neurons of the NTS and PNMT immunoreactivity was increased in the C2 adrenergic neurons. Alcohol exposure for 21 days increased the IC50 value in amygdala and piriform cortex, B0 in NPV as well as KD and BMAX values in amygdala, and KD in piriform cortex. The immunohistochemistry showed that alcohol exposure for 21 days increased adrenaline and noradrenaline immunoreactivity in catecholaminergic neurons of the NTS and ventrolateral medulla.

Conclusões: These results suggest that alcohol may interfere with central control of blood pressure by changing catecholamine levels and the binding of α2-adrenergic receptors in the central cardiovascular areas

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.121

MODULAÇÃO DA VASOPRESSINA NAS ÁREAS DE CONTROLE CARDIOVASCULAR PELO EFEITO DO ALCOOLISMO CRÔNICO Silva, T. P. **;

Silveira, G. A. da **; Fior-Chadi, D. R.; Chadi, G.; Anatomia - ICB III, USP; Fisiologia - IB, USP.

Objetivo: Este estudo analisou através da técnica da marcação imunohistoquímica e da hibridização in situ os efeitos da ingestão crônica do álcool na síntese da vasopressina (AVP), no núcleo do tracto solitário (NTS) e no núcleo paraventricular do hipotálamo (NPV) de ratos.

Métodos e Resultados: Métodos: Ratos adultos jovens foram divididos em dois grupos pareados por peso. Os animais do grupo álcool receberam dieta líquida hiperprotéica ad libitum contendo 37,5% de valores calóricos em álcool por 28 dias. O grupo controle recebeu quantidade isocalórica de dieta contendo maltose dextrina em substituíção ao álcool. Ao término do período de tratamento os animais foram submetidos ao registro da pressão arterial de cauda. Metade dos animais de cada grupo foi destinada ao processamento imunohistoquímico da AVP ou da hibridização in situ para a marcação do RNAm da AVP. A intensidade das marcações foi quantificada através da análise microdensitométrica de imagem. Resultados: Vinte e oito dias de alcoolização elevou a pressão arterial de cauda dos ratos em 21,5% (p<0,01). Os sinais do RNAm e da imunorreatividade da AVP não foram encontrados nos gânglios nodoso e petroso dos animais. Número pequeno de terminais imunorreativos à AVP foi encontrado em alguns subnúcleos do NTS. A quantificação da imunorreatividade da AVP no NTS mostrou uma redução na área destes terminais AVP positivos da ordem de 24% (p<0,05) nos animais que receberam dieta álcool. O sinal do RNAm da AVP não foi encontrado na região do NTS. No NPV, a ingesta crônica de dieta álcool diminuiu a imunorreatividade da AVP em 17,7% (p<0,05) e o sinal do RNAm da AVP em 38% (p<0,05).

Conclusões: O consumo crônico de álcool eleva a pressão arterial de cauda e diminui a síntese de vasopressina no NPV de ratos.

Apoio Financeiro: FAPESP

01.03.122

EFFECT OF CAFFEINE AND GUANOSINE IN THE B-AMYLOID TOXICITY Pernigotti Dall lgna, O. *; Porciúncula, L. **; Lara, D.; Souza, D.; Bioquímica, UFRGS.

Objetivo: Senile plaques, mainly formed by b-amyloid peptide, is considered a neuropathological hallmark of Alzheimer’s disease (AD). b-amyloid peptide administration has been currently accepted a an valid model for AD, causing both neuronal death in vitro and severe amnesia in vivo, being glutamate excitotoxicity an important mediator of these effects. Caffeine, an adenosine non-selective antagonist, and the nucleoside guanosine were shown to exert neuroprotective effects in diverse situations mainly down-regulating the glutamatergic system. The objective of this study was to evaluate the role of these two agents in the b-amyloid-induced toxicity.

Métodos e Resultados: In all experiments it was used the 25-35 fraction of b-amyloid peptide after aggregation induced by 4 days incubation at 37ºC. In vivo,

i.c.v. b-amyloid (25-35) induced severe diruption in mice performance in both inhibitory avoidance and spontaneous alternation tests, being this effect reverted by the administration of caffeine previous to the lesion. In vivo, we utilized cerebellar granular neuron cultures obtained form 8 days-old rat pupils to access b-amyloid (25-35)-induced toxicity. After two days of incubation with b-amyloid (25 mM), there was an extensive neuronal damage in the culture. This effect was dose-dependly reverted with the coadministration of caffeine, with the maximum effect in the dose of 5 and 25 mM. We further investigated the receptor involved in this action, and found similar effect with ZM241385, an adenosine A2a receptor antagonist, but not with CPT, an adenosine A1 antagonist. We also tested the effect of guanosine and there was a significant protection to the b-amyloid effects in the dose of 100 µM.

Conclusões: These results, corraborated by a case-control study indicating an inverse relationship beetween caffeine intake and AD, suggest that caffeine may have therapeutic implications in AD, and propose guanosine as a neuroprotective agent.

Apoio Financeiro: CNPq

01.03.123

IMUNOCONTEÚDO DA PROTEÍNA S100B E COMPORTAMENTO MOTOR DE NEONATOS DE RATAS EXPOSTAS AO METIL-MERCÚRIO DURANTE A GESTAÇÃO Vicente, É. **; Boer, M. *; Porciúncula, L. *; Portela, L. **; Leite, M. *; Tramontina, F. *; Netto, C. **; Dalmaz, C.; Alberto Saraiva Gonçalves, C.; Biologia - IB, PUC-RS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS; Neurociências, UFRGS.

Objetivo: Objetivos: O metil-mercúrio (MeHg) reconhecidamente afeta o sistema nervoso central de crianças expostas ao metal durante a vida fetal. Astrócitos são alvos da toxicidade do MeHg e elementos chave para entender o dano ao tecido nervoso. A proteína astrocítica S100B tem sido usada como marcadora de comprometimento glial frente à exposição a metais pesados. O objetivo deste estudo foi quantificar o imunoconteúdo da S100B no tecido nervoso de neonatos de ratas expostas ao MeHg durante a gestação, bem como avaliar o comportamento motor dos filhotes aos 30 dias de vida.

Métodos e Resultados: Métodos e Resultados: Ratas Wistar adultas foram tratadas com MeHg (5mg/dia) durante a gestação. Os filhotes de 1, 15 e 30 dias foram sacrificados por decapitação. A proteína S100B foi quantificada por ELISA (Tramontina et al, 2000, Brain Res Brain Res Protoc, 6: 86-90.) em fatias de hipocampo, córtex frontal e cerebelo, bem como em líquor. O comportamento motor foi avaliado por testes de campo aberto, força das patas dianteiras e de falha. Observamos um significante aumento de 300% do conteúdo de S100B no hipocampo do grupo tratado ao nascimento, mas essa diferença desapareceu do 15o dia em diante. Nenhuma diferença foi observada no córtex cerebral e cerebelo. Os níveis de S100B no líquor foram mais altos (155%) nos ratos expostos ao MeHg, quando medido no dia 15. Nos testes motores não houve diferença significativa entre os grupos controle e os tratados.

Conclusões: Conclusão: Nossos resultados sugerem que o hipocampo foi mais sensível à exposição ao MeHg durante o desenvolvimento do sistema nervoso. Os níveis de S100B no líquor foi mais alto nos ratos expostos ao MeHg entretanto esse aumento desapareceu aos 30 dias de vida

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS

01.03.124

IN VIVO AND IN VITRO INHIBITION OF BUTYRYLCHOLINESTERASE ACTIVITY IN RAT SERUM BY HOMOCYSTEINE. Stefanello, F. M. **; Streck, E. L. **; Zugno, A. I. *; Franzon, R. *; Wyse, A. T. S.; Biochemistry, UFRGS; Bioquímica, UFRGS.

Objetivo: Homocystinuria is a metabolic disorder caused by deficiency of cystathione β -synthase activity leading to tissue accumulation of homocysteine (Hcy). Affected patients present neurological dysfunction, including mental retardation. Considering that the determination of butyrylcholinesterase (BuChE) in peripheral systems may be a marker for acetylcholinesterase (AChE) in the central nervous system (CNS), we investigated the in vitro and in vivo effects of Hcy on BuChE activity in rat serum.

Métodos e Resultados: For the acute treatment, 28-day-old Wistar rats received one injection s.c. of Hcy (0.6 mmol/kg) or an equivalent volume of saline solution (control) and were killed one hour later. Serum was used to determine BuChE activity. For the in vitro studies, serum of non-treated rats was incubated in the presence of Hcy (0.01-0.5mM). Our results showed that acute administration of Hcy inhibited (28%) BuChE activity (control: 1.81± 0.423; Hcy: 1.30± 0.25, n=5). Beside, Hcy also significantly inhibited this enzyme in vitro in a dose-dependent manner (control: 2.28± 0.09; Hcy 0.01mM: 2.19± 0.10; Hcy 0.1mM: 1.91± 0.08; Hcy 0.5mM: 1.71± 0.09, n=5). Data are expressed as mean ± SD.

Conclusões: Considering the importance of the AChE for CNS normal function, our findings suggest that the inhibition of BuChE activity, a marker for AChE in this system, caused by Hcy may be one of the mechanisms involved in the neurological dysfunction observed in homocystinuria.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERGS, PROPESQ, PRONEX

01.03.125

CELLULAR PRION PROTEIN IS INVOLVED IN MEMORY FORMATION Coitinho, A. S. **; Martins, V. R.; Brentani, R. R.; Izquierdo, I. A.; Inflamação, INST.LUDWIG; Bioquímica, UFRGS.

Objetivo: Introduction and Goals: Cellular prion protein (PrPc) is a plasma membrane protein present in neurons but also in other cell types. PrPc has been associated with some physiological functions in the last few years. In this study, we investigate short and long-term memory in 3- and 9-

month old rats after intrahippocampal administration of affinity purified anti-PrPc IgG or pre- immune IgG (0.09 mg/side).

Métodos e Resultados: Methods and Results: Male Wistar rats (3- and 9-month old) were trained in the inhibitory avoidance task. To evaluate the effect of anti-PrPc antibody on consolidation, the rats were infused with anti-PrPc antibody into the hippocampus immediately after training; then, animals were tested 1.5 and 24 h later for short-(STM) and long-term memory (LTM). No differences were observed between 3-month old animals. However, 9-month old rats infused with anti-PrPc antibody showed a clear impairment of short and long-term memory retention of a step down inhibitory avoidance task.

Conclusões: Conclusions : These results suggest that systems involved in memory formation become more susceptible to mechanisms that require PrPc between the ages of 3 and 9 months both in mice and in rats.

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, PRONEX

01.03.126

O TRATAMENTO COM ANFETAMINA DURANTE A PRENHEZ PROVOCA ALTERAÇÕES NEUROQUÍMICAS DURANTE A LACTAÇÃO. Valera, A. G. **; Camilo Flório, J.; Nasello, A. G.; Felicio, L. F.; Ciências Fisiológicas, FCMSCSP; Farmacologia, USP; Patologia e Toxicologia - FMVZ, USP.

Objetivo: Já foi descrito que o tratamento crônico com anfetamina (AMPH) durante a prenhez é capaz de aumentar a inibição do comportamento maternal (CM) em ratas no 5º dia de lactação, quando comparado com o tratamento agudo com AMPH (The pharmacologist, 44:2, A64, 2002). Verificar se o tratamento crônico com AMPH durante a prenhez é capaz de alterar os concentrações hipotalâmicas e estriatais da dopamina (DA), e de seus metabólitos (HVA e DOPAC), e da serotonina (5-HT) e do seu metabólito (5-HIAA) durante a lactação.

Métodos e Resultados: Abaixo, encontram-se, os dados obtidos, em ng/g de tecido estriatal: Neurotransmissor Grupo experimental ou metabólito SS SA AS AA DA 248± 51 341± 34* 311± 21* 370± 74* HVA 14± 3 18± 3* 16± 4 20± 4* DOPAC 40± 11 54± 15 52± 15 66± 15* 5-HT 32± 8 40± 6 34± 6 35± 6 5-HIAA 14± 4 17± 5 17± 4 18± 5 Os valores representam a média ± EPM. O número de animais é igual a 10. Em negrito: diferença significante em relação ao grupo SS (*p<0,05; ANOVA; Tukey-Krammer). No hipotálamo, não foi encontrado nenhuma diferença estatisticamente significante.

Conclusões: Estes dados sugerem que o tratamento crônico com AMPH é capaz de alterar a concentração da dopamina e dos seus metabólitos, mas não a de serotonina. Além disso, a inibição do CM produzida pelo tratamento ocorre simultaneamente as alterações neuroquímicas no estriato.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.127

O TRATAMENTO CRÔNICO COM COCAÍNA DURANTE A PRENHEZ PROVOCA A INIBIÇÃO DO COMPORTAMENTO MATERNAL (CM) E ALTERAÇÕES NEUROQUÍMICAS DURANTE A LACTAÇÃO. Valera, A. G. **; Camilo Flório, J.; Nasello, A. G.; Felicio, L. F.; Ciências Fisiológicas, FCMSCSP; Farmacologia, USP; Patologia e Toxicologia - FMVZ, USP.

Objetivo: Injeções agudas de cocaína inibem o CM em ratas lactantes (Behavioral Neuroscience, 113:2, 377-390, 1999). O objetivo deste trabalho foi verificar se o tratamento crônico com cocaína durante a prenhez é capaz de exacerbar o efeito inibitório desta droga sobre o CM na lactação.

Métodos e Resultados: Ratas Wistar de 3 meses de idade foram tratadas diariamente do 13° ao 20° dia da prenhez com salina ou com 5,0 mg/kg de cocaína. No 5º dia de lactação, os animais foram divididos nos seguintes grupos: as ratas que foram tratadas com salina durante a prenhez e desafiadas com cocaína (1,0 mg/kg) durante a lactação foram denominadas SC, e as ratas que foram tratadas durante a prenhez e desafiadas durante a lactação com cocaína foram denominadas CC. Após 30 minutos da injeção, foram medidas as latências para a busca de 3 filhotes, agrupamento, ficar em posição de amamentação e comportamento materno total (CMT). Foi medida, ainda, a concentração de dopamina (DA) e dos seus metabólitos (HVA e DOPAC) no estriato, através do HPLC, como mostram os resultados abaixo: Grupo experimental Parâmetro SC CC CMT (segundos) 1686 ± 390 (n=18) 2580 ± 672 (6)* DA (ng/g) 266 ± 27 (n=13) 350 ± 40 (14)* HVA (ng/g) 15 ± 2 (n=13) 19 ± 3 (14)* DOPAC (ng/g) 41 ± 12 (n=13) 50 ± 13 (14)* Os valores representam a média ± EPM. O número de animais está entre parênteses. Em negrito: diferença significante em relação ao grupo SC (*p<0,05; ANOVA; Tukey-Krammer).

Conclusões: Estes dados sugerem que o tratamento crônico com cocaína é capaz de de aumentar a inibição do CM em ratas no 5º dia de lactação, quando comparado com o tratamento agudo. Além disso, a inibição do CM produzida pelo tratamento ocorre simultaneamente as alterações neuroquímicas no estriato.

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq

01.03.128

ARGININE ADMINISTRATION REDUCES CEREBRAL CORTEX ACETYLCHOLINESTERASE AND SERUM BUTYRYLCHOLINESTERASE ACTIVITIES. Chiarani, F. *; Stefanello, F. M. **; Delwing, D. **; Wajner, M.; Wyse, A. T. S.; Biochemistry, UFRGS; Bioquímica, UFRGS.

Objetivo: In the present study we investigated the action of vitamins E and C on the inhibition of acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BuChE) activities provoked by arginine (Arg) in cerebral cortex and serum of sixty-day-old Wistar rats.

Métodos e Resultados: Animals were pretreated for 1 week with daily i.p. administration of saline (control) or vitamins E (40 mg/Kg) and C (100 mg/Kg). Twelve h after the last injection, animals received one single injection of Arg (0.8 µ mol/g of body weight) or saline. Results showed that AChE and BuChE activities were decreased in the Arg-treated rats. Furthermore, pretreatment with vitamins E and C prevented these effects (AChE: control: 3.00± 0.39; Arg: 2.60± 0.10; Vit E&C: 2.85± 0.40; Vit E&C+Arg: 3.50± 0.27; n=4; BuChE: control: 1.55± 0.15; Arg: 1.18± 0.08, Vit E&C: 1.38± 0.23; Vit E&C+Arg: 1.42± 0.14; n=5). The data indicate that the reduction of AChE and BuChE activities caused by Arg was probably mediated by oxidative stress, since antioxidants prevented these effects. Data are expressed as mean ± SD.

Conclusões: Assuming the possibility that these effects might also occur in the human condition, our findings may be relevant to explain, at least in part, the neurological dysfunction associated with hyperargininemia and might support a novel therapeutic strategy to slow the progression of neurodegeneration in this disorder.

Apoio Financeiro: CNPq, PROPESQ, FAPERGS

01.03.129

PARTICIPAÇÃO TAREFA-DEPENDENTE DOS RECEPTORES DE ADENOSINA TIPO A1 NA CONSOLIDAÇÃO DA MEMÓRIA EM CÓRTEX CINGULADO POSTERIOR DE RATOS. Pereira, G. S. **; da Silva, R. S. **; Battastini, A. M. O.; Freitas Sarkis, J. J.; Bonan, C. D.; Izquierdo, I. A.; Ciências Fisiológicas, PUC-RS; Pesquisa em Bioquímica, PUC-RS; Bioquímica, UFRGS; Bioquímica - ICBS, UFRGS.

Objetivo: A adenosina é um neuromodulador com importante papel na transmissão sináptica e excitabilidade neuronal. Este nucleosídeo age através de quatro subtipos de receptores: A1, A2A, A2B and A3. Os receptores de adenosine do tipo A1 são os mais abundantes no sistema nervoso central e sua ativação inibe a liberação de neurotransmissores. Sendo assim, há um crescente interesse sobre o efeito da adenosina e de seus análogos no processamento da memória. Nosso grupo demonstrou que o bloqueio dos receptores A1 através da intrafusão do antagonista 1,3-dipropyl-8-cyclopentylxanthine (DPCPX) melhorou a consolidação da memória em córtex cingulado posterior (CP) de ratos submetidos a tarefa de esquiva inibitória. A tarefa comportamental de habituação a um novo ambiente, também conhecida como campo aberto, é considerada a mais elementar forma de aprendizagem. No entanto, pouco se sabe sobre as propriedades farmacológicas relacionadas a esta tarefa no CP. Portanto, nós investigamos se o bloqueio dos receptores A1, em CP, altera a resposta comportamental dos animais após a tarefa de campo aberto.

Métodos e Resultados: Os ratos foram expostos ao campo aberto, onde permaneceram durante cinco minutos correspondendo a sessão de treino. Durante este período foram contados os cruzamentos e as respostas de orientação. Imediatamente após os animais receberam uma injeção de DPCPX 50nM no CP. Vinte e quatro horas após os animais foram novamente colocados no campo aberto e as mesmas medidas foram contadas, correspondendo a sessão

de teste. A infusão de DPCPX no CP causou amnésia retrógrada na tarefa de campo aberto. O resultado oposto foi encontrado na tarefa de esquiva inibitória, onde o efeito pós-treino do DPCPX em CP foi facilitatório, confirmando resultados anteriores provenientes do nosso laboratório.

Conclusões: Estudos têm demonstrado diferenças farmacológicas e bioquímicas na consolidação da memória das tarefas de campo aberto e esquiva inibitória. Os nossos resultados, além de corroborarem com prévios dados da literatura, leva-nos a acreditar que o sistema adenosinérgico age diferentemente em tarefas associativas e não-associativas.

Apoio Financeiro: PUC - RS, CNPq, FAPERGS, PRONEX

01.03.130

OXIDO NITRICO REGULA A SOBREVIVENCIA DE NEURONIOS DE RETINA EM CULTURA García, T. A. M. **; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF.

Objetivo: Os efeitos variados do óxido nítrico [NO] durante o desenvolvimento do sistema nervoso central mostram a importância deste gás em organismos vertebrados ou invertebrados. Molécula diatômica altamente difusível, o NO é sintetizado pela enzima Óxido Nítrico sintase [NOSs, EC 1.14.13.39] na presença do substrato L-arginina e O2 produzindo L-citrulina e NO. Neste trabalho avaliamos os efeitos de SNAP (S-Nitroso-N-Acetil-Penicilamida), um doador de NO, na sobrevivência celular em culturas purificadas de neurônios de retina de pinto.

Métodos e Resultados: Culturas purificadas de neurônios eram obtidas de retina de embrião de pinto de 8 dias na densidade de 8 x l05 céls/mL sobre placas de Petri de 35 mm previamente tratadas com poli-L-ornitina. Após 24 horas, as culturas controle e experimentais foram tratadas com SNAP (70 a 150µM) e mantidas por 96 horas, quando eram fixadas com 2.5% de paraformaldeido em tampão fosfato 0.2 M por 1 hora. O meio das culturas experimentais era trocado após 72 horas e continha as concentrações respectivas de SNAP. A sobrevivência celular foi avaliada através da contagem do número de células com neuritos ou sem neuritos/campo de 0.114 mm2, escolhidos aleatoriamente em um microscópio invertido de contraste de fase. SNAP mostrou um efeito protetor da morte celular induzido pela troca do meio, sugerindo que o NO tem efeito neuroprotetor (em número de células x 104/placa; n=3, controle=8,1 ± 1,0; experimentais =15,7±2,0). Além disso, SNAP (120µM) induziu significativo crescimento dos prolongamentos neuríticos.

Conclusões: Incubação com NO apresenta efeitos na sobrevivência e diferenciação de neurônios de retina em cultura sugerindo ser uma molécula de grande importância durante o desenvolvimento do sistema nervoso central.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

01.03.131

REGULAÇÃO DA CAPTAÇÃO E LIBERAÇÃO DE ASCORBATO EM CÉLULAS DE RETINA DE PINTO. Couto, V. B. *; Martins, R. A. *; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF.

Objetivo: O ácido ascórbico (AA) é encontrado em grandes concentrações no sistema nervoso central onde pode desempenhar funções neuromodulatórias e neuroprotetoras. O AA é transportado via um transportator sódio-dependente e também via um mecanismo de troca com o glutamato. Neste trabalho estudamos o transporte de AA em células de retina, caracterizando os mecanismos de captação e liberação da vitamina estimulada por glutamato.

Métodos e Resultados: Células de retina de embrião de pinto eram cultivadas a 37°C por 3 dias. A captação era estudada incubando-se as culturas em 1 ml de Hank’s com [14C] AA por 40 min, e determinando-se a radioatividade após lise com água. Para a liberação, após a captação as culturas eram sucessivamente incubadas com 1 ml de Hank’s em 4 ciclos de 3 minutos e 3 de 10 minutos, o primeiro com Hank’s normal, o segundo em ausência ou presença de antagonistas e o terceiro com glutamato. Nossos resultados mostraram que a captação diminui cerca de 90% quando as células são incubadas com sulfinpirazona ou quando o sódio é depletado do meio. Glutamato (1 mM) aumenta em 60% a liberação de AA e sulfinpirazona bloqueia a liberação basal e a estimulada por glutamato. DNQX, antagonista de receptores AMPA/Kainato, ou MK 801, antagonista de receptores NMDA, não alteram a liberação basal de AA ou a estimulada por glutamato. Despolarização com KCl (50mM) também promove aumento da liberação.

Conclusões: Os resultados indicam que AA é captado e liberado de células da retina em cultura através de um transportador específico dependente de sódio e bloqueado por sulfinpirazona. Além disso, a liberação induzida por glutamato não é mediada por ativação de receptores ionotrópicos, sugerindo a existência de um mecanismo de troca AA-glutamato que pode ter funções neuroprotetoras na retina.

Apoio Financeiro: CAPES, FAPERJ, CNPq, PRONEX-MCT

01.03.132

ATIVAÇÃO DE RECEPTORES NMDA MODULA A SÍNTESE PROTEICA, NÍVEIS INTRACELULARES DE L-ARGININA E A SÍNTESE DE ÓXIDO NÍTRICO EM CULTURAS DE RETINA Coutinho, R. N. *; Cossenza, M. **; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF; Biofísica, UFRJ.

Objetivo: A concentração intracelular de L-arginina (L-Arg) é fator limitante na síntese de óxido nítrico (NO). Neste trabalho mostramos que esta concentração aumenta após ativação de receptores NMDA, um efeito que é mimetizado pela presença de cicloheximida (CHX, um inibidor de síntese protéica) e que interfere na síntese de NO.

Métodos e Resultados: Em culturas de retina de embrião de pinto a captação de [3H]L-Arg foi inibido por CHX em 50% em 15min e 80% em 30min. A

incorporação de [3H]L-Arg em proteínas mostrou-se alta nestas culturas (65%) quando comparadas com as tratadas com CHX (2%). Análises quantitativas por TLC revelaram que CHX promoveu um aumento de 7 vezes na medida de [3H]L-Arg livre intracelular. CHX também promoveu aumento de 300% na formação de [3H]L-citrulina, efeito bloqueado por L-nitro-Arg. Outros experimentos foram realizados incubando as culturas com [3H]L-Arg, na presença ou não de CHX, durante 30 minutos. Após lavagem das células e incubação com NMDA ou NMDA+APV (antagonista NMDA) por 15 min, as culturas foram lisadas e a quantidade de [3H]L-Arg intracelular determinada por TLC. Nas culturas tratadas com NMDA a quantidade de [3H]L-Arg aumentou 40%, efeito bloqueado por APV. Nas culturas incubadas com CHX a quantidade total de [3H]L-Arg aumentou 300% mas, NMDA não produziu efeito aditivo. NMDA também promoveu um aumento de 50% do efluxo de [3H]L-citrulina, enquanto que na presença de CHX o aumento foi de 25%. Ambos efeitos foram bloqueados por L-nitro-Arg, um inibidor da NOS.

Conclusões: A atividade de receptores NMDA aumenta a concentração de L-Arg livre intracelular através da inibição da síntese de PTN. Os resultados indicam que o aumento da L-Arg intracelular é fator determinante na ativação da NOS e conseqüente síntese de NO.

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

01.03.133

CAMKII E PKC REGULAM O TRANSPORTE DE PURINAS EM CULTURAS DE RETINA DE AVES Martins, R. A. *; Dias, B. V. *; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF.

Objetivo: O transporte bidirecional de adenosina (ADO) em células de retina em cultura ocorre através de transportadores específicos sensíveis a nitrobenziltioinosina. Nossos resultados anteriores demonstraram que o glutamato estimula a liberação de purinas em culturas de células de retina de pinto, através de um mecanismo dependente de cálcio. Nesse trabalho visamos estudar os mecanismos desta liberação, bem como a relação desta com a captação de ADO.

Métodos e Resultados: Culturas mistas de retina de embrião de pinto eram mantidas em BME por três dias. Para a captação, as culturas eram incubadas por 15 minutos em Hank’s com [3H] ADO, lavadas, lisadas e a radioatividade determinada por cintilação líquida. Para a liberação, após a captação as culturas eram sucessivamente incubadas com 1ml de Hank’s por 4 períodos de 3 minutos (lavagem) e 3 períodos de 10 minutos com ou sem as substâncias a serem testadas. KN-62 (10µ M) ou KN-93 (1µ M), inibidores da proteína cinase dependente de calmodulina tipo II (Cam K-II), inibiram a liberação de purinas estimulada por glutamato ou Kainato. Esses inibidores e também um peptídio inibitório específico (Myr-AIP) bloquearam a captação de ADO, mas não a captação de gaba ou colina. Dados cinéticos indicam uma inibição dependente da dose de KN62 (IC50=3,1µ M) e KN93 (IC 50=0,77µ M). A captação também

mostrou um comportamento bifásico, com um dos componentes bloqueados por KN62.A queleretrina, um inibidor da PKC, apresentou um comportamento distinto aumentando a liberação basal ou estimulada por glutamato, mas, no entanto, bloqueando a captação.

Conclusões: Os resultados sugerem que o transporte bidirecional de ADO é regulado por diferentes proteínas cinases possivelmente através de mecanismos envolvendo fosforilação do transportador.

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ, PRONEX-MCT

01.03.134

ATIVAÇÃO DE RECEPTORES NMDA PROMOVE INIBIÇÃO DA SÍNTESE PROTEICA EM CULTURAS DE RETINA DE PINTO. Cadilhe, D. V. *; Cossenza, M. **; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF; Biofísica, UFRJ.

Objetivo: O controle da síntese de proteínas locais é um processo de grande importância no SNC graças às várias implicações na LTP, reorganização sináptica e sinaptogênese. O objetivo deste trabalho foi mostrar a participação de receptores NMDA no controle rápido de síntese de proteínas de neurônios retinianos em cultura.

Métodos e Resultados: Culturas de retina embrião de pinto de 8 dias foram incubadas com Hank’s contendo [35S] Metionina ([35S] Met) por vários tempos em presença ou ausência de NMDA. Após lavagem das células e precipitação das proteínas, observou-se que NMDA (1mM) reduziu 40% da incorporação de [35S] Met em proteínas. O efeito era detectado desde 5 minutos e manteve-se durante todo o curso temporal. MK-801 (100µM) ou APV (200µM) (antagonistas de receptores NMDA) bloquearam o efeito, o mesmo não acontecendo com a adição de nitro-L-Arginina (L-NA) (200µM), um inibidor da óxido nítrico sintase ou KN-93 (1µM), um inibidor da CAM-K-II. A incorporação de [3H] L-Arg nas proteínas seguiu o mesmo padrão de tempo de inibição.

Conclusões: A ativação de receptores NMDA em culturas de retina inibe rapidamente a incorporação tanto de [35S]Met como de [3H]L-Arg em proteínas e o efeito não é dependente de óxido nítrico ou CAM-K-II. Os resultados indicam papel importante dos receptores NMDA no controle da síntese protéica local em neurônios de retina em desenvolvimento.

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ, PRONEX-MCT

01.03.135

REGULAÇÃO POR ADENOSINA DA ATIVIDADE DE ERKS 1/2 EM CULTURAS DE CÉLULAS GLIAIS DE RETINA DE PINTO. Araujo da Silva, I. L. *; Leão Ferreira,

L. R.; Rodrigues, A. S. *; Paes-de-Carvalho, R.; Biofísica - Neurobiologia, UFF; Biologia Celular e Molecular, UFF; Neurobiologia, UFF.

Objetivo: As células gliais apresentam papéis fundamentais no SNC, tais como regulação da transmissão sináptica, captação e metabolismo de neurotransmissores. Receptores para o nucleosídeo adenosina estão presentes em células gliais regulando a atividade da adenilil ciclase. A via das MAP cinases ou ERKs1/2 parece ter papel importante em diversas funções neurais e gliais. O objetivo do trabalho foi avaliar o envolvimento de ERKs na sinalização por adenosina, em culturas de células gliais de retina, caracterizando os subtipos de receptores envolvidos.

Métodos e Resultados: Culturas de células gliais foram obtidas após dissecção de retinas de embriões de pinto E11, dissociação e incubação a 37°C em BME por 21 dias. As culturas eram então incubadas com agonistas e antagonistas específicos de receptores de adenosina e processadas para determinação do nível de fosforilação/ativação de ERK por western-blotting, utilizando anticorpo específico para a forma fosforilada da enzima. A incubação das culturas com adenosina deaminase (0,5U/mL) resultou em redução dos níveis basais de fosforilação, o que indica a liberação de adenosina pelas células gliais. O nível máximo de fosforilação foi observado em culturas estimuladas por 5 minutos, decaindo em tempos subseqüentes. CHA(1µM), um agonista de receptores A1 de adenosina, provocou aumento dos níveis de fosforilação em culturas incubadas com adenosina deaminase, efeito bloqueado por DPCPX (1µM), um antagonista A1. Em experimentos similares, a co-incubação de CHA (1µM) com DPMA (1µM), um agonista A2a, resultou em bloqueio ao estímulo do agonista, sugerindo que os receptores A2a modulam a resposta à ativação de ERK 1/2 induzida por receptores A1.

Conclusões: Os resultados mostram que a ativação de diferentes receptores de adenosina modula a ativação das ERKs 1/2 em células gliais da retina.

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, PRONEX-MCT, CAPES

01.03.136

CARACTERIZAÇÃO DO TRANSPORTE DE ADENOSINA EM CULTURAS DE CÉLULAS DE GLIA DE RETINA DE PINTO Ferreira, J. M. **; Rodrigues Pereira, M. *; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF; Biofísica CCS, UFRJ.

Objetivo: A adenosina (ADO) é uma substância neuromoduladora liberada nos processos de hipóxia/isquemia exercendo efeito neuroprotetor. Mecanismos de captação e liberação de ADO foram previamente demonstrados em culturas mistas ou purificadas de neurônios da retina de pinto. O transporte de ADO ocorre através de transportadores específicos sensíveis ou insensíveis a nitrobenziltioinosina (NBMPR). Grande parte do transporte de ADO é bloqueado por NBMPR em culturas complexas e purificadas de neurônios. O objetivo do trabalho foi caracterizar o transporte de ADO pelas células gliais em culturas purificadas de retina.

Métodos e Resultados: Culturas purificadas de glia de retina de pinto eram mantidas por 21 dias até que as células atingissem a confluência. Para os experimentos de captação as células eram incubadas por 10 minutos com as drogas a serem testadas e em seguida era adicionada ( 3H ADO). As culturas eram então incubadas por mais 15 minutos. Para experimentos de liberação, após a captação as culturas eram estimuladas com diferentes drogas. A inibição máxima da captação de (3H) ADO por NBMPR foi de 64%, e ainda observamos o bloqueio da captação por inibição de PKC ou CAMKII, mas não da PKA. Ao contrário do que acontece em culturas mistas ou purificadas de neurônios a liberação de purinas não foi observada por estímulo com agonistas de receptores glutamatérgicos NMDA ou kainato. Entretanto, a incubação com a própria adenosina foi capaz de aumentar a liberação.

Conclusões: Transportadores de adenosina sensíveis a inibição por NBMPR são expressos em células gliais da retina em cultura. Esses transportadores, apesar de em menor concentração, apresentam as características observadas em culturas mistas, como a modulação parcial por PKC e CAMK II.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

01.03.137

ADENOSINA ENDÓGENA E AMP CÍCLICO MODULAM A EXPRESSÃO DE RECEPTORES A1 DE ADENOSINA EM CULTURAS DE RETINA DE PINTO. Rodrigues Pereira, M. *; Ferreira, J. M. **; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF; Biofísica CCS, UFRJ.

Objetivo: Os receptores A1 e A2a de adenosina regulam a atividade da adenilil ciclase respectivamente diminuindo ou aumentando os níveis intracelulares de AMP cíclico. Em culturas de células de retina em monocamada, o receptor A1 apresenta baixos níveis de expressão. Trabalhos anteriores mostraram que esta expressão depende do grau de dissociação das células, apresentando-se maior em culturas de agregados. Neste trabalho testamos a hipótese de que os níveis de adenosina endógena e AMP cíclico modulam a expressão do receptor A1 de adenosina em culturas de retina de pinto.

Métodos e Resultados: Para determinação da ligação a receptores A1, homogenados de culturas em monocamada eram incubados com (3H)DPCPX (antagonista A1), na ausência ou presença de CHA (agonista A1). Nestas condições não foi detectada a presença de receptores A1. Entretanto, quando essas culturas eram previamente tratadas por 6 dias com 8BrAMPc (100 µ M) ou SpAMPc (20 µ M), análogos permeáveis de AMPc, observou-se um aumento da ligação específica. O tratamento das células com adenosina deaminase ( 0,1 U/mL) por 24 horas também aumentou a detecção do receptor A1 em relação às culturas não-tratadas.

Conclusões: Os resultados indicam que a expressão do receptor A1 de adenosina é modulada pelos níveis de AMPc e de adenosina endógena em culturas de retina de pinto. Uma hipótese sugerida seria a modulação da expressão dos receptores

A1 ser dependente dos níveis de adenosina endógena liberada, que poderiam então, de acordo com as concentrações alcançadas, modular a ativação dos receptores A2a e aumentar os níveis de AMPc, ou ativar receptores A1, e conseqüentemente diminuir o nível de expressão desses receptores.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

01.03.138

REGULAÇÃO DA PROLIFERAÇÃO CELULAR POR ÓXIDO NÍTRICO EM RETINA DE EMBRIÃO DE PINTO Magalhães, C. R. **; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF.

Objetivo: Eventos de morte, sobrevida, proliferação, diferenciação e migração celular são críticos na configuração madura dos tecidos e são altamente regulados por vias de sinalização. Óxido nítrico(NO), uma molécula sinalizadora comum em vários tecidos, é produzida no sistema nervoso embrionário e adulto em diversos animais. Nesse estudo, buscamos caracterizar NO como supressor da proliferação celular, e esclarecer seu mecanismo de ação e população alvo em culturas de retina de embrião de pinto.

Métodos e Resultados: Culturas mistas de neurônios e células gliais, e culturas purificadas de glia, foram tratadas com diferentes drogas e após 24 horas, incubadas com 3[H]timidina por 1h. Em seguida a radioatividade incorporada ao núcleo foi determinada, ou as culturas fixadas e submetidas a autorradiografia. Tratamento com doadores de NO, SNAP e sperminaNO-complex(sperNO), inibiu em 75,9±6,9% e 49,3±3,1% a incorporação de 3[H]timidina, respectivamente. Nas culturas mistas incubadas com SNAP 100µM, a marcação aurorradiográfica foi quase nula em relação ao controle, que mostrou forte marcação em núcleos grandes e ovais de células achatadas. O efeito mostrou não ser dependente de GMPc, pois o tratamento com o análogo 8Br-GMPc, o inibidor da guanilato ciclase ODQ ou da fosfodiesterase para GMPc zaprinast não interferiu significativamente na síntese de DNA. A participação da cascata das MAP cinases foi sugerida quando SNAP e sperNO inibiram abaixo do basal o efeito proliferativo de ATP. Porém, resultados recentes de western blot indicam que NO aumenta os níveis de fosfoERK em culturas de células gliais.

Conclusões: NO inibe a proliferação de células gliais de retina de pinto em culturas mistas ou purificadas, um efeito independente de GMPc ou da ativação de MAP cinases. Os resultados reforçam a idéia de que o NO tem papel importante no sistema nervoso em desenvolvimento.

Apoio Financeiro: PRONEX-MCT, CNPq, FAPERJ

01.03.139

ÓXIDO NÍTRICO INIBE A EXCITOTOXICIDADE DO GLUTAMATO EM CULTURAS PURIFICADAS DE RETINA DE EMBRIÃO DE PINTO: ENVOLVIMENTO DE RECEPTORES NMDA. Ferreira, J. M. **; Paes-de-Carvalho, R.; Neurobiologia, UFF; Biofísica CCS, UFRJ.

Objetivo: Óxido Nítrico (NO) desempenha funções fundamentais durante os estágios iniciais do desenvolvimento do SNC regulando crescimento de neuritos e plasticidade. A morte celular observada após processos isquêmicos relacionam a atividade de receptores NMDA e produção de NO, cujos produtos de degradação disparam o processo de morte celular. A nitrosilação do receptor NMDA em um resíduo cisteína leva à inativação do receptor. O objetivo deste trabalho foi demonstrar o efeito da incubação com doador de NO de culturas purificadas de neurônios submetidos ao efeito excitotóxico de glutamato e o envolvimento do NO no controle da expressão de receptores do tipo NMDA. Objetivos: Óxido

Métodos e Resultados: Culturas purificadas de neurônios e mistas foram incubadas previamente com o doador de NO, SNAP, para testarmos respectivamente o bloqueio do efeito excitotóxico do glutamato em neurônios e a ligação de (3H)-MK801 a receptores de NMDA, assim como o influxo de 45Ca+2

após a ativação de receptores NMDA. Observamos bloqueio de cerca de 40% da excitotoxicidade por glutamato em culturas pré-tratadas com o doador de NO. Um aumento de ligação de (3H)MK-801 foi também detectado nestas culturas indicando ocorrer controle do receptor NMDA. Entretanto, ensaios de captação de 45Ca+2 mostraram haver diminuição do influxo deste íon em culturas estimuladas com NMDA + glicina.

Conclusões: O NO apresenta efeito neuroprotetor marcante sobre a excitotoxicidade induzida por glutamato em neurônios da retina. Os efeitos do NO sobre os receptores de NMDA se mostram complexos e provavelmente estão relacionados a nitrosilação do receptor.

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

01.03.140

PRODUÇÃO E PURIFICAÇÃO DE ANTICORPOS PARA PROTEÍNAS DA GELÉIA REAL DE APIS MELLIFERA E SEU USO NA ANÁLISE DE PROTEÍNAS HOMOLOGAS NO CÉREBRO DE ABELHA. Peixoto, L. G. *; Espindola, F. S.; Genética e Bioquímica, UFU.

Objetivo: Produção de anticorpos contra as proteínas da geléia real de Apis mellifera e a identificação de proteínas homologas no cérebro da abelha.

Métodos e Resultados: As principais proteínas hidrossolúveis da geléia real (PPGRs) são subdivididas em cinco classes protéicas (PPGR 1 a 5). A geléia real foi obtida comercialmente em Uberlândia, armazenada a –20ºC até a homogeneização em tampão fosfato pH 8.0 com EDTA. Por centrifugação (10000g, 4ºC) obteve-se a fração solúvel contendo as PPGRS. Para a imunização foram selecionados dois coelhos que receberam aplicações subcutâneas de PPGRs preparadas com Adjuvante completo de Freud’s (1º dose) e com Adjuvante

Incompleto de Freud’s (doses subseqüentes). Para a purificação de anticorpos por imunoafinidade aplicou-se o homogeneizado de geléia real em SDS-PAGE 10% e eletrotransferiu as proteínas para membrana de nitrocelulose. Incubou-se cada fita de nitrocelulose contendo uma única banda de PPGR com soro de coelho imune. Os anticorpos foram eluidos com trietilamina e dialisados em TBS. A melhor titulação dos anticorpos foi de 1:5000. Produziu-se anticorpos purificados por afinidade para PPGR total e para as bandas específicas correspondentes a PPGR1 a PPGR5. Houve marcação cruzada entre as PPGRs devido a sua alta identidade (presença de aminoácidos na mesma posição em seqüências alinhadas), mais de 42% entre as PPGRs. Esses anticorpos foram testados por Western Blot da fração sobrenadante do cérebro de abelha, coelho, rato e pintainho. Observou-se que o anti-PPGR1 foi eficiente em detectar exclusivamente no cérebro de Apis dois polipeptídeos de aproximadamente 120kDa e 55kDa.

Conclusões: A imunização com geléia real foi eficiente para obtenção de anticorpos para as diferentes PPGRs. O reconhecimento pela anti-PPGR-1 de proteínas no cérebro é uma nova ferramenta de estudos neubiológicos em himenópteros.

Apoio Financeiro: CNPq, UFU, VALÉE NORDESTE, Apiários Girassol

01.03.141

TRANSFERÊNCIA INTERMANUAL DE TREINAMENTO EM UMA HABILIDADE MOTORA ENVOLVENDO MOVIMENTOS SEQUENCIAIS DE OPOSIÇÃO DE DEDOS EM IDOSOS NORMAIS. Santos, R. L.; Silva, K.; Tardeli, E.; Araujo, R.; Souza, C.; Pimentel Piemonte, M. E.; Fisioterapia - Fonoaudiologia e T. O., FMUSP.

Objetivo: O aprendizado processual consiste na capacidade em adquirir uma nova habilidade através da repetição, sendo altamente específico e expresso através da melhora do desempenho. O objetivo deste trabalho foi verificar a transferência no aprendizado de uma nova habilidade motora envolvendo movimentos seqüenciais de oposição de dedos em idosos normais, entre: (1) duas diferentes seqüências de movimentos e, (2) entre as duas mãos.

Métodos e Resultados: Métodos: 21 sujeitos normais, 9 do sexo masculino e 12 do sexo feminino, com idade média de 62,8 anos (DP= 9,71), sem antecedentes de alterações neurológicas detectáveis, sendo 19 com dominância motora à direita e 2 à esquerda, foram avaliados através da velocidade e precisão em uma tarefa motora envolvendo movimentos seqüenciais de oposição de dedo em duas diferentes seqüências, antes e depois de 8 sessões de treinamento realizado em apenas uma das mãos, onde apenas uma das seqüências recebia treinamento. Cada uma das seqüências consistia de cinco movementos de oposição de dedos. Após o treinamento foram comparados os resultados obtidos com a seqüência treinada de não treinada, entre a mão treinada e não treinada. Resultados: Através do teste T-pareado foi encontrada diferença significativa (P=0,001) no desempenho antes e depois do treinamento para seqüência treinada em ambas as mãos (treinada e não treinada). O mesmo não pode ser observado para a seqüência não treinada (p>0,001).

Conclusões: Houve transferência do aprendizado entre a mão treinada e não treinada, mas não houve transferência entre a seqüência treinada e não treinada, a despeito da similaridade entre as mesmas

Apoio Financeiro: HCFMUSP

01.03.142

APRENDIZADO DE UMA NOVA HABILIDADE MOTORA ENVOLVENDO MOVIMENTOS SEQÜÊNCIAS DE OPOSIÇÃO DE DEDOS: EFEITOS DE UMA TAREFA MOTORA CONCORRENTE. Silva, K.; Santos, R. L.; Tardeli, E.; Araujo, R.; Souza, C.; Piemonte, M. E.; Fisioterapia - Fonoaudiologia e T. O., FMUSP.

Objetivo: O aprendizado motor faz parte do sistema processual cujas características são a aquisição lenta, baseada na repetição e evidenciada pela melhora no desempenho. No inicio do processo há uma grande demanda do sistema de atenção que diminui progressivamente com o treinamento, até que seja atingida a fase de automatização, quando se torna possível realizar a tarefa com o mínimo dispêndio atencional. O objetivo deste trabalho foi verificar a automatização de treinamento.uma tarefa motora específica envolvendo movimentos seqüenciais de oposição de dedos com o polegar.

Métodos e Resultados: Métodos: 21 sujeitos normais, com idade média de 62,8 anos (DP = 9,71), foram avaliados através da velocidade e precisão em uma tarefa motora envolvendo movimentos seqüenciais de oposição de dedo em duas diferentes seqüências, antes e depois de 8 sessões de treinamento, onde apenas uma das seqüências recebia treinamento. Após o treinamento foram comparados os resultados obtidos com a seqüência treinada de não treinada, entre a condição de treinamento e a condição onde os sujeitos deveriam realizar uma nova tarefa motora com a mão contralateral, concomitantemente a execução das seqüências de oposição de dedos, realizada com a mão treinada. Resultados: Através do teste T-pareado foi encontrada diferença significativa (P-value = 0,0001) no desempenho depois do treinamento para seqüência treinada. O mesmo não pode ser observado para a seqüência não treinada (P-value= 0,4067). Houve diferença significativa (p-value=0,000) na interferência da tarefa motora concorrente sobre o desempenho da seqüência treinada e não treinada.

Conclusões: Houve uma melhora significativa no desempenho da seqüência que foi treinada, a qual se mostrou menos dependente da atenção em comparação à seqüência que não foi treinada, evidenciando um processo de automatização decorrente da prática.

Apoio Financeiro: HCFMUSP

01.03.143

EFEITO DOS DERIVADOS ACETILÊNICOS TIOFENOS E FURANOS SOBRE A PEROXIDAÇÃO LIPÍDICA EM FÍGADO E CÉREBRO DE RATOS. Meotti, F. C. **; Nogueira, C. W.; Silva, D. O.; Zeni, G.; Rocha, J. B. T. da; Bioquímica, UFSM; Química, UFSM.

Objetivo: Estudos prévios deste grupo demonstram que derivados acetilênicos tiofenos e furanos possuem atividade antiinflamatória. No presente trabalho avaliamos o potencial antioxidante destes compostos através da peroxidação lipídica induzida por Fe2+ /EDTA.

Métodos e Resultados: Para testar o efeito dos compostos sobre a peroxidação lipídica incubamos os compostos acetilênicos tiofenos e furanos (10-400 mM) juntamente com homogeneizado de tecido hepático ou cerebral de ratos. A peroxidação lipídica foi induzida por FeCl2 e EDTA (Biochem. J. 184: 469-472, 1979). A avaliação da lipoperoxidação foi feita através do TBARS (Neuroc. Res. 3: 297-303, 2002). Todos os tiofenos testados inibiram a peroxidação lipídica de maneira dependente da concentração em fígado e cérebro. A potência inibitória foi na ordem 1>>2>3 no fígado e 1>>2=3 no cérebro. Derivados acetilênicos furanos inibiram a peroxidação lipídica de forma dependente da concentração. O composto furano 6 foi o mais efetivo contra a peroxidação lipídica, tanto em fígado quanto em cérebro. Os furanos 4 e 5 tiveram efeito somente em altas concentrações. Tiofenos e furanos foram mais potentes em inibir a peroxidação no tecido cerebral do que no hepático.

Conclusões: Estes resultados sugerem que derivados acetilênicos tiofenos e furanos são antioxidantes e que esta atividade antioxidante é alterada por modificações estruturais dos compostos. Além disso, a atividade antioxidante é potencialmente diferente nos diferentes tecidos.

Apoio Financeiro: FAPERGS, CNPq, FIPE-UFSM