minha defesa de dissertação 2004

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE METODOLOGIAS PARA DETERMINAÇÃO DE FURANOCUMARINAS EM

MEDICAMENTOS FITOTERÁPICOS

ADRIANA ELIAS PIRES

Orientadora: Prof. Dra. Cláudia Andréa Lima Cardoso

Campo Grande - MS

UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL

CENTRO DE CIÊNCIAS EXATAS E TECNOLOGIA

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

PÓS-GRADUAÇÃO EM QUÍMICA - MESTRADO

INTRODUÇÃO

MEDICAMENTO FITOTERÁPICO

Medicamento farmacêutico obtido por processos tecnologicamente adequados, empregando-se

exclusivamente matérias-primas vegetais, com finalidade profilática, curativa, paliativa ou para fins de

diagnóstico73.

“Fitoterápicos não têm efeitos colaterais...”

“Pode ser usado pelo tempo que você quiser...”

“Se não fizer bem, mal não há de fazer...”

Grande parte das espécies vegetais utilizadas não tem ação farmacológica comprovada, estudo químico realizado, nem estudos toxicológicos.

Fraudes e problemas na qualidade dos fitoterápicos.

MEDICAMENTOS FITOTERÁPICOS - Brasil

INTRODUÇÃO

Resolução da ANVISA – RDC nº17 de 24 de janeiro de 2000.

Consultas públicas - nº 94 de 6 de novembro de 2003.

Alternativa menos agressiva ao organismo;

Rigor da legislação e da vigilância sanitária;

Exigência de qualidade:

autenticidade;

da presença do teor correto de princípios ativos;

de boas condições de conservação; e outros.

PAÍSES COM TRADIÇÃO NO USO DE FITOTERÁPICOSComo Alemanha, França e Bélgica

INTRODUÇÃO

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE METODOLOGIAS

Desenvolvimento de metodologias:

Seleciona-se a substância de interesse na matriz;

Otimiza-se um método de extração;

Procede-se a determinação. Processo de Validação:

Garante confiabilidade às medidas obtidas;

Normas nacionais e internacionais:

INTRODUÇÃO

► ANVISA → Agência Nacional de Vigilância Sanitária

► FDA → US Food and Drug Administration

► USP → United States Pharmacopeia

► ICH → International Conference of Harmonization

PARÂMETROS DE VALIDAÇÃO

Especificidade

Limite de Quantificação

Limite de Detecção

Linearidade e Faixa de aplicação

Sensibilidade

Exatidão

Precisão

Estabilidade

Robustez

Diferenciar compostos na presença de outros.

Menor quantidade determinada com precisão/ exatidão.Menor quantidade detectada.

Produzir resultados lineares numa

dada faixa de variação.

Distinguir quantidades próximas.

Concordância entre os valores encontrados e o verdadeiro.

Inalteração dos resultados apesar de pequenas modificações do

método.

Constância do analito nas amostras.

Proximidade entre os resultados.

INTRODUÇÃO

FURANOCUMARINAS

Classe das cumarinas

Fotoreatividade (luz UV entre 200 e 300 nm)

Furanocumarinas ativadas

DNA, RNA, proteínas e

lipídios

Morte ou replicação da célula, síntese, mutação ou reparo do DNA

INTRODUÇÃO

Uso desde 2000 a.C. em doenças de pele como:

vitiligo micosePsoríase

FURANOCUMARINAS OU PSORALENOS

Famílias Apiaceae, Rutaceae e Moraceae.

INTRODUÇÃO

*5-[3-(4,5-Diidro-5,5-dimetil-4-oxo-2-furanil)-butoxi]-7H-furo[3-2-g][1]benzopiran-7-ona

*

• Efeitos colaterais: eritema, formação de bolhas, náuseas, prurido, dor de cabeça e depressão, genotoxicidade (alteram o conteúdo informacional dos genes).

• Uso continuado é questionado:

Efeito carcinogênico, envelhecimento precoce, tendência ao aparecimento de cataratas.

TERAPIA PUVA (PSORALENOS + UV A)

INTRODUÇÃO

TRATAMENTO DE DOENÇAS DE PELE

OBJETIVOS PRINCIPAIS

Desenvolver metodologias de extração de furanocumarinas em medicamentos fitoterápicos escolhidos no comércio.

Validar as metodologias desenvolvidas através de parâmetros de validação da ICH.

MEDICAMENTOS ANALISADOS → total= 10

7 Medicamentos contendo espécies do gênero Dorstenia:

• Indicados para tratamento de distúrbios menstruais e sintomas da menopausa.

• Não tinham informação sobre presença de furanocumarinas.

3 Medicamentos indicados para vitiligo:

• 2 eram identificados apenas como “produto natural”

• 1 informava sobre presença de furanocumarinas na seiva de Brosimum gaudichaudii.

Aquisição em farmácias de manipulação, drogarias e ervanários.

PARTE EXPERIMENTAL, RESULTADOS E DISCUSSÕES

Gênero Dorstenia

Dorstenia brasiliensis

•Habilidade em sintetizar furanocumarinas;

•Antiofídico, anti-reumático, infecções e doenças de pele;

•Carapiá ou figueirilha;

•Cardenolídeos, triterpenos, ácidos graxos, esteróides e vários flavonóides.

Brosimum gaudichaudii

•Utilizada no tratamento de doenças de pele;

•Mamica-de-cadela;

•Nativa do cerrado brasileiro, ampla distribuição por todo o Brasil;

•Cumarinas, chalcona, esteróides e triterpeno.

Espécie Brosimum gaudichaudii

Soluções orais

A Tinturas de Dorstenia multiformis, Davilla rugosa e Plumeria lancifolia

3 lotes São Paulo, Brasília, Goiânia e Rio de Janeiro

B Tinturas de Dorstenia multiformis e Plumeria lancifolia

2 lotes São Paulo, Goiânia, Rio de Janeiro e Brasília

C Tinturas de Dorstenia multiformis, Cereus jamacaru, Plumeria lancifolia e Erythrina mulungu

3 lotes Campo Grande

D Tintura de Dorstenia multiformis 1 lote Campo Grande

Cápsulas E Extratos secos de Dorstenia multiformis e Plumeria lancifolia


F Extratos secos de Dorstenia multiformis, Plumeria lancifolia, Cereus jamacaru e Erythrina mulungu


G Pó de Dorstenia brasiliensis 3 lotes Rio de Janeiro

Comprimidos

H Produto natural 3 lotes Campo Grande

I Produto natural 3 lotes Coxim

J Seiva de Brosimum gaudichaudii e vitaminas



SOLUÇÕES ORAIS – A, B, C e D

Análises preliminares em CCD → presença de furanocumarinas

Análise direta:

Solução oral A

Solução oral A

Psoraleno

sustâncias mais polares

Bergapteno

• Excluísse da solução de análise a maior parte das substâncias mais polares;

• Abrangente;

• Não oneroso;

• Solução de análise capaz de ser analisada em CLAE e CG.

Adquiridas de junho de 2002 à novembro de 2003.


DESENVOLVIMENTO DO MÉTODO

Soluções Orais A, B, C e D

Extração líquido - líquido

• Solvente extrator – diclorometano, éter etílico, clorofórmio

• Tempo em ultra-som – 10, 20, 30, 40, 50 min

• Tempo em centrifugação – 5, 10, 15 min Todos os experimentos foram realizados em triplicata (n=3).

Necessidade de reextração da fase inferior.


MÉTODO OTIMIZADO

Solução Oral

(5 mL) 7 mL de clorofórmio

10 min em ultra-som

10 min em centrifugação

1ª Fração superior

1ª Fração inferior

5 mL de clorofórmio

10 min em ultra-som


2ª Fração superior

2ª Fração inferior

Solução de análise 1

(MeOH)



CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA

Modelo: Shimadzu LC-6AD

Detector: UV-Vis de comprimento de onda fixo (Shimadzu)

Coluna: fase reversa octadecyl Shim-pack (25cm x 4,6mm x 5µm)

e pré-coluna (2,5cm x 4,6 mm) de mesma fase

CONDIÇÕES CROMATOGRÁFICASEluente: água – acetonitrila

Proporção 45: 55 (v/v)

Fluxo: 1mL/min

Comprimento de onda: 223 nm

Injeção: 10 µL

EQUIPAMENTO


C adic (µg ml-

1)

Psoraleno (%) (média ± DP)

Bergapteno (%) (média ± DP)

A B C A B C4 95,99 ±

1,1797,28 ±

0,9196,13 ±

1,1698,76 ±

0,7498,34 ±

1,1796,43 ±

1,11

40 92,35 ± 0,35

96,55 ± 1,14

97,19 ± 0,99

99,89 ± 0,87

99,97 ± 0,89

97,29 ± 0,67

100 93,76 ± 0,81

99,05 ± 0,74

98,98 ± 1,01

94,43 ± 0,53

98,43 ± 0,79

98,11 ± 1,03

200 96,83 ± 0,97

95,95 ± 0,87

98,37 ± 0,78

98,26 ± 0,93

96,86 ± 1,05

97,81 ± 1,15

Recuperação do método para soluções orais A, B e C (n=5 para cada amostra).

RECUPERAÇÃO

C adic, concentração adicionada.


SOLUÇÃO ORAL A

Amostra inteira



1 – Psoraleno

2 - Bergapteno


SOLUÇÃO ORAL B

Amostra inteira



1 – Psoraleno

2 - Bergapteno


SOLUÇÃO ORAL C

Amostra inteira



1 – Psoraleno

2 - Bergapteno


Metodologia de extração dos medicamentos E, G, H e I já havia sido

determinada em nosso laboratório → metanol-clorofórmio 7:3, tempo em

ultra-som 15 min e tempo em centrifugação de 10 min.

MEDICAMENTOS EM CÁPSULAS E COMPRIMIDOS

Estudar a aplicabilidade do método a:

Medicamento em cápsula F: maior complexibilidade de composição: (mistura de extratos secos de 5 plantas).

Medicamento J: adição de substâncias ativas isoladas (não-fitoterápico): seiva concentrada de uma planta medicinal + vitaminas.

Foram mantidos os mesmos tempo de ultra-som e centrifugação. Vários solventes e misturas de solventes testados.

Todos os experimentos foram realizados em triplicata (n=3).


MÉTODO OTIMIZADO – F, E, G, H e I

Medicamento

(100 mg) 10 mL de metanol-clorofórmio

7:3

15 min em ultra-som


1º Resíduo

1º Extrato

10 mL de metanol-clorofórmio 7:3

15 min em ultra-som


2º Resíduo 2º Extrato

Solução de

análise(MeOH)


Recuperação do método para E, F, G, H e I (n=5 para cada amostra).

RECUPERAÇÃO → Eficiência da extração

PSORALENO (%) (MÉDIA ± DP)

C adic (µg mL-

1)E F G H I

1 97,33 ± 1,36 97,99 ± 0,94

97,34 ± 0,99

97,45 ± 1,16

97,89 ± 0,87

20 98,79 ± 0,85 99,14 ± 1,37

98,98 ± 0,96

98,96 ± 0,78

99,44 ± 1,11

40 99,03 ± 0,97 99,05 ± 0,77

99,47 ± 1,27

99,29 ± 0,91

99,27 ± 0,80

BERGAPTENO (%) (MÉDIA ± DP)

C adic (µg mL-

1)E F G H I

1 98,13 ± 0,81 98,87 ± 1,12

98,01 ± 1,19

97,89 ± 1,10

98,67 ± 0,83

20 99,43 ± 0,71 99,46 ± 0,91

99,26 ± 0,73

99,02 ± 0,86

99,29 ± 1,11

40 99,01 ± 0,67 99,39 ± 0,80

98,11 ± 1,03

99,44 ± 0,93

99,33 ± 0,76

DT (%) (MÉDIA ± DP)

C adic (µg mL-

1)E F G H I

1 97,45 ± 1,28 97,88 ± 0,99

97,67 ± 0,87

97,74 ± 1,25

98,68 ± 1,03

20 98,99 ± 0,73 99,35 ± 1,27

99,01 ± 1,13

98,76 ± 0,89

99,50 ± 1,19

40 99,14 ± 1,02 99,13 ± 0,97

98,00 ± 1,22

99,36 ± 1,27

99,55 ± 0,82

C adic, concentração adicionada.

O medicamento em comprimidos J não se enquadrou no método.


sustâncias mais polares

MEDICAMENTO J – não se enquadrou no método.

Psoraleno Bergapteno


MEDICAMENTO F

Psoraleno

Bergapteno

DT


E G

H I

MEDICAMENTOS E, G, H e I

• Utilizando-se as mesmas condições para CLAE descrita em soluções orais.

1 – Psoraleno

2 - Bergapteno

3 - DT


VALIDAÇÃO DAS METODOLOGIAS

Estudo interequipamento

• Confirmar valores encontrados → não havia parâmetros de referência de quantidade;

• Precisão interequipamento;

• Possibilidade da utilização de CLAE e CG nos métodos.

CG-DIC → para método de soluções orais A, B e C.

Modelo: Varian

Coluna: LM-5 (15m x 0,2mm x 0,2 µm)

Detector: DIC, temperatura 280º C

Injetor: 280ºC

Split: 1:20

Gás de arraste: Hidrogênio com fluxo de 0,8 mL/min



CG-EM → para método dos medicamentos E, F, G, H e I

Modelo: Shimadzu 17

Coluna: LM-A (15m x 0,2mm x 0,2 µm)

Injetor Split/Splitless: razão de Split 1:20

Temperatura da interface: 280ºC

Detector seletivo de massa, modelo: Shimadzu QP 5000

Modo de ionização: impacto de elétrons ; Modo de aquisição: 55-550 u.m.a

Gás de arraste: Hélio com fluxo de 0,6 mL/min


Temperatura(ºC)

Velocidade de aquecimento (ºC/min)

Tempo de isoterma

(min)

150 10 -

240 5 -

280 - 20 O tempo de análise total no CG foi de 37 minutos.

Programação de temperatura utilizada em CG-EM E CG-DIC(no forno da coluna)


CG-DIC, solução oral B

Estudo inter-equipamento

CG-EM, medicamento F

1 – Psoraleno

2 - Bergapteno

3 - DT


VALIDAÇÃO DAS METODOLOGIAS - Parâmetros

Especificidade

Os métodos demonstraram boa separação dos picos de interesse em CLAE-UV, CG-DIC e CG-EM sem interferentes.

Substâncias CLAE-UV CG-DIC CG-EM

Psoraleno 6,1 ± 0,04 4,25 ± 0,03

4,3 ± 0,05

Bergapteno 7,4 ± 0,03 6,35 ± 0,01

6,3 ± 0,04

DT 11,4 ± 0,03

16,55 ± 0,03

16,5 ± 0,05

Psoraleno Bergapteno DT

LD LQ LD LQ LD LQ

CLAE-UV

0,03 0,10 0,07 0,23 0,24 0,80

CG-DIC 1,3 4,3 0,6 2,0 1,5 5,0

CG-EM 0,10 0,33 0,09 0,30 0,24 0,80

Limites de detecção e quantificação

LD, limite de detecção; LQ, limite de quantificação.


Estabilidade

Soluções-padrão e soluções de análise.

Curva de calibração – padrão externo

CLAE-UV CG-DIC

Substâncias



FL (µg mL-

1)1-600 1-400 10-100 5-90

r 0,9998 0,9998 0,9998 0,9997

n 9 9 10 10

CLAE-UV CG-EM

Substâncias

Psoraleno

Bergapteno

DT Psoraleno

Bergapteno

DT

FL (µg mL-

1)1-50 1-50 1-50 1-50 1-50 1-50

r 0,9998 0,9999 0,9997 0,9998 0,9998 0,9997

n 10 10 10 10 10 10

•MÉTODO PARA SOLUÇÕES ORAIS•MÉTODO PARA CÁPSULAS E COMPRIMIDOS



• As quantidades determinadas de analitos nos medicamentos pela extrapolação da reta no eixo x das curvas de linearidade dos métodos foram semelhantes às encontradas empregando-se padrão externo.

Linearidade – Métodos de soluções orais e de cápsulas e comprimidos.• r2 = 0,9998 (n=5) nas matrizes dentro do intervalo das curvas de calibração.



Acurácia

% Inexatidão= concentração obtida – concentração esperada

concentração esperada

% CV = desvio padrão das medidas

concentração média determinada

Precisão

1 - REPETITIVIDADE → Análises intradia

2 - PRECISÃO INTERMEDIÁRIA → Análises interdia

3 - ANÁLISE INTEREQUIPAMENTO → CG-DIC ou CG-EM3 repetições (n=5 para cada concentração trabalhada) Período de 1 dia3 repetições (n=5 para cada concentração

trabalhada) 1 repetição por dia → 3 dias



ACURÁCIA E PRECISÃO → Soluções orais A, B e C

Acurácia e precisão intradia em CLAE (n=4 para cada amostra)PSORALENO BERGAPTENO

C. adicionada(µg mL –1)

C. determinada(µg mL –1)

(média ± DP)

Acurácia (%)

CV (%)


(média ± DP)

Acurácia (%)

CV (%)

4 3,9 ± 0,17 -2,5 4,35 3,8 ± 0,18 5,0 4,73

40 41,0 ± 0,83 2,5 2,02 42,0 ± 1,13 5,0 2,69

200 202,0 ± 2,39

1,0 1,18 203,0 ± 3,05

1,5 1,50Acurácia e precisão intrerdia em CLAE (n=5 para cada amostra)PSORALENO BERGAPTENO

C. adicionada(µg mL –1)


(média ± DP)

Acurácia (%)

CV (%)


(média ± DP)

Acurácia (%)

CV (%)

4 3,9 ± 0,16 2,5 4,10 3,9 ± 0,15 2,5 3,85

40 42,0 ± 2,07 5,0 4,93 42,0 ±1,79 5,0 4,26

200 204,0 ± 3,23

2,0 1,58 203,0 ± 3,91

1,5 1,93C., concentração.


ACURÁCIA E PRECISÃO → Medicamentos E, F, G, H e I

Acurácia e precisão intradia em CLAE (n=5 para cada amostra)PSORALENO BERGAPTENO DT

C. adic.(µg mL –

1)

C. deter.(µg mL –1)

(média ± DP)

Ac.(%)

CV (%)


(média ± DP)

Ac. (%)

CV(%)


(média ± DP)

Ac. (%)

CV(%)

1 1,03 ± 0,05 3,00

4,85

1,01 ± 0,04 1,00

3,96

1,03 ± 0,05 3,00

3,96

20 19,51 ± 0,53

2,45

2,72

20,02 ± 0,47

0,10

2,35

20,08 ±0,57

0,40

2,84

40 39,32 ± 0,91

1,70

2,31

39,51 ± 0,85

1,23

2,15

39,43 ± 0,99

0,14

2,51

Acurácia e precisão interdia em CLAE (n=5 para cada amostra)PSORALENO BERGAPTENO DT

C. adic.(µg mL –

1)


(média ± DP)

Ac.(%)

CV (%)


(média ± DP)

Ac. (%)

CV(%)


(média ± DP)

Ac. (%)

CV(%)

1 1,05 ± 0,05

5,00

4,76

1,02 ± 0,05

2,00

4,90

1,03 ± 0,05

3,00

3,96

20 19,78 ± 0,59

1,10

3,01

20,06 ± 0,51

0,30

2,54

20,10 ± 0,42

0,50

4,20

40 39,50 ± 0,82

1,25

2,08

39,63 ± 0,79

0,93

1,99

39,50 ± 0,87

1,25

2,20

C., concentração; adic., adicionada; deter., determinada, Ac., acurácia


DETERMINAÇÃO DAS FURANOCUMARINAS – Soluções orais

Soluções orais

Psoraleno (µg mL-

1)Bergapteno (µg mL

-1)

A1 274 ± 4,3 65 ± 2,9

A2 272 ± 4,1 63 ± 2,1

A3 260 ± 4,9 66 ± 2,0

B1 530 ± 3,1 134 ± 3,6

B2 522 ± 5,9 128 ± 3,2

C1 265 ± 4,9 72 ± 2,8

C2 314 ± 6,7 84 ± 3,4

C3 325 ± 7,3 90 ± 2,1D 1052 483

A hidrólise enzimática realizada em triplicata (resíduo das soluções orais + β-glucosidase em tampão acetato 0,1mol/L, 37ºC por dois dias) com as soluções orais A, B e C não indicou presença de glicosídios furanocumarínicos nas amostras.

Não houve discrepâncias entre os lotes dos medicamentos A e B.

C → 20% diferença para as furanocumarinas.


0

100

200

300

400

500

600

A1 A2 A3 B1 B2 C1 C2 C3

Co

nce

ntr

açã

o (

μg

mL-1

)

Psoraleno: CLAE-UV

Psoraleno: CG-DIC

Bergapeno: CLAE-UV

Bergapteno: CG-EM

Comparação entre as quantidades determinadas (µg mL-1) de psoraleno e bergapteno nos diferentes lotes de soluções orais A, B e C por análise em CLAE-UV e CG-DIC.

ANÁLISE INTEREQUIPAMENTO – Soluções orais

Não houve diferenças significativas entre os dois aparelhos.


Medicamentos

Psoraleno (µg mL -

1)Bergapteno (µg mL -1)

DT(µg mL -

1)

E1 250 ± 1,4 83 ± 1,3 -

E2 249 ± 1,3 85 ± 0,9 -

E3 250 ± 1,4 80 ± 1,2 -

F1 210 ± 2,2 60 ± 1,7 10 ± 0,3

F2 213 ± 2,2 63 ± 2,1 12 ± 0,3

F3 210 ± 2,0 67 ± 1,4 14 ± 0,4

G1 172 ± 2,6 75 ± 1,9 -

G2 70 ± 1,1 72 ± 2,5 -

G3 237 ± 2,4 94 ± 3,3 -

H1 225 ± 2,2 55 ± 1,7 11 ± 0,2

H2 232 ± 2,2 56 ± 2,1 13 ± 0,3

H3 222 ± 2,0 53 ± 1,4 12 ± 0,4

I1 - - -

I2 - - -

I3 - - -

DETERMINAÇÃO DAS FURANOCUMARINAS – cáp e cpd

Não houve discrepâncias entre os lotes analisados dos medicamentos E, F e H.

150 – 240% 4 - 30%


0

50

100

150

200

250

300

E1 E2 E3 F1 F2 F3 G1 G2 G3 H1 H2 H3

Co

nce

ntr

açã

o (

µg

mL-1

)

Psoraleno: CLAE-UV

Psoraleno: CG-EM

Bergapteno: CLAE-UV

Bergapteno: CG-EM

DT: CLAE-UV

DT: CG-EM

Comparação entre as quantidades determinadas (µg mL-1) de psoraleno, bergapteno e DT nos diferentes lotes de medicamentos E, F, G, H e I por análise em CLAE-UV e CG-EM.

ANÁLISE INTEREQUIPAMENTO – cáp e cpd

Não houve diferenças significativas entre os dois apartelhos.


CORRELAÇÕES

SOLUÇÕES ORAIS A, B e C (15 mL/dia):

UMA SEMANA: 53,38 mg de furanocumarinas.

SOLUÇÃO ORAL D: 160,65 mg de furanocumarinas / semana.

MEDICAMENTOS E, F, G e H (3 cáp ou cpd / dia):

UMA SEMANA: 25,76 mg de furanocumarinas.

DOENÇAS DE PELE (pessoa de 60kg) → 144 mg de bergapteno,

36 mg de xantotoxina ou 84 mg de trimetilpsoraleno / semana.


OUTROS ESTUDOS REALIZADOS


NOVAS CONDIÇÕES CROMATOGRÁFICAS

Amostra inteiraSolução oral A

Amostra inteiraSolução oral C

Amostra inteiraSolução oral B

Proposta para determinação das demais substâncias presentes nos medicamentos.

CONDIÇÕES ISOCRÁTICAS e em GRADIENTE para CLAE

CONDIÇÃO EM GRADIENTE

020406080

100

% s

olv

en

te

na

mis

tura

0 25 28 33 43 50

Tempo (min)

acetonitrilaágua

0

20

40

60

80

100%

so

lven

te n

a m

istu

ra

0 25 50

Tempo (min)

acetonitrila

água

CONDIÇÃO EM GRADIENTE

A

B C

ESTUDOS PRELIMINARES COM PLANTAS

Amostra Parte Psoraleno (%)

Bergapteno(%)

carapiá1 rizoma 0,62 0,11

carapiá2 rizoma 0,40 0,10

Dorstenia brasiliensis rizoma 0,69 0,17

mamica de cadela raiz <0,01 0,48

Brosimum gaudichaudii1

raiz 0,36 1,07

Extração com etanol absoluto e reextrações com clorofórmio.

1,020,04casca da raizBrosimum gaudichaudii30,161,10casca da raizBrosimum gaudichaudii23,492,09casca da raizBrosimum gaudichaudii1

CONCLUSÃO

Dois métodos para determinação de furanocumarinas em medicamentos fitoterápicos foram desenvolvidos e validados para CLAE e CG (segundo os parâmetros da ICH):

Ambos os equipamentos poderão ser utilizados;

Os métodos podem ser aplicados a outras formulações do mercado.

Foram encontradas furanocumarinas nos medicamentos A, B, C, D, E, F, G e H, sem que a informação estivesse presente nas bulas ou folhetos explicativos.

As quantidades de furanocumarinas encontradas nos medicamentos analisados sugerem que o uso destes fitoterápicos no tratamento de distúrbios menstruais e menopausa é considerado de alto risco devido os efeitos colaterais e a alta incidência de câncer provocados pelo uso das substâncias.

CONCLUSÃO

Como não foi detectada a presença de furanocumarinas no látex de 3 espécimes de B.gaudichaudii, sugere-se que o medicamento J seja formulado com outra parte da planta.

As amostras de carapiá e mamica de cadela adquiridas no mercado assemelharam-se às amostras de Dorstenia brasiliensis e Brosimum gaudichaudii respectivamente, quanto à presença de furanocumarinas.

Uma nova condição cromatogrática para CLAE foi proposta para estudo das outras substâncias presentes nos medicamentos A, B e C.• Os espécimes de B. gaudichaudii analisados apresentaram grandes diferenças quanto às quantidades de furanocumarinas presentes.

Dedico a presente dissertação aos meus pais

Dario Xavier Pires e Tânia Mara Elias Pires.

Ao meu namorado Sókrates Campos Quevedo dos Santos.

As minhas irmãs Claudia e Fernanda.

A toda a minha família e amigos sempre presentes.

A Deus.

DEDICATÓRIA

DEDICATÓRIA

Dedico a presente dissertação aos meus pais

Dario Xavier Pires e Tânia Mara Elias Pires.

Ao meu namorado Sókrates Campos Quevedo dos Santos.

As minhas irmãs Claudia e Fernanda.

A toda a minha família e amigos sempre presentes.

À prof. Dra. Cláudia A. L. Cardoso, pela preciosa orientação deste trabalho, apoio e amizade.

Às prof. Dra. Neli K. Honda e Dra. Rosenei L. Brum, pelos ensinamentos, amizade e pelo laboratório onde foi realizado este trabalho.

Ao Leonardo Viana pela colaboração e pelos grandes ensinamentos de cromatografia líquida.

À mestra Roberta da INEP, pela realização de análises em cromatografia gasosa.

À prof. Dra. Conceição E. dos Santos Silveira e ao mestrando em Botânica Dario Palhares, da UnB, pelas coletas e identificação de amostras de Brosimum gaudichaudii.

Aos secretários do mestrado Celestino G. de Oliveira e Maria Otávia P. V. de Toledo pela colaboração.

À CAPES pela bolsa concedida.

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