SEMINÁRIO VIROLOGIA

CAROLINE CARNIEL HILLER

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SULFACULDADE DE VETERINÁRIA

VIROLOGIA BÁSICA

Astrovírus

◦ Vírus pequenos

◦ Circulares

◦ Não envelopados

◦ Morfologia “like star”

◦ Diâmetro: 25-35 nm.

◦ Genoma linear

◦ RNA positivo (7 kb)

Astrovírus

◦ Classificação

◦ Família Astroviridae

◦ Gênero Avastrovirus

◦ Dividido em espécies de acordo com o hospedeiro que se originou: ◦ Perus: turkey astrovirus tipo 1 (TAstV-1) e tipo 2 (TAstV-2)

◦ Galinhas: avian nephritis virus (ANV) e o chicken astrovirus (CAstV)

◦ Patos: DAstV tipo 1 (DAstV-1) e tipo 2 (DAstV-2)

◦ Atual (estrutura do aminoácido do capsídeo viral)◦ Três espécies de Avastrovirus: tipo 1,2 e 3.

Astrovírus◦ Enterites � várias espécies

◦ Aves � enterite + queda no crescimento + alta mortalidade◦ Descrito em lotes saudáveis de aves e perus

◦ Chicken astrovirus (CAstV)

◦ Distribuição mundial

◦ Nem sempre associado a sintomas

◦ Galinhas◦ RSS (Runting-Stunting Syndrome)

◦ “pintos brancos”

Objetivo

◦ Reportar o isolamento de CAstV e suas características patológicas em ovos embrionados de galinhas (CEE) de aves SPF proveniente de lotes com diarreia e RSS (runting–stunting syndrome).

Aves SPFOvos embrionados

(CEE)

Lotes comerciais com RSS

RSS

◦ Primeira semana de vida

◦ Queda no ganho de peso◦ Aumento conversão alimentar

◦ Redução da uniformidade

◦ Diarréia

◦ Infecções secundárias

Cepas virais• 280 amostras (conteúdo intestinal de frangos de corte ou matrizes com sinais de doenças

entéricas ou RSS) 2008 a 2010• SP/RS/SC

Diagnóstico molecular para vírus entéricos• CAstV, ANV, REO, ROTA, ADENO Grupo I (FAdV-1), IBV e parvovirus de galinhas

(ChPV)

Confirmação • 14 amostras positivas paras CAstV � RT pcr e sequenciamento

Inoculação em CEE de SPF

Materiais e métodos

Materiais e métodos

◦ CAstV inóculo

◦ Primeira passagem: ◦ Mesma suspensão da prova molecular◦ Adição de ATB e antifúngico

◦ Segunda e terceira passagem: PBS + macerado de gema e embrião

◦ Ovos embrionados de aves SPF◦ 07 dias de incubação SPF White Leghorn◦ Incubadora automatizada◦ Controle de temperatura e umidade

Materiais e métodos◦ Isolamento viral

◦ Primeiro grupo: 07 dias (formação e diferenciação embrionária do intestino)

◦ Segundo grupo: 14 dias (intestinos mais desenvolvidos e funcionais)

◦ Inoculo de 0.2 mL via saco da gema

◦ Controle negativo: PBS

◦ Triplicata

◦ Viabilidade embrionária: diária por 05 dias◦ Descarte de ovos com mortalidade embrionária 24h pós-inoculação

◦ Após 24h: necropsia

◦ Ovos viáveis até o quinto dia: “eutanásia”� necropsia

◦ Remoção da cabeça, asas e pernas � macerado para a próxima passagem � inoculo

Materiais e métodos

◦ Caracterização macroscópica

◦ Presença de lesões características de infecções virais◦ Deformidades

◦ Nanismo

◦ Enrolamento

◦ Hemorragias

◦ Edemas

◦ Aspecto gelatinoso

Classificação em positivo ou negativo

Resultados

◦ Confirmação do isolamento viral◦ PCR e RTpcr

◦ electron microscopy negative staining (ME) “Microscopia eletrônica de coloração negativa”

◦ Lesões

CAstV

Resultados

◦ Isolamento viral◦ Visualização de partículas virais na ME

◦ Lesões macroscópicas nos embriões

◦ PCR e RT PCR

◦ Todas as amostras foram testadas: CAstV, ChPV, ANV, IBV, FAdV-I, ROTAVIRUS, REOVIRUS e NDV.◦ 08 amostras positivas para CAstV e negativas para os demais vírus.

◦ 07 e 14 dias dos CEE

◦ 07 dias � lesões significativas / 14 dias � sem lesões

◦ Primeira passagem

Resultados

◦ Lesões nos embriões Grupo 01 (07 dias)

◦ Não houve mortalidade embrionária

◦ Grupo 02 (14 dias): não houve lesões e nem mortalidade

Discussão

◦ Doenças entéricas relação com CAstV � isolamento em aves com problemas entéricos

◦ Inoculação aos 07 e 14 dias � bons resultados para CAstV

◦ Isolamento de CAstV de fezes � vírus circulante no Brasil ◦ Não há relatos em outros países de América Latina

◦ Inoculação via saco da gema � efetiva no isolamento

◦ Não houve mortalidade em nenhuma das passagens nos dois grupos � CAstV não produz letalidade embrionária.

◦ Técnicas moleculares – auxiliam na identificação

◦ Primeiro isolado no Brasil de CAstV em ovos embrionados de aves SPF provenientes de galinhas com sintomatologia entérica.

Obrigada!