FeSBE 2012

Resumo: 18.001

Projeções retinianas para o núcleo mediodorsal do tálamo do sagui (Callithrix jacchus): um estudo utilizando a subunidade b da toxina colérica

Autores

1SOUSA, T. B.

1, SILVA, A. M.

1, SANTANA, M. A. D.

1, MORAIS, P. L. A. G.

1, SOARES, J. G.

1,

MELO, T. F. V. 1, CAVALCANTE, J. C.

1, COSTA, M. S. M. O.

2, CAVALCANTE, J. S.

1,

NASCIMENTO Jr, E. S. 1 Departamento de Morfologia - UFRN,

2 Departamento de Fisiologia -

UFRN

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERN

Resumo Objetivos O Núcleo Mediodorsal (MD) é um núcleo talâmico localizado lateralmente a linha média e medialmente ao complexo de núcleos intralaminares em quase toda a sua extensão. Muitos estudos mostram o MD como uma estrutura chave nos processos de memória e aprendizagem, bem como nos mecanismos emocionais e de vigília, devido as conexões recíprocas com o sistema límbico e o córtex pré-frontal. Recentemente, foram descritas fibras da retina para o MD em um roedor, o mocó ( < i>Kerodon rupestris), sugerindo uma possível regulação do MD sobre a atividade visual. O presente estudo descreve uma projeção incomum da retina para o MD de um pequeno primata do novo mundo, o sagui ( < i>Callithrix jacchus), o qual é caracterizado por uma série de projeções retinianas em áreas classicamente não-visuais. Métodos Cinco saguis adultos machos (peso corporal entre 250-350 g) provenientes do Núcleo de Primatologia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN), foram utilizados nesse estudo sob autorização do Comitê de Ética no Uso de Animais da UFRN (CEUA-041/2009). Os animais receberam injeção intra-ocular unilateral de CTb. Após cinco dias foram perfundidos transcadiacamente e os encéfalos foram removidos e submetidos a microtomia, obtendo-se séries de secções coronais de 30 μm. Uma série foi corada pelo método de Nissl, utilizando-se o corante Thionina para demarcação das estruturas. Outras foram processadas imunoistoquimicamente (protocolo ABC) para revelação de CTb. Os cortes foram montados em lâminas gelatinizadas, intensificados pelo ósmio e em seguida observados ao microscópio óptico. Resultados As secções coradas pelo método de Nissl permitiram subdividir o MD do sagui em uma porção lateral ou parvocelular (MDpc) e uma outra porção medial ou magnocelular (MDmc). As secções submetidas a imunoistoquímica para revelação de terminais imunorreativos a CTb demonstraram terminais apenas no MDpc, apresentando varicosidades claras, uma característica dos terminais axonais. Conclusão Embora a projeção descrita neste estudo seja relativamente pequena e provavelmente não conduza informações espaciais ou tenha participação em circuitos formadores de imagem, ela representa uma via alternativa além da via retino-geniculada pela qual algum tipo de informação fótica possa diretamente influenciar o córtex pré-frontal em primatas.

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Resumo: 18.002

CITOARQUITETURA E DISTRIBUIÇÃO DE PROTEÍNAS LIGANTES DE CÁLCIO DA ZONA INCERTA DO MOCÓ (Kerodon rupestris)

Autores

1MORAIS, P. L. A. G.

1, SOUSA, T. B.

1, SANTANA, M. A. D.

1, COSTA, M. S. M. O.

1,

CAVALCANTE, J. D. S. 1, JUNIOR, E. S. D. N.

1, NASCIMENTO JR, E. S

1 MORFOLOGIA -

UFRN

Apoio Financeiro: Capes

Resumo Objetivos A Zona Incerta (ZI) é um agrupamento neuronal derivado do tálamo ventral, e está envolvida em várias funções, como processamento somato-sensório e nociceptivo, resposta motora e comportamento sócio-sexual. Estudos em roedores e primatas mostraram que a ZI apresenta várias subdivisões de acordo com diferenças citoarquitetônicas, populações neuroquímicas e hodologia. As proteínas ligantes de Cálcio (PLCa) são importantes moduladores da concentração de cálcio, e são usadas como marcadores de grupamentos celulares. O objetivo do trabalho foi caracterizar citoarquitetonicamente a ZI e mostrar a distribuição das PLCa calbindina (CB), calretinina (CR) e parvalbumina (PV) no interior do núcleo. Métodos Foram utilizados 5 mocós (Kerodon rupestris) perfundidos transcardiacamente e os encéfalos removidos para posterior microtomia. Foram obtidas secções de 30 µm distribuídas em seis compartimentos. Um compartimento foi utilizado para coloração pelo método de Nissl, e os demais compartimentos processados para revelação do padrão de distribuição das PLCa, e em seguida montadas em lâminas histológicas e analisadas no microscópio. SISBIO 21.440-1 Comitê de Ética 043/2009 Resultados Neurônios imunorreativos a CB (CB-IR) foram observados na porção medial da ZI, enquanto que neurônios imunorreativos a CR (CR-IR) foram observados na porção lateral. Neurônios imunorreativos a PV (PV-IR) foram identificados em toda ZI, apresentado maior densidade celular em relação à CB e CR. Analisando a ZI pela coloração de Nissl, vemos as porções ventral de dorsal, com neurônios densamente agrupados na porção, sendo a porção ventral, com somas de formato ovóide e a dorsal ovóide e estrelado. A porção medial apresenta neurônios esparsamente distribuídos e com formato ovóide. Conclusão Esses achados corroboram com estudos anteriores, mostrando que a ZI apresenta Diferentes características citoarquitetônicas e caráter citoquímico em suas regiões, implicando em uma possível variabilidade no contexto funcional.

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Resumo: 18.003

ANÁLISE DAS PROTEÍNAS JUNCIONAIS NA ALTERAÇÃO DA PERMEABILIDADE DA BARREIRA HEMATOENCEFÁLICA INDUZIDA PELO VENENO DA ARANHA Phoneutria nigriventer

Autores

1MENDONÇA, M. C. P.

2, SOARES, E. S.

2, STÁVALE, L. M.

2, RÂPOSO, C.

1,2, CRUZ-HÖFLING,

M. A. D. 1 Departamento de Farmacologia - UNICAMP,

2 Departamento de Histologia e Embriologia -

UNICAMP

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPESP, FAEPEX

Resumo Objetivos O objetivo deste estudo foi investigar a via paracelular em períodos agudos após o envenenamento e sua relação com a membrana basal, avaliando a expressão da Laminina e de proteínas das junções de oclusão (JO) e de adesão (JA), respectivamente a Ocludina e Beta-catenina em animais de diferentes idades (neonatos e adultos). Métodos A expressão das proteínas foi investigada 2, 5 e 24 h após a injecção i.p. de PNV, 1,7 mg/kg (n=6/grupo) por western blotting, no hipocampo de ratos Wistar machos (Rattus norvegicus) de, 14 dias (P14), ~30 g e 8-10 semanas de idade, ~250- 350g e comparada com a expressão em controles pareados injetados com solução salina 0,9% (sham). O estudo foi aprovado pelo CEUA/Unicamp, protocolo 2672-1. Os dados foram comparados pelo teste t-Student com p < 0,05 sendo considerado significativo e expressos como média±SEM. Resultados A análise densitométrica em triplicata dos imunoblots das proteínas mostraram semelhanças entre os animais de 14 dias controle e tratados, respectivamente, para Ocludina às 2 h (68.07±4.03 x 66.16±0.96) e 24 h (99.95±0.05 x 98.50±0.50); Beta-catenina às 2 h (64.00±10.35 x 63.19±8.78) e 24 h (87.65±3.84 x 94.62±4.89) e Laminina às 2 h (97.03±2.21 x 95.70±3.81) e 24 h (99.97±0.025 x 98.53±0.74). Entretanto, 5 h após a administração de PNV ocorreu diminuição significativa na expressão de Ocludina, Beta-catenina e Laminina, respectivamente (24%, p < 0,001; 22%, p < 0,01; 9%, p < 0,05) nos animais jovens. Em ratos adultos, às 2 h a expressão da Ocludina diminuiu em 22%, Beta-catenina em 36% e Laminina em 34% ( p < 0,05) pós-PNV; 24 h após, a expressão de Ocludina permanecia 15% abaixo do nível basal ( p < 0,01). Diferentemente dos animais jovens, às 5 h a análise da expressão das proteínas mostrou semelhança entre os controles e tratados, respectivamente, para Ocludina (74.76±5.66 x 73.68±7.75), Beta-catenina (58.00±9.50 x 60.38±13.11) e Laminina (57.57±0.27 x 62.21±2.74). Conclusão Nos animais P14 a diminuição da expressão das proteínas foi mais tardia, só acontecendo após 5 h enquanto nos animais adultos deu-se após 2 h. Além disso, a expressão da Ocludina permanecia abaixo do fisiológico 24 h após exposição ao PNV nos animais adultos enquanto estava recuperada nos animais P14. Por outro lado, a expressão da Laminina e Beta-catenina foi mais rápida nos animais adultos (5 h) em comparação aos P14 (24 h). Concluímos que há modulação diferencial dependente da idade na expressão das proteínas associadas à via paracelular e à membrana basal.

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Resumo: 18.004

EFEITOS DA ADMINSTRAÇÃO AGUDA DE FOSFATIDILSERINA NA PROLIFERAÇÃO E SOBREVIVÊNCIA CELULAR NO GIRO DENTEADO DO HIPOCAMPO DE RATOS ADULTOS

Autores 1TAKASE, L. F.

2, RODELLA, P.

1 Morfologia e Patologia - UFSCar,

2 Farmácia - Unifeb

Apoio Financeiro: Fapesp (2007/52445-5)

Resumo Objetivos O medicamento fitoterápico fosfatidilserina (FTS), um fosfolipídeo ácido e componente essencial do córtex cerebral, tem sido indicado no tratamento de déficits de memória, principalmente em pacientes idosos ou com quadros de mal de Alzheimer. Estes déficits cognitivos podem estar relacionados com o declínio da neurogênese no hipocampo, estrutura envolvida em importantes processos como aprendizado, memória e regulação do humor. Estudos sugerem que a FTS pode estimular a neurogênese através de mudanças estruturais das membranas sinápticas, tornando-as mais fluidas e mais eficazes em sua ligação com neurotransmissores como a serotonina, importante fator estimulatório da neurogênese. Dessa maneira o presente trabalho tem como objetivos analisar os efeitos da administração aguda da FTS em ratos adultos maduros (5 meses) e idosos (13 meses) na neurogênese hipocampal. Métodos Os animais receberam injeção diária de FTS (i.p., 100mg/kg, sonicado em solução salina estéril) durante 7 dias. Durante este período foi realizado o teste de reconhecimento de objetos para avaliação das memórias de curto e longo prazo. Ao final do período experimental, os animais serão perfundidos e os encéfalos processados com técnicas de imunohistoquímica contra Ki-67 (proliferação celular) e BrdU (sobrevivência celular e neurogênese). protocolo 044/2011 - UFSCar Resultados O teste de reconhecimento de objetos não mostrou melhoras cognitivas nos animais após a administração aguda de FTS, tanto nos animais adultos maduros quanto nos idosos. A análise da expressão de Fos, um marcador de atividade neuronal, também não evidenciou diferenças estatísticas entre o grupo experimental e o controle. No entanto, a administração de FTS promoveu significante aumento na proliferação celular (células Ki-67-IR) no giro denteado tanto nos animais adultos maduros (60,2%) quanto nos idosos (76,6%). A FTS também estimulou a sobrevivência celular (células BrdU-IR) nos animai adultos maduros (24,3 %) quando comparado ao grupo controle. Conclusão O presente estudo pode ter importantes correlações clínicas uma vez que a FTS, através do aumento das taxas de neurogênese hipocampal, pode promover melhoras cognitivas nos animais, atenuando ou até mesmo revertendo os déficits cognitivos comumente observados em animais idosos.

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Resumo: 18.005

Avoiding Pitfalls of Internal Controls: Validation of Reference Genes for Analysis by qRT-PCR and Western Blot throughout Rat Retinal Development

Autores 1MARTINS, M.**

2, NJAINE, B.

1, KEVORKIAN, Y.*

1, SILVEIRA, M.

1 Neurobiologia - IBCCF,

2

Terapia Celular e Bioengenharia - IBCCF

Apoio Financeiro: CAEN/ISN, CNPq & FAPERJ

Resumo Objetivos Housekeeping genes have been commonly used as reference to normalize gene expression and protein content data because of its presumed constitutive expression. In this study, we challenge the consensual idea that housekeeping genes are reliable controls for expression studies in the retina through the investigation of a panel of reference genes potentially suitable for analysis of different stages of rat (Lister-Hooded) retinal development. Métodos CEUA Protocol (IBCCF 121). We applied statistical tools on combinations of retinal developmental stages from embryonic (E) to post-natal (P) animals (E18, P1, P4, P10, P14 and P45) to assess the most stable internal controls for quantitative RT-PCR (qRT-PCR). Biological groups were run in duplicate to reduce confounding variance. The stability of expression of seven putative reference genes (Actb, B2m, Gapdh, Hprt1, Mapk1, Ppia and rRNA 18S) was analyzed using geNorm, BestKeeper and Normfinder software. In addition, several housekeeping genes were tested as loading controls for Western blot in the same sample panel, using Image J. Immunoblot was performed in the same membrane for each of the three biological replicates after stripping, so that loading errors would not mask the results. Resultados Overall, for qRT-PCR the combination of Gapdh and Mapk1 showed the highest stability for most experimental sets. Actb was downregulated in more mature stages, while rRNA 18S and Hprt1 showed the highest variability. We normalized the expression of cyclin D1 using various reference genes and demonstrated that spurious results may result from blind selection of internal controls. For Western blot significant variation could be seen among four putative internal controls (beta-actin, cyclophilin b, alpha-tubulin and lamin A/C), while Mapk1 was stably expressed. Conclusão Putative housekeeping genes exhibit significant variation in both mRNA and protein content during retinal development. Our results showed that distinct combinations of internal controls fit for each experimental set in the case of qRT-PCR and that Mapk1 is a reliable loading control for Western blot. The results indicate that biased study outcomes may follow the use of reference genes without prior validation for qRT-PCR and Western blot.

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Resumo: 18.006

ANÁLISE HISTOMORFOMÉTRICA DO NERVO CIÁTICO DE RATOS DE DIFERENTES IDADES SUBMETIDOS À RESTRIÇÃO PROTEICA MATERNA

Autores 1SILVA, L. F.

1, SQUISATTO, M. A. M.

1, SCABORA, J. E.

1, SCABORA, J. E.

1

Morfologia/Anatomia - FHO

Apoio Financeiro: FUNDAÇÃO HERMÍNIO OMETTO

Resumo Objetivos A restrição de proteínas na alimentação resulta em sérias consequências na homeostasia de órgãos e tecidos. O objetivo deste estudo foi descrever os efeitos de diferentes protocolos de restrição proteica durante a gestação na organização estrutural do nervo periférico, durante a maturação, em ratos machos da linhagem Wistar. Métodos Nove casais de ratos com 90 dias idade foram submetidos ao acasalamento e, após constatação da presença de espermatozoides no lavado vaginal, as fêmeas prenhas foram divididas em três grupos e passaram a ser alimentadas com ração normoproteica (NP-17% de proteína em peso, dieta basal), ração hipoprotéica (HP- 6% de proteína) e com ração hipoproteica acrescida de taurina (HP+T, 6% de proteína acrescida de 2,5% de taurina em peso) durante todo o período gestacional. As dietas foram balanceadas de forma a tornarem-se isocalóricas e normossódicas. Após o nascimento das ninhadas, as ratas passaram a receber a dieta basal. Após o período de lactação, os machos foram separados, de acordo com o grupo que pertencia suas mães, e alimentados com a dieta basal. Três animais foram coletados com a idade de 25, 112 e 224 dias de cada grupo (NP, HP, HP+T), respectivamente. Os indivíduos foram sacrificados pela aplicação peritonial de sobredosagem da associação Xilazina (0,2ml/Kg) e Ketamina (1 ml/kg). Uma amostra de 1,5cm do nervo ciático foi removida. A amostra foi fixada em solução de paraformaldeído a 4% em tampão fosfato 0,1M, pH 7.4 e processada para análise histopatológica e morfométrica. Nesta última, foi aferido o número de fibras mielínicas e amielínicas (N em 104 μm2), a quantidade de fibroblastos (N em 104 μm2) e o número total de vasos (N em 104 μm2). Os dados foram comparados por ANOVA e pós-teste de Tukey ( p < 0,05). Este estudo foi aprovado pela CEUA-UNIARARAS (079/2011). Resultados A quantidade fibras mielínicas do grupo NP foi de 17±8, 21±10 e 29±10 para os animais de 25, 112, 224 dias, respectivamente. O número de fibras amielínicas foi de 69±17, 62±13 e 58±9 no mesmo período. A quantidade de fibroblastos atingiu 22±5, 18±7e 12±4, respectivamente. A quantidade de vasos sanguíneos foi de 4±1, 5±2 e 4±1. No HP, a quantidade fibras mielínicas foi de 12±5, 17±6 e 21±4 para os animais de 25, 112, 224 dias, respectivamente. O número de fibras amielínicas foi de 58±14, 60±9 e 62±12 no mesmo período. A quantidade de fibroblastos atingiu 18±6, 19±8 e 16±5, respectivamente. A quantidade de vasos sanguíneos foi de 4±1, 5±1 e 5±1. A análise quantitativa do grupo HP+T apresentou valores semelhantes ao HP em todos os parâmetros e idades. Não foram observadas diferenças significativas entre os grupos quanto a quantidade de fibroblastos, vasos sanguíneos e fibras amielínicas. Por outro lado, a quantidade de fibras mielínicas foi significativamente menor nos grupos HP e HP+T. Conclusão Os dados levantados neste trabalho demonstraram que a gestação exposta a uma dieta com restrição proteica reduziu a quantidade de fibras mielínicas no nervo ciático na prole de ratos machos durante o período de maturação do indivíduo.

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Resumo: 18.007

PADRÃO DE DISTRIBUIÇÃO DE FIBRAS SEROTONÉRGICAS NOS NÚCLEOS DA LINHA MÉDIA DO TÁLAMO DO MOCÓ (Kerodon rupestres)

Autores

1SILVA, A. M.

1, ENGELBERTH, R. C. G. J.

1, SOUSA, T. B.

1, SOARES, J. G.

1, SANTANA, M. A.

D. 1, MORAIS, P. L. A. G.

1, SANTOS, J. R.

1, PONTES, A. L. B.

1, CAVALCANTE, J. C.

1,

NASCIMENTO JÚNIOR, E. S. 1 Departamento de morfologia - UFRN

Apoio Financeiro: CNPQ; PROPESQ; FUNPEC

Resumo Objetivos Os núcleos da linha média constituem uma faixa estreita de pequenos núcleos que estão distribuídos medialmente no tálamo da porção dorsal à ventral. Compreendem os núcleos talâmicos da linha média da maior parte das espécies de mamíferos: o núcleo paratenial (Pt), o núcleo paraventricular (PVT), o núcleo intermédio-dorsal (IMD), o núcleo reuniens (Re) e o núcleo rombóide (Rh). Tais núcleos, juntamente com os intralaminares do tálamo apresentam densa inervação serotonérgica oriunda do tronco encefálico, a partir, principalmente, do denominado sistema de ativação ascendente. Esses núcleos estão frequentemente associados à mediação do ciclo sono-vigília, funções motoras, atenção, bem como processos cognitivos. Assim, o objetivo deste trabalho foi descrever a distribuição dos terminais serotonérgicos nos núcleos da linha média de uma espécie de roedor típico do semi-árido do nordeste brasileiro, o mocó (Kerodon rupestres). Métodos Foram utilizados 4 mocós adultos, sendo dois machos e duas fêmeas, pesando entre 300 e 400g. Após etapas de perfusão e microtomia, foi realizada imunoistoquímica para serotonina (5-HT). A pesquisa em questão foi aprovada pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (CEUA), cujo protocolo segue-se em extensão a pesquisa anterior (Protocolo 015/2009). Resultados Os núcleos da linha média apresentaram densa concentração de fibras de serotonina. Os núcleos PVT, Re e Rh foram classificados como intensamente preenchidos por terminais imunorreativos a 5-HT. Já o núcleo IMD apresentou moderada inervação de fibras comparado aos descritos anteriormente. Adicionalmente, o Pt apresentou escassos terminais imunorreativos a 5-HT. Conclusão Os presentes achados mostraram que fibras de 5-HT distribuem-se através dos núcleos da linha média. Tais resultados corroboram com estudos realizados em outros roedores e primatas, confirmando a grande estabilidade filogenética do sistema serotonérgico dos vertebrados.

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Resumo: 18.008

Coral snake phospholipases A2 induce neurotoxicity in rat hippocampal neurons

Autores

1CARVALHOA, N. D. D.

2, GARCIA, R. C. T.

1, LEBRUN, I.

1, MARIA, D. A.

1, CARNEIRO, Y.

1,

AFECHE, S. C. 1, SANDOVAL, M. R. L.

1 Laboratório de Farmacologia - IBU,

2 Toxicologia - FCF-

USP

Apoio Financeiro: fapesp 2011/51600-2

Resumo Objetivos The venoms from Micrurus snakes (Elapidae) are endowed with pre- and postsynaptic neurotoxins. Previously, we showed that the intrahippocampal administration of the PLA2s neurotoxins, MlTx-8 and MlTx-9, isolated from Micrurus lemniscatus venom induce seizures and neuronal lesion. The present work was designed to investigate in detail the neurotoxic effects of two PLA2 toxins (Mlx-8 and Mlx-9) isolated from Micrurus lemniscatus venom on cultured primary hippocampal neurons through morphological analysis, determination of cell viability and mitochondria membrane potential. Métodos Rat CHpN were dissociated from hippocampi of E18-E19 Wistar rat fetuses. Cultures were maintained at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO2. On the seventh day, cells were incubated with MlTx-08 or MlTx-09 in different concentrations (0.74, 7.4 or 74nM) for 3, 6, 12 or 24 hours, depending on the experiment.This protocol was approved by the Ethics Committee of the Butantan Institute (nº676/09). Resultados The PLA2-neurotoxins had a potent time and concentration-dependent neurotoxic effects on CHpN. The cell viability determined through MTT assay indicated that CHpN exposed for 12 hr to 74nM MlTx-8 or MlTx-9 reduced the neuronal viability to 70,87±8,56% and 43,87±2,75%, respectively. This assay showed that these PLA2s-neurotoxins reduce the mitochondria dehydrogenase activity. To investigate whether mitochondria lay on the main pathway underlying the neurotoxicity, the mitochondria membrane potential of CHpNs was evaluated by the fluorescent probe Rodamine 123. After 3 hr of the CHpN stimulation with 74nM MlTx-8 or MlTx-9, we observed a reduction of the mitochondria membrane potentialin a magnitude of 26 and 39%, respectively. Inspection using fluorescent images of staining with ethidium bromide and ultra structural analysis by scanning and transmission electromicroscopy showed that multiphase injury are characterized by overlapping cell death phenotypes. There were observed both neurons with apoptosis and necrosis features: shrinkage, membrane blebbing, chromatin condensation, nucleosomal DNA fragmentation and the formation of apoptotic bodies. The most striking alteration observed in the electron microscopy was the fragmentation and rarefaction of the neuron processes network. Swollen terminal synapses, cell debris and apoptotic bodies are observed among the fragmented fibers. In the cytoplasm, it was noted numerous large vacuoles, swollen mitochondria and dilated Golgi. Conclusão This is the first report showing that PLA2s isolated from the M. lemniscatus venom induce CHpN death. Our morphological data showed both neurons with apoptosis and necrosis features. We suggest that these neurotoxins could act on mitochondria membrane permeability. Conclusions: These neurotoxins will be a useful tool for understanding the death pathways in neurotoxic processes and contribute to elucidate the mechanism of action of neurotoxic PLA2s.

FeSBE 2012

Resumo: 18.009

THE EFFECT OF INTERLEUKIN-4 INTRAVITREOUS INJECTION UPON RETINOTECTAL PATHWAY IS MEDIATED BY pERK ACTIVATION

Autores 1GOULART, V. G.

1, MENEZES, G. D.

1, MELIBEU, A. C. F.

1, SERFATY, C. A.

1, CAMPELLO-

COSTA, P. 1 Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PROAP-UFF

Resumo Objetivos The superior colliculus is a major subcortical visual center in mammals, receiving afferents from retinal ganglion cells, which establish synaptic contacts in an orderly fashion on target. The visual system undergoes an extensive structural and functional adaptation by environment modification in a process called plasticity. The main plasticity in the superior colliculus occurs during the critical period of development which corresponds to the first two/three post-natal weeks. Interleukin-4 is an anti-inflammatory cytokine that plays a role in immune and nervous systems. In the nervous system, it has been related to hippocampal neuronal survival and differentiation and retinal cells proliferation as well. In retina, IL-4 receptor (IL-4R) was identified both in photoreceptors and Müller cells process. The aim of this study was to observe the in vivo effect of IL-4 in the retinofugal pathway. Furthermore, we are looking for the IL-4R- related signaling pathways. Métodos Lister Hooded rats were injected with IL-4 or PBS (control) in the right eye at post natal day 10 (PND 10). In PND 14 the animals were injected with HRP, a neuronal marker, in the left eye. The animals were perfused in the next day and after then the superior culliculus were removed, cryoprotected and frozen. The brains were then cut into 40 μm and the sections were collected. Slices were subjected to histochemistry reaction to reveal the distribution pattern of retinal axons in the superior colliculus according to the Mesulam protocol. At the same time, a group of animals were processed for immunofluorescence or western blotting analysis to verified p-ERK and p-AKT content in the retina. Quantitative analysis was performed using Scion Image and GraphPad Prism software. All animal use procedures were approved by the local animal care committee (CEPA-UFF) under protocol number 00129/09. Resultados Our results show that animals treated with intraocular injection of PBS (n= 3) show a normal distribution pattern of retinotectal afferent, which is characterized by the presence of fibers and terminal fields defined in clusters in the ventral and anterior region of superior colliculus. On the other hand, animals submitted to IL-4 in vivo treatment (n= 4) at PND10 presents an increase in retinotectal arbors, with many fibers emerging to anomalous regions of the superior colliculus. Moreover, IL-4 treatment leads to an increase in pERK (8.637 ± 301; n= 5) content in the retina compared to PBS (3.507 ± 408; n = 4), control group. There was no significant difference in the content of pAKT between groups (PBS – 95333 ± 18604; n= 7 and IL-4 - 99316 ± 16026; n= 9). Conclusão Our results show that intravitreous treatment with IL-4 induces an increase in pERK expression in the retina and a disruption in the uncrossed retinotectal pathway of the opposite eye. Altogether, this data suggest that interleukin-4 induces a change in intra-retinal electrical activity and the consequent weakening of the contralateral retinal projections which may be contributing to the sprouting of ipsilateral retinal connections of the intact eye.

FeSBE 2012

Resumo: 18.010

sAPPα CONTENT IN SUPERIOR COLLICULUS IS HIGHER DURING EARLY DEVELOPMENTAL STAGES AND AFTER INDUCTION OF PLASTICITY

Autores 1VASQUES, J. F.

1, GONÇALVES, R. G. J.

1, CAMPELLO-COSTA, P.

1, SERFATY, C. A.

1,

FARIA-MELIBEU, A. D. C. 1 Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: CNPQ, CAPES, PROPPi-UFF, PROAP-UFF

Resumo Objetivos Amyloid Precursor Protein (APP) is a transmembrane glycoprotein highly expressed and conserved in the organism of several species. APP metabolism is extremely related to Alzheimer’s Disease (AD) pathology, but this protein is also involved in important physiological processes, such as synaptogenesis, cellular survival and neural plasticity. APP can be processed by two antagonic proteolytic pathways, leading to formation of opposite fragments. In the non-amyloidogenic pathway, the cleavage by α-secretase releases soluble α-APP (sAPPα), a neurotrophic molecule. In the amyloidogenic pathway, the sequential cleavage by β-secretase and &Gamma-secretase induces the formation of β-amyloid peptide (Aβ), which can be extremely neurotoxic in high concentrations. AD is characterized by an imbalance in APP processing, leading to increased levels of Aβ and reduction in sAPPα disponibility. The superior colliculus (SC) is an excellent model to study topographic organization during development and in models of plasticity. In previous studies, we verified that transmembrane APP levels in rat SC are higher in early developmental stages, a period in which retinotectal axons undergo use-dependent remodeling, leading to precise patterns of connections. We also showed that sAPP; content in SC is increased after monocular enucleation (ME)at PND 21 (adult rats), a model of induction of plasticity. Taken all together, these data indicate that APP, and specifically sAPPα, can be important to the axonal growth and sinaptogenesis that occur intensely in the SC in first postnatal days and after the ME. To further analyze this hypothesis, our goal in this work is to verify APP main metabolites content in SC during development. Métodos All animals uses and procedures were approved by the local animal care committee (CEPA-UFF) under protocol number 00205/10. At different stages of development (from PND0 to PND70) or after ME at PDN 10 (juvenile rats) pigmented rats (Lister hooded) were euthanized and the superficial layers of the SC extracted and processed for western blotting for APP metabolites. Quantitative and statistical analyses were performed using Scion Image and GraphPad Prism softwares. Resultados Our results indicate that sAPPα is highly expressed during the early stages of development, especially in PND10. At this age, sAPPα conten in SC is 238% higher than in PND 7. After that age, sAPPα content in SC in negatively modulated, and in PND 42 very low levels of this protein are detected (67% in relation to PND 7). We also verified a 25% increase in sAPPα expression 24h after ME in DPN 10. This increase, however, is not sustained: sAPPα content in deafferented SC seems similar to control levels just 48h after ME. Conclusão These results indicate that sAPPα is up-regulated in the initial stages of retinocolicular development and also after induction of plasticity in the visual pathway. This pattern indicates that sAPPα content in SC correlates with periods where axonal growth, arborization and synapse formation occur intensively, indicating that sAPPα; may be participating in these processes. Therefore, sAPPα would be important to the organization of retinocollicular topography, during normal development and after injuries.

FeSBE 2012

Resumo: 18.011

Modulação da expressão dos receptores de adenosina A1 em períodos precoces do desenvolvimento da retina de embrião de galinha.

Autores 1PEREIRA-FIGUEIREDO, D.*

1, Brito, R.**

1, PAES-DE-CARVALHO, R.

1, CALAZA, K. D. C.

1

Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ, PRONEX-MCT, PROPPi/UFF.

Resumo Objetivos A retina é conhecida por ser um bom modelo de estudo do sistema visual e sistema nervoso central. É nesta estrutura que irá ocorrer o processo de transdução da informação luminosa para elétrica. A adenosina é uma importante molécula sinalizadora nos vertebrados, possuindo um papel de neuromoduladora. Atua no sistema nervoso central assim como na retina, através de seus receptores de superfície A1, A2a, A2b e A3 (acoplados à proteína Gi ou Gs que vão modular os níveis de AMPc). Recentemente, foi mostrado que a ativação prolongada dos receptores A2a (A2aR) induz a um aumento na quantidade dos A1R em culturas de células de retina embrionária (E) de 8 dias cultivadas por seis dias. Assim, o objetivo do nosso trabalho é averiguar a modulação in vivo da expressão dos A1R após 2 dias de injeção dos agonistas e antagonistas dos A2aR, além de inibidores e estimuladores de possíveis moléculas da via de sinalização intracelular, em retinas de embrião de galinha de 7 dias. Métodos Este projeto foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa animal da UFF (no 112/09). Ovos embrionados de Gallus domesticus com 7 dias (E7) foram injetados com CGS (agonista A2a) ou ZM (antagonista A2a) na concentração final estimada de 100nM ou DMSO (controle); Foscolina (estimulador de adenilil ciclase,concentração final de 10µM) ou queleritrina (inibidor da proteína cinase C –PKC-,concentração final de 5µM). Em E9, os animais foram eutanasiados e as retinas processadas para as técnicas de binding ao [3H]DPCPX (antagonista A1R) e western blot (WB) para A1R. Os valores do binding foram quantificados a partir de cintilação líquida, enquanto que os do WB por densitometria óptica a partir do software ImageLab e os dados obtidos analisados (One-way ANOVA, post test Bonferroni). Resultados : A exposição ao CGS-21680 (agonista A2a) aumentou o binding para o A1R, enquanto a Foscolina (estimuladora da adenilil ciclase) não alterou tais níveis (CTR=100,00 n=5; CGS 143±11,7 n=5 p < 0,001; Foscolina 114,7±14,81 n=3). Resultados preliminares com a queleritrina (inibidor da PKC, n=1) mostraram uma diminuição de 25,5% do binding para o [³H]DPCPX. Os resultados obtidos com o WB seguiram o padrão do binding. CGS aumentou a expressão do receptor A1 sendo este efeito bloqueado pelo ZM (antagonista A2a). ZM sozinho não alterou os níveis da proteína para A1R (CTR=100,00 n=5; CGS=158,3±7,53 n=3 p < 0,01; ZM=103,5±21,85 n=4; CGS±ZM=81,80±13,67 n=4). Conclusão Os resultados indicam uma modulação da expressão dos A1R pelo A2aR em períodos precoces do desenvolvimento da retina de embrião de galinha. Este efeito não parece envolver a via clássica dos receptores de adenosina (modulação da formação de AMPc) mas sim uma via que dependa da ativação da PKC.

FeSBE 2012

Resumo: 18.012

OMEGA-3 FATTY ACIDS NUTRITIONAL RESTRICTION LEADS TO A DELAY IN THE CRITICAL PERIOD IN THE RODENT VISUAL SYSTEM AND MODULATES MECHANISMS INVOLVED IN SYNAPTIC STABILIZATION

Autores

1VELASCO**, P. C. D.

1, SANDRE*, P. C.

1, FARIA-MELIBEU, A. D. C.

3, BORBA, J. M. C.

2,

COSTA, B. L. S. A. D. 3, GUEDES, R. C. A.

1, CAMPELLO-COSTA, P.

1, SERFATY, C. A.

1

Neurobiologia - UFF, 2 Fisiologia - UFPE,

3 Nutrição - UFPE

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, CAPES, PRONEX/MCT

Resumo Objetivos The intrinsic ability to sculpt highly specific circuits that convey sensory and cognitive information occurs during a postnatal time window of brain development known as the critical period. Appropriate brain connections are normally achieved through the selective elimination of misplaced axons and the maintenance of correct ones and stabilization their synapses, which underlies the formation of topographical maps. Among the mechanisms involved in synaptic stabilization, essential fatty acids, which are acquired exclusively through dietary intake, appear as precursors of signaling molecules involved in modulation of gene expression and neurotransmitter release. These acids are transferred through the placenta, and are present in human milk. They are highly accumulated in the brain and retina during the fetal period and early postnatal development. Our research studied the impact of a low omega-3 diet on the development of retinocollicular topographical maps and its underlying critical period. Métodos Female Lister Hooded rats and their litters were fed with either control (soy oil) or restricted (coconut oil) omega-3 diets. Lipid analyses indicated that our experimental diet led to a specific reduction in omega-3 fatty acids, mostly DHA (docosahexaenoic acid) in the superior colliculus (SC). At various postnatal ages, PND13, 28 and 42, rat pups received a neuronal tracer (HRP) to visualize retinal axons at their brain targets. Another group received a single retinal lesion at the temporal periphery at PND21. For supplementation experiments, animals submitted to an omega-3 deficient diet were given an oral protocol with fish oil containing 120 mg of DHA and 180 mg of EPA (eicosapentaenoic acid) given daily (3.0 g/kg). All experiments were approved by the local Animal Care Committee (CEUA-UFF) under protocol no.00150/09. Resultados Omega-3 restriction induced an increase in the optical density in the superficial layers of the SC, outside the main terminal zones (Exp Neurol. 234(1):220, 2012). This effect was observed throughout the stratum griseum superficiale (SGS), including the ventral and intermediate sub-layers at PND13 (control group: ventral 42.86 ± 4.13 a.u and intermediate 12.36 ± 1.57 a.u; restricted group: ventral 80.45 ± 4.26 a.u and intermediate 25.78 ± 0.88 a.u), PND28 (control group: ventral 33.42 ± 2.97 a.u and intermediate 5.27 ± 1.37 a.u; restricted group: ventral 50.92 ± 3.85 a.u and intermediate 13.22 ± 1.86 a.u) and PND42 (control group: ventral 26.32 ± 2.94 a.u and intermediate 4.09 ± 0.76 a.u; restricted group: ventral 48.19 ± 6.06 a.u and intermediate 8.88 ± 1.35 a.u). The quantification of optical densities suggests a delay in axonal elimination in the omega-3 restricted groups. Chronic supplementation with fish oil (DHA) was able to reverse the abnormal expansion of the retinocollicular projection. The same pattern of expanded terminal fields was also observed in the ipsilateral retinogeniculate pathway at PND28. In order to study the impact of DHA nutritional restriction on the critical period of plasticity, we performed retinal lesion experiments. DHA restriction induced an increased sprouting of intact, ipsilateral axons at the deafferented region of the SC, revealing an abnormal extension of the critical period and loss of synaptic maintenance mechanisms. Indeed, the omega-3 restricted group showed normal levels of GAP-43 with decreased levels of

FeSBE 2012

its phosphorylated form, pGAP-43. Results demonstrated that omega-3 restriction increased AMPAR subunits (GluR1 and GluR2) and decreased NMDAR (NR1, NR2A and NR2B) subunits. Omega-3 restricted groups also showed a decrease in RXRα expression. Conclusão The data indicate, therefore, that the chronic dietary restriction of omega-3/DHA delays axonal elimination and critical period closure, interfering with the use-dependent development of topographical maps and circuitry formation.

FeSBE 2012

Resumo: 18.013

Efeitos da administração crônica de extrato de Ginkgo biloba na proliferação celular no giro denteado do hipocampo de ratos adultos.

Autores 1FREITAS, J. D. S.

1, TAKASE, L. F.

1 Morfologia e Patologia - UFSCar

Apoio Financeiro: Fapesp (2007/52445-5)

Resumo Objetivos O Ginkgo biloba (GB) é um medicamento fitoterápico utilizado há vários séculos na China e Japão no tratamento de diversas doenças. Atualmente, é utilizado no tratamento de problemas cognitivos, como déficits de memória e aprendizado. Apesar de seus mecanismos de ação ainda estarem completamente esclarecidos devido aos seus múltiplos compostos ativos, alguns estudos sugerem que o GB estimule a memória através do aumento da potenciação de longa duração dos neurônios hipocampais, diminuição da concentração de glicocorticóides circulantes e inibição da MAO no hipocampo. Estas melhoras cognitivas podem estar, pelo menos em parte, relacionada com a estimulação da neurogênese hipocampal. Desta maneira, o presente trabalho tem como objetivos analisar os efeitos da administração crônica do extrato de GB na proliferação celular no giro denteado do hipocampo de ratos adultos. Métodos Foram utilizados ratos wistar, machos, 4 meses de idade, mantidos em biotério em condições controladas. Os animais do grupo experimental receberam diariamente, por via oral, extrato de GB (100mg/kg, utilizando óleo de gergelim como veículo) durante o período de 28 dias. Os animais do grupo controle receberam apenas o veículo. Ao final do período experimental, os animais serão perfundidos e os encéfalos processados com técnicas de imunohistoquímica contra Ki-67 para análise da proliferação celular. protocolo 044/2011 - UFSCar Resultados A análise do número de células imunorreativas ao Ki-67 mostrou que a administração crônica de GD não promoveu diferenças estatisticamente significantes entre o gruo experimental e o controle. Contrariando as expectativas, houve uma tendência à diminuição da proliferação celular tanto no giro denteado (-9,8%) e principalmente no hilo (-23,3 %). Conclusão A administração crônica de GB não promoveu mudanças estatisticamente significantes na proliferação celular no hipocampo. Estes resultados evidenciam a necessidade de novos estudos utilizando novas concentração do extrato de GD, bem como a utilização de outras vias de administração do fitoterápico.

FeSBE 2012

Resumo: 18.014

Papel dos receptores canabinóides CB1 na retina avascular isquêmica

Autores 1ARAÚJO, D. S. M. D.

1, COREIXAS, V. S. M.

1, CALAZA, K. D. C.

1 Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, INCT/INNT/CNPq, PROPPi/UFF, CAPES.

Resumo Objetivos O trabalho tem por objetivo investigar o efeito do sistema canabinóide diretamente na retina neural utilizando para isso a retina avascular. Métodos Pintos (Gallus domesticus) 2-7 dias pós-eclosão (PE) são eutanasiados por decapitação ( < i>protocolo de aprovação do CEUA/UFF no112/09). Após a enucleação, segmentos de retina foram submetidos à condição controle (Ringer com glicose e aerado com mistura gasosa 95%O2 e 5% CO2) ou a condição isquêmica (Ringer sem glicose borbulhado com mistura especial gasosa contendo 95%N2 e 5%O2 – privação de glicose e oxigênio, OGD) por 50 minutos. Para o ensaio de viabilidade celular, os seguimentos de retina (fração intracelular) e seus respectivos meios (fração extracelular) foram coletados e foi utilizado um kit comercial colorimétrico para a identificação e quantificação da enzima lactato desidrogenase (LDH, Promega). Os valores referentes à análise de viabilidade celular pelo ensaio de liberação percentual de LDH (já corrigidos volumetricamente) da retina controle foram considerados como 100%. Os dados das quantificações foram analisados pelos testes one-way ANOVA com pós-teste de Bonferroni através do programa GraphPad Prism (versão 5, 2007). Resultados As retinas do grupo OGD apresentaram aumento de morte celular (CTR=100 n=32; OGD=253,6±23,09 n=29). O tratamento com concentrações crescentes de WIN55212-2 (agonista dos receptores canabinóides: 1; 5; 10; 50 e 100 µM), durante o tempo de OGD, demonstrou que a partir de 10 µM havia um efeito neuroprotetor na morte celular causada pelo OGD (OGD + WIN55212-2 10 µM= 173,1±31,75 n=14). Este efeito protetor não foi bloqueado pela pré-incubação com antagonistas CB1, SR141716 (CTR=100 n=29; OGD=260,6±24,16 n=26; OGD+WIN55212-2+SR141716=208,6±41,81 n=3) ou AM251 (CTR=100 n=29; OGD=260,2±24,16 n=26; OGD+ WIN55212-2+ AM251=79,74±16,88 n=8). Mas com o antagonista CB2 AM630, houve uma inibição em concentrações maiores, 50 µM E 100 µM (CTR=100 n=29; OGD=260,2±24,16 n=26; OGD+ WIN55212-2+ AM630=121,7±43,43 n=5). O tratamento com capsazepina (antagonista TRPV1) nos mostra também um efeito protetor em grandes concentrações (CTR=100 n=32; OGD=253,6±23,09 n=29; OGD+ WIN55212-2+CAP 10 µM=112,2±43,90 n=3; OGD+ WIN55212-2+CAP 50 µM=42,22±28,95 n=3; OGD+ WIN55212-2+CAP 100 µM=35,00±15,00 n=2). Conclusão Com os resultados verificamos que o agonista WIN55212-2 pode apresentar um papel neuroprotetor e que esse efeito não é alterado pelos antagonistas AM251 e SR141716, mas pode ser bloqueado em altas concentrações de AM630, mostrando que talvez possa haver uma ação dos receptores CB2 maior do que os CB1. Os resultados com a capsazepina nos permitem dizer que os receptores TRPV1 também podem estar influenciando nesse processo de morte celular.

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Resumo: 18.015

CURTOS PERIODOS DE HIPERGLICEMIA INDUZEM ALTERAÇÕES GABAÉRGICAS E DOPAMINÉRGICAS EM RETINAS DE RATOS

Autores 1SANTOS, R. C.**

2, Maggesissi, R. S.

2, GARDINO, P. F.

1, CALAZA, K. D. C.

1 Departamento de

Neurobiologia - UFF, 2 Departamento de Biofísica - UFRJ

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, PROPPi-UFF, PRONEX e FAPERJ.

Resumo Objetivos A retinopatia diabética é uma doença classicamente relacionada com alterações vasculares. Entretanto, existem evidências que indicam que durante períodos curtos de hiperglicemia ocorrem disfunções no eletroretinograma, como os potenciais oscilatórios, que são gerados por células amácrinas. O objetivo deste trabalho é investigar se ocorrem alterações morfológicas de células amácrinas GABAérgicas e dopaminérgicas em um curto período de tempo de hiperglicemia. Métodos Este projeto foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa animal da UFF (no 199/10). Ratos (Sprague-Dawley) com 30 dias receberam uma injeção intravenosa de estreptozotocina (STZ, 100mg/kg) ou salina (controle). ODepois de uma semana, os níveis de glicose foram medidos e os animais eutanasiados para remoção das retinas. As retinas foram preparadas para imunohistoquímica, cortes radiais de retina (14µm) foram incubados com os seguintes anticorpos primários: x-GABA, x-TH e x-xCT. Após incubação com anticorpos secundários, cortes foram incubados com ABC e em seguida com cromógeno DAB para então ser analisada ao microscópio óptico. Foram quantificadas as células amácrinas GABA ou TH positivas através da contagem de seus corpos celulares. No caso das células xCT positivas, foi feito uma análise da densidade óptica das células ganglionares através do programa ImageJ. Para a análise da vascularização, cortes radiais foram incubados com IB4 e revelados com Estreptoavidina-596. Os cortes também foram marcados com DAPI e visualizados em microscópio de fluorescência. Para a quantificação, foi feita a contagem dos vasos IB4 positivos. Os dados são analisados estatisticamente usando o teste t, no programa ‘’Graphpad Prism’’. Resultados As retinas dos animais hiperglicêmicos demonstraram uma diminuição no numero de células amácrinas TH positivas (N=3, 60% ± 5) e um aumento no numero de células GABA positivas (N=2, 36% ± 10) em relação ao controle. Também foi observado um aumento na marcação para IB4 nos vasos do plexo interno (N=3, 20% ± 3) em relação ao controle. Não foi visto uma diferença significativa na densidade óptica da marcação para xCT. Conclusão A hiperglicemia é capaz de induzir alterações na retina em um curto período de tempo. Em apenas uma semana de hiperglicemia, foi visto um aumento da marcação para IB-4, sugerindo um inicio de processo reativo das células endoteliais, além de alterações na retina neural, em subpopulações de células amácrinas, como as células GABAérgicas e dopaminérgicas.

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Resumo: 18.016

FOTOCONVERSÃO SEM MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA

Autores 1da Silva FILHO, M.

1, de AZEVEDO, T. P. S.

1, SANTOS, D. V. V.

1 Fisiologia - UFPA

Apoio Financeiro: CNPq, UFPA

Resumo Objetivos Desenvolver um novo método de fotoconverter corantes fluorescentes sem empregar microscopia de fluorescência (MF). Métodos Descreveremos aqui um fotoconversor que usa como fonte de energia luminosa um LED para converter permanentemente o 1,1’-dioctadecil-3,3,3’,3’-tetrametilcarbocianina perclorato (DiI).O regulador de voltagem LM317 foi usado como fonte de

corrente (≅ 320 mA) para alimentar um LED verde de alta potência com λ = 535 nm. O regulador foi fixado a um radiador de calor posicionado na base do fotoconversor.Um circuito impresso foi produzido pelo método fotográfico com formato circular para alojar os componentes eletrônicos de apoio ao LED.O LED foi fixado em um disco de alumínio com um furo de Ø 8 mm, para permitir a colimação e saída da luz e um radiador de calor foi adicionado ao conjunto.Esse conjunto foi fixado a um disco de acrílico com Ø 80 mm e 15 mm de espessura.Um anel de acrílico foi construído para dar corpo ao fotoconversor que ao final ficou com 50 mm de altura, onde foram fixados componentes eletromecânicos.O LED utiliza uma fonte chaveada com capacidade de carga de 1A.Ratos com idade entre P0 e P8 foram usados para avaliar a eficiência do método.Foram anestesiados com uma solução de cetamina/xilasina em 3:1.Após foram sacrificados e os cérebros removidos para o implante dos cristais de DiI, onde permaneceram por um período de 20 a 30 dias em paraformaldeído na ausência de luz.Depois os cérebros foram cortados em micrótomo vibratório em fatias de 100 µm que foram então irradiadas nas regiões adjacentes aos implantes na presença de 3,3’-diaminobenzidina tetrahidrocloreto (DAB) resfriado a 4 ºC, substituído a cada 10 min. Após 1 hora de irradiação foi possível observar células fotoconvertidas. Resultados Maranto (1982), desenvolveu um método em que o Lucifer Yellow (LY), injetado nessas células, poderia ser convertido em um composto marrom mais estável e observável sob microscopia eletrônica. A técnica consiste basicamente em irradiar-se a célula marcada com uma luz azul intensa na presença de 3,3’-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB). O resultado foi a substituição da fluorescência do LY por um polímero marrom, osmiofílico e elétron denso, que se formava através da oxidação do DAB. Sandell e Masland (1988) monstraram, em uma variedade de tipos celulares, que outros corantes fluorescentes poderiam sofrer o mesmo processo, desde que fossem irradiados com luz de comprimento de onda correspondente à excitação do corante a ser fotoconvertido. Desde então, este método tem sido amplamente usado na caracterização morfológica e nas relações anatômicas celulares, tanto na fase adulta como na de desenvolvimento do sistema nervoso, empregando microscopia óptica, eletrônica ou confocal.Netes estudos empregou-se MF para realizar o processo de fotoconversão.Os resultados obtidos neste trabalho,permitiu converter o DiI presentes em neurônios sem a necessidade de MF, além disso, esse novo método pode fotoconverter grandes áreas de tecido. Conclusão O método proposto apresenta vantagens em relação ao que emprega MF ou confocal.São elas:1) pode converter grandes áreas de tecido com a mesma qualidade o que não ocorre no método que emprega microscópio, cuja qualidade depende do poder da objetiva;2) o fato de usar LED como fonte de luz aumenta seu tempo de utilização em cerca de 50 vezes em relação ao microscópio, pois a vida útil do LED empregado é cerca de 100.000 horas;3) sua construção é de baixo custo quando comparada ao microscópio;4) apresenta grande portabilidade podendo ser usado dentro de capelas, por exemplo.

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Resumo: 18.017

Inibição da atividade da PP1 altera a formação topográfica no colículo superior de ratos

Autores 1LANZILLOTTA, B.

1, FREITAS, G. S.

1, TRINDADE, P.

1, SERFATY, C. A.

1 Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos O funcionamento adequado dos sistemas sensoriais depende do refinamento de mapas topográficos. As sinapses retinotectais são refinadas durante o período pós natal do desenvolvimento, resultando em uma organização espacial precisa de axônios retinianos no colículo superior (CS). A proteína fosfatase 1 (PP1) é uma serina/treonina fosfatase com papael amplamente descrito em processos de potencialização e depressão de longo termo (LTP e LTD), ambos envolvidos no refinamento retinotectal dependente de atividade. A PP1 pode atuar em diversos alvos relacionados com plasticidade sináptica, como a proteína ligante ao elemento de resposta do AMPc (CREB) e receptores de glutamato do tipo AMPA e NMDA. Métodos Neste contexto, analisamos a expressão da PP1 e a função desta fosfatase durante o desenvolvimento da via retinotectal ipsilateral de ratos Lister Hooded. A expressão da PP1 no CS foi avaliada através da técnica de western blot em cinco idades do período pós natal (DPN 2, 7, 14, 28 e 4M). A distribuição axonal foi avaliada usando peroxidase como marcador anterógrado em animais tratados em DPN7 com implantes intracraniais de ELVAX contendo cantaridina (CANTA), inibidor da atividade da PP1; ciclosporina A (CsA), inibidor da atividade da calcineurina (CaN) ou veículo. Os animais receberam sete dias de sobrevida. Os mesmos tratamentos foram realizados para avaliar o conteúdo da proteína de densidade pós sináptica 95 (PSD95). Código Experimentação Animal 00205/10 Resultados A expressão da PP1 ao longo do desenvolvimento se mostrou basicamente constante no CS, com pouca variabilidade entre as idades analisadas. O estudo da via ipsolateral mostrou que a inibição local da PP1 produziu um aumento na densidade de marcação terminal no stratum griseum superficiale (SGS). A inibição da CaN associada à da PP1 (implante com CANTA e CsA) gerou uma dispersão de terminais para zonas mais dorsais, fora da região de aglomerados. A expressão de PSD95 apresentou aumento em DPN14, após o tratamento local de sete dias com CANTA ou CANTA+CsA. Conclusão Nossos resultados sugerem que a PP1 e a calcineurina podem atuar no refinamento dependente de atividade da via ispolateral do sistema retinotectal. As alterações no conteúdo de PSD95 indicam que a inibição do sistema fosfatase no CS pode reduzir a eliminação sináptica, aumentando o número de sinapses. Desta forma, nosso trabalho demonstra a importância do refinamento e manutenção da topografia mediados pelo sistema fosfatase no colículo superior.

FeSBE 2012

Resumo: 18.018

ANÁLISE DA PARTICIPAÇÃO DA PORÇÃO ROSTROLATERAL DA MATÉRIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL (RLPAG) NO COMPORTAMENTO DE BUSCA POR DROGA.

Autores

1,2OLIVEIRA, W. F. D.

2, SUKIKARA, M. H.

2, CARDOSO, C.

3, FELÍCIO, L. F.

2, MOTA-ORTIZ,

S. R. 1, CANTERAS, N. S.

1 Anatomia - ICB-USP,

2 Núcleo de Pesquisa em Neurociência - UNICID,

3

Patologia - FMVZ-USP

Apoio Financeiro: FAPESP: 10/52039-0

Resumo Objetivos O papel dos neurônios que expressam orexina localizados na área hipotalâmica lateral (LHA) nos mecanismos de recompensa e comportamentos aditivos tem sido amplamente estudado. Através de projeções para área tegmental ventral e o accumbens, estes neurônios podem modular os mecanismos de recompensa associados ao comportamento de busca por droga e comida. Estudos mostram que essa região da LHA é aferentada por fibras provenientes da porção rostrolateral da matéria cinzenta periaquedutal (rlPAG). Sendo assim, este trabalho tem como objetivo investigar o papel da rlPAG no comportamento de busca por droga. Métodos Foram utilizados ratos machos adultos (300g) da linhagem Wistar (protocolo nº131). No primeiro dia do experimento os animais foram habituados no aparato experimental por 10 minutos. No dia seguinte os animais receberam uma injeção (i.p.) de sulfato de morfina (10mg/kg) e foram colocados em um compartimento do aparato por trinta minutos. Três horas depois receberam uma injeção (i.p.) de salina (0,9%) e foram mantidos em outro compartimento por 30 minutos. Nos três dias seguintes as injeções se repetiram de forma alternada. No sexto dia os ratos foram colocados no aparato e o comportamento foi observado por 10 minutos. Os animais do grupo controle foram submetidos ao mesmo delineamento experimental, porém, receberam apenas injeções de salina. Após o teste comportamental, todos os animais foram perfundidos por via transcardíaca e os encéfalos processados histologicamente para posterior reação imunoistoquímica para detecção da proteína Fos e para duplas marcações de Fos e orexina. Código Experimentação Animal nº131 Resultados Os animais tratados com morfina (309,2 ±16,7; p < 0,001) apresentaram uma clara preferência pelo compartimento onde receberam as injeções de morfina quando comparados ao grupo de animais que receberam salina (167,4 ±14,9). Além disso, os animais do grupo experimental apresentaram um aumento na ativação da coluna rostrolateral da PAG ( p < 0,007) e das duplas marcações de Fos e orexina na LHA (79,4 ±9,3; p < 0,05) comparados aos animais do grupo controle (17,2 ±3,9). Os dados foram expressos em média ± erro padrão utilizando os testes não paramétricos Kruskal-Wallis e U de Mann-Whitney. Conclusão Foi observada uma ativação diferencial da PAG nos animais que receberam as injeções de sulfato de morfina além do aumento de duplas marcações para Fos e orexina na LHA. Os resultados sugerem que a ativação da porção rostrolateral da PAG bem como o aumento de duplas marcações na LHA podem indicar o envolvimento desta região no comportamento de busca por droga.

FeSBE 2012

Resumo: 18.019

SUBDIVISÕES DO COMPLEXO NUCLEAR DA SUBSTÂNCIA NEGRA (A9) DO MOCÓ (Kerodon rupestris)

Autores

1CAVALCANTI, J. R. L. P.

1, SOARES, J. G.

1, OLIVEIRA, F. G.

1, PONTES, A. L. B.

1, SOUSA, T.

B. 1, GUZEN, F. P.

1, CAVALCANTE, J. S.

1, NASCIMENTO-JÚNIOR, E. S.

1, CAVALCANTE, J.

C. 1, COSTA, M. S. M. O.

1 Laboratório de Neuroanatomia - UFRN

Apoio Financeiro:

CAPES, CNPq, Fundação de Amparo à Pesquisa do Rio Grande do Norte

(FAPERN), Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP) e Programa de Pós-

Graduação em Psicobiologia – UFRN.

Resumo Objetivos O complexo nuclear da substância negra (SN, grupo A9) consiste em uma estrutura mesencefálica que utiliza dopamina como seu principal neurotransmissor. É a origem da via mesostriatal, relacionada funcionalmente ao controle da motricidade. Estudos realizados em outras espécies propuseram a subdivisão do complexo A9 em quatro grupamentos: substância negra compacta dorsal (SNcd ou A9d), substância negra lateral (SNl ou A9l), substância negra medial (SNm ou A9m) e substância negra ventral (SNv ou A9v). O Objetivo deste trabalho consistiu em descrever a morfologia do grupo A9 do mocó (Kerodon rupestris), um roedor pertencente à família Caviidae, típico da região Nordeste do Brasil, que está sendo adotado como modelo para estudos neuroanatômicos no Laboratório de Neuroanatomia da Universidade Federal do Rio Grande do Norte. Métodos Foram utilizados quatro mocós adultos, obtidos por captura após permissão do Instituto Brasileiro do Meio ambiente (IBAMA – Licença nº 21440-1) e aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (CEUA), mediante protocolo nº 015/2009. Os animais foram pré-anestesiados com associação de cloridrato de tramadol e xilazina, ambos na dose de 5mg/kg, por via intramuscular e mantidos em anestesia por via inalatória utilizando isoflurano e oxigênio 100%. Foram então submetidos à perfusão transcardíaca e seus encéfalos removidos e seccionados em micrótomo de deslizamento, com material emblocado em gelo seco, obtendo-se secções coronais com espessura de 30 μm. Os cortes de um compartimento foram submetidos à coloração pelo método de Nissl e cortes dos demais foram submetidos à imunoistoquímica para tirosina-hidroxilase (TH). Os cortes foram montados em lâminas e, após intensificação pelo ósmio, desidratação, clarificação e montagem das lamínulas, foram examinados ao microscópio óptico e imagens digitais foram obtidas. Resultados Através da imunorreatividade a TH, pôde-se identificar subpopulações de neurônios TH+ em A9 que se diferenciavam tanto pela aglomeração em zonas específicas, quanto por diferenças no corpo celular e arborização dendrítica. Com isso, foi possível identificar as subdivisões: substância negra compacta dorsal (SNcd ou A9d), substância negra lateral (SNl ou A9l), substância negra medial (SNm ou A9m), cauda da substância negra (SNv ou A9v). Conclusão Conclui-se que o complexo nuclear A9 é muito semelhante ao que é descrito em outros animais da ordem Rodentia, exceto pela presença nesta espécie da cauda da substância negra (cSN). Assim, A9 é filogeneticamente estável entre as espécies, porém estudos adicionais são necessários relacionados à cSN, seja investigando a sua ocorrência em outras espécies de roedores, seja investigando a sua relevância funcional.

FeSBE 2012

Resumo: 18.020

AVALIAÇÃO DA INIBIÇÃO COMPORTAMENTAL DE RATAS LACTANTES EXPOSTAS AO PREDADOR NATURAL.

Autores 1TEIXEIRA, C. R.

3, FELÍCIO, L. F.

2, CANTERAS, N. S.

1, ORTIZ, S. R. M.

1, SUKIKARA, M. H.

1

Núcleo de Pesquisa em Neurociência - UNICID, 2 Anatomia - ICB-USP,

3 Patologia - FMVZ-USP

Apoio Financeiro: FAPESP: 2011/03820-3; 2009/53390-5; 2009/52851-9

Resumo Objetivos Estudos demonstram que a inibição comportamental é considerada um dos componentes da resposta de defesa sendo uma estratégia crítica para a sobrevivência dos animais no ambiente natural e manutenção da própria espécie. Recentemente, um estudo funcional acerca da inibição do comportamento maternal em ratas lactantes expostas ao odor de gato, mostrou que este comportamento foi claramente inibido em favorecimento a respostas defensivas específicas. O presente estudo teve como objetivo avaliar o comportamento defensivo e em seguida a duração da inibição do comportamento maternal isoladamente. Métodos Utilizamos ratas da linhagem Wistar, virgens, adultas (280g) (protocolo do comitê de ética em experimentação animal CEUA/UNICID n°13580576). Acasalamento: As ratas permaneceram na gaiola dos machos para acasalamento durante um período de 10 dias. Nascimento e padronização da ninhada: As ocorrências de nascimento foram consideradas como dia 0 de lactação. No dia 1, as ninhadas foram padronizadas para 4 machos e 4 fêmeas. Habituação: Nos dias 2, 3 e 4 de lactação, no início do período claro, as fêmeas foram privadas de seus filhotes por 1 hora. Em seguida, a porta da caixa-moradia foi aberta permitindo que as fêmeas se deslocassem através de um corredor até a caixa 2 para a busca e agrupamento de seus filhotes. Teste Comportamental: No dia 5 de lactação as ratas foram expostas ao gato presente na caixa 2, sem a presença dos filhotes, e a resposta comportamental foi observada por 10 minutos. Após a exposição ao gato, tanto o corredor, quanto a caixa 2 com o gato foram substituídos por uma segunda caixa contendo todos os filhotes. A inibição do comportamento maternal foi observada durante 1 hora. O teste comportamental foi dividido em duas etapas com o objetivo dos comportamentos de defesa e maternal serem avaliados separadamente. Resultados Os resultados obtidos demonstraram que durante 1 hora de observação comportamental após os 10 minutos de exposição ao gato, 90% dos animais ainda apresentaram a resposta de freezing (1,5 ± 0,2; p= 0,0021) mesmo com a presença dos filhotes e estímulos sensoriais vindo destes, apresentando uma diferença estatisticamente significante em relação ao grupo Controle que não foram expostos ao predador e não expressaram o comportamento defensivo (0,0 ± 0,0). Ainda, 100% das fêmeas lactantes que foram expostas ao gato, apresentaram respostas de avaliação de risco como o crouch–sniff (4,2 ± 0,2; p= 0,0006) e o comportamento de stretch – posture (1,0 ± 0,0 p= 0,0006), os quais não foram apresentados por nenhuma fêmea do grupo Controle (0,0 ± 0,0). As ratas do grupo Experimental apresentaram respostas de Exploração do aparato experimental logo após os 10 minutos de exposição ao gato (1,0 ± 0,0; p= 0,0006), apresentando uma diferença estatisticamente significante em relação ao grupo Controle (0,0 ± 0,0). Conclusão O comportamento maternal das ratas lactantes expostas ao predador natural sugere que a reação de defesa e a inibição dos parâmetros do comportamento maternal por um período de 1 hora pode ser considerada um parâmetro do comportamento defensivo observada em momentos distintos.

FeSBE 2012

Resumo: 18.021

Origem das aferências noradrenérgicas aos neurônios da raiz coclear, primeiro núcleo do circuito elementar do reflexo auditivo de sobressalto

Autores

1Da SILVA, A. V.

1, BEDUSCHI, R. S.

1, MARTINS, M. G.

1, BARIONI, N. O.

2,3, HORMIGO, S.

1,2,

HORTA-JÚNIOR, J. D. A. D. C. E. 2,3

, LÓPEZ, D. E. 1, HORTA-JUNIOR, J. A. C.

1 Anatomia -

UNESP, 2 Instituto de Neurociências de Castilla y León - USAL- INCYL,

3 Instituto de Investigación

Biomédica de Salamanca - IBSAL

Apoio Financeiro: Fapesp 2008/02771-6 e 2011/02214-2; MICINN #BFU2010-17754; PIBIC,

CAPES e Programa de Pós-graduação em Biologia Geral e Aplicada (BGA-IBB)

Resumo Objetivos Objetivos: Os neurônios da raiz coclear (CRN) são os primeiros neurônios do sistema nervoso central a receber a informação auditiva proveniente da cóclea e conectam-se com centros de integração sensoriomotora do tronco encefálico, especialmente com o núcleo reticular caudal da ponte. Funcionalmente, os neurônios da raiz coclear estão envolvidos no circuito elementar do reflexo auditivo de sobressalto (RAS), juntamente com as células ganglionares do órgão de Corti, o núcleo reticular caudal da ponte e os motoneurônios da medula espinal. O padrão de conectividade eferente dos neurônios da raiz coclear é bem conhecido, porém pouco se conhece sobre as origens de suas aferências e a identidade neuroquímica das mesmas. Neste trabalho identificamos as aferências noradrenérgicas aos CRN provenientes do locus coeruleus (LC) e da região do grupamento noradrenérgico A5 (A5). Métodos Métodos: Para confirmar as possíveis aferências noradrenérgicas identificadas em experimentos prévios com traçador neuronal retrógrado, realizamos experimentos de injeção de traçador neuronal anterógrado (BDA) no LC (n=5), na região do grupamento noradrenérgico (A5, n=3) e colocalização com as enzimas tirosina hidroxilase (TH) e dopamina beta hidroxilase (DBH), em ratos Wistar adultos fêmeas (90 a 120 dias, 250 a 300g). Os protocolos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética na Experimentação Animal do Instituto de Biociências de Botucatu – UNESP (protocolo no 17/08). Resultados Resultados: Foram observadas fibras imunorreativas para TH e DBH na parte lateral da raiz coclear. Estas fibras apresentavam numerosas varicosidades e em muitos casos contornavam o soma dos CRN. Como resultado das injeções de BDA no LC e na região do A5, foram observadas fibras marcadas na raiz coclear com distribuição e morfologia semelhante às imunorreativas para TH e DBH. As aferências provenientes do LC são bilaterais com predominância ipsolateral, contudo as aferências provenientes da região do A5 são somente ipsolaterais. Os experimentos de colocalização confirmaram que as fibras marcadas com neurotraçador são imunorreativas para TH e DBH. Conclusão Conclusão: Nossos resultados confirmam resultados prévios obtidos após a injeção de traçador retrógrado na raiz coclear e identificaram neurônios do LC e da região do A5 como fontes de aferências noradrenérgicas para os CRN. Estudos prévios sugerem que a noradrenalina possui um papel modulatório no reflexo de sobressalto por aumentar a sensibilidade ao processamento acústico ou por diminuir o limiar para seu desencadeamento. Por outro lado, a conexão (A5-CRN) poderia indicar uma modulação do RAS por centros ativadores do controle autônomo que participam da resposta de sobressalto desencadeada por um estímulo acústico.

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Resumo: 18.022

ANÁLISE DO PADRÃO DE ATIVAÇÃO DA PROTEÍNA FOS NA PORÇÃO ROSTROLATERAL DA MATÉRIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL (RLPAG) DE RATOS EXPOSTOS A UM AMBIENTE PREVIAMENTE PAREADO COM SULFATO DE MORFINA.

Autores

1HERRERO, A. P.

2, CANTERAS, N. S.

3, MARIN, M. T.

1, SUKIKARA, M. H.

1, MOTA-ORTIZ, S.

R. 2, OLIVEIRA, W. F.

1 Núcleo de Pesquisa em Neurociência - UNICID,

2 Anatomia - ICB-USP,

3

Área de Ciências Fisiológicas - ICBIM

Apoio Financeiro: FAPESP: 2009/53390-5

Resumo Objetivos De acordo com literatura a porção rostrolateral da matéria cinzenta periaquedutal (rlPAG) é uma estrutura chave nos mecanismos motivacionais relacionados a busca alimentar e por droga. Dados de nosso laboratório mostraram que os neurônios desta região se encontram ativados durante o comportamento de busca por droga, e o envolvimento da rlPAG neste comportamento poderia ser explicado através das projeções desta estrutura para os neurônios que expressam orexina localizados na área hipotalâmica lateral (LHA), que através de projeções para área tegmental ventral e o accumbens, modularia os mecanismos de recompensa associados ao comportamento de busca por droga e comida. Sendo assim, este trabalho tem como objetivo analisar o padrão de ativação da proteína Fos da rlPAG de ratos expostos a um ambiente previamente pareado com sulfato de morfina. Métodos Foram utilizados ratos machos adultos (300g) da linhagem Wistar (protocolo de comitê de ética em experimentação animal CEUA -ICB/USP n°131). No primeiro dia do experimento os animais receberam uma injeção via intraperitonial (i.p.) de sulfato de morfina (10mg/kg) e foram colocados em um compartimento do aparato denominado compartimento morfina por 30 minutos. Três horas após receberam uma injeção i.p. de salina (0,9%) e foram mantidos em um compartimento do aparato denominado compartimento salina por 30 minutos. Nos três dias seguintes as injeções se repetiram de forma alternada, ou seja, se um dia o animal recebeu primeiro a injeção de sulfato de morfina, no outro dia receberá primeiro a injeção de salina, e assim sucessivamente. No quinto dia os ratos não receberam nenhum tipo de injeção e o teste foi realizado. Metade dos animais foi colocada no compartimento morfina e a outra metade foi colocada no compartimento salina, permanecendo nesses compartimentos por 10 minutos. Os animais do grupo controle foram submetidos ao mesmo delineamento experimental, porém, receberam apenas injeções de salina. 90 minutos após teste, todos os animais foram perfundidos por via transcardíaca e os encéfalos processados histologicamente para posterior reação imunoistoquímica para detecção da proteína Fos. Resultados Os animais tratados com sulfato de morfina que foram expostos ao compartimento morfina no dia do teste apresentaram um aumento na ativação da coluna rostrolateral da PAG (controle 78,78 ± 14,81; experimetal 301,3 ± 33,34; p < 0,007) quando comparados aos animais que tratados com sulfato de morfina e que foram expostos ao compartimento salina. Os dados foram expressos em média ± erro padrão utilizando os testes não paramétricos Kruskal-Wallis e U de Mann-Whitney. Conclusão Foi observada uma ativação diferencial da PAG nos animais que receberam as injeções de sulfato de morfina. Os resultados sugerem que a ativação da porção rostrolateral da PAG pode indicar o envolvimento desta região quando os animais tratados com morfina são expostos ao ambiente previamente pareado com morfina.

FeSBE 2012

Resumo: 18.023

AVALIAÇÃO DO ENVOLVIMENTO DA COLUNA DORSOLATERAL DA MATÉRIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL (PAGdl) NA FORMAÇÃO DA MEMÓRIA DE MEDO NAS RESPOSTAS CONTEXTUAIS DE DEFESA AO AMBIENTE PREVIAMENTE RELACIONADO AO PREDADOR.

Autores 1RUFINO, R. A.

2, CANTERAS, N. S.

3, GUIMARÃES, F. S.

1, SUKIKARA, M. H.

1, ORTIZ, S. R.

M. 1 Núcleo de Pesquisa em Neurociência - UNICID,

2 Anatomia - ICB-USP,

3 Farmacologia - FMRP

Apoio Financeiro: FAPESP 2011/03789-9; 2009/53390-5

Resumo Objetivos A substância cinzenta periaquedutal (PAG) é um importante sítio neural envolvido na organização e expressão de diversos comportamentos como o defensivo, o reprodutivo e o maternal. Especificamente a porção dorsalateral da PAG (PAGdl) está relacionada com a expressão do comportamento de defesa, a formação da memória de medo e também com o aumento da síntese da enzima NOs quando o animal se depara com um predador. No presente trabalho, tivemos como objetivo determinar se inativações farmacológicas por muscimol, deste setor particular da PAG, após a exposição do animal ao predador ou 30 minutos após, seria capaz de inibir a formação da memória de medo. Métodos Utilizamos ratos adultos, machos Wistar (300g), para a implantação de cânulas na PAGdl (protocolo de comitê de ética em experimentação animal (CEUA/UNICID n° 13580578). No Experimento 1, as injeções de muscimol ou salina foram realizadas após a exposição do animal ao predador, enquanto no Experimento 2, as injeções foram feitas 30 minutos após o confronto. Um grupo de animais que não receberam injeção de muscimol ou salina foi utilizado como grupo controle, nos dois experimentos. Após 10 dias de habituação os animais foram expostos ao gato e filmados por 10 minutos e no 12º dia avaliamos a formação da memória de medo dos animais que foram expostos ao mesmo ambiente, sem a presença do predador. As respostas comportamentais de crouch sniff, stretch posture e exploração, junto com o tempo (s) de permanência nos compartimentos foram analisadas e submetidas ao teste estatístico Kruskal-Wallis ( p < 0,05). Após o teste os animais foram perfundidos por via transcardíaca e os encéfalos processados para analise histológica para verificação da localização da cânula. Resultados No experimento 1, os animais que receberam muscimol não apresentaram preferência por nenhum dos compartimentos do aparato (n=6; caixa 1 119,8±40,7; caixa 2 191,5±55,5) em relação aos grupos controle (n=10; caixa 1 386,5±47,3; p < 0,05 e caixa 2 0,0±0,0) e salina (n=6; caixa 1 337,0±40,7; caixa 2 22,3±18,6), prevalecendo o comportamento exploratório. Expressando em maior grau a resposta de crouch sniff (salina 45,8±3,2 e controle 213,5±21,6; p < 0,05) e stretch posture (salina 57,5±11,6; p < 0,05 e controle 44,5±8,7), comparado ao grupo muscimol (crouch sniff 10,0±3,7 e stretch posture 14,5±3,3). Já no experimento 2, não houve diferença estatisticamente significante no tempo (s) de permanência do grupo muscimol (n=5) na caixa 1 e 2, e também nas respostas de avaliação de risco, comparado aos grupos controle (n=8) e salina (n=6). Conclusão Pudemos inferir que a porção rostrodorsal especificamente a PAGdl está relacionado com a formação da memória de medo, onde injeções de muscimol logo após a exposição ao predador neste setor da PAG foi capaz de inibir as respostas contextuais dos animais previamente expostos a um predador. Porem a inativação por muscimol 30 minutos após a este mesmo procedimento não inibiu a formação da memória.

FeSBE 2012

Resumo: 18.024

MUCOPOLYSACCHARIDOSIS TYPE I: GROWTH FACTORS AND ASTROCYTE RESPONSE IN NEUROLOGICAL DYSFUNCTION

Autores

1,2MARTINELLI, B. Z.

1, MAYER, F. Q.

1,2, BALDO, G.

1,3, LAGRANHA, V.

4, FERNANDES, M.

C. 5, WINK, M. R.

1,3, MATTE, U.

1,2,3, GIUGLIANI, R.

1 Centro de Terapia Gênica - Centro de

Pesquisa Experimental - HCPA, 2 Programa de Pós Graduação em Ciências Biológicas: Bioquímica -

UFRGS, 3 Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecular - UFRGS,

4 Laboratório de

Patologia - UFCSPA, 5 Laboratório de Biologia Celular - UFCSPA

Apoio Financeiro: FIPE - HCPA

Resumo Objetivos The aim of this study was to evaluate the gene expression of growth factors essential for normal neurological functions and the astrocytic response to Mucopolysaccharidosis type I (MPS I) pathological condition. Métodos The study was approved by the authors' institutional ethics review board, under id 09-420. Six-month old Idua knockout mice (MPS I group, n=4) and normal mice (normal group, n=5) were sacrificed by cervical dislocation after isofluorane anesthesia and the brain cortex, hippocampus and cerebellum were collected. Part of tissues was homogenized in phosphate buffer with papain, and the glycosaminoglycans (GAG) content was measured using the dymethyl blue assay. Gene expression analysis of Growth Associated Protein-43 ( < i>Gap-43), Fibroblast Growth Factor-2 ( < i>Fgf-2) and Fibroblast Growth Factor Receptor-1 ( < i>Fgfr-1) was performed by the comparative CT (ΔΔCT) method in qPCR using SYBR Green. For detection of Glial Fibrilar Acidic Protein (Gfap), immunohistochemistry was performed and tissues were analyzed by counting positive GFAP cells (GFA P < su p > + ) in 5 random high power fields by a researcher blinded for the groups. Statistical analysis was performed by the Predictive Analytics SoftWare (PASW, version 18.0) using Mann Whitney to GAG analysis and Student t test to GFAP and qPCR analysis. The comparisons were made between Normal and MPS I groups. Statistical differences among groups were considered when p < 0.05. CEA 09-420 Resultados GAG levels in MPS I mice cortex were 1.5-fold normal (p=0.048), and no difference was observed in hippocampus and cerebellum. Gap-43 expression was 1.4-fold in hippocampus of MPS I mice (p=0.002). Fgfr-1 expression was significantly higher in cortex (1.3-fold normal, p=0.042) and hippocampus (1.4-fold, p=0.019) of these animals and no difference in Fgf-2 expression was detected. GFA P < su p > + cells in MPS I group showed darker staining and more profuse ramifications than the corresponding cells from Normal group. The number of GFA P < su p > + cells was higher in the cortex (7.7-fold, p=0.003), hippocampus (1.4-fold, p=0.01) and cerebellum (3.7-fold, p=0.001) of MPS I mice. Conclusão Our results suggest that the primary storage of GAG observed, caused by alfa-L-iduronidase deficiency, could lead to neurological dysfunction and neurodegeneration by an increase of astrocyte reactive response, alterations in cellular morphology and growth factors expression. Studies suggest that Gap-43 overexpression leads to abnormal and dysfunctional growth of dendrites in other mucopolysaccharidoses. Proliferative and reactive astrocytes are an indicator of neurological injury and could be responsible for the neuronal dysfunction observed in these mice and MPS I patients. The investigation of additional molecular and cellular alterations could be an approach to explain the mechanisms of neuronal dysfunction in MPS I.

Resumo: 18.025

FeSBE 2012

MAPEAMENTO DOS RECEPTORES IONOTRÓPICOS DE GLUTAMATO NA MÁTÉRIA CINZENTA PERIAQUEDUTAL (PAG).

Autores 1,1,1

JESUS, M. D. D. 1,1,1

, SUKIKARA, M. H. 1,1,1

, ORTIZ, S. R. M. 1 Núcleo de Pesquisa em

Neurociência - UNICID

Apoio Financeiro: CNPq / FAPESP (09/53390-5; 09/52851-9)

Resumo Objetivos Diversos estudos mostram que a matéria cinzenta periaquedutal (PAG) organiza expressões de comportamentos intempestivos (luta e fuga). O Glutamato, sendo o maior neurotransmissor excitatório presente no Sistema Nervoso Central, está associado a algumas conexões, compondo fragmentos ou vias de quase todos os circuitos neurais. A resposta glutamatérgica se dá através de um grande número de tipos e sub-tipos de receptores (GluRs) que podem constituir um canal iônico (receptores ditos ionotrópicos) ou que envolvem sistemas de segundos mensageiros (receptores metabotrópicos) ligados à proteína G. Assim, este estudo, teve como objetivo, mapear a distribuição das subunidades dos receptores ionotrópicos de Glutamato, do tipo AMPA (GluR1, GluR2, GluR3 e GluR4), em toda extensão rostrocaudal da PAG. Métodos Ratos albinos da linhagem Wistar, machos adultos (350g), com aproximadamente 90 dias de idade foram anestesiados e

perfundidos por via transcardíaca ( protocolo n° 13580578). Cortes frontais seriados, com 40m de espessura foram obtidos utilizando-se um micrótomo de congelação. Os cortes foram colhidos sequencialmente em 4 compartimentos, de

forma que a distância entre os cortes adjacentes em um mesmo compartimento foi de 160m. Os compartimentos foram utilizados para a detecção imunoistoquímica das 4 subunidades dos receptores do tipo AMPA (GluR1, GluR2/3 e GluR4) e o material usado para o mapeamento das subunidades de receptores ionotrópicos foram analisados em microscopia de campo claro (microscópio óptico Nikon 80i), utilizando como referência citoarquitetônica os cortes corados pelo método de Nissl. Resultados Foram mapeados os subtipos dos receptores ionotrópicos, do tipo AMPA, em toda extensão rostrocaudal da PAG. Após análise qualitativa, observamos que o receptor Glur1 é a subunidade mais expressa na PAG, em particular na porção caudal da coluna ventrolateral, enquanto os receptores GluR2/3 e GluR4 possuem uma marcação escassa em comparação ao receptor GluR1, em toda extensão rostrocaudal da PAG. Conclusão Os resultados referentes ao mapeamento das subunidades de receptores ionotrópicos do tipo AMPA, indicam que a subunidade GluR1 é a subunidade mais expressa na PAG, quando comparada as subunidades GluR2/3 e GluR4, e que essa marcação ocorre especificamente na coluna ventrolateral. Dados da literatura mostram que esta região particular da PAG, está relacionada com a expressão das respostas de congelamento motor que ocorrem em situações de perigo eminente. Dessa forma, podemos inferir que a presença de subunidades de receptores de glutamato do tipo ionotrópico, na coluna ventrolateral seria particularmente relevante quando verificamos que a resposta de defesa apresenta padrões comportamentais que são prontamente acionados, quando o animal se confronta com o seu predador natural.

Resumo: 18.026

FeSBE 2012

REHABILITATION OF MASTICATORY ACTIVITY REDUCES SPATIAL MEMORY IMPAIRMENT AND ASTROCYTIC CHANGES IN CA1 OF ADULT ALBINO SWISS MICE

Autores

1SILVA, R. P.

1, MENDES, F. C. C. S.

1, ALMEIDA, M. N. F.

1, FELÍCIO, A. P. G.

1, FALSONI, M.

1, ANDRADE, M. L. F.

1, BASTOS, G. A.

1, DINIZ, C. W. P.

1, SOSTHENES, M. C. K.

1 Laboratório

de Investigação em Neurodegeneração e Infecção - HUJBB - UFPA

Apoio Financeiro:

CNPQ (GRANT NUMBER 475677/2008-0) AND FROM FAPESPA –

FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DO PARÁ (GRANT

NUMBER 136/08)

Resumo Objetivos IN THE PRESENT REPORT WE HAVE INDUCED MASTICATORY STRESS WITH POWDER DIET AND COMPARED LEARNING AND SPATIAL MEMORY PERFORMANCES IN THE MORRIS WATER MAZE WITH A GROUP OF MASTICATORY REHABILITATED SUBJECTS AND COMPARED ASTROGLIAL MORPHOLOGICAL FEATURES IN THE STRATUM RADIATUM OF CA1. Métodos TWO GROUPS OF FEMALES ALBINO SWISS MICE WERE MAINTAINED IN ENRICHED CAGES FROM THE 21ST POSTNATAL DAY ONWARDS AND FED WITH SOFT DIET (SD) OR WITH AN ALTERNATED SEQUENCE OF HARD, SOFT AND HARD DIETS (HD-SD-HD) DURING 4 MONTHS EACH. AT 12 MONTHS OF AGE ALL ANIMAL WERE TESTED FOR LEARNING AND SPATIAL MEMORY IN THE MORRIS WATER MAZE. AFTER BEHAVIORAL TESTS ALL SUBJECTS WERE SACRIFICED AND HAD THEIR BRAINS PROCESSED FOR IMMUNOHISTOCHEMISTRY WITH A SELECTIVE MARKER OF ASTROCYTES CYTOSKELETON USING ANTIBODIES AGAINST THE GLIAL FIBRILLARY ACID PROTEIN (GFAP). CEPAE-UFPA: BIO 004-09 Resultados HD-SD-HD SUBJECTS LEARNED AND REMEMBERED THE LOCATION OF THE PLATFORM ON THE 2ND TRAINING DAY WHEREAS SD SUBJECTS DID SO ONLY AT THE 3RD TRAINING DAY. THREE-DIMENSIONAL MORPHOMETRIC ANALYSIS OF THE ASTROCYTES OF THE STRATUM RADIATUM OF CA1 AT 12 MONTHS OF AGE REVEALED THAT MASTICATORY STRESS INDUCED BY SOFT DIET WAS ASSOCIATED WITH A SIGNIFICANT SHRINKAGE OF THE ASTROCYTES PROCESSES WITH A REDUCTION OF THE SURFACE AREA AND EQUIVALENT VOLUMES, AS WELL AS A REDUCTION OF THE CELL SOMA AREA AND VOLUME. Conclusão WE SUGGEST THAT ASTROGLIAL NETWORK IN THE STRATUM RADIATUM OF CA1 MAY BE AFFECTED BY MASTICATORY STRESS AND THAT THIS CHANGE MAY CONTRIBUTE AT LEAST IN PART TO THE WORSE PERFORMANCE IN SD GROUP. WE ALSO SUGGEST THAT REHABILITATION OF NORMAL MASTICATORY ACTIVITY IN HD/SD/HD GROUP MAY HAVE CONTRIBUTED TO REDUCE ASTROGLIAL NETWORK CHANGES AND COGNITIVE RECOVERY.

Resumo: 18.027

FeSBE 2012

ESTUDO DA PARTICIPAÇÃO DA ÁREA PRÉ-ÓPTICA MEDIAL DE RATAS VIRGENS EXPOSTAS A NEONATOS.

Autores 1,1,1

FLORA, B. V. 1,1,1

, MOTA-ORTIZ S.R. 1,1,1

, SUKIKARA, M. H. 1 Núcleo de Pesquisa em

Neurociência - UNICID

Apoio Financeiro: PIBIC#122504/2011-9; FAPESP #2009/53390-5; 2009/52851-9;

Resumo Objetivos O comportamento maternal é importante para todos os mamíferos incluindo os seres humanos. Dados da literatura mostram a área pré-óptica medial (MPOA), como sendo um sítio neural crítico para a expressão e manutenção das respostas maternais. Adicionalmente, a matéria cinzenta periaquedutal (PAG), em particular, sua coluna ventrolateral, apresenta-se com uma região importante para a expressão da cifose, durante a amamentação. De particular relevância, ratas virgens expostas a filhotes recém-nascidos da mesma espécie, apresentam respostas comportamentais de aversão e defesa, essas respostas seriam mediadas pelo sistema hipotalâmico de defesa e pela coluna dorsal da PAG. Com o objetivo de avaliarmos o padrão de ativação hipotalâmico, assim como, da PAG, neste trabalho, propomos uma análise comparativa do padrão de ativação da proteína Fos, em ratas lactantes e ratas virgens expostas a filhotes recém-nascidos, da mesma espécie. Métodos Ratas da linhagem Wistar (190 a 210g) de aproximadamente 90 dias de idade foram divididas em 2 grupos: Controle (lactantes; n=4) e Experimental (virgens; n=4). Esses animais foram mantidos de acordo com o Protocolo de Pesquisa no 13587753. O ciclo estral das ratas do grupo Controle foi monitorado, a fim de que as mesmas fossem submetidas ao acasalamento junto a um macho sexualmente experiente. Após o parto, a ninhada foi padronizada para 4 machos e 4 fêmeas. No 4º dia de lactação as ratas foram habituadas na caixa experimental durante uma hora. No dia do teste, 5º dia de lactação, as ratas foram colocadas na caixa experimental uma hora antes da exposição aos neonatos. Para o início do teste comportamental, os filhotes foram introduzidos aleatoriamente na caixa onde a rata se encontrava e o comportamento das mesmas foi observado durante 15 minutos. Noventa minutos após o teste, os animais foram perfundidos e os encéfalos processados para posterior detecção imunoistoquímica para a proteína Fos. Resultados O padrão de ativação da MPOA e da PAG foi analisado a partir da análise qualitativa do padrão de ativação da proteína Fos, nos dois grupos experimentais. Observamos uma mobilização da MPOA nos dois grupos experimentais, assim como, a mobilização da coluna lateral da PAG. Adicionalmente, verificamos a mobilização da coluna ventrolateral da PAG nas ratas lactantes. Conclusão Os resultados obtidos corroboram dados da literatura que mostram a ativação da MPOA e da coluna ventrolateral da PAG em ratas lactantes, indicando a participação desses dois sítios neurais, na expressão do comportamento maternal. Por outro lado, a ativação da coluna lateral da PAG nos dois grupos experimentais, indicaria uma participação importante deste setor na expressão de respostas sociais relevantes, como o agrupamento dos filhotes, no grupo lactante, e a investigação dos neonatos pelas ratas virgens. Segundo, dados do laboratório, a coluna lateral da PAG é uma região crítica para a expressão de respostas motivacionais, como o agrupamento dos filhotes. Por fim, a ativação da MPOA nas ratas virgens expostas aos neonatos, ainda precisa ser investigada, no entanto, é importante ressaltar que este setor hipotalâmico recebe informações sensoriais coespecíficas, provenientes da amígdala, em particular dos setores anterodorsal e posterodorsal do núcleo medial da amígdala.

Resumo: 18.028

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INTRAVITREOUS INTERLEUKIN-6 TREATMENT AFTER THE CRITICAL PERIOD OF DEVELOPMENT DISRUPTS RETINOTECTAL TOPOGRAPHIC ORDER

Autores 1MENEZES, G. D.

1, GOULART, V. G.

1, ARAÚJO, S. E. S.

1, SERFATY, C. A.

1, LOPES, P. C. C.

1

Departamento de Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: CAPES, FAPERJ, CNPq, PROAP-UFF, PRONEX-MCT

Resumo Objetivos The development of retinotectal topography involves a synaptic refinement mediated by electrical activity, which is completed after the second week of life, producing a mature topographic pattern. Cytokines are factors synthesized by neurons and glial cells, which participate in the development and plasticity of the central nervous system. Recently we demonstrated that interleukin-6 (IL-6) intravitreous injection during the critical period leads to a disruption of the topography of the visual system (Menezes et al., SBNeC 2010). The aim of this study was to observe the effect of in vivo treatment with IL-6 upon the maintenance of topographical order of retinotectal axons after the end of the critical period of development. Métodos The project was approved by the ethics committee of Fluminense Federal University under protocol number 129/09. Lister Hooded rats were injected with IL-6 or PBS (control) in the right eye at PND 30 (n = 3 animals/group). In PND 37 the animals were injected with HRP, a neuronal marker, in the left eye. The animals were perfused in the next day and after then the superior culliculus were removed, cryoprotected and frozen. The brains were then cut into 40 μm in parasagittal orientation and the sections were collected. Slices were subjected to histochemistry reaction to reveal the distribution pattern of retinal axons in the superior colliculus according to the Mesulam protocol. Resultados The data demonstrated that PBS-treated animals (control) presented a normal pattern of distribution of retinotectal axons that located mainly in deep regions of visual layers in the anterior third of the target. In contrast, intravitreous injection of interleukin-6 after the critical period leads to dispersion in retinal axons until the posterior region of the superior colliculus. Conclusão Our results show that intravitreous treatment with IL-6 induces a topographic disruption after the critical period of development. Thus, we suggest that interleukin-6 promotes a misbalance in retinal electrical activity between eyes which favor the sprouting of uncrossed retinotectal pathway of the untreated eye.

Resumo: 18.029

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Efeito do consumo crônico de etanol na proliferação celular no giro denteado do hipocampo de ratos bebedores voluntários de etanol (linhagem UChB)

Autores 1BALTAZAR, D. R.

1, TAKASE, L. F.

1 Morofologia e patologia - UFSCar

Apoio Financeiro: Fapesp (2007/52445-5)

Resumo Objetivos O alcoolismo pode causar danos irreversíveis no sistema nervoso central e aumentar a incidência de distúrbios cognitivos e comportamentais, como déficits de memória e depressão. Estudos demonstraram que tanto o consumo agudo quanto o crônico de etanol inibe a neurogênese (produção de novos neurônios) e estimula processos neurodegenerativos (morte celular) no hipocampo de ratos adultos. Déficits cognitivos e comportamentais geralmente observados em pacientes alcóolicos podem ser, pelo menos em parte, relacionados com a diminuição da neurogênese hipocampal. Desta maneira, o presente trabalho tem como objetivo analisar os efeitos do consumo crônico de etanol na proliferação celular no hipocampo de ratos bebedores voluntários de etanol (linhagem UChB). Métodos Foram usados ratos da linhagem UChB, machos, com 5 meses de idade. Durante o período de 3 meses, os animais tiveram acesso a duas garrafas, uma contendo água e a outra contendo solução de etanol 10%. Estes ratos são considerados excelentes modelos experimentais para o estudo do alcoolismo, uma vez que consomem etanol em proporção semelhante aos humanos. O grupo controle, formado por ratos Wistar padrão, foi mantido em condições normais, sem receber etanol. Os animais foram perfundidos e os encéfalos processados com técnicas de imunohistoquímica contra Ki-67 para análise da proliferação celular. Outra série de cortes foi corada com violeta de cresila para análise volumétrica do giro denteado do hipocampo. protocolo 044/2011 - UFSCar Resultados A análise quantitativa do número de células imunorreativas ao Ki-67 mostrou, de maneira geral, diminuição da proliferação celular. A análise estatística evidenciou diferenças estatisticamente significantes no giro denteado (-39,7%), sua porção posterior (-43,0%) e na zona subgranular (-47,7%) quando comparado com o grupo controle. A análise volumétrica mostrou diminuição significativa do volume do giro denteado dos animais UChB quando comparados ao controle. Conclusão Estes dados sugerem que o consumo crônico de etanol promoveu inibição da proliferação celular no hipocampo. A diminuição do volume hipocampal observada nos animais UChB sugere que o álcool também pode estar estimulando processos neurodegenerativos.

Resumo: 18.030

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Expressão de caveolina-1 no hipocampo de ratos neonatos e adultos após envenenamento por Phoneutria nigriventer

Autores

1SOARES, E. S.

2, MENDONÇA, M. C. P.

1, STÁVALE, L. M.

1, RÂPOSO, C.

1,2, CRUZ-HÖFLING,

M. A. D. 1 Departamento de Histologia e Embriologia - UNICAMP,

2 Departamento de Farmacologia -

UNICAMP

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPESP, FAEPEX

Resumo Objetivos Os venenos biológicos são estruturas capazes de promover importantes alterações fisiológicas. A compreensão da via de atuação dessas moléculas pode contribuir para a elucidação de diversos mecanismos celulares. Neste contexto, o estudo da ação do veneno da aranha armadeira P.nigriventer (PNV) demonstrou sua capacidade de interferir na permeabilidade da barreira hematoenfálica (BHE), estrutura responsável pela manutenção da homeostasia no ambiente neural. O PNV interfere no transporte de moléculas que ocorre nas regiões das cavéolas. A caveolina-1 (Cav-1) é a principal proteína das cavéolas e sua expressão está relacionada ao aumento da endocitose celular. Recentemente mostramos que o PNV causa aumento imediato da Cav-1 (1, 2, 5 e 24 h) no tráfego transcelular de moléculas mediado por cavéolas na interface sangue-cerebelo da substância branca e na molecular e granular do córtex. Nosso objetivo foi avaliar a expressão da Cav-1 no hipocampo por western blotting (WB) e sua distribuição regional no tecido. O estudo da expressão diferencial da caveolina no sistema nervoso central pode fornecer novos elementos para a compreensão da estrutura da BHE e de mecanismos que permitam sua mobilização. Métodos (Protocolo nº 2411-1) Ratos Wistar machos de 8 semanas (250±300g) e 14 dias (P14, ±30g) receberam dose subletal de PNV por via intraperitoneal (170mg/ml) ou solução salina 0,9% (sham). Após 2, 5 e 24h (n=5/grupo) os animais foram sacrificados, e o hipocampo processado para WB. Os resultados são relativos e mostrados considerando a média±SEM; foi feito o teste t-Student e as diferenças consideradas significativas tendo p < 0,05*. Foi realizada imunohistoquímica para detectar a distribuição regional da caveolina em CA1, CA2 e CA3. Resultados A imunomarcação anti-Cav-1 revelou maior reatividade nos vasos da região CA1 em relação à CA2 e CA3 tanto nos animais P14 quanto de 8 semanas. A expressão da proteína no hipocampo por WB mostrou que após 2h do envenenamento não houve aumento significativo na expressão de Cav-1 no hipocampo dos animais das duas idades (P14– 84±9.87vs84.43±3.28; e 8 semanas– 93.13±6.87vs75.43±7.99). A partir de 5h de tratamento houve apenas tendência de aumento nos grupos tratados com PNV (P14– 83.93±5.14vs92±6.24; e 8 semanas– 88.37±6.29vs97.47±2.53). Nas fases de envenenamento tardio, após 24h, ocorreu aumento significativo na expressão de caveolina nos animais P14 (86±1.6vs98.1±1.9)( p < 0,05), enquanto nos de 8 semanas (94.7±4.67vs92.5±0.32) sua expressão se manteve estável. Conclusão Nos P14 o aumento da expressão da caveolina após administração de PNV mostra que a via transcelular é afetada tardiamente, sugerindo aumento na internalização de vesículas pelas células endoteliais. A Cav-1 atua diretamente na endocitose o que corrobora seu aumento tardio em resposta ao veneno. Esse efeito não foi visto nos vasos hipocampais dos ratos adultos, sugerindo que os animais neonatos são mais suscetíveis à alterações fisiológicas no ambiente neural. Estudos estão em curso para determinar alterações na expressão da Cav-1 nas diferentes regiões do hipocampo.

Resumo: 18.031

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Análise da expressão de aquaporina 4 no cerebelo de ratos neonatos e adultos por Western Blotting após envenenamento por Phoneutria nigriventer

Autores

1STAVALE, L. M.

1, SOARES, E. S.

2,1, MENDONÇA, M. C. P.

1, RAPÔSO, C.

1,2, CRUZ-

HÖFLING, M. A. 1, HÖFLING, M. A. D. C.

1 Histologia e Embriologia - IB-UNICAMP,

2

Farmacologia - FCM-UNICAMP

Apoio Financeiro: CAPES/CNPq/FAPESP/FAEPEX

Resumo Objetivos Objetivos: Phoneutria nigriventer, popularmente conhecida como aranha armadeira, é responsável pela maioria dos casos de araneísmo no Brasil. A injeção i.v. do veneno de P. nigriventer (PNV) em ratos resulta em aumento do transporte transcelular, quebra da barreira paracelular e edema vasogênico dos pés astrocitários perivasculares da barreira hematoencefálica (BHE). Dados recentes demonstram a presença de AQP4, uma proteína formadora de canais de água, no cortex cerebelar, especialmente ao longo da superfície pial, fibras da glia de Bergmann da camada molecular, nas células granulares e de Purkinje, e células ependimárias. A AQP4 tem papel chave na formação e resolução de edema cerebral por regular o rápido transporte de água dentro/fora dos pés astrocitários e consequentemente na homeostase cerebral e do fluxo de água no SNC. O objetivo é analisar se a AQP4 é alvo do PNV no cerebelo. Métodos Métodos: Análise tempo-curso (às 2, 5 e 24 h após injeção intra-peritoneal de PNV, 1.7mg/kg, e salina 0.9%, n=6/time) da expressão anti-AQP4 no cerebelo de ratos Wistar, machos (Rattus norvegicus) de 14 dias (P14) e 8-10 semanas (adultos), de 20-40g e 250-300g, respectivamente (protocolo CEUA/Unicamp 2405-1), por Western Blotting. A quantificação da proteína foi realizada utilizando a metodologia Image J e a análise de variância pelo teste t-student ( p < 0.05 sendo considerado significativo) para comparar os grupos tratados e controles. Resultados Resultados: O grupo P14 não apresentou alteração significativa na expressão da AQP4, no cerebelo em qualquer dos tempos. Os animais de 8 semanas mostraram aumento significativo dessa proteína 2h (68,54±5.4 vs 99±0,33) após o envenenamento, em relação ao seu controle ( p < 0,05). Nos períodos de 5 e 24h (74,20±16,28 vs 79,53±20,97 e 99,4±0,6 vs 93,37±5,67, respectivamente), os animais adultos envenenados também não apresentaram diferença significativa nos níveis da proteína, em relação ao controle. Conclusão Conclusões: Os dados mostraram que a expressão de AQP4 é maior tanto nos animais adultos (controles e tratados com PNV) do que nos P14. Os dados concordam com a literatura que mostra que a quantidade de AQP4 no cerebelo é baixa na primeira semana pós-natal e aumenta gradualmente até a idade adulta, sendo que após 14 dias, há aproximadamente 25% da proteína em relação ao cerebelo adulto; é sugerido que o nível de AQP4 no início do desenvolvimento pode interferir com a função neuronal para o transporte de íons. Os resultados em ratos adultos, indicando a expressão mais elevada de AQP4 às 2h pós-PNV está de acordo com dados anteriores onde mostramos que o pico de edema vasogênico ocorria entre 1-2h, período tido como crítico na permeabilidade da BHE pelo PNV e como aqui sugerido no transporte de água. Estudos com o mesmo modelo e desenho experimental mostraram que o PNV aumenta a expressão da AQP4 nas regiões hipocampais CA1,CA2 e CA3 em todos os períodos (pico às 24h) e mais proeminentemente nos animais adultos. O presente estudo confirma resultados anteriores que o cerebelo é menos susceptivel ao PNV e se recupera mais rapidamente que o hipocampo.

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Resumo: 18.032

EFEITO DE DIETAS HIPERLÍPIDICAS PRÉ-NATAIS SOBRE A MATURAÇÃO SOMÁTICA E ONTOGÊNENSE DE REFLEXOS EM RATOS NEONATOS.

Autores 1SOUTO, T. D. S.

1, NAKAO, F. S. N.

1, HOSOUME, L. F.

1, GIRIKO, C. Á.

1, SILVA, C. M. D.

1

BiociÊncias - UNIFESP

Apoio Financeiro: Fapesp - n. 2011/17574-4

Resumo Objetivos Pesquisas sugerem que a exposição materna a dietas obesogênicas (hiperlipídicas ou cetogências), durante a gestação pode causar alterações morfofuncionais ao desenvolvimento do sistema nervoso da prole. Assim, o presente estudo investigou indicadores do desenvolvimento somático e sensório-motor na prole de ratas expostas a dietas cetogênicas durante a gestação. Métodos Ratos Wistar neonatos (pesando entre 6-7g) foram divididos em três grupos, conforme a dieta materna: 1. Dieta Controle (DC; n=16); 2. Dieta Hiperlípidica-Banha (DHL-B; n=24) e 3. Dieta Hiperlípidica-Óleo de Canola (DHL-OC; n=16). Os indicadores de desenvolvimento avaliados durante o período de lactação foram: desenvolvimento somático (peso corporal); maturação de características físicas [dia da abertura do pavilhão auricular (APA), do conduto auditivo (ACA), dos olhos (AO) e da erupção dos dentes incisivos (EDI)] e desenvolvimento sensório-motor [ontogênese dos reflexos de Preensão Palmar (PP); Recuperação de Decúbito (RD; Colocação pelas Vibrissas (CV); Aversão ao Precipício (AP); Geotaxia Negativa (GN); Resposta ao Susto (RS) e Reação de Aceleração (RA). Os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética e Pesquisa em Experimentação Animal da Universidade Federal de São Paulo (número do protocolo CEP 0968/11). Para análise dos resultados, os dados foram expressos como média ± desvio padrão (x ± DP) e foi empregado o modelo de análise de variância (ANOVA) com medidas repetidas seguido do método de comparações múltiplas de Bonferroni.O nível de significância adotado foi de p ≤ 0,05. Resultados As proles das mães expostas às dietas hiperlipídicas pré-natal apresentaram retardo: 1) no ganho de peso corporal ao longo do período de amamentação [5º (11,84±0,56) ao 21º (46,53±2,61) dia pós-natal no DHL-B (p ≤ 0,05); e do 5º (11,92±0,86) ao 14º (28,95± 1,62); 17º (± DP) e 19º (38,79±2,91) dia pós-natal no DHL-OC (p ≤ 0,05)] quando comparadas aos controles [5º (12,64±1,10); 14º (30,72±1,15); 17° (37,30±1,55); 19º (40,66±1,56) e 21º (48,68±2,62)];l; 2) na maturação das características físicas ACA [DHL-B/DHL-OC (13,0±0,0)]; EI [DHL-B (11,50±1,10)] e no desenvolvimento sensório-motor [DHL-B para os reflexos de PP (10,46±2,93), CV (13,42±1,25), RS (13,0±0,0) e RA (14,92±1,06) e DHL-OC para os reflexos de CV (12,19±1,47) e RS (13,0±0,0)], quando comparadas aos controles [ACA (12,50±0,52); EI (10,56±0,81); PP (7,63± 1,20); CV (10,06±0,68); RS (12,50±0,52) e RA (12,88±1,86)]. As dietas obesogênicas materna prejudicaram o desenvolvimento somático e sensório-motor da prole, independente do tipo de gordura prevalente. Conclusão As dietas pré-natais obesogênicas materna prejudicaram o desenvolvimento somático e sensório-motor da prole, independente do tipo de gordura prevalente.

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Resumo: 18.033

TEMPORAL EVALUATION OF THE CHOLINERGIC SYSTEM AND ITS INFLUENCE ON THE DOPAMINERGIC SYSTEM IN PARKINSON´S DISEASE MODEL

Autores 1FERNANDES, A. C. M. N.

1, HAYASHIDE, L. S.

1, CARVALHO, M. B.

1, SERFATY, C. A.

1,

CAMPELLO-COSTA, P. 1, RIBEIRO, M. G. L.

1, FARIA-MELIBEU, A. C.

1 Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, Proppi-UFF, PROAP-UFF.

Resumo Objetivos Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disease characterized by a severe and progressive motor impairment due to progressive and specific degeneration of A9 dopaminergic neurons of the substantia nigra compacta. Acetylcholine (ACh) is present in the striatum via cholinergic interneurons and several studies have shown that cholinergic activity in the striatum regulates the release of dopamine (DA) through the action of nicotinic receptors (nAChRs). These receptors are expressed in dopaminergic nerve terminals and the normal activity of striatal neurons depends on the balance between DA and ACh. Therefore, we aimed to investigate, in a mouse model of PD, biochemical changes in the dopaminergic and cholinergic systems during survival periods after PD induction, in order to study time and cholinergic dependent modulation of the dopaminergic system. Métodos All animals use procedures were approved by the local animal care committee (CEPA-UFF) under protocol number 131/09. Adult C57Bl10 mice were submitted to unilateral injection of 6-OHDA into the left medial forebrain bundle using stereotaxic procedures (n=4 animals/group). Mice were then allowed to survive for either 1, 2 or 4 weeks thereafter. The behavioral test was performed using an openfield and animals were injected intraperitonealy with apomorphine. Then, the mice were euthanized and brains were removed for immunofluorescence procedure with anti-Girk2, anti-TH and anti-ChAT antibodies or striatum was dissectioned to prepare samples for western blot (WB) analysis (we used anti-TH, anti-DDC, anti-α7, anti-β2 and anti-ChAT antibodies) and for the determination of acetylcholinesterase (AChE) activity according to the colorimetric method of Ellman (1961). Resultados In behavioral analysis, mice exhibited contra-lateral rotational activity and remarkable difficulties in coordinating during the first two weeks, with decreased in the fourth week. WB analysis revealed that 6-OHDA injection in the striatum (lesion side) decreases DDC (46%) and TH (53%) content and increases ChAT (41%) content, β2 (51%) and α7 (34%) subunits content when compared to control in 1 and 2 weeks after injury. Immunofluorescence staining for TH and Girk2 (A9 DA neurons marker) showed a decreased reactivity in the injured bundle of the striatum and a reduced number of neurons in substantia nigra in the parasagittal sections in 1 and 2 weeks. Furthermore, the number of ChAT-positive cells increased when compared to the control side. Enzyme analysis showed a decrease in the AChE activity (40%) of the lesion side compared to the control side in 1 and 2 weeks, which was recovered after 4 weeks. Conclusão The 6-OHDA lesion induced symptoms related to DP and our data revealed that the inhibition of the dopaminergic system is accompanied by an increase in cholinergic transmission in the different periods analyzed. PD animals with 1 to 2 weeks post-surgery showed a decrease in expression of dopaminergic markers and an increase in cholinergic markers, whereas animals 4 weeks pos-surgery presented values similar to control. It suggests the existence of a biochemical machinery which tends to reverse damage through cholinergic modulation of dopaminergic transmission within a time window. These results may contribute to the development of future therapeutic strategy for the treatment of PD and other neurodegenerative disorders.

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Resumo: 18.034

A INIBIÇÃO DA CALCINEURINA E DA ATIVAÇÃO MICROGLIAL ALTERA A PLASTICIDADE RETINOTECTAL INDUZIDA POR ENUCLEAÇÃO MONOCULAR

Autores 1CHAGAS, L. S.

1, TRINDADE, P.

1, LEITE, P. E. C.

2, MORAES, L.

1, MELIBEU, A. F. C.

1,

COSTA, P. C. 1, SERFATY, C. A.

1 NEUROBIOLOGIA - UFF,

2 IBCCF - UFRJ

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

Resumo Objetivos Alguns tipos de lesão são capazes de induzir a plasticidade em circuitos intactos do sistema nervoso central e progressos foram feitos para compreender os mecanismos compartilhados pela ativação do sistema imune e a neuroplasticidade induzida por lesão. Nosso modelo experimental utiliza as projeções retinotectais para estudar a correlação entre plasticidade e ativação microglial durante o período crítico do desenvolvimento sináptico. Para tanto, investigamos o papel da calcineurina (CaN), fosfatase envolvida em ambos os fenômenos de estabilização sináptica e ativação imunológica e os efeitos da inibição seletiva da ativação microglial sobre a plasticidade induzida por lesão no sistema visual. Métodos Durante o período crítico (DPN 0-21), a enucleação monocular de ratos Lister Hooded induz um brotamento robusto dos axônios intactos por todas as camadas visuais do colículo superior (CS), sendo que o efeito é mais intenso com 24 horas de sobrevida. A partir disso, animais DPN 10 foram submetidos à encucleação monocular com 24 horas de sobrevida após tratamentos sistêmicos (CsA - 10mg/kg) e local (ELVAX, CsA - 1mM) com Ciclosporina A, desde DPN7 até DPN10, onde recebiam também injeções intraoculares de traçador anterógrado (HRP). Além disto, técnicas de imunofluorescência com marcadores Iba-1 e IB-4 foram utilizadas para se avaliar a ativação microglial nos grupos de estudo. O envolvimento microglial na plasticidade retinotectal foi avaliado com o uso de um inibidor específico da sua ativação, a minociclina. Os animais DPN10 receberam doses agudas de minociclina (50mg/kg e 125 mg/kg) por via subcutânea ou intraperitoneal 4horas após lesão com 24 horas de sobrevida. Os experimentos foram aprovados pela CEUA/UFF sob o protocolo de nº. 00151/09. Resultados O tratamento sistêmico, quando comparado ao tratamento local com inibidores da CaN, se mostrou eficaz na inibição da plasticidade induzida pela enucleação, levando a redução da arborização axonal, resultando em diferenças significativas entre o grupo tratado e o grupo controle. A imunofluorescência mostrou que a liberação local de antagonistas da CaN não interferiu com a ativação microglial, diferente da inibição sistêmica que gerou uma notável redução no número de células ativadas no CS contralateral à lesão. Dados preliminares mostraram indícios de que o uso da minociclina (125 mg/kg) promove redução da arborização axonal nas camadas mais dorsais do CS. Conclusão Em conjunto, nossos resultados sugerem que a liberação local de CsA pode ser insuficiente para garantir a inibição microglial na via retinotectal após lesão, bem como a plasticidade induzida por enucleação monocular. Por sua vez, a administração sistêmica de CsA reduziu a plasticidade induzida pela lesão ao mesmo tempo em que reduziu o número de células microgliais ativadas no CS. Além disto, os dados preliminares mostraram que o uso de inibidores microgliais específicos após a lesão interfere na reorganização plástica no CS. Os resultados sustentam a hipótese de um possível envolvimento da ativação microglial, mediada pela CaN, na regulação da plasticidade induzida por enucleação monocular durante o período crítico.

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Resumo: 18.035

TIME COURSE OF CHANGES IN p-GAP-43 AND POSTSYNAPTIC PROTEINS IN A MICE MODEL OF PARKINON´S DISEASE

Autores 1CARVALHO, M. B. D.

1, FERNANDES, A. C.

1, MELIBEU, A. C. F.

1, SERFATY, C. A.

1, LOPES,

P. C. 1 NEUROBIOLOGIA - UFF

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PROAP-UFF, PRONEX-MCT

Resumo Objetivos Parkinson’s disease (PD) is a progressive extrapyramidal motor disorder. Pathologically, this disease is characterized by the selective dopaminergic (DAergic) neuronal degeneration in the substantia nigra and severe motor symptoms. In the postsynaptic density, dopamine receptors physically associates with PSD-95, a postsynaptic scaffolding protein. PSD-95 organizes the molecular architecture of synapses and regulates interactions between NMDA glutamate receptors and downstream-signaling molecules. Alterations in PSD-95 were found in a number of neuropsychiatric and neurological diseases such as Alzheimer’s disease, schizophrenia and PD. NMDA receptors are essential mediators of synaptic transmission during development and after lesion-induced plasticity. Their composition modulates dendritic spine morphology in striatal medium spiny neurons and PSD-95 bind to these kinds of receptors anchoring them. GAP-43 (growth associated protein 43), is normally produced by neurons during early stages of central nervous system development, when it has been involved in axonal outgrowth and guidance. Moreover, many studies have been demonstrated its relation with synapse formation and maintenance. GAP-43 is also a key component for regenerative response in the nervous system. According to their important roles in synapses function, we focusing in evaluate the levels and the immune reactivity of these proteins in a 6-OHDA model of Parkinson´s disease. Métodos Adult C57BL6 mice were anesthetized and submitted to unilateral injection of 6-OHDA (2µl at a rate of 0,5µl/5 min) into the left medial forebrain bundle using stereotaxic procedures. The behavioral test was performed using an open field and animals were injected intraperitonealy with apomorphine (0,5mg/kg) 1, 2 and 4 weeks after surgery (n = 4 animals/group). Then, the brain was removed for immunofluorescence procedure and striatum was dissected to prepare samples for western blot (WB) analysis. All animals use procedures were approved by the local animal care committee number 129/09 (CEPA-UFF). Resultados In behavioral test, mice exhibited contra-lateral rotational activity and remarkable difficulties in coordinating movements. WB analysis revealed that 6-OHDA injection into striatum (lesioned side) increases PSD-95 (93% of control) and NR1 (52% of control) constitutive subunit of glutamate receptor mostly two weeks post-lesion. On the other hand, pGAP-43 presented this increase (31% of control) only at the first week post-lesion, decreasing afterwards (41% of control). Immunofluorescence reaction for PSD-95 and NR1 showed a marked increase immunostaining in post-synaptic neurons in the striatum (qualitative analysis) Conclusão This study reveals that 6-OHDA is a suitable model to analyze the time course of neurochemistry modification in different stages of Parkinson´s disease. Herein we noticed a transient increase in p-GAP43 after one week survival following by an increase in both NR1 and PSD-95 proteins after two weeks. Together these findings suggest that during PD progression, p-GAP43 could participates in the initial remodeling of reminiscent nigro-striatal connections. Afterwards the correlated increase in PSD-95 and NR1 subunit glutamate receptor could play an important role in the stabilization of newly projections of striatal medium spiny neurons.

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Resumo: 18.036

MATERNAL CAFFEINE INTAKE DECREASES p-CREB CONTENT AND DISRUPTS RETINOTECTAL PATHWAY IN PUPS

Autores 1CASTRO, D. J. F. A.

2, MIRANDA, F. C.

1, CARVALHO, M. B.

1, SERFATY, C. A.

1,

CAMPELLO-COSTA, P. 1 Neurobiologia - UFF,

2 Laboratório de Neurogênese - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, CAPES, PROAP-UFF.

Resumo Objetivos Adenosine is a neuromodulator that has been implicated in central nervous system development and plasticity. We have shown that A1 and A2a receptors are expressed in superior colliculus and also that purinergic modulation is involved with stabilization of retinotopic topography which develops within the first two/three post-natal weeks. Indeed, a short term treatment with caffeine, which is a non-selective A1 and A2a receptors antagonist, leads to a rapid reorganization in this pathway. The aim of this work was to study the effect of maternal caffeine intake during pregnancy and/or lactation upon the visual system´s development in pups. Métodos All animal use procedures were approved by the local animal care committee (CEPA-UFF) under protocol number 129/09. Briefly, Lister Hooded rats have been treated with caffeine (1g/L) in drinking water from third gestation week (GD15) to birthday (pregnant group) or to the second or third postnatal week (pregnant/lactation groups). Another group was treated with caffeine only during lactation period, between PND0–13 or PND0-21 (lactation group). Control animals received only water. Afterwards, the pups were submitted to HRP intravitreous injection to label retinotectal axons. The p-CREB contents were assayed by western blotting. Resultados Our results demonstrate that maternal caffeine intake increases neuronal plasticity of retinofugal pathway in pups (n = 4). This effect is characterized by the presence of many fibers in atypical regions of visual layers of superior colliculus. Furthermore, the content of pCREB in the superior colliculus at postnatal day 13 decreases both in pregnant/lactation (7844 ± 32) and lactation (7565 ± 51) related to control group (8243 ± 62)(n = 3/group). Conclusão Our data show that caffeine treatment during pregnant and/or lactation periods decrease the phosphorylation of CREB and an important rearrangement in the subcortical visual pathway. These observations and other previously data from our group indicate that caffeine acts preferentially in A2a receptors which has been involved in the stabilization of central connections. Therefore, we suppose that A2a receptor blockade induced by caffeine decrease cAMP-PKA-pCREB pathway, weakening synaptic contacts and leading to reorganization of retinotectal circuitry. Furthermore, these data also support the idea that caffeine consumption during these periods induce morphological adjustments in the central nervous system which could be critical for the correct development of both sensory, motor or cognitive circuitry.

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Resumo: 18.037

Amyloid Precursor Protein Metabolism in the Superior Colliculus of Young Rats May Be Altered by Modulation of the Serotonergic System

Autores 1LEO, L. M.

1, ANTONIOLI-SANTOS, R.

1, GONÇALVES, R.G. J.

1, VASQUES, J. F.

1, Campello-

Costa, P. 1, SERFATY, C. A.

1, FARIA-MELIBEU, A. C.

1 Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, PROPPI-UFF, PROAP-UFF

Resumo Objetivos Amyloid Precursor Protein (APP) is a transmembrane glycoprotein associated with synaptogenesis and synaptic plasticity events, among other functions. APP undergoes cleavage by two distinct pathways, either releasing a soluble APPα (non-amyloidogenic pathway) or the potentially neurotoxic Amyloid-β peptide (amyloidogenic pathway). Our group has demonstrated a chronological correlation between high levels of APP expression and the post-natal development of the retinocollicular pathway in rats, as well as altered APP metabolism in a model of induced plasticity. These observations led us to believe that APP might have a role in the plasticity events that regularly occur during the post-natal refinement of synaptic connections in the retinocollicular pathway of rats. Furthermore, previous data from our group has established that modulation of the serotonergic system, either by tryptophan dietary restriction or by chronic fluoxetine treatment, disrupts the typical cluster distribution of retinal ganglion cell projections in the superior colliculus, achieved by post-natal refinement of such connections. Tryptophan restriction impairs the refinement of retinocollicular projections, whereas chronic fluoxetine treatment causes fiber sprouting. Data from the literature show that drugs which enhance serotonergic function, such as several antidepressants, are able to modify APP metabolism decreasing levels of the neurotoxic Amyloid-β. Therefore, we set out to determine whether modulation of the serotonergic system by tryptophan dietary restriction is capable of altering the normal metabolism of APP during plasticity events that take place in post-natal development of the rat retinocollicular pathway. Métodos Lister hooded rats were fed a low tryptophan diet, based on corn and gelatin, from post-natal day (PND) 0 (CEUA-UFF protocol 00120/09). Rats were sacrificed at PND 10 and had the superficial layers of their superior colliculi removed, homogenized and prepared for Western Blot analysis, in which APP was detected with anti-APP 22C11 Millipore antibody. In order to further survey the processing of APP, anti-Amyloid-β 6E10 Covance and anti-soluble APP OM84 Millipore antibodies were also employed. Resultados In the Western Blot analysis the expression of membrane-bound APP (22C11) was raised by 30% (n=8 p=0.0291) with the tryptophan dietary restriction. In the same analysis, there was a 92% increase in a lower molecular weight band (soluble APPα) (n=8 p=0.0433) compared to animals fed a standard laboratory diet. With the OM84 antibody, specific for soluble APP, we observed a 40% increase in the content of secreted APP (n=4 p=0.0223) in animals under tryptophan dietary restriction. Conclusão These results suggest that serotonin depletion by tryptophan restriction may raise the expression and alter the processing of APP in the retinocollicular pathway of young rats. Therefore, we hypothesize that serotonin signaling in the superior colliculus, which involves primarily the inhibitory 5-HT1A and 5-HT1B receptors, might modify the processing of APP, which may contribute to impairments in the refinement of retinocollicular projections.

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Resumo: 18.038

EXPRESSÃO DE ISOFORMAS DE NOS (ÓXIDO NÍTRICO SINTASE) DURANTE O DESENVOLVIMENTO DA RETINA

Autores 1WALTER, L. T.

1, NOCERA, O. C.

1, HIGA, G.

1, SANTOS, M. F. D.

1, SOUSA, É.

1, PASCHON,

V. 1, WEBER, V. R. S.

1, KIHARA, A. H.

1 Neurociência e Cognição - UFABC

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, UFABC

Resumo Objetivos O óxido nítrico está associado a diversos processos fisiológicos e patológicos do sistema nervoso, em concentrações moderadas pode promover neuroproteção, inibindo a apoptose, porém, em altas concentrações pode causar stress nitrosativo e/ou oxidativo decorrentes de sua interação com espécies nitradas e oxigenadas. Sua produção fisiológica se dá por meio das óxido nítrico sintases (NOS): iNOS, nNOS e eNOS. Embora muito parecidas estruturalmente, estas enzimas possuem propriedades de expressão bastante diferenciadas. Por conta dessas diferenças, as isoformas parecem desempenhar papéis diferentes no organismo, inclusive durante o desenvolvimento. Este estudo propôs a análise das diferentes isoformas durante o desenvolvimento do sistema nervoso, utilizando como modelo a retina de rato. Métodos Foram coletadas retina de ratos ( < i>Rattus norvergicus) da linhagem Long evans em diferentes idades (P0, P5, P10 e P60). O estudo está de acordo com os Princípios Éticos de Experimentação Animal adotado pela Sociedade Brasileira de Ciência de Animais de Laboratório e foi aprovado epla Comissão de Ética em Experimentação Animal (registrado sob nº20 fls.67 do livro 2). Esse material foi utilizado para análises de expressão gênica por meio de RT-PCR e análises proteicas pela técnica de imuno-histoquímica. Os resultados quantitativos foram analisados pelo método ANOVA seguidos de teste Tukey. Resultados Por imuno-histoquímica a isoforma iNOS não apresentou marcação- na idade adulta, apenas em situações de lesão e inflamação. Já durante o desenvolvimento houve uma leve marcação da isoforma nas idades iniciais do desenvolvimento pós-natal (P0 e P5). A isoforma nNOS foi observada em adultos na retina interna,nas camadas ganglionar e camada plexiforme interna - aparentemente em células amácrinas. Especificamente na camada plexiforme interna, observamos nas sublâminas ON e OFF. Durante o desenvolvimento, observamos nNOS apenas em P10. Corroborando os dados encontrados nas análises de imuno-histoquímica, os resultados de PCR indicaram aumento da expressão gênica, mRNAs das isoformas ao longo do desenvolvimento. No cado da isoforma eNOS houve diferença significativa ( p < 0.05) na expressão das idades P0 e P5 se comparadas com o adulto (P60) e as diferenças entre P0 e P10 e entre P5 e P10 também foram significativas. Na análise da expressão de iNOS também observamos aumento da expressão com a idade, menos linear, porém significativas em todas as idades (exceto se comparadas as idade P10 e P60). A análise de nNOS mostrou que os níveis de expressão gênica são menores em P0, P5 e P10 se comparados com o adulto. Da mesma forma, as diferenças foram significativas entre as idades P0 e P10 e entre P5 e P10. Conclusão Este estudo possibilitou a identificação das diferentes isoformas de (NOS) durante o desenvolvimento da retina. Foi observado que a isoforma eNOS parece estar envolvida com a formação dos vasos da retina, pois sua expressão aumentada coincide com o desenvolvimento dos vasos. A iNOS parece estar presente quando células gliais estão presentes durante o desenvolvimento, enquanto nNOS parece estar envolvida com processos mais tardios do desenvolvimento (em neurônios já diferenciados), aparecendo mais expressivamente a partir de P10.

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Resumo: 18.039

Neuronal plasticity and caffeine – a possible interaction between extracellular matrix and the purinergic system

Autores 2,1

CABRAL-MIRANDA, F. 1, OLIVEIRA-POLETO, A. L.

1, SILVA, P. O.

1, CAMPELLO-COSTA,

P. 1 NEUROBIOLOGIA - UFF,

2 BIOFÍSICA - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, PROP-UFF

Resumo Objetivos Neuroplasticity is a pivotal phenomena implicated in the establishment of neuronal projections and synapse stabilization along development. Among the effectors involved in neuronal plasticity, molecular mediators secreted in synapses and extracellular matrix elements have emerged as prominent components. Purinergic modulation has been implicated in such phenomena, raising the possibility that caffeine, which act as an adenosine antagonist, would interfere with neuronal plasticity along early development. Also, metalloproteinases secretion seems to be implicated in the refinement of visual projections topography as well. Literature shows that purinergic receptors regulate metalloproteinase secretion in cells outside the nervous system. Here we use an in vivo model to access if caffeine could alter neuronal plasticity through disruption of adenosine signaling and metalloproteinase secretion. Métodos Lister Hooded rats were treated with caffeine (30 mg/kg ip.) from post natal day (PND)9 to 12. We performed intraocular injections of peroxidase to label ipsilateral projections from retina in superior colliculus. Another group of treated animals had their brains removed and processed for in situ zymography to measure metalloproteinase-9 (MMP-9) activity in superior colliculi. All experiments were previously approved by an ethics committee from the university (protocol No 130/09). Resultados Results show that caffeine treatment greatly increases neuronal plasticity as accessed by superior colliculi projections labeling, showing areas of axonal sprouting not observed in vehicle treated animals ( p < 0,001, n=3 animals per group). In situ zymography indicates that metalloproteinases acitivity is also increased in the superior colliculi of caffeine-treated animals compared to control, saline-treated rats. Conclusão Our results show that a short term treatment with caffeine during early stages of development alters MMP-9 activity and the distribution of retinal axons in the superior colliculus. These data raise the possibility that the blockade of purinergic signaling induced by caffeine, the most consumed psychoactive drug in modern society, induces a retinotectal reorganization through modulation of MMP-9 activity.

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Resumo: 18.040

THE ROLE OF REELIN ON THE DEVELOPMENT OF RETINOCOLLICULAR TOPOGRAPHY: MODULATION THROUGH TRYPTOPHAN NUTRITIONAL RESTRICTION

Autores 1ANTONIOLI-SANTOS, R.

1, GONZÁLEZ, É.

2, HEDIN-PEREIRA, C.

1, SERFATY, C. A.

1

Neurobiologia - UFF, 2 Anatomia - UFRJ

Apoio Financeiro: CAPES, FAPERJ, CNPQ, PRONEX,PROPPI/UFF

Resumo Objetivos During postnatal development, neural circuits are established according to their interaction with the environment and also the availability of nutrients. We studied the role of reelin – an extracellular matrix glycoprotein able to affect several steps in brain development, from neuronal migration and positioning to dendritic maturation and synaptic plasticity – on the retinocollicular topography and its involvement on modulation through tryptophan nutritional restriction, which decreases the levels of brain serotonin. Métodos In the present study, Lister Hooded rats were used and all the experimental procedures were approved by the local Animal Care Committee (CEUA-UFF) under protocol no. 00120/09. We performed western blot analysis to evaluate the content of reelin in the visual layers of the superior colliculus. Also, we performed immunofluorescence analysis to investigate the pattern of reelin immunoreactivity. Rats were submitted to intracranial delivery of a reelin neutralizing antibody (CR-50 -1mg/ml) or PBS at PND07 through ELVAX implants, and the distribution of uncrossed retinocollicular terminal fields was examined following intraocular injections of horseradish peroxidase (HRP 30%) in aldehyde-fixed, free-floating superior colliculus sections (40μm) at PND 14. Resultados Reelin was differentially expressed in the collicular visual layers during postnatal development: low levels were found at PND5 followed by a transient increase over the second postnatal week, reaching the highest expression at PND14. After the third postnatal week, reelin expression showed a slight decrease and remained stable even after the end of the critical period (PND28), when an adult-like pattern of retinocollicular topography is observed. Moreover, the chronic administration of CR-50, a reelin neutralizing antibody, induces a disorganization of uncrossed retinocollicular axons during the critical period. As shown in our previous results, the neonatal tryptophan restriction alters the retinocollicular topographical refinement, suggesting a delay in axonal elimination, associated to a decrease of neural plasticity (Exp. Neurol. 211:441, 2008). Animals fed with this corn-based diet from the day of birth until PND10, showed an increase in reelin and phospho-Dab1 expression, as compared to control groups fed with a regular rodent diet. Conclusão The present results indicate the modulation of reelin content throughout development in the visual layers of the SC and its functional role during the development of retinocollicular topography. Moreover, the data suggest that reelin overexpression induced by a low tryptophan diet may result in a lack of axonal elimination and overstabilization of inappropriate connections in the developing visual system.

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Resumo: 18.041

Effects of MMP-9 activity inhibition after monocular enucleation in rats.

Autores 1OLIVEIRA-POLETO, A. L.

1, SERFATY, C. A.

1, OLIVEIRA-SILVA, P.

1 Department of

Neurobiology, Institute of Biology - UFF

Apoio Financeiro: Proppi/ UFF, Faperj, CNPq

Resumo Objetivos Neuroplasticity comprises a series of phenomena responsible for the establishment of neural connections and synapse stabilization during the development of sensory systems. In a time-window called critical period a robust reorganization in neuronal circuitry is observed and it can be mediated by variations in environmental stimuli or lesions. Among the molecular components involved in these phenomena, matrix metalloproteases (MMPs) have been described as promoters of neurite outgrowth and long-term potentiation. Previous data of our group showed that monocular enucleation, an induced-plasticity protocol, causes a disruption in retinotectal topographical map. Furthermore, gel zimography analisys revealed an increase in MMP-9 activity by this event. In this study, our objective was to investigate the morphological effects of MMP-9activity inhibition during critical period after monocular enucleation. Métodos Lister Hooded rats at post-natal PND 10 were submitted to monocular enucleation and imediately implanted with ELVAX containing DMSO (veichle) or SB-3CT (at a concentration recognized for promoting specific inhibition of MMP-9 activity - 648µM) in superior colliculs (SC). Horseradish Peroxidase was injected in temporal retina of animals at PND11. Animals were submitted to a perfusion trough heart at PND12 with saline 0.9% followed by aldehydes, afterwards the brains were removed and left in sucrose solution for 24h. 40µ coronal sections were obtained in a cryostat and stored in 0.1M phosphate buffer. Then sections were transferred to 0.1M acetate buffer and incubated with TMB and H2O2. Data analysis was made using a Leica microscope. All experiments were previously approved by an ethics committee from university (protocol nº 130/09). Resultados Morphological analysis revealed an increase in neuronal arborization in SC 48h after monocular enucleation, indicating a plastic reorganization of this structure. However, in animals treated with SB-3CT our group observed a significant reduction in this arborization compared with the control group. Conclusão This result raises the possibility that MMP-9 activity modulates the SC plasticity in critical period. However, further analyses must be made to elucidate the mechanisms by which MMP-9 contributes these phenomena.

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Resumo: 18.042

Estudos in vivo e in vitro do papel de Rac1 na proliferação e diferenciação da glia de Müller

Autores 1PESSÔA, C. N.

1, DA SILVA, L. C.

1, MIGLIAVACCA, P. P.

1, SAITO, K. C.

1, DOS SANTOS, M.

F. 1, HAMASSAKI, D. E.

1 Biologia Celular e do Desenvolvimento - USP

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, NAPNA (Núcleo de Apoio à Pesquisa em Neurociências

Aplicadas- Pró-Reitoria de Pesquisa da USP)

Resumo Objetivos A perda progressiva de neurônios retinianos está intimamente relacionada com a perda visual observada em diversas doenças degenerativas. Contudo, até hoje nenhum tratamento foi capaz de reverter esta perda e recuperar a capacidade visual. Trabalhos recentes mostraram que as células gliais de Müller são capazes de gerar novos neurônios retinianos em resposta a lesões, sugerindo que essas células sejam uma possível fonte para regeneração retiniana. Nesse contexto, as GTPases Rho podem exercer um papel interessante, visto que regulam múltiplas vias de sinalização, incluindo conhecidas vias de proliferação e diferenciação celular. Neste estudo analisamos, in vitro e in vivo, o papel de Rac1 durante a resposta regenerativa, proliferação e diferenciação, das células de Müller da retina de galinhas. Métodos Galinhas ( < i>Gallus gallus) com 8 dias pós-eclosão foram anestesiadas e receberam injeções intraoculares de 100uM de NMDA (processo). Após 24 e 36hs os animais receberam injeções de 100uM de NSC23766 (inibidor de Rac1). Os animais foram eutanasiados, após 72hs, as retinas processadas para a obtenção de cortes histológicos e realização de imunohistoquímica. Embriões de galinhas com 9 dias foram eutanasiadas, e as retinas dissecadas para formação de cultura de monocamada. As culturas foram enriquecidas de glia de Müller por diversas passagens e colocadas em meio específico para formação de neuroesferas. Aprovado pelo comitê de ética (CEEA) protocolo nº 052/05. Resultados A injeção intraocular de NMDA levou ao aparecimento de células gliais de Müller BrdU-positivas, que não são observadas no controle (PBS). Este número foi reduzido em cerca de 40% (n=3), após a inibição específica de Rac1 por NSC23766, na região central (média: 39,5 DP: 3,4; média: 5,3 DP: 3,5) e periférica (média: 25,8 DP: 0,7; Média: 11,9 DP: 2,2) da retina. Nenhuma alteração significativa foi observada na morte neuronal ou no perfil de células progenitoras. O padrão de imunomarcação de Rac1 ativa também apresentou alteração 72hs após o tratamento com NSC23766 (n=3). Experimentos in vitro mostraram que a inibição de Rac1 reduziu o número de neuroesferas formadas (média: 102,7 DP: 22,4; Média: 29,0 DP: 5,1), sugerindo que essa GTPase possa atuar inibindo a desdiferenciação da glia de Müller. Conclusão Esses resultados mostram um papel importante de Rac1 na regulação da proliferação e possível função na desdiferenciação de células gliais de Müller em resposta a lesões retinianas, sugerindo que as GTPases Rho possam ser um futuro alvo terapêutico.

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Resumo: 18.043

NICOTINE-INDUCED PLASTICITY IN THE RAT RETINOCOLLICULAR PATHWAY: EVIDENCE FOR INVOLVEMENT OF GSK3

Autores 1GONÇALVES, R. G. J.

1, VASQUES, J. F.

1, SERFATY, C. A.

1, CAMPELLO-COSTA, P.

1,

FARIA-MELIBEU, A. C. 1 Neurobiologia - UFF

Apoio Financeiro: CAPES, PROPPi-UFF, PROAP-UFF

Resumo Objetivos Alterations in synaptic transmission and plasticity are involved in the development of various neurological disorders such as Alzheimer's disease (AD). AD is a progressive neurodegenerative disease that arises on a neuropathological background of senile plaques mainly composed of β-amyloid (Aβ) derived from the larger Amyloid Precursor Protein (APP) and intracellular neurofibrillary tangles (NFTs) consisting of hyperphosphorylated tau protein. Glycogen synthase kinase-3 (GSK3) is one of the key kinases required for this abnormal phosphorylation of tau. Interestingly, accumulating evidences have shown that GSK3 is implicated in the regulation of the two major forms of synaptic plasticity, N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR)-dependent long-term potentiation (LTP) and depression (LTD). Neural plasticity has been extensively examined in the retinocollicular pathway where activity-dependent synaptic plasticity results in the topographic organization of afferent terminals. We have earlier reported that local delivery of nicotine through ELVAX intracranial implants upregulated α7- and β2-containing nAChRs and facilitated APP processing through the non-amyloidogenic pathway in the visual layers of the superior colliculus (SC). These effects were accompanied by a transitory sprouting of uncrossed retinal axons and required glutamate NMDAR activity. To examine the possible involvement of GSK3 in nicotine-induced plasticity in the rat retinocollicular pathway we here measured levels of pGSK3 in the superficial layers of the SC after nicotine exposure. Métodos Lister Hooded rats were submitted to intracranial ELVAX implants containing nicotine (100mM) or PBS at postnatal day 7 (PND7). Animals were euthanized one week after surgery and the visual layers of the SC were processed for western blot analysis using anti-pGSK3α/β (Ser21/9). All experimental procedures were approved and conducted in agreement with the Animal Research Ethic Committee (Protocol CEPA/No. 00205/10). Resultados Our results show that local administration of nicotine significantly increased (approximately 40%) total content of pGSK3 in the visual layers of the SC at PND14 compared to the PBS-treated control group (n=3; p= 0,0025). Conclusão Measurements of changes in the phosphorylation state of GSK3 reflect modulation of its activity. Thus, our finding indicates that nicotine exposure reduces the activity of GSK3 in the SC and suggests a possible role for GSK in the nicotine-induced plasticity in the retinocollicular pathway.

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Resumo: 18.044

HIPOTIREOIDISMO CONGÊNITO ALTERA O DESENVOLVIMENTO E A PLASTICIDADE DE AXÔNIOS VISUAIS

Autores 1RODRIGUES-JUNIOR, W.S

1, AMARAL, C. H. X. D.

1, OLIVEIRA-SILVA, P.

1, P. CAMPELLO-

COSTA 1, SERFATY, C. A.

1 NEUROBIOLOGIA - UFF

Apoio Financeiro: Finacial Support: CAPES, CNPQ, FAPERJ, PRONEX

Resumo Objetivos Durante o desenvolvimento, os axônios retinotectais ipsolaterais adquirem um padrão topográfico maduro por volta da segunda semana pós-natal por meio da eliminação de axônios transitórios e pelo aumento de densidade de árvores terminais em sítios topograficamente corretos. O hipotireoidismo congênito está associado a um quadro de deficiência mental e motora que pode refletir alterações na conectividade do sistema nervoso central. Estudamos o papel dos hormônios tireoidianos no desenvolvimento topográfico da via retinotectal ipsolateral de ratos com o intuito de desenvolver um modelo de estudo de hipotireoidismo na formação de conexões centrais in vivo (protocolo no. CEUA/UFF 00120/09) Métodos Avaliamos a capacidade plástica da via retinotectal (protocolo no. CEUA/UFF 00120/09) após o tratamento com Metimazol (um inibidor da tireoperoxidase que atua impedindo a oxidação central do iodeto e, desta forma, a incorporação do iodo à tireoglobulina inibindo diretamente a síntese de T4 e, consequentemente a de T3) 0,1% diluído em aguá potávelem dois grupos experimentais: o 1° grupo foi submetido a uma lesão da retina temporal contralateral durante o período crítico do desenvolvimento (P10) com sobrevida de 4 dias; o segundo foi submetido a uma lesão de retina após o término do período crítico (P21) com sobrevida de 7 dias (P28). As projeções retinotectais foram marcadas com peroxidase após injeções intraoculares do traçador. Após processamento histoquímico, cortes parassagitais do colículo superior foram analisados sobre microscopia de campo escuro e polarização Resultados . A análise quantitativa mostrou que o tratamento com Metimazol a partir do primeiro dia pós-natal (P0) não gerou diferenças significativas na densidade ou área de aglomerados ipsolaterais, porém induziu um aumento de 20% na densidade de terminais esparsos distribuídos fora da área de terminação topograficamente correta deste axônios no terço anterior do colículo superior (CS). Utilizamos os ensaios de lesão de retina para avaliarmos a influência do hipotireoidismo sobre a capacidade de reorganização plástica da via retinotectal. Observamos que o tratamento com Metimazol foi capaz de alterar a reorganização dos aferentes retinianos, induzida pela lesão, quando comparados com o grupo controle. A partir desses resultados decidimos observar a influência da deficiência de hormônios tireoidianos sobre a expressão e atividade da metaloproteinase 9 através de ensaios de zimografia das camadas superficiais do CS. Conclusão Os dados sugerem que os hormônios tireoidianos sejam fundamentais para o estabelecimento de conexões topograficamente organizadas e tenham um papel na plasticidade uso-dependente do sistema visual durante o período crítico pós-natal.

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Resumo: 18.045

EFFECTS OF TREATMENT WITH LACTULOSE IN THE AQUAPORIN-4 EXPRESSION AND BEHAVIORAL PARAMETERS IN AN EXPERIMENTAL MODEL OF ENCEPHALOPATHY ASSOCIATED WITH HEPATIC CIRRHOSIS

Autores 1MENDES, N. F.

1, NAGAOKA, M. R.

1, MALUF, L. L. S.

1 BIOCIÊNCIAS - UNIFESP

Apoio Financeiro: CNPq

Resumo Objetivos Brain edema occurs as the result of several diseases that affect the Central Nervous System (CNS), including Hepatic Encephalopathy (HE). It manifests as a range of behavioral, neuropsychiatric and neuromuscular symptoms related to the incapacity of the liver disease patients of metabolizing toxic waste. Among these toxins, ammonia has its conversion to urea impaired in cirrhotic liver, and it is detoxified in the brain mainly by astrocytes during the conversion of glutamate to glutamine. Increase of ammonia levels and amount of glutamine in astrocytes cause osmotic imbalance, resulting in cell swelling (cytotoxic edema) and, ultimately, in brain edema, affecting the expression of the protein involved in the homeostasis of water and ions in these cells, aquaporin-4 (AQP-4). Lactulose, a disaccharide nonabsorbable, has been used as a treatment for HE for a long time. It is fermented by colonic bacteria in the large intestine, and its reaction uses ammonia as a substrate, consequently reducing its absorption and production from this source. The aim of this work was to investigate the exploratory activity through behavioral tests and to evaluate the expression of AQP-4 in different brain regions in animals submitted to experimental HE after treatment with lactulose. Métodos (1462/09)Adult male Wistar rats were divided into two groups. HE was induced in BDL group (n=15) by bile duct ligation and section surgery (bile duct ligation; BDL). In SHAM group (n=15), the rats were just submitted to surgical procedure (without biliar duct connection and section). After 21 days, the rats were subdivided into four groups. The animals from BDL+lactulose (n=9) and SHAM+lactulose (n=8) were submitted to treatment with lactulose from 21th to 28th day of experiment. The exploratory activity in these animals was assessed through an Open Field test. At the end of 28 days, the animals were anesthetized and sacrificed by decapitation. The evidence of encephalopathy induced by hyperammonemia was obtained by determination of plasma levels of ammonia while the expression of AQP-4 was evaluated by Western Blotting. CEA 1462/09 Resultados Significant increase in plasma ammonia concentration was observed between SHAM and BDL ( p < 0.05) and SHAM+lactulose and BDL+lactulose ( p < 0.05) groups, on the 21th and 28th days, respectively. The Open Field test showed a significant decrease in the number of crossings ( p < 0.05) between BDL and SHAM groups on the 21th and 28th days, and decrease of vertical exploration between BDL and BDL+lactulose when compared with SHAM and SHAM+lactulose groups, but this difference was not significant. There was a tendency for decrease on the expression of AQP-4 in cortex, hippocampus, diencephalon and cerebellum in the groups BDL and BDL+lactulose when compared to groups SHAM and SHAM+lactulose, even after treatment with lactulose. Conclusão Lactulose seems not to be effective in reversing the decreased expression of AQP-4 in animals with hepatic encephalopathy, although it improved the exploratory activity, which was impaired in the untreated group.

FeSBE 2012

Resumo: 18.046

INFLUÊNCIA DO FENÓTIPO DE NEURÔNIOS CORTICAIS SOBRE A NEURITOGÊNESE EM RESPOSTA A DIFERENTES SUBSTRATOS IN VITRO

Autores 1Gonçalves, J. E. S.

1, COELHO-SAMPAIO, T.

1, MENEZES, J. R. L.

1 Instituto de Ciências

Biomédicas - ICB - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq - PRONEX; FAPERJ; IBNet

Resumo Objetivos Lesões neurológicas causam limitações à regeneração relacionadas a um micro ambiente hostil e alterações morfofisiológicas dos axônios transectados. A manipulação do meio extracelular pode ser uma abordagem para induzir a regeneração axonal. Recentemente, foi demonstrado que injeção de Laminina polimerizada, uma proteína de matriz extracelular, no sítio de lesão favorece a regeneração axonal de fibras lesionadas (FASEB. 24; 4513, 2010) . No presente trabalho, procuramos comparar a resposta in vitro de sobrevivência e neuritogênese de neurônios corticais axotomizados e cultivados sobre diferentes substratos. Métodos Em nossos experimentos foram utilizados camundongos suíços entre as idades pós-natais de 0 (zero) a 5 dias (P0 - P5), considerando-se o dia do nascimento como P0 (CEUA/UFRJ: DAHEICB 052). Neurônios corticais axotomizados foram cultivados sobre diferentes substratos, Poli-L-Lisina (PLL), Matrigel, Laminina em pH 7 e pH 4; e identificados a partir de técnicas de imuno-histoquímica, afim de determinar seu fenótipo. Para tal, utilizamos marcadores específicos para tipos específicos de células corticais, em especial dos neurônios de Projeção Córtico-Espinal (CSPN; CTIP2), Calosos (CPN; Satb2), Talamo-corticais de camada VI (CPth; Tbr1) e Interneurônios GABAérgicos (anti-GABA); e outros marcadores como o anticorpo TuJ1 beta-tubulina III (citoesqueleto neuronal), anti-glutamato vesicular para neurônios glutamatérgicos, e GFAP para células astrocitárias. Para quantificação, usamos o número de células totais (DAPI+); neuronais (TuJ1+); astrocitárias (GFAP+); GABAérgicas (GABA+); CSPN (CTIP2+), CPN (Satb2+); e CPth (Tbr1+), contados numa imagem mosaico (5 x 5) de cada lamínula feitas ao microscópio óptico de fluorescência, usando o software AxioVision (Zeiss). Para a quantificação do número e comprimento dos neuritos, foi usado o software ImageJ. A análise estatística foi realizada usando teste ANOVA. Resultados Nossos resultados preliminares indicam que a Laminina polimerizada é capaz de aumentar: em mais de 100% a taxa de sobrevivência de células CTIP2+; em mais de 20% o número de prolongamentos primários de células CTIP2+; e em mais de 60% o comprimento dos neuritos secundários. Apesar deste aumento de neuritogênese de neurônios motores, não encontramos diferença significativa correspondente para neurônios GABAérgicos, CPN e CTth axotomizados. Conclusão Identificamos um efeito seletivo de diferentes substratos de matrix celular sobre os diferentes subtipos de neurônios corticais. Em especial, os neurônios motores tiveram sua sobrevida e regeneração favorecidos pela Laminina polimerizada como substrato.

FeSBE 2012

Resumo: 18.047

ESTABILIDADE DE MICRORNAS NA RETINA: REGULAÇÃO DO TRANSCRIPTOMA NA ONTOGÊNESE DO SISTEMA NERVOSO

Autores 1SOUSA, É.

1, KIHARA, A. H.

1 Centro de Matemática, Computação e Cognição - UFABC

Apoio Financeiro: UFABC, CNPq, FAPESP

Resumo Objetivos MicroRNAs (miRNAs) são RNAs endógenos de curta extensão que regulam a expressão gênica a nível pós-transcricional. Sua estabilidade e degradação no interior das células é regulada, entre outros fatores, pelas enzimas PAPD4 e XRN2, respectivamente. A primeira adiciona caudas poli-A na extremidade 3' e a segunda possui atividade exonucleolítica. O objetivo deste estudo foi caracterizar a expressão destas duas proteínas no tempo de desenvolvimento pós-natal da retina, além de caracterizar sua distribuição no tecido. Métodos Foram utilizados animais da espécie Rattus norvegicus em quatro idades pós-natal (P0, P5, P10 e P60) de ambos os sexos, com peso variando de acordo com a idade. O estudo está de acordo com os Princípios Éticos de Experimentação Animal adotado pela Sociedade Brasileira de Ciência de Animais de Laboratório e foi aprovado pela Comissão de Ética em Experimentação Animal (registrado sob nº 20 nas fls. 67 do livro 02). A expressão foi avaliada por Western Blot e a distribuição no tecido foi observada por Imunofluorescência. Resultados No decorrer do desenvolvimento a expressão de XRN2 e PAPD4 varia significativamente. Em P5 e P10 a expressão de XRN2 é cerca de três vezes maior que em P60 (n = 4; desvio padrão = 0,5). No caso de PAPD4, o resultado é bastante similar, com expressão em P5 e P10 cerca de duas vezes maior que a de P60 (n = 4; desvio padrão = 0,4). A distribuição é diferencial na ontogênese da retina e em sua fase adulta, com XRN2 acumulando-se nas células ganglionares e alguns núcleos da camada nuclear interna e PAPD4 distribuindo-se no citoplasma, incluindo processos e os segmentos externos de fotorreceptores. Conclusão miRNAs são fatores de regulação gênica importantes para a homeostase do tecido nervoso, onde há evidências que este conjunto de RNAs apresentem turnover acelerado em relação a outros tipos celulares, devido ao seu alto metabolismo. Embora cada miRNA tenha sua própria taxa de síntese e decaimento, a atividade enzimática relacionadas a estes processos controla, de maneira genérica, a meia vida de miRNAs; logo, sua abundância é um fator de alto impacto na regulação gênica. No desenvolvimento da retina, especialmente em fases intermediárias (P5 e P10), nas quais ocorre diferenciação celular e sinaptogênese, a renovação de miRNAs é um processo relevante, haja vista que a retina em desenvolvimento é um microambiente em intensa mudança.

FeSBE 2012

Resumo: 18.048

PLASTICIDADE DENTRO E FORA DO PERÍODO CRÍTICO: CURSO TEMPORAL E EFEITO DA PRIVAÇÃO DE LUZ NA REORGANIZAÇÃO RETINOCOLICULAR INDUZIDA POR ENUCLEAÇÃO MONOCULAR

Autores 1TRINDADE, P.

1, TAVARES-GOMES, A. L.

1, MENDONÇA, H. R.

1, FARIA-MELIBEU, A. C.

1,

CAMPELLO-COSTA, P. 2, LINDEN, R.

1, SERFATY, C. A.

1 Neurobiologia - UFF,

2 IBCCF - UFRJ

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPERJ, PRONEX-MCT

Resumo Objetivos Diversos tipos de lesão são capazes de induzir plasticidade de circuitos intactos do sistema nervoso central. A enucleação monocular é um conhecido modelo de estudo de plasticidade induzida por lesão que vem sendo utilizado nos últimos 40 anos para o entendimento do processamento da informação binocular no sistema visual. Entretanto, sabe-se pouco a respeito dos mecanismos plásticos envolvidos na reorganização induzida por enucleação monocular bem como do curso temporal desses eventos plásticos dentro e fora do período crítico do desenvolvimento. Assim, resolvemos investigar o curso temporal da plasticidade retinocolicular dos axônios ipsolaterais do olho remanescente induzida por enucleação monocular dentro e fora do período crítico do desenvolvimento e o efeito da privação de luz neste contexto. Métodos Ratos da Linhagem Lister Hooded foram submetidos a enucleação monocular no décimo dia pós-natal (DPN10), DPN21 ou DPN70 e mantidos por diferentes períodos após a cirurgia. Os animais receberam injeções intraoculares de peroxidase ou toxina da cólera conjugada com alexa 594 como traçadores anterógrados com o intuito de mapear a topografia dos axônios retinocoliculares ipsolaterais do olho intacto. Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de ética e experimentação animal da UFF com número de protocolo 131/09. Resultados Durante o período crítico (DPN10), a enucleação monocular induziu um brotamento intenso dos axônios intactos apenas 12h após a lesão. Esta expansão se manteve mesmo 1 ano após a enucleação. Em DPN21, uma idade que marca o fim do período crítico retinocolicular, a enucleação monocular também induziu um brotamento intenso dos axônios intactos 12h após a lesão. Entretanto, este brotamento apresentou redução progressiva até que 6 meses após a lesão não foi detectado na quantificação. Em DPN70 também detectamos um brotamento itenso 12h após a enucleação monocular que se mostrava revertido 1 semana após a lesão. Os animais submetidos à privação de luz logo após a enucleação monocular em DPN21 continuaram a exibir um intenso brotamento 24h após a lesão. Contudo, a privação de luz manteve a presença de fibras não correlatas 1 semana após a enucleação em DPN21. Conclusão Em conjunto, nossos resultados indicam que, diferentemente do que a literatura vem apontando, a capacidade plástica dos neurônios em resposta a lesões está presente e intensa mesmo após o período critico. Aparentemente é a eliminação de fibras topograficamente não correlatas que se intensifica ao longo do desenvolvimento. Além disso, esta remoção de fibras não correlatas parece depender da atividade evocada pela experiência visual enquanto que o brotamento inicial induzido pela lesão, não.

FeSBE 2012