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10.005.00

BIOTÉCNICA IND.COM. LTDA. Rua Ignácio Alvarenga nº 96, Vila Verônica, Varginha MG BRASIL CEP: 37026-470 Tel/fax: +55 35 3214 4646 www.biotecnica.ind.br

Revisão: 01 - FEVEREIRO/2012

HDL COLESTEROL

FINALIDADE Kit destinado à determinação da fração HDL do colesterol presente no soro. PRINCÍPIO DO MÉTODO Os quilomícrons e as lipoproteínas de baixíssima densidade (VLDL) e de baixa densidade (LDL) presentes na amostra, precipitam em presença de íons fosfotungstato e magnésio. Após a centrifugação o sobrenadante contém as lipoproteínas de elevada densidade (HDL), cujo colesterol quantifica-se em espectrofotômetro mediante as reações acopladas descritas abaixo: col. esterase Colesterol esterificado + H2O -------------> Colesterol + Ac. graxo col. oxidase Colesterol + ½ O2 + H2O --------------> Colestenona + H2O2

peroxidase

2H2O2 + 4-Aminoantipirina + Fenol -------------> Quinoneimina + 4H2O COMPOSIÇÃO DOS REAGENTES

Ácido Fosfotúngstico 16 mmol/L, Cloreto de magnésio 3,5 mmol/L.

Butanol 10% v/v; Triton X100 0,1% v/v; em concentração equivalente à 20 mg/dL de HDL colesterol.

CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE • Estabilidade: Estável até a data de validade do kit que está impressa no

rótulo da embalagem. • Não usar reagentes cuja data de validade tenha expirado. • Conservar de 2 a 8 ºC. • Não congelar e manter ao abrigo da luz.

MATERIAL NECESSÁRIO NÃO FORNECIDO • Espectrofotômetro ou fotômetro para leitura em 505 nm (490 - 510). • Banho de água, termostatizado a 37 ºC. • Pipetas de vidro e/ou automáticas. • Relógio ou Cronômetro. • Tubos de ensaio. • Centrífuga com capacidade mínima de 3.000 rpm. • Kit Biotécnica para dosagem de Colesterol- CAT BT 10.004.00.

CUIDADOS E PRECAUÇÕES • O kit destina-se somente para uso diagnóstico in vitro. � As amostras a serem analisadas devem ser tratadas como material

potencialmente infectante. • Utilizar os EPI’s de acordo com as Boas Práticas de Laboratório Clínico. • Descartar as sobras das reações de acordo com as Boas Práticas de

Laboratório Clínico (BPLC) e Programa de Gerenciamento de Resíduos de Serviço de Saúde (PGRSS).

• As informações de Descarte, Segurança e Primeiros Socorros estão descritas na Ficha Individual de Segurança de Produtos Químicos (FISPQ) deste produto, disponível em www.biotecnica.ind.br ou pelo telefone (35)-3214-4646.

• Não misturar reagentes de lotes diferentes. • Não trocar as tampas dos frascos dos reagentes, a fim de evitar

contaminação cruzada. • Não usar o reagente quando este apresentar característica visual em

desacordo com o especificado na FISPQ do produto. • Evitar deixar os reagentes fora das condições de armazenamento

especificadas, quando os mesmos não estiverem em uso. • Usar pipetas de vidro e ponteiras descartáveis específicas para cada

amostra, controle, padrão/calibrador e reagente. • O nível de água do banho-maria deve ser superior ao dos tubos de ensaio

que contém as reações.

AMOSTRA - PREPARO E ESTABILIDADE • Soro. Estável por 3 dias de 2 a 8 ºC. PROCEDIMENTO TÉCNICO A) PREPARAÇÃO DOS REAGENTES

Reagente pronto para uso.

B) PROCEDIMENTO

Precipitação

1. Pipetar em tubo de centrífuga

Amostra 250 µL

Reagente precipitante 250 µL

2. Agitar vigorosamente e deixar em repouso durante 10 minutos. 3. Centrifugar durante 10 minutos a 3.000 rpm para obter um sobrenadante límpido. 4. Recolher com cuidado o sobrenadante. 5. Realizar a dosagem de colesterol HDL imediatamente. Dosagem do Colesterol HDL Proceder à determinação do colesterol HDL utilizando o reagente de Colesterol Biotécnica CAT BT 10.004.00 1. Pipetar em tubos de ensaio:

Branco Padrão Amostra Água destilada 100 µL - - STD - 100 µL - Sobrenadante - - 100 µL Reagente do Colesterol 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL

2. Homogeneizar bem e incubar os tubos durante 10 minutos a 37 ºC. 3. Medir a absorbância (Ap) do Padrão e (Aa) da Amostra frente ao Branco a 505 nm. A cor é estável durante 30 minutos. PROCEDIMENTO DE CALIBRAÇÃO/CÁLCULOS

HDL Colesterol (mg/dL) = Absorbância da Amostra x Conc. Padrão (mg/dL) (*) Absorbância do Padrão (*) 40 equivale ao valor do padrão (20 mg/dL) corrigido de acordo com o fator de diluição (1:2) usado na precipitação.

Exemplo:

Concentração do Padrão = 40 mg/dL Absorbância da Amostra = 0,244 Absorbância do Padrão = 0,305 Colesterol HDL (mg/dL) = 0,244 x 40 = 32 mg/dL 0,305

Com Fator de Calibração:

Fator de Calibração = Concentração Padrão (mg/dL)(*) Absorbância do Padrão

Colesterol HDL (mg/dL) = Absorbância da amostra x Fator de Calibração

Exemplo: Fator de Calibração = 40 = 131 0,305

Colesterol HDL (mg/dL) = 0,244 x 131 = 32 mg/dL SENSIBILIDADE E LINEARIDADE - Sensibilidade Metodológica:

Calculado: 0,145 mg/dL

- Linearidade: 150 mg/dL.

Para valores superiores, diluir a amostra com NaCl 150 mM (0,9%), realizar nova dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição. LIMITAÇÕES DA TÉCNICA • Anticoagulantes Não devem ser usados, pois produzem resultados falsamente diminuídos.

• Hemólise, Icterícia Hemoglobina > 150 mg/dL

Bilirrubina > 10 mg/dL CONTROLE DA QUALIDADE Todo laboratório clínico deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os objetivos, procedimentos, normas e critérios para limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Ao mesmo tempo, deve ser mantido um sistema definido para monitorar a variabilidade analítica que ocorre em todo sistema de medição. O uso de controles para avaliar a imprecisão e a inexatidão das determinações deve ser prática rotineira no laboratório. Sugere-se usar um controle na faixa de referência ou no nível de decisão e outro controle com valor em outra faixa de significância clínica. A aplicação do sistema de regras múltiplas de Westgard para avaliação do estado de controle também é recomendável. O laboratório deve participar de programas de controle externo de qualidade, a exemplo daqueles oferecidos pela SBAC (Sociedade Brasileira de Análises Clínicas) e SBPC (Sociedade Brasileira de Patologia Clínica). Para Calibração e Controle Interno de Qualidade Laboratorial recomenda-se o uso de soro controle. VALORES DE REFERÊNCIA Pelas últimas Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Prevenção da Aterosclerose, os valores de referência para HDL Colesterol podem ser consultados por faixa etária, como mostrado na tabela abaixo:

Faixa Etária Valor (mg/dL) Interpretação Até 10 anos > 40 Desejável

De 10 a 19 anos > 35 Desejável < 40 Baixo

41 a 59 Aceitável Adultos > 60 Desejável

Diabéticos > 45 Desejável Estes valores são unicamente para orientação, sendo recomendável que cada laboratório estabeleça seu próprio intervalo de referência.

Conversão para Unidade do Sistema Internacional (SI): HDL Colesterol (mg/dL) x 0,026 = HDL Colesterol (mmol/L) CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO Repetibilidade

A realização de 20 determinações de uma mesma amostra em um mesmo dia, com valores dentro da faixa de referência mostrou um Coeficiente de Variação de 2,83%.

Reprodutibilidade A realização de 10 determinações de uma mesma amostra, analisada em dias diferentes mostrou um Coeficiente de Variação de 3,62%. Especificidade Analítica A comparação com um método similar, já validado, mostrou um coeficiente de correlação, r, igual a 0,999 a partir de amostras obtidas de pacientes de ambulatório. A equação de regressão obtida foi Y = 1,002X - 0,4652. SIGNIFICADO CLÍNICO O colesterol HDL exerce importante função na retirada do colesterol dos tecidos e transporte até o fígado para ser metabolizado em ácidos biliares (transporte reverso do colesterol). Vários estudos sugerem existir uma forte correlação inversa entre os níveis de HDL colesterol e o risco de aterosclerose. Assim sendo, níveis elevados de HDL são benéficos e até mesmo desejáveis. Estudos demonstram que exercícios físicos podem aumentar essa fração do colesterol. Valores de HDL Colesterol são dependentes de sexo e idade, e tendem a decrescer temporariamente após um episódio de infarto agudo do miocárdio. Em doenças da tireóide seus valores não devem ser usados como estimativa de risco de aterosclerose, visto que seus níveis se elevam no hipotireoidismo e diminuem no hipertireoidismo. Fatores que contribuem para o decréscimo do HDL Col esterol � Fatores genéticos: hipoalfalipoproteinemia. � Fumo. � Obesidade. � Hipertrigliceridemia. � Sedentarismo. � Esteróides,androgênios, progestágenos, anabólicos, tiazídicos. � β-Bloqueadores adrenérgicos. � Neomicina. � Anti-hipertensivos OBSERVAÇÕES 1. O laboratório deve estabelecer os requisitos químicos, microbiológicos e de partículas para a água antes do seu uso para cada uma das suas aplicações e deve definir as especificações ou tipos de água que os atenda. Uma vez que a pureza necessária tenha sido definida, o sistema de purificação deve ser validado e é importante garantir que a água obtida continue a atender às especificações por meio de verificações periódicas. 2. A limpeza e secagem adequadas do material usado são fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados corretos. APRESENTAÇÕES

R1

2 x 50 mL 400 Precip. de 0,25 mL Apresentação 1

STD 1 x 4 mL 40 cal de

100 µL

GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Biotécnica são testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes é assegurada até a data de validade mencionada na embalagem de apresentação, desde que armazenados e transportados nas condições especificadas. Os dados relativos ao Controle de Qualidade deste produto (lote impresso nas etiquetas dos frascos de reagentes) podem ser solicitados em: [email protected] AUTOMAÇÃO Este procedimento é automatizável na maioria dos analisadores. Os protocolos estão disponíveis em www.biotecnica.ind.br SAC - SERVIÇO DE ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Qualquer dúvida na utilização deste kit, entrar em contato com a Assessoria Científica da Biotécnica Ltda, através do telefone +55 35 3214 4646 ou pelo email [email protected] REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS • BURSTEIN, M.; SCHOLNICK, H. R.; MORFIN, R. Rapid method for the

isolation of lipoproteins from human serum by precipitation with polyanions. J. Lipid Res. v.11, p.583-595, 1970.

• VIRELLA, M.F.L. et al. Cholesterol determination in high-density lipoproteins separated by three different methods. Clin. Chem. v.23, p.882-884,1977.

• KOSTNER, G.M. et al. Determination of high-density lipoproteins: screening methods compared. Clin. Chem. v.25, n.6, p.939-942,1979.

• GROVE, T. H. Effect of reagent pH on determination of high-density lipoprotein cholesterol by precipitation with sodium phosphotungstate-magnesium. Clin. Chem. v.25, p.560-564, 1979.

• WARNICK, R.G.; NGUYEN, T.; ALBERS,A. A. Comparison of Improved Precipitation Methods for Quantification of High-Density Lipoprotein Cholesterol. Clin. Chem. v.2, p.217,1985.

• SOCIEDADE BRASILEIRA DE CARDIOLOGIA. Diretrizes Brasileiras Sobre Dislipidemias e Diretrizes de Prevenção da Aterosclerose. Arq. Bras. Cardiol . v.77, supl. III p.1-48, 2001.

• YOUNG, D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests - vol. 2 , 5 ed. Washington DC: AACC Press, 2000.

• WESTGARD, J. O. et al. A multi-rule shewhart chart quality control in clinical chemistry. Clin. Chem. v.27 p.493-501, 1981

RESPONSABILIDADE TÉCNICA Dr. Gilson Sério Pizzo - CRF MG - 5310 MS 80027310215

TABELA DE SÍMBOLOS INTERNACIONAIS

SÍMBOLO IDIOMA DEFINIÇÃO

Português English Español

Consultar Instruções de Uso Consult instructions for use Consultar la metódica


Código Code Código


Número de lote Batch code Denominación de lote


Para uso diagnóstico in vitro For in vitro diagnostic medical device Para uso em diagnostico in vitro


Conteúdo do kit Contents of kit Contenido del estuche


Conteúdo suficiente para <n> testes Contains sufficient for <n> tests Contenido suficiente para <n> ensayos


Calibrador Calibrator Calibrador


Controle Control Control


Padrão Standard Patrón


Reagente e seu número/abreviação Reagent and its number/abbreviation Reactivo e su número/abreviación


Limite de temperatura Temperature limitation Temperatura límite


Data limite de utilização (último dia do mês) Use by (last day of the month) Estable hasta (ultimo día del mes)


Fabricado por Manufactured by Elaborado por


Risco biológico Biological risk Riesgo biológico


Corrosivo Corrosive Corrosivo


Tóxico Toxic Tóxico


Inflamável Flammable Inflamable


Nocivo / Irritante Harmful / Irritant Nocivo / Irritante


Material reciclável Recyclable material Material reciclable


Não descartar diretamente no ambiente Dispose properly Desechar adecuadamente

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