PALOMA OLIVEIRA VIDAL

Caracterização molecular e morfológica de populações de Aedes aegypti (Diptera:

Culicidae) no Estado de São Paulo

Tese apresentada ao Departamento de

Parasitologia do Instituto de Ciências

Biomédicas da Universidade de São Paulo,

para obtenção do título de Doutor em

Ciências.

Área de concentração: Biologia da Relação

Patógeno-Hospedeiro.

Orientador: Prof. Dr. Lincoln Suesdek

Versão original

São Paulo

2015

RESUMO

Vidal PO. Caracterização molecular e morfológica de populações de Aedes aegypti (Diptera:

Culicidae) no Estado de São Paulo. [Tese (Doutorado em Parasitologia)]. São Paulo: Instituto

de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo; 2015.

O mosquito Aedes (Stegomyia) aegypti é nativo da África Oriental e tem se espalhado pelo

mundo, devido principalmente às atividades humanas. A presença e a dispersão deste

mosquito são consideradas como um problema de saúde pública, devido à sua capacidade de

transmitir patógenos causadores de doenças, como a Dengue, Febre Amarela, Chikungunya e

a Febre Zika. O Estado de São Paulo, apresenta uma das mais altas taxas de infecção por vírus

dengue no mundo, com aproximadamente 500.000 casos autóctones notificados no primeiro

semestre de 2015. A principal maneira de controlar o vírus da dengue é diminuir as

populações de mosquito Ae. aegypti, pois nenhuma vacina eficaz e nem drogas antivirais

estão disponíveis. Apesar da alta incidência de dengue no Estado de São Paulo poucos

estudos dirigidos às populações do mosquito têm sido realizados. Diante desse cenário, o

objetivo deste trabalho foi caracterizar geneticamente e morfologicamente populações de Ae.

aegypti localizadas em seis municípios do Estado de São Paulo: Santos (SAN), São Paulo

(SPA), Campinas (CAM), São Carlos (SCA), Catanduva (CAT) e São José do Rio Preto

(SRP). Já que esses municípios são interligados por grandes rodovias, hipotetizamos que elas

poderiam viabilizar a dispersão do mosquito no Estado. Coletamos amostras populacionais de

Ae. aegypti em três períodos diferentes durante os anos de 2011 e 2012. A distância

geográfica linear entre as populações amostradas foram de no máximo 468,4 km e de no

mínimo 54,9 km. A caracterização dessas populações geográficas foi feita mediante

genotipagem de oito loci microssatélites, sequenciamento dos genes mitocondriais Citocromo

oxidase subunidade I (COI) e Nicotinamida adenina dinucleotídeo desidrogenase subunidade

4 (ND4) e morfometria geométrica alar. Análises genéticas e fenéticas revelaram que as

populações de Ae. aegypti no Estado de São Paulo estão estruturadas. Todos os loci

microssatélites foram polimórficos e apontaram diferenciação genética moderada e

significativa entre as populações (Fst= 0.04; p < 0,05). Níveis de diversidade nucleotídica do

gene COI (π =0,0062) e do gene ND4 (π=0,017) foram moderadamente altos. Dois grupos

geneticamente distintos foram encontrados no Estado de São Paulo (k= 9,70; divergência

nucleotídica= 0,019; Fst= 0,80). Distâncias de Mahalanobis indicaram diferenças no formato

alar entre as seis populações (p <0,0001). Não foi detectada correlação entre distâncias

geográficas e genéticas ou morfológicas. A população de SAN foi a mais distinta e

polimórfica, e, além disso, verificamos que o polimorfismo genético das amostras

populacionais é inversamente proporcional à sua distância relativa a SAN. Isso é coerente

com o fato de que o município de Santos contém um porto marítimo reputado como ponto de

entrada dos mosquitos Ae. aegypti de diversas partes do mundo. Ao longo dos meses que

compreenderam o estudo, foram encontradas diferenças morfo-genéticas temporais entre as

seis populações analisadas, possivelmente indicativas de microevolução dos mosquitos. Os

resultados deste estudo podem ser úteis para compreendermos a dispersão deste mosquito

vetor no Estado de São Paulo.

Palavras–chave: Morfometria geométrica alar. Microssatélites. Microevolução. Mosquitos.

Culicídeos. Citocromo oxidase subunidade I. Nicotinamida adenina dinucleotídeo

desidrogenase subunidade 4. COI. ND4.

ABSTRACT

Vidal PO. Molecular and morphological characterization of Aedes aegypti populations

(Diptera: Culicidae) from State of São Paulo. [Ph. D. thesis (Parasitology)]. São Paulo:

Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo; 2015.

The mosquito Aedes (Stegomyia) aegypti, is native from Eastern Africa, but has spread

worldwide mainly due to human activities. The presence and dispersion of this mosquito are

considered to be a public health problem because of its vectorial competence for dengue,

yellow fever, chikungunya and Zika viruses. The State of São Paulo, Brazil, displays one of

the highest rates of dengue infection in the world, with approximately 500,000 autochthonous

cases being reported in the first semester of 2015. The main way to control dengue viruses is

reducing Ae. aegypti populations, because neither effective vaccines nor antiviral drugs are

available. Despite the high incidence of dengue in the São Paulo State, few populational

studies have been undertaken. The aim of this study was to genetically and morphologically

characterize Ae. aegypti populations from six locations in the São Paulo State: Santos (SAN),

São Paulo (SPA), Campinas (CAM), São Carlos (SCA), Catanduva (CAT) e São José do Rio

Preto (SRP). Since these municipalities are connected by major highways, we hypothesized

that they could facilitate spread of the mosquito in the State. Samples were collected during

the years 2011 and 2012. The linear distances between them range from 54.9 to 468.4 km.

The mosquitoes were analyzed based on eight microsatellite loci, sequences of the

mitochondrial DNA cytochrome oxidase subunit I (COI) and Nicotinamide adenine

dinucleotide dehydrogenase subunit 4 (ND4) genes and and wing geometric morphometrics.

The phenetic and genetic analyses revealed that populations of Ae. aegypti are structured. All

microsatellites loci were polymorphic and genetic differentiation among samples was

moderate and statistically significant (Fst= 0.04; p < 0.05). Nucleotide diversities of COI (π =

0.0062) and ND4 gene (π = 0.017) were moderately high. Two groups genetically distinct

were found in the State of São Paulo (k= 9.70; nucleotide divergence= 0.019; Fst= 0.80). No

correlation between geographic and genetic or morphological distances was detected. The

SAN population was the most distinct and polymorphic, furthermore, we verified that genetic

polymorphism decreases away from the SAN population, which is consistent with the fact

that SAN contains a seaport that could act as a point of entry for the mosquito Ae. aegypti

come from all over the world. Over the months comprised by study, we found the temporal

genetics and morphologic differences among the six populations, a possibly indicative of

microevolution of mosquitoes. The results of this study may be useful for understand the

spread of this vector mosquitoes in the State of São Paulo.

Keywords: Wing geometric morphometrics. Microsatellites. Microevolution. Mosquitoes.

Culicidae. Cytochrome oxidase subunit I. Nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase

subunit 4. COI. ND4.

1 INTRODUÇÃO

1.1 Aedes aegypti: O mosquito, os problemas e o controle.

A Dengue é uma doença viral de maior impacto para a saúde pública nas regiões

tropicais (World Health Organization, 2015). É considerada a segunda doença mais mortal do

mundo, na qual o agente etiológico é transmitido por um vetor artrópode, aquém apenas da

Malária. Devido sua distribuição generalizada, a Dengue é a doença mais importante em

termos econômico e de morbidade (Gubler, 2002; Guzman et al., 2010). A Organização

Mundial da Saúde estima que 50-100 milhões de infecções ocorrem anualmente no mundo e

aproximadamente 2,5 bilhões de pessoas vivem em áreas de risco ao vírus dengue. Em São

Paulo, o Estado mais populoso e urbanizado do Brasil, o Centro de Vigilância Epidemiológica

registrou nos últimos anos grandes surtos de Dengue autóctone, por exemplo, em 2013 e 2014

foram notificados 201.498 e 196.879 casos respectivamente. Em 2015, de janeiro a julho

foram confirmados 499.556 casos. Até o momento não está disponível nenhuma vacina eficaz

para a prevenção da Dengue e nem drogas antivirais para o tratamento da doença, sendo

assim, o controle dos vetores e a vigilância entomológica permanecem as principais

estratégias contra a infecção nos seres humanos.

O mosquito Aedes (Stegomyia) aegypti (L.) 1762 (Figura 1) além de ser o principal

vetor do vírus dengue no Brasil, também é vetor de agentes etiológicos de doenças graves

como a Febre Amarela, Chikungunya e a Febre Zika. Pertencente à família Culicidae (112

gêneros e 3.546 espécies) essa espécie é natural da região afrotropical onde são encontrados

os outros membros do grupo (Harbach, 2015). Atualmente está distribuído por quase todo o

mundo, devido principalmente as atividades humanas, com ocorrência nas regiões tropicais e

subtropicais.

Provavelmente o Ae. aegypti foi introduzido nas Américas durante as primeiras

explorações europeias ao Novo Mundo no século XV, por meio de barcos que cruzavam o

Atlântico (Díaz-Nieto et al., 2013). Os primeiros registros no Estado de São Paulo foram em

1980 na zona portuária de Santos, sendo os focos eliminados (Pontes, Ruffino-Netto, 1994).

De acordo com a Secretaria de Vigilância em Saúde, o Ae. aegypti está atualmente presente

em todos os Estados brasileiros incluindo o distrito federal. Com o intercâmbio comercial do

Brasil com outros países, as cidades que apresentam grandes portos como Santos, Belém e

Manaus proporcionam um meio passivo transoceânico para disseminação do mosquito Ae.

aegypti no país (Paduan, Ribolla, 2008). Indivíduos adultos raramente voam mais do que 500

metros de distância, por isso a dispersão terrestre desse mosquito também pode ocorrer

passivamente ao longo de estradas (Honório et al., 2003; Reiter et al., 1995).

Figura 1 - Fêmea do mosquito Ae. aegypti.

Fotografada por: Marcos Teixeira de Freitas.

Os mosquitos Ae. aegypti são altamente domesticados, com hábitos sinantrópicos e

antropofílicos (Forattini, 2002). Seus ovos e larvas são adaptados para viverem em recipientes

artificiais, tais como, garrafas plásticas, latas, pneus, tanques de água, baldes entre outros. A

preferência alimentar das fêmeas adultas em sangue humano reforça a capacidade de

transmissão das doenças aos seres humanos. Rodrigues et al. (2015), estudando esses

mosquitos em uma área urbana no Estado de São Paulo, verificaram que a densidade de

mosquitos fêmea é diretamente proporcional ao número de habitantes dentro de uma

residência, indicando que a população humana afeta positivamente o número de indivíduos do

mosquito Ae. aegypti.

Estudos populacionais têm sido desenvolvidos em vários países a fim de ajudar no

desenvolvimento de estratégias de controle desse inseto vetor (Brown et al., 2013; Jaimes-

Dueñez et al., 2015; Monteiro et al., 2014; Paupy et al., 2012; Vidal, Suesdek, 2012). A

variação genética em populações de Ae. aegypti pode influenciar na competência vetorial de

patógenos, como os vírus da Dengue e Febre Amarela (Lourenço-de-Oliveira et al., 2004; Sim

et al., 2013; Tabachnick et al., 1985). Portanto, a caracterização genética de populações

naturais ao longo do tempo é essencial para acompanhar a circulação de traços genéticos

epidemiologicamente importantes que podem explicar sobre a epidemiologia dessas doenças.

Estratégias de controle do mosquito Ae. aegypti tem sido desenvolvido há décadas,

mediante o uso de inseticidas, controle biológico, controle mecânico e os recentes métodos

alternativos de mosquitos transgênicos (Araujo et al., 2015; Carvalho et al., 2015; Wilke,

Marrelli, 2012) e o uso de Wolbachia como um biocontrole (Ritchie, 2014). Os mosquitos

apresentam grande capacidade adaptativa a diferentes condições ambientais devido à

resistência de diferentes mutantes. Dessa forma a eficácia de cada método de controle vai

depender da situação em que estão sendo empregados. Outro fator que pode dificultar os

métodos de controle é a microevolução desses mosquitos.

A microevolução é definida como uma mudança na frequência alélica dentro de uma

população, que pode ser observada em pequenos intervalos de tempo, de uma geração para

outra (Futuyma, 1997; Ridley, 2003). Essa mudança pode ocorrer por diferentes processos,

tais como, mutação, seleção, fluxo gênico e deriva genética. Os mosquitos Ae. aegypti em

geral apresentam reprodução rápida, podendo completar o ciclo de vida em poucos dias. Em

condições ambientais adequadas como temperatura, umidade, pluviosidade, o tempo entre a

eclosão dos ovos e os adultos emergirem dura de 8 a 10 dias (Forattini, 2002), dessa forma

podem apresentar uma rápida evolução entre suas populações.

A caracterização populacional utilizando padrões genéticos, morfológicos e

comportamentais comparadas ao longo de transectos geográficos ou temporais, é o primeiro

passo para estudar a microevolução. Vidal et al. (2012), estudando a forma e o tamanho alar

de Ae. albopictus no período de 4 anos, verificaram alterações nas asas, que indicam

processos microevolutivos nesta espécie. Em trabalho mais recente, Louise et al. (2015)

mostraram como a microevolução em Ae. aegypti pode ocorrer em pequenos intervalos de

tempo. Eles mostraram que ao longo de um ano, entre as estações climáticas, a frequência

alélica e o formato das asas de uma população de mosquito Ae. aegypti foram alteradas.

A análise de diferentes variáveis biológicas pode fornecer maior robustez aos testes de

hipóteses que visem descrever padrões e processos microevolutivos, uma vez que as taxas e

velocidades de evolução entre os caracteres são distintas em uma espécie. Sendo assim, as

chances de detectar variações fenotípicas e genotípicas utilizando múltiplos parâmetros são

maiores (Paupy et al., 2010; Rocha, 2005; Savard et al., 2006; Vidal, Suesdek, 2012). A

seguir serão descritos os marcadores que foram utilizados no desenvolvimento do presente

trabalho.

1.2 Marcadores Genéticos

1.2.1 DNA nuclear - Microssatélites

Os microssatélites, também conhecidos como SSR (sequências simples repetidas), são

sequências curtas de 1 a 6 pares de bases, repetidas em tandem, ou seja, uma ao lado da outra

(Schlötterer, Pemberton, 1998). Essas regiões são muito frequentes, espalhadas aleatoriamente

por todo o genoma de eucariotos, podendo estar associadas a sequências expressas. Os SSRs

são flanqueados por sequências únicas que podem ser amplificadas pelo método da PCR

(Reação em cadeia da polimerase) por meio de um par de primers específicos, sendo,

portanto, unilocos, com herança codominante, permitindo a discriminação entre homozigotos

e heterozigotos (Müller et al., 2010).

Os SSRs são marcadores com níveis elevados de polimorfismo, principalmente pela

natureza altamente repetitiva e apresentarem pequena extensão da região de repetição.

Independente do elemento repetido, cada SSR, representa um locus genético, multialélico e

muito informativo. O processo de multialelismo do locus SSR está envolvido em três

fenômenos básicos, mutação, “Crossing over” ou permuta desigual e erros da DNA

polimerase (“Slippage”).

Um dos fatores limitantes para a aplicação de marcadores SSRs é o baixo índice de

transferibilidade dos primers entre as espécies, sendo necessário isolar essas regiões na

maioria das espécies que estão sendo estudadas pela primeira vez. Isso ocorre porque os SSRs

são encontrados em áreas não codificantes do genoma, onde a taxa de substituição é maior do

que em regiões codificantes. Para a espécie Ae. aegypti, diversos trabalhos já foram

publicados isolando marcadores SSRs altamente polimórficos (Brown et al., 2011; Chambers

et al., 2007; Huber et al., 2001; Slotman et al., 2006) o que facilita a utilização desses

marcadores para estudo de populações desse mosquito vetor.

Os marcadores SSRs passaram a ser utilizados em Culicideos a partir da década de 90

(Lanzaro et al., 1995) e desde então o número de trabalhos publicados só tem aumentado,

principalmente para estudar populações de mosquitos vetores de patógenos causadores de

doenças como do gênero Anopheles (Ambrose et al., 2014; Angêlla et al., 2014; Scarpassa,

Conn, 2007), do gênero Culex (Kothera et al., 2013, 2012; Wilke et al., 2014) e do gênero

Aedes (Das et al., 2014; Gloria-Soria et al., 2014; Mendonça et al., 2014; Monteiro et al.,

2014). Todos esses trabalhos são de suma importância, pois conhecer a estrutura genética

populacional ajuda entender melhor a dinâmica de uma população de vetores, sabendo-se que

a adaptação de um organismo está diretamente ligada a sua variabilidade genética.

Através dos marcadores microssatélites é possível observar diferenças genéticas em

populações separadas por poucos quilômetros (Da Costa-Ribeiro et al., 2006; Vidal, Suesdek,

2012) ou ainda, analisar uma única população em períodos distintos de tempo (Lehmann et

al., 2003; Louise et al., 2015), já que essas regiões de SSRs evoluem rapidamente. Além

disso, estudos com SSRs indicaram fortes evidencias de que o armazenamento de água e os

hábitos humanos afetam na diferenciação genética do mosquito Ae. aegypti (Huber et al.,

2002).

1.2.2 DNA mitocondrial - COI e ND4

O DNA mitocondrial apresenta algumas vantagens quando comparado ao DNA

nuclear: possui múltiplas cópias por células; o genoma é haploide, de herança materna e com

ausência de recombinação gênica, com raras exceções; é considerado um genoma compacto,

com poucos genes (37 no total), raramente possui sequências espaçadoras, introns,

pseudogenes e sequências repetitivas; o conteúdo gênico é bastante conservado; a taxa

evolutiva, ou seja, de substituições de base é muito alta; os erros de replicação e as altas

concentrações de compostos de oxigênio capazes de danificar o DNA, aliados a um reparo

pouco eficiente, possivelmente acabam acumulando mutações (Moritz et al., 1987; Wilson et

al., 1985).

O gene COI (Citocromo Oxidase subunidade I) e o gene ND4 (Nicotinamida Adenina

Dinucleotídeo Desidrogenase subunidade 4) do DNA mitocondrial estão envolvidos no

transporte elétrico e catálise da cadeia respiratória de organismos eucariotos (Saraste, 1990).

Esses genes têm sido utilizados recentemente em análise de genética populacional,

identificação de espécies crípticas, filogenia e filogeografia de diversos grupos da família

Culicidae (Bracco et al., 2007; Caldera et al., 2013; de Lourdes Muñoz et al., 2013; Lorenz et

al., 2014; Moore et al., 2013; Paduan, Martins Ribolla, 2008; Petersen et al., 2015; Sallum et

al., 2002; Scarpassa et al., 2008; Scarpassa, Conn, 2007; Werblow et al., 2014; Zawani et al.,

2014).

Estudos prévios, do sequenciamento da região COI e/ou ND4 tem indicado a presença

de duas linhagens de Ae. aegypti (Bracco et al., 2007; da Costa-da-Silva et al., 2005;

Gorrochotegui-Escalante et al., 2002; Herrera et al., 2006; Jaimes-Dueñez et al., 2015; Moore

et al., 2013; Paupy et al., 2012), inclusive no Brasil (Lima Júnior, Scarpassa, 2009; Scarpassa

et al., 2008). A espécie Ae. aegypti é originada a partir de duas linhagens matriarcais (Powell

et al., 1980). Há duas subespécies reconhecidas de Ae. aegypti lato sensu, a forma ancestral

Ae. aegypti formosus, um mosquito silvestre restrita à região subsaariana da África, e a

subespécie Ae. aegypti aegypti, referente a Aedes aegypti stricto sensu, encontrada

globalmente em regiões tropicais e subtropicais, tipicamente associada com os seres humanos

(Jaimes-Dueñez et al., 2015; Moore et al., 2013).

Estudos baseados em genética populacional de Ae. aegypti têm fornecido informação

sobre estrutura populacional e dispersão em níveis micro e macro-geográficos, mostrando que

a dimensão ambiental, fatores sociais e intervenções humanas, afetam a estrutura populacional

deste vetor. Scarpassa et al. (2008) conduziram um estudo filogeográfico por intermédio do

DNA mitocondrial do Ae. aegypti no Brasil, o estudo revelou uma pronunciada estrutura

genética brasileira para o Ae. aegypti, provavelmente resultante de diversos fatores como:

múltiplas introduções associadas com diferentes linhagens, diferenciação geográfica, padrões

de dispersão passiva, atividades de controle, de extinção e recolonização de eventos e deriva

genética. Yáñez et al. (2013) analisando populações de Ae. aegypti em áreas endêmicas de

dengue no Peru concluíram que a variabilidade desses mosquitos é causada tanto pela

migração ativa do vetor, quanto pela migração passiva mediada pela atividade humana.

A detecção da variabilidade genética dentro de populações, mediante gradientes

geográficos e/ou temporais podem fornecer dados que estimem se uma população está em

equilíbrio, extinção ou em expansão. Além disso, as diferenças genéticas observadas em

populações de mosquitos vetores podem auxiliar na compreensão da história evolutiva e na

epidemiologia das doenças (Yan et al., 1998).

1.3 Marcador Morfológico

1.3.1 Morfometria geométrica alar

A Morfometria Geométrica (MG), de acordo com Monteiro e Reis (1999) é capaz de

mensurar e identificar fenômenos que o olho humano ou as técnicas matemáticas usuais são

incapazes de perceber ou medir com precisão. As análises morfométricas começaram a ser

utilizadas a partir do final da década de 80 devido à disponibilidade de ferramentas

computacionais robustas. As principais propriedades da morfometria geométrica são as

possibilidades de análises multivariadas, com múltiplas variáveis simultaneamente e a

possibilidade de recuperar informações de forma e tamanho independentemente. Assim

sendo, o poder de resolução é alto permitindo gerar diversos marcadores taxonômicos ou

populacionais.

Em insetos, existe uma preferência em utilizar as asas para os estudos morfométricos,

pois se trata de uma estrutura bidimensional, evitando erros de deformação. Além disso, as

asas apresentam características potencialmente herdáveis, ou seja, possível de evolução

(Dujardin, 2008; Jirakanjanakit et al., 2008). Os tipos de dados mais informativos utilizados

nas análises morfométricas são os marcos anatômicos, que na maioria das vezes são

escolhidos nos encontros das nervuras.

Trabalhos recentes tem mostrado a utilização da morfometria geométrica para

responder diferentes questões em Culicídeos de interesse médico-veterinário. Virginio et al.

(2015) utilizaram a MG para estudar o dimorfismo sexual em 10 espécies de Culicídeos.

Naquele estudo eles verificaram que a morfologia das asas difere significativamente entre os

sexos. Lorenz et al. (2014) verificaram estruturação populacional em populações de An. cruzii

distribuídas em altitudes diferentes. Louise et al. (2015) verificaram diferenças no formato

alar em Ae. aegypti no período de um ano. A morfometria também tem sido utilizada para

resolver questões taxonômicas (Gómez et al., 2013; Jaramillo et al., 2015).

Estudo baseado em análises morfométricas revelou estruturação em populações de Ae.

albopictus distribuídas no Mundo, com ênfase na Ásia, onde o vetor foi originado (Morales

Vargas et al., 2013). Os padrões de variação da forma naquele trabalho eram compatíveis com

a deriva genética, sugerindo mudanças microevolutivas induzidas pela expansão do mosquito.

Estudo realizado por Morais et al. (2010) mostraram diferenças entre as populações de Cx.

quinquefasciatus do Norte e do Sul do Brasil, indicando uma avaliação preliminar da estrutura

populacional desses mosquitos.

Caracteres morfométricos também têm sido utilizados na identificação de espécies.

Henry et al. (2010) fizeram um estudo mostrando a utilização da morfometria geométrica alar

como complemento para diagnosticar exemplares danificados de vetores da dengue, Ae.

aegypti e Ae. albopictus. Naquele trabalho, os autores verificaram que a variação da forma

não produziu sobreposição interespecífica significativa, independente da origem geográfica.

Globalmente o tamanho e forma da asa mostraram ser bem preservada. Outros trabalhos

foram realizados com o intuito de utilizar caracteres morfométricos na identificação de

espécies, Lorenz et al. (2012) conseguiu diagnosticar espécies do gênero Anopheles e Vidal et

al. (2011) diagnosticou duas espécies do gênero Culex.

1.4 O Ae. aegypti no Estado de São Paulo

O Estado de São Paulo é o mais populoso do Brasil (o número de habitantes equivale

cerca de 22% da população Brasileira), com uma das populações mais diversificadas do país e

a terceira unidade política mais populosa da América do Sul. O Estado de São Paulo tem

grande vulnerabilidade para a Dengue por apresentar características como, diferenças

socioeconômicas, alta densidade populacional e ter um grande fluxo de migrantes de outros

Estados e Países.

Os casos de dengue estão correlacionados com a distribuição dos mosquitos Ae.

aegypti. A ocorrência no Estado de São Paulo desses mosquitos teve início na década de 80.

Entre os anos de 1986 e 1996, a dispersão desses mosquitos ocorreu de forma contínua, rápida

e ampla, ocupando principalmente as regiões Oeste, Norte e Central do Estado. No ano de

1995, dos 626 municípios paulistas, 415 estavam infestados pelo mosquito (Glasser, de Castro

Gomes, 2000). Desde então, a expansão geográfica desse vetor continua ocorrendo.

O Ministério da saúde informou que em março/15 pelo menos 91 dos 645 municípios

paulistas estavam em situação de epidemia de dengue. Os dados mostraram que a situação foi

mais grave em cidades com menos de 100 mil habitantes. Entre as cidades com mais de 100

mil habitantes, a situação mais crítica foi em Catanduva. Na cidade de São Paulo foram

registrados no primeiro semestre de 2015 mais de 59 mil casos. Alguns fatores ambientais

podem favorecer o aumento de dengue. Araujo et al. (2015), estudando populações de Ae.

aegypti na cidade de São Paulo, verificaram que a Dengue está correlacionada a áreas

chamadas de ilhas urbanas de calor, ou seja, uma área com altas temperaturas ( > 28 ºC) o

número de casos de Dengue são maiores.

Diferentes métodos de controle ao mosquito Ae. aegypti tem sido aplicado no Estado

de São Paulo, com finalidade de diminuir os casos de dengue. Os inseticidas e o controle

mecânico são os mais utilizados. Macoris et al. (2014) avaliaram o impacto da resistência a

inseticida dos moquitos no Estado de São Paulo e concluíram que a utilização em populações

com susceptibilidade reduzida torna essa ferramenta pouco eficiente e que precisa ser

utilizado com bastante cautela, sugerindo que o controle da Dengue requer estratégias mais

sustentáveis.

Estudos com populações de Ae. aegypti podem gerar conhecimentos que visem

entender o processo de evolução e dispersão desses mosquitos no Estado de São Paulo. Vidal

e Suesdek (2012) verificaram estruturação populacional do mosquito em locais distanciados

por no máximo 50 quilômetros dentro da área metropolitana de São Paulo, indicando baixo

fluxo gênico entre as populações analisadas. Campos et al. (2012) estudaram populações de

Ae. aegypti na cidade de Botucatu-SP no período de 5 anos e verificaram que esse mosquito é

capaz de manter uma população relativamente grande no período da seca para manter

frequências genéticas estáveis. Ao contrário do que foi observado naquele trabalho, Louise et

al., 2015, analisando populações de Ae. aegypti no período de um ano na cidade de São Paulo-

SP, verificaram rápida evolução desse mosquito vetor, com diferenças genéticas e

morfológicas ao longo das estações climáticas do ano de 2011-12.

Apesar da grande incidência da Dengue no Estado de São Paulo, pouco se conhece da

dinâmica populacional do Ae. aegypti. Assim sendo, compreender a estruturação genética e os

padrões de fluxo gênico no nível espacial e temporal é de extrema relevância. Visando

aproximarmo-nos desta compreensão, seis populações de Ae. aegypti coletadas ao longo de

um importante corredor rodoviário foram estudadas quanto a variabilidade de marcadores

genéticos e morfológicos. Este corredor, compreendido pelas rodovias: Imigrantes, Anchieta,

Bandeirantes, Anhanguera e Washington Luís, é uma importante ligação entre o porto de

Santos e outras grandes cidades do Estado de São Paulo que são afetadas pela dengue.

Também avaliamos o potencial da morfometria geométrica alar para acessar aspectos da

genética populacional desse mosquito vetor.

2 CONCLUSÕES

Os três marcadores biológicos indicaram estruturação populacional;

Baixo fluxo gênico foi encontrado entre as seis populações de Ae. aegypti no Estado

de São Paulo;

Não foi observado isolamento das seis populações do Estado de São Paulo por

distância geográfica;

As rodovias que interconectam as seis populações de Ae. aegypti amostradas, não são

suficientes para homogeneizar essas populações através da migração passiva desses

mosquitos;

Os resultados sugerem a existência de duas linhagens genéticas na espécie de Ae.

aegypti do Estado de São Paulo;

A população de SAN foi a mais diferenciada de todas as outras populações analisadas;

A dispersão do mosquito Ae. aegypti no Estado de São Paulo provavelmente ocorreu

do litoral de Santos para o interior;

Os marcadores genéticos e morfológicos apresentam velocidades distintas de

evolução;

Diferenças temporais morfo-genéticas foram observadas nas amostras coletadas entre

2011-2012.

REFERÊNCIAS1

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