Universidade Federal do Cear Centro de Cincias Agrrias - Departamento de Tecnologia de AlimentosPrograma de Ps-graduao em Cincia e Tecnologia de Alimentos Disciplina: Anlise de alimentosProf. Cludio Ernani Mendes da Silva

ALUNA: Liana Cleide Flor de Lima Velho MATRCULA: 361924 DATA: 19/05/15

RELATRIO DA 3 AULA PRTICA: Determinao de protena pelo mtodo Micro-Kjeldahl.

1 OBJETIVO

Determinar o teor de protena bruta de amostra de farinha de milho por meio do mtodo de determinao de protenas Micro-Kjeldahl.

2 INTRODUO

A terminologia protena bruta engloba grande grupo de substncias com estruturas semelhantes, porm com funes fisiolgicas muito distintas. O mtodo de determinao de protenas proposto por Kjeldahl em 1883 um dos mais utilizado para este tipo de determinao. Este determina o nitrognio 14 (N) orgnico total, isto , o N protico e no-protico orgnico. Porm, na maioria dos alimentos, o N no-protico representa muito pouco de N total. As protenas so determinadas pelo teor de nitrognio das amostras e depois multiplicadas pelo fator de converso de nitrognio em protena. De forma geral o fator de converso utilizado 6,25, no entanto para cereais, como o milho, utiliza-se o fator 5,7.

3 AMOSTRA ANALISADA E SUAS CARACTERTICAS

A matria-prima utilizada para a realizao deste experimento foi farinha de milho industrializada (fub), da marca comercial Yoki.

4 METODOLOGIA

Os equipamentos, materiais e reagentes empregados foram: balana analtica, tubo digestor micro Kjeldahl, esptula, bloco digestor, capela de exausto, destilador de Kjeldahl, bureta de 2,0 mL, erlenmeyer de 125 mL, mistura cataltica, cido sulfrico p.a. concentrado, soluo de cido clordrico 0,1N, soluo de hidrxido de sdio a 40%, soluo de cido brico a 4%, soluo indicadora (vermelho de metila e verde de bromocresol) e soluo de fenolftalena. 1 etapa digesto: foram pesadas cerca de 0,1g da amostra em papel de filtro qualitativo e adicionado 1,0g da mistura cataltica. Esse material foi colocado em um balo de digesto de Kjeldahl ao qual foram adicionados 6 ml de cido sulfrico (H2SO4) concentrado. O balo foi colocado em seguida em um digestor para a completa digesto da amostra, por aproximadamente 3 horas, onde houve a decomposio da matria orgnica, restando apenas o composto nitrogenado, evaporando gua e outros componentes, bem como a formao do sulfato de amnio. O contedo que restou da digesto foi transferido para um balo volumtrico de 100ml cujo volume foi completado com gua destilada. 2 etapa destilao: Num erlenmeyer de 125ml foi adicionado 20 mL de cido brico juntamente com 3 gotas da soluo indicadora (vermelho de metila/verde de bromocresol), e este foi adaptado ao destilador de maneira que a ponta do destilador ficasse mergulhada no cido. Ao aparelho adicionou-se 10ml da amostra diluda, cerca de 15ml de hidrxido de sdio e 4 gotas de fenolftalena. Iniciou-se a destilao at a obteno de cerca de 50ml de destilado (cor verde) no enlenmayer. 2 etapa titulao: Fez-se a titulao do destilado com uma soluo padronizada de cido clordrico de 0,1N at o ponto de viragem, ou seja, at que houvesse a mudana de cor de verde para rseo. Foi feito um branco com o papel filtro e o valor encontrado foi subtrado do resultado da titulao. Aps todo o processo foi calculado a porcentagem de protenas com os dados obtidos.

5 RESULTADOS E DISCUSSO

A anlise foi feita em trs repeties e os resultados do teor de protena bruta da amostra podem ser analisados na Tabela 1 e foram calculados em % protena bruta atravs da seguinte frmula: % Protena Bruta (PB) = (Va-Vb) x N x f x F1 x F2 x 0,014 . 100 (Pa / 10)A partir dos resultados de percentual de protena bruta, foram calculados a mdia, o desvio padro, o coeficiente de variao (CV) e o Valor Mais Provvel (VMP), conforme expostos na Tabela 1. O desvio padro foi corrigido para populao n < 30 com 95% de confiana e 5% de significncia. Tabela 1 Resultados obtidos na determinao do teor de protena bruta na farinha de milho pelo mtodo Micro-Kjeldahl.

RepetioPeso (g)Va (mL)Vb (ml)Vol. final gasto na titulao% Protena bruta em base mida*

10,010,160,050,118,75

20,010,180,050,1310,34

30,010,170,050,129,55

Mdia 9,55

Desvio padro 0,79

CV (%) 8,27

Valor Mais Provvel (VMP) 9,55 1,96

Fonte: Dados coletados em aula prtica *Clculo realizado considerando-se: N = 0,1; f = 0,99727; e F = 5,7.

O percentual de protena bruta encontrado no produto analisado, que foi de 9,55%, est dentro da faixa encontrada por Naves et al. (2004), que achou teores proteicos entre 8,5 a 10,5 g/100g em fubs de milho.De acordo com os resultados apresentados, pode-se observar que o mtodo Micro-Kjeldahl apresentou um desvio padro baixo, o que sugere que este mtodo demonstra boa reprodutibilidade de seus resultados. Pelo resultado do CV pode-se considerar que a preciso deste mtodo relativamente elevada, apesar do valor apresentado se encontrar um pouco acima do esperado, que seria um CV menor que 5%, o que indicaria uma maior homogeneidade nas amostras.

6 CONCLUSO O mtodo de quantificao de protenas Micro-Kjeldahl um mtodo oficial da AOAC e, apesar de ser antigo, um mtodo padro amplamente utilizado na anlise de alimentos. Como este mtodo baseia-se na na quantificao do Nitrognio protico total, ele determinada o teor de nitrognio orgnico, ou seja, o nitrognio proveniente de outras fontes alm da protena, tais como: cidos nuclicos, alcalides, lipdeos e carboidratos nitrogenados, componentes geralmente presentes em quantidades menores. Apesar de ser uma metodologia lenta, que deve ser cuidadosamente conduzida para se evitaracidentes ou produo de resultados duvidosos, o mtodo Micro Kjeldahl um mtodo qumico til na determinao de protena.REFERNCIASAOAC. Official methods of analysis of AOAC INTERNATIONAL. Disponvel em: . Acesso em: 06 de mai. de 2015.

NIELSEN, S. Suzanne (Ed.).Food analysis.4th ed. New York: Springer, c2010. xiv, 602 p.

NAVES, M.M.V.; SILVA, M.S.; CERQUEIRA, F.M.; PAES, M. C. D. Avaliao qumica e biolgica da protena do gro em cultivares de milho de alta qualidade protica. Pesquisa Agropecuria Tropical, Goinia, v. 34, n. 1, p. 1-8, 2004.