caracterizaÇÃo das proteÍnas
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REITORIA DE GRADUAÇÃO
ENFERMAGEM
ELIZABETH DE ARAÚJO PRAXEDES
HELOÍSA HELENA DE MEDEIROS SILVA
JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES
ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE
CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS
Prática 1 - Caracterização de ovo albumina
Prática 2- Precipitação salina do ovo-albumina
Prática3- Precipitação por ácido
NATAL
2010
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ELIZABETH DE ARAÚJO PRAXEDES
HELOÍSA HELENA DE MEDEIROS SILVA
JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES
ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE
CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS
Prática 1 - Caracterização de ovo albumina
Prática 2- Precipitação salina do ovo-albumina
Prática3- Precipitação por ácido
Relatório solicitado pelo curso de enfermagem da
.......................sobre a caracterização de
proteínas, para nota na disciplina de processos
biológicos.
ORIENTADOR:
NATAL
2010
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OBJETIVOS
Esse relatório tem como finalidade a caracterização de proteínas,
através de diferentes métodos, como caracterização do ovo albumina,
caracterização por precipitação salina e por fim, a precipitação por ácido.
Analisando assim, as cores resultantes de cada procedimento.
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SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO...........................................................................................05
2 CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS......................................................06
2.1 PRÁTICA 1 - CARACTERIZAÇÃO DA OVOALBUMINA..........................06.
2.1.1 Procedimento experimental.................................................................06
2.1.2 Resultados e discussões.....................................................................07
2.2 PRÁTICA 2 - PRECIPITAÇÃO SALINA DA OVOALBUMINA...................08
2.2.1 Procedimento experimental..................................................................08
2.2.2 Resultados e discussões......................................................................09
2.3 PRÁTICAS 3- PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDO.............................................09
2.3.1 Procedimento experimental...................................................................09
2.3.2 Resultados e discussões.......................................................................10
3 CORES DOS EXPERIMENTOS....................................................................11
4 QUETIONAMENTOS.....................................................................................12
5 CONCLUSÃO.................................................................................................13
6 REFERÊNCIAS..............................................................................................14
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INTRODUÇÃO
A detecção de proteínas em materiais biológicos envolve reações
especificas com determinados reativos, os quais originam substâncias
coloridas que absorvem luz na região visível, permitindo a sua quantificação.
Dentre os métodos utilizados, situa-se o método do biureto, que é
baseado na reação do sulfato de cobre em meio alcalino (reativo do biureto),
com proteínas e peptídeos (no mínimo tripeptídeos). O nome do método
provém do fato de que a uréia aquecida dará reação positiva, com
desprendimento de amônia.
O método da precipitação protéica que envolve supressão de cargas
sobre a superfície protéica pelos íons do sal de carga oposta, a eliminação do
invólucro de água em torno da molécula protéica. Os íons do sal altamente
hidrofílicos passam a competir com as cargas protéicas pelas moléculas da
água, resultando na desidratação das moléculas protéicas causando a
precipitação. E por fim, a precipitação por ácido, onde ocorre a desnaturação e
precipitação de proteínas positivamente carregadas. Alterando assim a
estrutura das proteínas.
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CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS
PRÁTICA 1-CARACTERIZAÇÃO DA OVOALBUMINA
Essa prática tem como objetivo identificar ligações peptídicas
através de testes colorimétricos.
1-Procedimento experimental
a) Materiais utilizados:
Tubos de ensaio;
Água destilada;
Uréia;
Ovoalbumina;
Hidróxido de sódio (NaOH);
Sulfato de cobre (CuSo4);
Pipetas graduadas;
Aquecedor elétrico.
b) Procedimentos
Numeramos os três tubos de ensaio de 1 a 3.
No tubo 1,colocamos 2 ml de água destilada;
No tubo 2,colocamos uma pequena quantidade de uréia (com a
ponta da espátula), aquecemos brandamente e adicionamos 2ml de água
destilada;
No tubo 3, colocamos 2ml de solução de ovoalbumina, e por fim,
adicionamos o reativo de biureto em cada tubo (5 gotas de hidróxido de sódio e
5 gotas de sulfato de cobre), aguardamos alguns segundos e agitamos.vale a
pena salientar que quando colocamos as primeiras gotas de hidróxido de sódio
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não observamos nenhuma cor, porém quando adicionamos 5 gotas de sulfato
de cobre, foi essencial para que as cores surgissem, identificando assim as
cores.
Observamos os seguintes resultados:
2 - Resultados e discussões
Nesse experimento podemos observar que o primeiro tubo ficou azul
pelo fato da mistura de água destilada com o reativo de biureto,como o cobre
em suas reações desenvolve uma cor azul, aqui não seria diferente, a água
com o cobre ficaria azul.
O segundo tubo ficou rosa, pois dependendo da complexidade da
proteína ou dos peptídeos em questão, a cor do produto da reação na
presença do biureto varia substancialmente, sendo assim, proteínas dão
colocaração violeta como no tubo 3, e os peptídeos dão coloração rosa, como
tubo 2.
A intensidade da cor depende exclusivamente da concentração de
proteínas. Para que a reação de biureto seja positiva, há necessidade da
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presença de pelo menos duas ligações peptídicas na molécula. Como por
exemplo, o tubo de ensaio 3.
PRÁTICA 2 - PRECIPITAÇÃO SALINA DA OVOALBUMINA
Essa pratica tem como objetivo caracterizar a proteína por saturação salina.
1 - Procedimento experimental
a) Materiais utilizados:
Ovoalbumina;
Sulfato de amônia (75%);
Hidróxido de sódio (2,5N);
Sulfato de cobre;
Tubos de ensaio;
Pipetas graduadas;
Funil;
Papel filtro;
Garra de madeira.
b) Procedimentos:
Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5ml de solução de
ovoalbumina lentamente.Adicionamos 10 ml de solução de sulfato de amônia a
75%, também de forma lenta, até que todo o conteúdo estivesse no tubo.
Misturamos por inversão suavemente.
Aguardamos 10 minutos, e filtramos para um novo tubo de ensaio.
Com o filtrado obtido, fizemos a reação de biureto: Pipetamos 2 ml
do filtrado para um outro tudo de ensaio e adicionamos o reativo de biureto
(5 gotas de hidróxido de sódio e 5 gotas de sulfato de cobre).
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2-Resultados e discussões:
Na precipitação salina, o tubo ficou azul negativa: Azul por causa do
sulfato de cobre e negativa por não conter duas ligações peptídicas, pois houve
o filtramento da proteína.
PRÁTICA 3 - PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDO
Essa pratica, tem como objetivo caracterizar a proteína por
desnaturação.
1- Procedimento experimental
a) Materiais utilizados:
Ovoalbumina;
Solução ácida (HCl)
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Tubos de ensaio;
Pipetas graduadas.
b) Procedimentos:
Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5 ml de solução
ovoalbumina lentamente. Adicionamos 3 gotas de ácido lentamente e já
pudermos observar a mudança na estrutura da proteína.
2- Resultados e discussões:
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As proteínas são compostas por 4 estruturas especificas:Estrutura
primária, secundaria terciária e quartenária. A desnaturação da proteína ocorre
quando se rompe sua estrutura terciária. Quando a proteína foi submetida ao
ácido clorídrico, ocorreu o rompimento das ligações peptídicas e ou a perda da
estruturas terciária. Dessa maneira ocorreu uma alteração na estrutura,
tornando sua função praticamente inerte. Ficando assim, com esse aspecto
branco.
CORES DOS EXPERIMENTOS
Prática 1:
Tudo 1:Azul
Tubo 2: Rosa
Tubo 3:Violeta
Prática 2:Tubo 4: Azul
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Prática 3:
Tubo 5:Branco
QUESTIONAMENTOS
1) Qual o objetivo de realizar a reação do biureto com a uréia
aquecida e com a ovoalbumina?
Resposta: O objetivo de realizarmos a reação de biureto com a
uréia aquecida é o fato de o biureto ser um composto que se forma pela
condensação de moléculas de uréia com liberação de uma molécula de
amônia. Esta condensação ocorre pelo aquecimento. Esse composto em
contato com o sulfato de cobre em meio alcalino desenvolve uma coloração
violeta. Sendo fundamental para a visualização das proteínas. Usamos o
ovoalbumina para identificarmos as proteínas presentes, através da sua
coloração, pois este alimento é rico em proteínas, sendo fácil a visualização.
2) Explique o que você observou na experiência 2. O que ficou retido
no papel filtro?
Resposta: Observamos que ao filtrar o ovoalbumina com o sulfato
de amônia a 75%, o experimento ficou uma cor clara opaca, porém ao
adicionarmos a reação de biureto, ele mudou de cor, para um azul negativo.
O componente retido no papel foi o ovoalbumina.
3) Por que a reação de biureto foi negativa para o filtrado obtido?
Resposta: Porque ao filtrar a substância, a ovoalbumina ficou retida
no papel filtro, sendo assim o líquido resultante do filtrado ficou negativo, pelo
fato de não conter as duas ligações peptídicas.
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CONCLUSÃO
Com esse relatório concluímos que existem diferentes métodos para
identificar as proteínas como pela saturação salina, reação de biureto e até
pela precipitação por ácido, através da desnaturação, podemos fazer esse
último método em casa de forma simples e prática, através da clara do ovo e
algum tipo de ácido.
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REFERÊNCIAS
Reação de caracterização de proteínas. Disponível em
http://www2.ucg.br/cbb/professores/19/Nutricao/Bioquimica/Reacao%20de%20
Biureto.pdf, acesso em 3 de setembro de 2010.
Experimentos de química. Disponível em
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/reacoes_cor
adasdois.htm acesso em 3 de setembro de 2010.
WILSON, Roberto. Biologia atual. 13 º Ed.1995