perfil del adn humano en la identificacion forense

8/12/2019 Perfil Del Adn Humano en La Identificacion Forense

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XVII CONCURSO UNIVERSITARIO FERIA DE LAS CIENCIAS

CARTULA DE TRABAJO

Biologa

rea

Externa

Categora

Investigacin ExperimentalModalidad

Caracterizacin del perfil de ADN humano

como herramienta de identificacin

forenseTtulo del trabajo

EcoR1

Pseudnimo de integrantes


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NDICE


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NDICE

Abreviaturas ---------------------------------------------------------------------- 4

Resumen -------------------------------------------------------------------------- 6

Marco Terico ---------------------------------------------------------------------8

Introduccin ----------------------------------------------------------------- 8

Gentica -------------------------------------------------------------------- 9

Medicina Forense ----------------------------------------------------------- 10

Enzimas de restriccin ------------------------------------------------------ 15

Electroforesis en gel de agarosa-------------------------------------------- 17

Planteamiento del problema---------------------------------------------------- 20

Objetivo General----------------------------------------------------------------- 22

Objetivos especficos ------------------------------------------------------------ 22

Hiptesis-------------------------------------------------------------------------- 22

Material y Mtodos---------------------------------------------------------------24

Digestin de ADN con enzimas de restriccin-------------------------------24

Electroforesis de las muestras de ADN--------------------------------------24

Metodologa --------------------------------------------------------------------- 25

Obtencin de muestras de ADN-------------------------------------------- 25

Digestin con enzimas de restriccin de las muestras de ADN------------- 25

Rehidratacin de las muestras-------------------------------------- 25

Electroforesis en gel de agarosaPreparacin del tampn de electroforesis---------------------------- 26

Preparacin de la agarosa------------------------------------------- 26

Preparacin de los geles de agarosa--------------------------------- 26

Electroforesis y tincin de las muestras de ADN--------------------- 27

Tincin de los geles de ADN----------------------------------------- 27

Resultados ----------------------------------------------------------------------29

Anlisis de Resultados --------------------------------------------------------- 33

Conclusiones ------------------------------------------------------------------- 35

Referencias --------------------------------------------------------------------- 37

Apndices

Apndice A Glosario de trminos------------------------------------------------ 40

Apndice B Escenarios alternativos de la tcnica de identificacin de ADN----- 47

Apndice C Fotografas----------------------------------------------------------52


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ABREVIATURAS


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ABREVIATURAS

ADN.- acido desoxirribonucleico

DTT.- dithiothreitol

EcoRI.- E. coli restriction enzyme (por sus siglas en ingls)

EDTA.- cido etilendiaminotetraactico

HindIII.- marcadores con pares de bases que migran a distancias conocidas

MgCl2.- Cloruro de Magnesio

NaCl.- Cloruro de sodio

PCR.- reaccin en cadena de polimerasa

SEMEFO.- Servicio de Mdico Forense

TAE.- Tris-Acetate-EDTA

TC.- Tampn de carga

TSJDF.- Tribunal Superior de Justicia del Distrito Federal


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RESUMEN


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Caracterizacin del perfil de ADN humano como herramienta deidentificacin forense.

RESUMEN

Todos los das podemos observar como la gentica forma parte de nuestras vidas,

ya que mediante sta es posible confirmar parentescos, conocer nuestrapredisposicin a desarrollar determinadas enfermedades, y comprender conmayor profundidad el funcionamiento de nuestro organismo. Del mismo modo,desde sus inicios la gentica ha resultado ser una herramienta fundamental en eldesarrollo de otras ciencias como la antropologa y la arqueologa, as como en elsistema judicial de una gran cantidad de pases, donde en muchas ocasiones laspruebas de ADN (cido desoxirribonucleico) prcticamente han resuelto casoscriminales.La tcnica de tipificacin de ADN se utiliza en la medicina forense, en laantropologa y la biologa de conservacin no slo para determinar la identidad delos individuos sino tambin para determinar su relacin. Este proceso ha sidoutilizado para liberar a sospechosos inocentes, reunir a nios con sus familiares,identificar animales robados y demostrar que la carne de ballena ha sido sustituidapor el pescado en el sushi.Esta tcnica consiste bsicamente en llevar a cabo una digestin enzimtica delADN en cuestin. De este modo se obtienen fragmentos de ADN de secuenciasconocidas y por lo tanto pueden ser comparables con ADN proveniente de otrasmuestras. El ADN digerido enzimticamente se somete a un ensayo deelectroforesis, el cual se basa en la separacin de dichos fragmentos por sus

cargas elctricas y tamao molecular. De este modo es posible comparar lospatrones obtenidos de cada muestra y establecer relaciones de parentesco, deidentidad, o de contenido segn sea el caso.En esta investigacin se simula un caso criminal y se propone identificar dentrodel escenario propuesto al sujeto responsable de un crimen basndose en latipificacin del ADN de cada muestra comparndola con la muestra recogida en laescena de un crimen.El conocimiento de las tcnicas actuales de biologa molecular resulta unelemento bsico e indispensable en la educacin media superior. Reconociendoesta necesidad quisimos profundizar pero sobre todo llevar a la prctica los

conocimientos adquiridos y poder transmitirlos a travs de la difusin en el XVIIConcurso Universitario Feria de las Ciencias.

Palabras clave:Gentica, ADN, Medicina Forense, PCR, Electroforesis, enzimas de restriccin,Gel de agarosa, huella gentica, secuencia de reconocimiento.


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MARCO TERICO


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MARCO TERICOIntroduccin

Todos los das podemos observar como la gentica forma parte de nuestrasvidas, ya que mediante sta es posible confirmar parentescos, conocer nuestra

predisposicin a desarrollar determinadas enfermedades, y comprender conmayor profundidad el funcionamiento de nuestro organismo. Del mismo modo,desde sus inicios la gentica ha resultado ser una herramienta fundamental en eldesarrollo de otras ciencias como la antropologa y la arqueologa, as como en elsistema judicial de una gran cantidad de pases, donde en muchas ocasiones laspruebas de ADN (cido desoxirribonucleico) prcticamente han resuelto casoscriminalsticos. Sin duda alguna, adems de constituir una ciencia per se, lagentica posee mltiples aplicaciones, siendo un invaluable auxiliar en unavariedad de campos de estudio.

La gentica ha tenido un importante desarrollo durante las ltimas dcadas;sin embargo, desde pocas tan antiguas como la cultura griega tenan ya ciertosconocimientos. Mientras que Aristteles propuso que exista la herencia entreabuelos y bisabuelos, los indios observaron que haba enfermedades que serepetan en las diversas generaciones de sus familias. Despus de la pocamedieval, tambin hubo algunos avances al realizar estudios sobre el aparatoreproductor llegando a la conclusin de que la herencia exista por unin.

En el siglo XIX, un monje austriaco llamado Gregor Mendel, observ lascaractersticas que se iban transmitiendo y las que se rezagaban de unageneracin de plantas a otra. En base a sus experimentos lleg a variaspropuestas, entre ellas el hecho de que la informacin gentica proviene 50% delpadre y el otro 50% de la madre. Asimismo, acu los conceptos de alelo,dominancia y recesividad. Gracias a sus avances y al ser el primero en estudiarformalmente ste campo, se le conoce como el Padre de la Gentica.

Despus de Mendel, otros cientficos han continuado la labor, descubriendoelementos fundamentales de esta ciencia como lo son los cromosomas, el factorhereditario, la estructura del ADN y su formacin, la sntesis de protenas, y msrecientemente el estudio del genoma humano, entre otros. Estos descubrimientoshan dado paso al desarrollo de nuevas tcnicas que son de gran utilidad en otrasreas.

La gentica juega un rol esencial en la medicina forense pues el ADN quese encuentra presente en los fluidos y las estructuras de nuestro cuerpo permitereconocer cadveres, conocer la identidad del emisor de algn fluido como salivao semen, saber si un determinado sujeto estuvo presente en un lugar, etc.


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Consecuentemente, la gentica y el ADN amplan en gran medida el horizonte delos sistemas judiciales, posibilitando la imparticin de justicia con un margen deerror relativamente nulo.

Gentica

La gentica se define como el estudio de la herencia y de los genes.Aunque los primeros antecedentes de esta ciencia se remontan a varios siglosatrs, no surgi formalmente sino hasta el siglo XIX con las investigaciones deMendel. En la actualidad la gentica se ha enfocado principalmente en el estudiode los factores hereditarios y el anlisis del cido Desoxirribonucleico (ADN).Igualmente, la gentica ha sido aplicada en diferentes reas de nuestras vidas.

En la medicina, la gentica se utiliza principalmente para el diagnstico ytratamiento de enfermedades o desrdenes hereditarios tales como sndromes ygenes que predisponen el desarrollo de cncer. Estas pruebas pueden realizarse

desde las etapas ms tempranas del desarrollo de una persona, incluso antes delparto. Se espera que en un futuro cercano, la ingeniera gentica pueda reparargenes con fines mdicos o modificarlos cuando definan alguna predisposicinpatolgica (Solari, 1999)

Asimismo en la agricultura, la gentica se usa extensamente con el propsito demejorar las distintas especies de plantas y animales para poder obtener un mejoraprovechamiento de sus recursos. Los campesinos aplican la gentica para lacreacin de lo que comnmente se conoce como plantas transgnicas, las cualesson ms resistentes a los fenmenos naturales y las plagas, aunque todava son

debatidos los efectos que puedan tener para la salud en el largo plazo.

La industria farmacutica recurre a la gentica para crear y/o mejorar diversasbacterias y otros microorganismos antibiticos. As, los medicamentos adquierenuna mayor eficacia para tratar los padecimientos.

El ADN es definido como un compuesto bioqumico encontrado en todas lasclulas procariotas y eucariotas, as como en varios virus. Los genes, el objeto deestudio de la gentica, son parte de la estructura del ADN y almacenan el cdigogentico. El ADN est formado de nucletidos, los cuales son compuestos por

una molcula de azcar desoxiribosa, un grupo fosfato y una de cuatro basesnitrogenadas: Adenina, Guanina, Timina o Citosina. La estructura del ADN es deuna doble hlice formada por hebras de ADN que forman una espiral (Britannicaonline, 2009)

Todas las personas tienen un cdigo gentico diferente, siendo posibleidentificarlas teniendo como base una muestra gentica de la persona. De este


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modo, a partir de una muestra de alguna clula se puede extraer ADN y encontrarla huella gentica de la persona, pudiendo compararla con otra muestra (Frankel,1989). Debido a ello, la gentica es una de las reas ms tiles entre las que seintegran y aplican a la medicina forense.

Medicina Forense

La medicina forense se define como un conjunto de conocimientos relacionadoscon la medicina cuyo objetivo es hacer una valoracin acertada sobre las causasdel fallecimiento de una persona (TSJDF, 2009). Es una especialidad mdicacuyos conocimientos cientficos sirven para determinar los agentes que causaronla muerte de un individuo, ya sea natural o provocada. Su principal funcin essuministrar conocimiento al aparato legal para precisar la aplicacin de justicia(Trujillo, 2002)

En Mxico, la institucin que se dedica a la medicina forense es el Servicio

Mdico Forense en Mxico. sta institucin tiene como objetivo proporcionarapoyo pericial a distintas instituciones jurdicas; est regulado por el TribunalSuperior de Justicia del Distrito Federal. El apoyo pericial que proporciona estainstitucin es el de determinar las causas y la fecha de un deceso, as como darsustento en incidentes referentes a balstica u otro tipo de lesiones en los que nonecesariamente se registra algn fallecimiento. Esta institucin se conforma deespecialistas en medicina forense, qumica, balstica, psicologa, deontologa ydactilologa, entre otros.

El Servicio Mdico Forense cuenta con los servicios de identificacin de cuerpos,

toxicologa y patologa. El primero permite conocer la identidad de una personafallecida comparando huellas digitales o radiografas dentales. La toxicologaayuda a determinar si alguna sustancia (drogas) se involucr en la muerte de unapersona. Finalmente, el departamento patolgico analiza rganos del cuerpo paradeterminar las posibles causas de muerte (Corporativo de servicios periciales,2009)

Un mdico forense realiza actividades mdicas relacionadas con la identificacinde personas, certificacin de lesiones, sanidad y consecuencias de las mismas,as como valoraciones psiquitricas y psicolgicas, todas stas por orden de la

autoridad judicial. El Servicio Mdico Forense presta apoyo a instituciones desalud y procuracin de justicia para la elaboracin de opiniones tcnicas de tipomdico o para la determinacin de intoxicaciones por consumo de drogas deabuso, intoxicaciones por otras sustancias y estudios de histopatologa.


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La medicina forense depende de la gentica ya que esta es la rama de laBiologa que trata de la herencia y de su variacin. La herencia se refiere a que ladescendencia tiende a asemejarse a sus padres, basndose en el hecho de queel aspecto y funcin biolgica, es decir, el fenotipo, est determinado en granmedida por la constitucin gentica, es decir, el genotipo.

En el plano tcnico, los mdicos legistas del Distrito Federal estn agrupadosprincipalmente en tres instituciones:

Servicio Mdico Forense, que en la capital depende del Tribunal Superiorde Justicia del Distrito Federal, y se encarga de la prctica de autopsiasmedicolegales.

Direccin General de Servicios Periciales de la Procuradura General deJusticia del Distrito Federal. Sus mdicos asisten al escenario de la muerte,atienden casos de lesiones as como de delitos contra la libertad sexual.

Procuradura General de la Justicia de la Repblica, cuyos mdicosatienden a los casos de farmacodependencia y otros delitos federales.

En cada estado existe un servicio mdico forense que depende de la DireccinGeneral de Servicios Periciales de la Procuradura General de la Justicia Estatal.(Negrete, 2009)

Los servicios con los que cuenta el Servicio Mdico Forense (SEMEFO) son:

Archivo.- El archivo del SEMEFO se encarga de atender los trmites en

relacin a la solicitud de copias certificadas de dictmenes de necropsia, yampliacin de la misma, resultados de estudios toxicolgicos e histopatolgicos,llenado de formatos de seguro de vida, as como oficios de fe de erratas.

Identificacin.- El departamento de Identificacin del SEMEFO cuenta conpersonal especializado en antropologa, dactiloscopa, odontologa y fotografaforense. El objetivo principal es el estudio de los cadveres que ingresan encalidad de desconocidos, para su probable identificacin.

La antropologa forense se encarga de realizar la cdula somatolgica de todo

cadver de identidad desconocida que es ingresado a esta Institucin, con lafinalidad de obtener y registrar todos los hallazgos presentes en el cuerpo, yasean congnitos (malformaciones, manchas y lunares) adquiridos (tatuajes,cicatrices, amputaciones, deformaciones, modificaciones estticas). Permitiendola elaboracin de un archivo que se utiliza para ser confrontado con la informacinde la persona extraviada o ausente, que es proporcionada por los familiares.


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Otra actividad que realiza esta rea es la valoracin de la edad biolgica enpersonas involucradas en procesos legales, as como el anlisismorfocomparativo de la regin facial.

La odontologa forense realiza el estudio odontolgico completo de todos los

cadveres que ingresan en calidad de desconocidos, la ficha que se elaboramenciona las caractersticas naturales de los dientes como son resistencia,tamao, posicin, color, ausencia congnitas y caractersticas adquiridas comoson las restauraciones dentales, amalgamas, resinas, prtesis fijas, removibles,totales tratamientos de ortodoncia ausencias por extracciones, etc. Con todas lascaractersticas mencionadas se obtiene una base de datos, la cual se utiliza paracompararla con la informacin proporcionada por los familiares y determinar laidentidad de un cuerpo.

La dactiloscopa se encarga de realizar el estudio de las yemas de los dedos

de ambas manos. Su participacin en el departamento de identificacin esimportante ya que elabora una ficha conocida como decadactilar a todos loscadveres que ingresan como desconocidos al SEMEFO, en el caso de recinnacidos se toma la huella de ambas manos y de la planta de los pies. Con estasfichas se realizan confrontas con los documentos proporcionados por losfamiliares para la bsqueda de las personas ausentes o extraviadas.

La fotografa como disciplina forense forma parte importante deldepartamento de identificacin, tiene como objetivo fundamental, reforzar demanera grfica a las diferentes reas que la integran, elaborando una fichafotogrfica de identificacin de individuos desconocidos, ampliacin fotogrfica dehuellas dactilares, fotografa de cavidad oral, fotografa de seas particulares,seguimiento fotogrfico de exhumaciones y seguimiento de estudios postmortem.

Patologa.- El laboratorio de patologa es un auxiliar para el mdico forensedebido a que diagnostica o ratifica los diagnsticos macroscpicos. Su actividades la de llevar a cabo los estudios microscpicos de las muestras de los rganosque son enviadas del rea de necropsias del Servicio. En ocasiones los estudioshistopatolgicos son determinantes para establecer la causa de muerte, sin elapoyo de dichos estudios algunas necropsias pueden resultar incompletas.

Toxicologa.- Realiza estudios qumico toxicolgicos del mbito forense encadveres, a peticin expresa del mdico forense en muestras biolgicasretiradas del cadver.

En el caso concreto del laboratorio qumico su misin es auxiliar de maneradirecta al mdico forense, llevando al cabo anlisis qumicos toxicolgicos para


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esclarecer la probable causa de muerte o en su caso establecer si la persona almomento del fallecimiento se encontraba bajo el influjo de alguna droga.

Los anlisis qumicos son llevados al cabo con tecnologa de punta iniciandostos con un screening por tcnicas presuntivas, de igual forma se corroboran

estos resultados mediante tcnicas confirmativas para lo cual se utilizan anlisisinmunoenzimtico, cromatgrafo de gases con head space, cromatgrafo degases acoplado a espectrometra de masas y espectrometra de absorcinatmica.

Los txicos y sustancias ms comnmente solicitadas para su bsquedason alcoholes, sustancias voltiles, drogas de abuso, frmacos en general,plaguicidas, monxido de carbono, metales y fosfatasa cida.

En cuanto a muestras biolgicas las ms comunes tomadas del cadvercorresponden en orden descendente y son la sangre, orina, contenido gstrico,

rganos especficos y exudados.

Enseanza.- Esta rea se encarga de coordinar y programar grupos dealumnos de escuelas de medicina, sin embargo, debido al inters de algunasescuelas para observar estudios de necropsia se llega a autorizar su asistencia,para ello se requiere presentar solicitud escrita con anticipacin, una hojamembretada de la escuela, con sello y firma del Director, que la carrera olicenciatura sea afn a la medicina forense, indicar por la Institucin solicitante elgrado acadmico y nmero de alumnos y la finalidad y metas de la visita.

Reclasificacin de Lesiones.- Es una accin necesaria para el Juez que losolicita debido a que requiere que un especialista determine si la clasificacinmdico legal inicial permanece igual o esta cambia, adems le interesa establecersi el lesionado se encuentra sano de las lesiones que sufri y si existenconsecuencias debido a ellas; esta actividad es indispensable para que el Jueztenga la posibilidad de resolver una situacin jurdica. (Tribunal Superior deJusticia del Distrito federal)

El ADN fue descubierto por los cientficos Watson y Crick en la dcada delos 50 y dicha hazaa cientfica revolucion el campo de la medicina

especficamente la especialidad gentica, a partir de ah se comenzaron mltiplesintentos de modificar enfermedades que hasta entonces solo tena tratamientopaliativo y no se podan prever, es importante sealar que precisamente la partede la molcula de ADN que se utiliza con fines clnicos es la no variable ya que esla que consta con aminocidos que codifican a cada gen en cada tejido, sinembargo no fue hasta 1985 que Dr. Alec Jeffreys para la resolucin de un caso de


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inmigracin de un joven procedente de Ghana lo aplica con fines forenses porprimera vez y en segunda ocasin dos aos ms tarde, en la investigacincriminal, posibilitando identificar a Robert Melias, un pen de Bristol de 32 aos deedad, como autor de una agresin sexual a una mujer enferma de polio, y a NigelDavis como autor del denominado "caso del condado de Leicestershire", en el que

se produjo la violacin y muerte de dos mujeres del condado, la primera en 1983 yla segunda en 1985 y donde los mtodos serolgicos clsicos no pudieron lograruna individualizacin suficiente con los indicios biolgicos, su teora se basaba enel descubrimiento de regiones hipervariable que se extendan entre lascodificantes, que no se repiten entre los individuos y que cada ciertos segmentosvuelven de forma exacta a la misma secuencia de aminocidos que present alprincipio lo que hacen identificar de forma absoluta a ese individuo.

La variabilidad de estas zonas radica en diferencias exhibidas por elmaterial gentico, en la secuencia nucleotdica misma a travs de sustituciones

de nucletidos, o en la distinta longitud generada por una misma secuencia que serepite un nmero diferente de veces. Cuando fue posible conocer su localizacin ydesarrollar una metodologa adecuada para ponerlas de manifiesto comenzaron aser estudiadas mediante sistemas de anlisis cada vez ms precisos y sencillos.

El descubrimiento de regiones hipervariables del genoma con localizacinespecfica permiti el desarrollo de las sondas de locus nico que resolveran elproblema, posibilitando el estudio de una zona conocida del genoma que sevisualizaba como dos nicas bandas para la condicin heterocigota,correspondientes cada una a un alelo, heredado de cada progenitor.

Estas zonas estn constituidas por secuencias repetidas, queaparentemente carecen de funcin como codificantes de protenas. La menorvariabilidad exhibida por estos sistemas de anlisis se solucionaba empleando unconjunto de cuatro o ms sondas unilocus que evaluaban otras tantas regionesdel genoma.

La identificacin mdico-legal a travs del anlisis del ADN se realiza sobreregiones no codificantes del genoma que son aquellas que no contieneninformacin alguna sobre las caractersticas fenotpicas de las personas. Es decir,que por medio del anlisis forense del ADN no se puede saber sin un individuo esrubio, alto, gordo, ni conocer si va a sufrir alguna enfermedad o si tiene tendenciaa padecer determinados tipos de patologas, ya que el ADN no codificante nocontiene esa informacin. Si disponemos un archivo con material biolgico(sangre o saliva) la muestra podra destinarse a otro tipo de anlisis, diferente a laidentificacin mdico-legal, pero tambin es cierto que las muestras archivadas enesas bases de datos, al margen de las garantas que el sistema de cada pas


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disponga para evitar el mal uso, no podrn ser utilizadas en otros estudios clnicospor la cantidad de material (que es mnima, suficiente para el estudio forense, perodifcilmente para un anlisis clnico) y por las condiciones y caractersticas delmismo, ya que este se guardan en forma de manchas secas, con lo cual lacalidad del ADN se ver afectada.

Las caractersticas generales del ADN no codificante lo hacenespecialmente til para su aplicacin a la identificacin en Medicina Forense.Como se puede deducir de su trascendente funcin, el ADN esencial estformado por secuencias altamente conservadas con muy pocas variacionesinterindividuales e intergeneracionales, ya que de lo contrario se podran verafectadas funciones bsicas para la vida de las personas. Los mnimos cambiosque tienen lugar, cuando son viables, aumentan el polimorfismo de protenas yenzimas, aunque tambin pueden tener efectos negativos.

Por el contrario, el ADN no codificante presenta una gran variabilidad deunos individuos a otros, ya que estas secuencias no son conservadoras al noafectar sus cambios a la fisiologa del individuo. Las variaciones debidas acambios de bases sencillos, procesos de insercin-deteccin o de intercambio deADN (recombinacin) durante la formacin de las clulas germinales (meiosis),hacen que se modifiquen el nmero de repeticiones o el orden de las bases de undeterminado fragmento repetitivo, pudiendo producirse en un locus sencillo o emltiples loci, siendo este el origen de la variacin que hace que no haya dospersonas, a excepcin de los gemelos univitelinos, que tengan la mismasecuencia del ADN.

La repercusin prctica de lo anterior es la existencia de diferentes alelos,es decir la posibilidad de que encontremos entre la poblacin varias formas depresentarse un determinado carcter o fragmento de ADN no codificante.

Para lograr identificar los diferentes alelos se usan las enzimas derestriccin que son las que cortan el ADN haciendo dos roturas, una con cada unode las espinas dorsales del fosfato de la hlice doble. La enzima hace esto sindaar las bases del ADN. Aunque la enzima rompe el ADN, los vnculos qumicosse pueden reformar por otras enzimas conocidas como ligases del ADN. Por lotanto, los fragmentos de la restriccin del ADN de los diversos cromosomas ogenes se pueden ligar, proporcionando a sus extremos secuenciascomplementarias.

Enzimas de restriccin

Las enzimas de restriccin se sitan en la molcula de ADN y se desplazanpor la hlice hasta que reconocen unas secuencias especficas de pares de bases


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que indican a la enzima que deje de desplazarse. Las enzimas entonces digiereno separan qumicamente la molcula de ADN en ese punto, llamado diana derestriccin, actuando como tijeras moleculares, cortando el ADN por secuenciasespecficas de pares de bases. Si existe ms de una diana de restriccin en unamolcula de ADN, la enzima de restriccin cortar en cada uno de esos sitios,

obtenindose mltiples fragmentos. As, si un fragmento lineal de ADN se cortacon una enzima de restriccin cuya diana de restriccin se encuentra en dospuntos diferentes de la molcula de ADN, se obtendrn tres fragmentos dediferentes longitudes. La longitud de cada fragmento depender de la localizacinde las dianas de restriccin en la molcula de ADN. Cuando las enzimas derestriccin se usan para cortar cadenas de ADN plasmdico circular, se obtienenfragmentos de ADN de varios tamaos. El ADN cortado con enzimas derestriccin puede ser separado y observado utilizando una tcnica denominadaelectroforesis en gel de agarosa. El trmino electroforesis significa mover conelectricidad.

Dado que cortan el ADN, las enzimas de restriccin son las tijeras qumicas delos bilogos moleculares. Cuando una determinada enzima de restriccinreconoce una secuencia de reconocimiento (de 4 o 6 pares de bases) en unfragmento de ADN, corta la molcula en ese punto. Las secuencias dereconocimiento de dos enzimas usadas habitualmente, EcoRI y PstI, aparecen acontinuacin. El lugar exacto en que se corta la cadena de ADN se seala conunas tijeras como smbolo:

Para la enzima: Eco RI

Para la enzima: Pst I

Como todas las enzimas, las enzimas de restriccin funcionan mejor en untampn (buffer) y a una temperatura especfica. El tampn apropiado para lasenzimas de restriccin se incluye con la muestra de ADN, de manera que cuando

el ADN rehidratado y las enzimas se mezclan, se crean las condiciones idealespara el ptimo funcionamiento de las enzimas. El buffer contiene Tris 50 mM,NaCl 100 mM, MgCl2 10 mM, DDT 1 mM, pH 8.0, que son las condiciones idealespara el funcionamiento correcto de las enzimas EcoRI y PstI.

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Electroforesis en gel de agarosa

La tcnica de electroforesis se basa en la migracin de las molculas concarga neta de una muestra, cuando es sometida a un campo elctrico, hacia elpolo opuesto de su carga. El mtodo no es tan sencillo: primero hay que saber con

qu tipo de molculas se est trabajando y de acuerdo a esto se elige elprocedimiento y los materiales necesarios.

Hay dos fuerzas que determinan la velocidad con que una molculamigrar: la fuerza elctrica y la de rozamiento. La primera es la responsable deque la molcula en cuestin, que en nuestro caso es el ADN, sea atrada haciauno de los electrodos. Por esto es que cuanto mayor sea el cociente carga/masade la molcula mayor ser la aceleracin con que se mueva. La fuerza derozamiento tiene una accin opuesta: a mayor rozamiento, menor velocidad demigracin. Esta fuerza tiene que ver con el tamao y forma de la molcula que

migra, y con las caractersticas del medio en que se mueve.Para realizar la electroforesis se utiliza un medio de migracin adecuado,

de modo que la separacin sea eficiente, ya que se necesita que exista unasuficiente fuerza de rozamiento para que las molculas de distinto tamao seseparen. Para ello se utiliza usualmente un gel que consiste en una redcompuesta por un polmero orgnico llamado agarosa que es un derivado de unpolisacrido de un alga el cual aumenta considerablemente la friccin, impidiendoa la vez la difusin de las molculas a travs del medio acuoso en todas lasdirecciones. Al colocar las muestras de DNA a travs de este gel y someterlo a uncampo elctrico durante cierto tiempo, podemos verlas separadas segn sutamao. La rapidez con que migren las molculas puede ser regulada por laconcentracin de agarosa disuelta en la solucin amortiguadora que usemos: amayor concentracin, mayor compactacin de la red y por tanto menor velocidadde migracin (Garrido, 2009).

El ADN es incoloro lo que provoca que los fragmentos de ADN no sepuedan ver en el gel durante la electroforesis. Se utiliza entonces un tampn decarga, que contiene dos colorantes azules, y que se aade a la solucin de ADN.Los colorantes no tien el ADN, pero facilitan la carga de los geles y permiten verel avance de la electroforesis. Los colorantes migran hacia el polo positivo situadoal final del gel, al igual que los fragmentos de ADN. El colorante rpido migra conlos fragmentos de ADN de aproximadamente 500 pb, mientras que el colorantelento migra con los fragmentos de ADN de tamao aproximado de 5 kpb.

La tincin del ADN muestra su localizacin en el gel. Cuando el gel sesumerge en una solucin diluida de colorante, las molculas de ste se unen a las


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molculas de ADN atrapadas en el gel de agarosa. Para aumentar el contraste yvisualizar con facilidad las bandas de ADN, el exceso de colorante se puedeeliminar del gel destindolo con agua. Cuando las bandas sean visibles, sepodrn comparar los patrones de restriccin de diferentes muestras de ADN.

Los dos principales factores que afectan a la fiabilidad de la tecnologa del ADNen la medicina forense son la gentica de las poblaciones y la estadsticagentica. En los humanos hay miles de loci RFLP (Poimorfismos de longitud defragmentos de restriccin) o de segmentos de ADN que se pueden seleccionar yusar para analizar la huella gentica. En funcin de factores demogrficos comoel origen tnico o el aislamiento geogrfico, algunos segmentos mostrarn msvariabilidad que otros.

Algunas poblaciones muestran mucha menos variabilidad en segmentosparticulares de ADN que otras. El grado de variabilidad afectar a la probabilidad

de que exista ms de un individuo con la misma secuencia. Si el 90% de unapoblacin presenta el mismo patrn para un determinado segmento de ADN, pocainformacin se podr obtener. Pero si la frecuencia de aparicin de un patrn deADN para un determinado segmento en una poblacin, es extremadamente baja,entonces este segmento puede ser una herramienta muy til para discriminarentre los individuos de esa poblacin. Cada poblacin muestra diferentes patronesen sus genotipos debido a las distintas aportaciones realizadas a sus genesindividuales a lo largo del tiempo.

Por eso, para determinar hasta qu punto incrimina una prueba de ADN, senecesita hacer la siguiente pregunta: Estadsticamente, cuntas personas enuna poblacin presentarn un patrn idntico al observado en la muestra recogidaen la escena del crimen? 1 de cada 10.000? o 1 de cada 10?


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PLANTEAMIENTO DEL PROBELMA


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PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Todos los das podemos observar como la gentica forma parte de nuestras vidas,ya que mediante sta es posible confirmar parentescos, conocer nuestra

predisposicin a desarrollar determinadas enfermedades, y comprender conmayor profundidad el funcionamiento de nuestro organismo. Del mismo modo,desde sus inicios la gentica ha resultado ser una herramienta fundamental en eldesarrollo de otras ciencias como la antropologa y la arqueologa, as como en elsistema judicial de una gran cantidad de pases, donde en muchas ocasiones laspruebas de ADN (cido desoxirribonucleico) prcticamente han resuelto casoscriminales.

En este sentido consideramos esencial el conocimiento de las tcnicas debiologa molecular de las que hoy disponemos y que muy probablementeutilizaremos por lo menos alguna vez durante nuestras vidas. Este conocimientonos permitir entender mejor el entorno en que vivimos y las diferentes situacionesa las que nos enfrentaremos.

Esta investigacin se propone abarcar los aspectos tericos y metodolgicossimilares a los que se emplean en la resolucin se casos criminales con elobjetivo de esclarecer la identidad de una persona involucrada en un caso dehomicidio comparando los patrones de ADN de diferentes sujetos con el halladoen la simulacin de una escena del crimen.


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OBJETIVOS


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OBJETIVO GENERAL

Realizar una comparacin de patrones de ADN entre diferentes sujetos

empleando una tcnica de separacin de fragmentos de ADN para encontrarsimilitudes y diferencias entre las muestras comparadas.

OBJETIVOS ESPECFICOS

1. Llevar a cabo una digestin enzimtica de las muestras de ADN proporcionadas

2. Realizar una tcnica de separacin de fragmentos de ADN (electroforesis engel de agarosa) para visualizar los fragmentos obtenidos de la digestinenzimtica

3. Comparar los patrones de separacin de las muestras corridas en gel mediantemediciones de las distancias recorridas, extrapolando dichos datos en la curvaestndar de fragmentos con pares de bases conocidas.

4. Establecer si algn patrn encontrado en una o ms muestras coinciden con la

muestra que se identific como ADN de una escena del crimen.

HIPTESIS

Si las enzimas de restriccin empleadas separan fragmentos de ADN ensecuencias conocidas entonces ser posible la comparacin de dichosfragmentos en todas las muestras de ADN estudiadas.

Si existe alguna muestra idntica a la identificada como ADN escena del crimenentonces el patrn de fragmentos de ADN ser idntico en ambas muestras.


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MATERIAL Y MTODOS


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METODOLOGIA

Obtencin de muestras de ADN

El desarrollo experimental de esta investigacin se llev a cabo en el Laboratoriode Inmunoqumica del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias el cualcuenta con un banco de ADN de donde se obtuvieron las muestras con las querealizamos nuestros experimentos. Se nos proporcionaron 6 muestras de ADN yse identific una como la muestra recogida en la escena de un crimen as como 5muestras ms de distintas personas presuntamente vinculadas con la escena delcrimen. El ADN de las personas involucradas se obtuvo por una tcnica estndarpreviamente descrita (Ried, 2002).

Digestin con enzimas de restriccin de las muestras de ADN

Rehidratacin de las muestras

Todos los viales de ADN y de enzimas contenan un residuo blanco (seencontraban liofilizados previamente) y aparecer como un polvo suelto en losviales de ADN. La mezcla liofilizada de las enzimas EcoRI/PstI se conserv en unvial de color mbar.

A. Para rehidratar las muestras de ADN, aadimos 200 l de agua estril encada vial de ADN liofilizado y lo agitamos para resuspenderlo. Despus, dejamosque las muestras se rehidrataran a temperatura ambiente, durante 5 minutos,hasta que se disolvieron.

Las muestras rehidratadas de ADN estuvieron en una solucin tampn a unaconcentracin de 0.3g/l en Tris 100 mM, NaCl 200 mM, MgCl2 20 mM, DTT2mM, pH 8.0. Al aadir las enzimas de restriccin la concentracin final deltampn fue de Tris 50 mM, NaCl 100 mM, MgCl2 10 mM, DTT 1mM, pH 8.0.

B. Para rehidratar la mezcla de enzimas EcoRI/PstI, aadimos 750 l de aguaestril y agitamos para resuspender las enzimas. Despus, dejamos que lasenzimas se rehidrataran en hielo durante 5 minutos.

C.Preparacin de las alcuotas de la mezcla de enzimas. Transferimos 80 l dela mezcla enzimtica rehidratada a cada uno de los 8 microtubos de 1.5 mlmarcados como ENZ.


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D. Digestin con enzimas de restriccin. Dejamos que se digirieran lasmuestras introduciendo los tubos en una gradilla de plstico situada en un litro deagua a 37C y lo dejamos en incubacin toda la noche.Electroforesis en gel de agarosa

Preparacin del tampn de electroforesis

El tampn de electroforesis TAE (Tris, acetato, EDTA) se encontraba en unasolucin concentrada 50x. Usamos el tampn TAE 1x, necesitando un volumentotal de unos 275 ml para cada cubeta de electroforesis. Fueron necesarios 3litros de tampn TAE-1x para las cubetas de electroforesis y la preparacin de losgeles de agarosa en las diversas repeticiones del experimento.

Preparacin de la agarosa

A. La concentracin que utilizamos para la preparacin del gel fue de agarosaal 1%. Para preparar agarosa al 1%, aadimos 1 g de agarosa a 100 ml detampn TAE-1x.

B. Aadimos la agarosa en polvo a un matraz Erlenmeyer de 500 ml, parapreparar 200 ml. Aadimos TAE-1x y agitamos para resuspender la agarosa en eltampn. Situamos otro matraz Erlenmeyer de 25 ml en la boca del primero y enposicin invertida, para que actuara como una cmara de reflujo, permitiendo unaebullicin prolongada o vigorosa sin que se produjeran muchas prdidas por

evaporacin. Posteriormente fundimos la agarosaDejamos el matraz 3 minutos a media intensidad en el horno de microondas.Paramos el horno cada 30 segundos y agitamos el matraz para disolver laagarosa, continuamos con este proceso hasta que se disolvieron todas laspartculas de agarosa. Lo dejamos enfriar hasta los 60C antes de utilizarlo.

Preparacin de los geles de agarosa.

Paso 1Se sellaron los bordes del molde o soporte donde se prepar el gel concinta adhesiva de laboratorio. Se apret la cinta firmemente a los bordes para

formar un precinto hermtico.Paso 2Se nivel el molde sobre una mesa usando el nivelador.Paso 3Se prepar la cantidad de agarosa adecuada en tampn TAE.Paso 4Se dej enfriar la agarosa hasta al menos los 60 C, y verterla sobre elsoporte.


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Paso 5Mientras se enfriaba la agarosa, se coloc el peine en el molde a unos 2cm del extremo del soporte.Paso 6 Se dej que el gel solidificara a temperatura ambiente durante 10-20minutos.Paso 7Se retir el peine del gel con precaucin.

Paso 8Se retirar la cinta de los bordes del soporte.Paso 9Se coloc el molde o soporte en la cubeta de electroforesis, situando lospocillos en el ctodo (negro). Las muestras de ADN migraron hacia el nodo (rojo)durante la electroforesis.

Electroforesis y tincin de las muestras de ADN

1. En este paso del experimento empezamos por alicuotar el tampn de carga:

A. Rotulamos un microtubo como TC (Tampn de carga), y alicuotamos 35 ldel tampn de carga en el tubo.

B. Aadimos 20 l del tampn de carga al tubo que contena los marcadoresHindIII y calentamos los marcadores 5 minutos a 65 C, y luego los dejamosenfriar en hielo para que las bandas de los marcadores se separaran. DespusRotulamos un microtubo con una M y aadimos 15 l de los marcadores con eltampn de carga al tubo M.

2. Para preparar la solucin para la tincin de ADN diluimos 1 ml de la solucin

500x en 499 ml de agua destilada en un recipiente adecuado, el cual cubrimos yalmacenamos a temperatura ambiente hasta que lo volvimos a utilizar.

3. Para llevar a cabo la electroforesis de las muestras eficazmente, dejamoscorrer el proceso durante 40 minutos. Se conectaron los cables a la cmara deelectroforesis y sta a una fuente de poder y se hizo pasar una corriente elctricade 100V..

Tincin de los geles de ADN

Una vez que termin el tiempo de corrida, se desconecto la cmara y se retiraronlos geles de su contenedor. Lo situamos en un recipiente y lo cubrimoscompletamente con la solucin colorante y lo dejamos ah durante toda la noche.Al da siguiente, aclaramos los geles teidos con agua y luego los dejamosdesteir en agua durante toda una noche.


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RESULTADOS


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RESULTADOS

Con el fin de hacer ms precisa la comparacin entre el ADN de la escena delcrimen y el ADN del sospechoso, algo que sea ms que una impresin visual, senecesita crear una medida cuantitativa del tamao de los fragmentos. Se realiz

de la siguiente manera:

1. Usando la regla, se midi la distancia a la que migr cada banda. Se midi ladistancia en milmetros desde el fondo del pocillo hasta el centro de cada bandade ADN (figura 1), y se recolectaron los datos en la tabla 1. Los datos de la tablase usaron para construir una curva patrn y para estimar el tamao de losfragmentos de la escena del crimen y de los sospechosos.

2. Para hacer una estimacin exacta del tamao de los fragmentos tanto de laescena del crimen como de los sospechosos, se construy una curva patrnusando las distancias (eje X) y el tamao de los fragmentos (eje Y) de losmarcadores de tamao Lambda/HindIII.

4. Para estimar el tamao de un fragmento de la escena del crimen o de unsospechoso, se midio la distancia a la que migr ese fragmento. Se localiz esadistancia en el eje X de la curva patrn, y desde esa posicin en el eje X, se subehasta la curva patrn, y luego se sigue la lnea milimetrada del papel hasta el ejeY. El punto en el que la lnea se encuentra con el eje Y, indica el tamaoaproximado del fragmento de ADN.

5. Se compararon los tamaos de los fragmentos de los sospechosos y de laescena del crimen (Grfica 1).

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1 2 3 4 5 6 7 Carril Muestra1 Marcadores Lambda/HindIII2 ADN escena del crimen

3 sospechoso 14 sospechoso 2

5 sospechoso 36 sospechoso 47 sospechoso 5Figura 1. Electroforesis en gel de agarosa de las muestras

identificadas como sospechosos y escena del crimen.

Representa un experimento representativo de 3. Las flechas

sealan la identificacin de los patrones iguales.


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1. Migracin de las bandas correspondientes a los fragmentos de ADN de las diferentes muest

Marcadores de pesomolecular

Lambda/Hind III

DNA RECUPERADODE LA ESCENA DEL

CRIMENSOSPECHOSO 1 SOSPECHOSO 2 SOSPECHOSO 3 SO

BANDADISTANCIA

(mm)Tamao

(pb)1DISTANCIA

(mm)Tamao

(pb)DISTANCIA

(mm)Tamao

(pb)DISTANCIA

(mm)Tamao

(pb)DISTANCIA

(mm)Tamao

(pb)DIST

(m

111.0 23,130 19.0 4.010 21.0 2,985 21.0 2,985 19.0 4,010 21

213.0 9,416 20.5 3,334 23.5 2,134 25.0 1,879 20.5 3,334 29

315.0 6,557 32.0 1,698 30.5 1,789 28.5 1,646 32.0 1,698 30

4 18.0 4,361 31.5 1,534 31

523.0 2,322

624.0 2,027

Tabla 1. Patrn de pares de bases obtenido en el ensayo de electroforesis en gel de agarosa a

1pares de bases

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ANLISIS DE RESULTADOS


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ANLISIS DE RESULTADOS

Se ha dicho que la huella gentica puede llegar a substituir a la huella dactilar.

Esta idea es errnea. Cada una tiene sus aplicaciones especficas. Y si bien elestudio de la huella gentica ha sido un avance revolucionario en determinadoscasos como es el estudio del semen o la sangre para identificar a la persona aquien pertenece, no tiene nada que ver con el hallazgo de huellas dactilares sobrela superficie de un arma u otro objeto donde el criminal haya puesto sus manos.

Con esta idea llevamos a cabo una serie de experimentos que nos permitieranestandarizar una tcnica de separacin de fragmentos de ADN por electroforesisen gel de agarosa.

Se llevaron a cabo una serie de 5 experimentos donde se probaron diferentes

condiciones de concentracin de agarosa, tiempo de corrida y voltaje empleado,Los resultados de estos experimentos nos permitieron concluir que lascondiciones ptimas de experimentacin fue utilizar un gel de agarosa al 1% yhacer la corrida del gel durante 45 minutos a 100V.

Con estas condiciones establecidas se repiti tres veces el experimento que dioorigen a los datos que aqu se presentaron. Fue posible observar despus de laelectroforesis y gracias a la tincin del gel la separacin de las bandascorrespondientes a los fragmentos de los diferentes ADN de los sujetosestudiados.

Al comparar los fragmentos visualmente se pudo comprobar que la muestra delADN identificado como sospechoso 3 coincida en nmero y posicin de bandascon el ADN identificado como escena del crimen.

Las enzimas de restriccin empleadas cortan fragmentos en secuencias idnticaslo que permite comparar los fragmentos de las diferentes muestras.

Si hay dos cortes en dos muestras de ADN en el mismo punto, significa que lassecuencias coinciden y que por lo tanto pertenecen al mismo individuo.


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CONCLUSIONES


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CONCLUSIONES

1. Las enzimas de restriccin EcoR1/Pst1 cortan secuencias especficas(GAATTC) que permiten comparar las distintas muestras de ADN.

2. La electroforesis en gel de agarosa permite separar los fragmentos derestriccin en base su tamao (pares de bases) haciendo visibles los patrones demigracin de dichos fragmentos pudiendo compararlos entre s.

3. La muestra identificada como sospechoso 3 y ADN escena del crimenmuestran un patrn idntico de migracin y nmero de bandas por lo que esposible concluir que se trata del mismo sujeto.

Lo anterior es posible sustentarlo cientficamente comparando las distancias a las

cuales migraron ambas muestras y al tamao idntico de ambas muestras.4. El desarrollo de las tcnicas de biologa molecular especficamente latipificacin de ADN es una herramienta fundamental hoy en da en diversoscampos de la vida humana, desde el campo mdico hasta el criminalsticopasando por la antropologa o la agricultura.

5. El conocimiento y desarrollo de dichas tcnicas permitir su comprensin yaplicacin adecuadas.


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REFERENCIAS


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APNDICES


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Biotecnologa: toda aplicacin tecnolgica queutilice sistemas biolgicos y organismos vivos o susderivados para la creacin o modificacin deproductos o procesos en usos especficos.

Carcter:rasgo distintivo como expresin de un gen.

Catalizador: sustancia que altera la velocidad de unareaccin qumica, acelerndola o retrasndola,pudiendo recuperarse sin cambios esenciales en suforma o composicin al final de la reaccin.

Clula: unidad de estructura y funcional de plantas yanimales que consta tpicamente de una masa decitoplasma que encierra un ncleo (excepto enprocariontes) y limitada por una membranadiferencialmente permeable. Es la unidad viva mssimple que se reproduce por divisin. Normalmentecada clula contiene material gentico en forma deADN incorporado a un ncleo celular, que se escindeal dividirse la clula. Los organismos superiorescontienen grandes cantidades de clulasinterdependientes. Sin embargo, stas ltimaspueden tratarse independientemente como clulaslibres en medios de cultivos apropiados.

Clulas sexuales: clulas que al unirse forman elhuevo fertilizado. En la especie humana los gametoso clulas sexuales son el espermatozoide (masculino)y el vulo (femenino).

Cepa:en microbiologa, conjunto de virus, bacterias uhongos que tienen el mismo patrimonio gentico.

Clones: grupo de clulas o de organismos de idnticaconstitucin gentica entre s y con el antepasadocomn del que proceden por divisin binaria o porreproduccin asexual.

Clonacin celular: proceso de multiplicacin declulas genticamente idnticas, a partir de una sola

clula.

Clonacin de genes: tcnica que consiste enmultiplicar un fragmento de ADN recombinante enuna clula-husped (generalmente una bacteria o unalevadura) y aislar luego las copias de ADN asobtenidas.

Clonacin molecular: insercin de un segmento dADN ajeno, de una determinada longitud, dentro dun vector que se replica en un husped especfico.

Cdigo del triplete: sucesin de tres bases de trenucletidos en la molcula de ADN que cifra u

aminocido.

Cdigo Gentico: cdigo cifrado por la disposicide nucletidos en la cadena polinucletida de ucromosoma que rige la expresin de la informacigentica en protenas, es decir, la sucesin daminocidos en la cadena polipeptdica. Linformacin sobre todas las caractersticadeterminadas genticamente en los seres vivogentica est almacenada en el ADN y cifradmediante las 4 bases nitrogenadas. Cada sucesiadyacente de tres bases (codn) rige la insercin d

un aminocido especfico. En el ARN la timina esustituida por uracilo. La informacin se transmite duna generacin a otra mediante la produccin drplicas exactas del cdigo.

Codn: secuencia de tres nucletidos consecutivoen un gen o molcula de ARNm determinada por subases nitrogenadas, que especificar la posicin dun aminocido en una protena.

Congnito: Cuya naturaleza depende de eventoocurridos durante el embarazo y desarrol

embrionario y fetal de un individuo.

Conjugacin: uno de los procesos naturales dtransferencia de material gentico de una bacteria otra, junto con la transduccin y la trasformacirealizado por contacto entre ellas.

Cromosoma: corpsculo intracelular alargado quconsta de ADN, asociado con protenas, y constituidpor una serie lineal de unidades funcionaleconocidas como genes. La especie humana tiene 4cromosomas (23 pares). Su nmero vara desde mnimo de un cromosoma en las obreras de hormiga Myrmecia pilosula hasta los 1.26cromosomas (630 pares) del helecho Ophioglussurecitulatum.

Diagnstico gnico: tcnica de localizacin identificacin de la secuencia de un determinado gepara establecer su normalidad o malformaci


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Permite predecir en ausencia de sntomas, enalgunos casos la existencia de enfermedadescongnitas, y, en otros, los factores ambientales deriesgo que las provocarn.

Dominante: referido a un gen, el que slo necesitauna copia para expresarse por lo que enmascara lapresencia de su alelo recesivo. La mayora de losalelos dominantes representan el estadoevolucionado y completamente funcional del gen.

Enzima: catalizador biolgico, normalmente unaprotena, que mediatiza y promueve un procesoqumico sin ser ella misma alterada o destruida. Soncatalizadores extremadamente eficientes y muyespecficamente vinculados a reacciones

particulares.Enzimas de restriccin: enzimas bacterianassintetizadas como reaccin defensiva frente a lainvasin de ADN extrao, como, por ejemplo,bacterifagos ADN, a los que degrada mientras queel propio est protegido por metilaciones especficas.Cada una de estas enzimas escinden el ADN siempreen el mismo sitio, en loci especficos o secuenciasobjetivo. Son las tijeras de la ingeniera gentica queabrieron las puertas a la manipulacin gentica.

Especie: clasificacin taxonmica formada por elconjunto de poblaciones naturales que puedencruzarse entre s real o potencialmente. Es decir, quese determina de forma emprica: dos individuospertenecen a la misma especie si pueden generardescendencia reproducible; en caso contrario son deespecies diferentes.

Evolucin biolgica: cambios primero molecular,despus celular, y por ltimo de organismos, a lolargo de la historia como resultado de mutaciones enel ADN, de su reproduccin y de procesos deseleccin. Los caracteres adquiridos en vida no seheredan. La especie humana comparte el 98'4% delADN con el de dos especies de chimpanc, el comny el pigmeo. La evolucin depende sobre todo demutaciones en los genes reguladores de los genesestructurales, que hacen que se activen o desactiven,ms que de mutaciones en los mismos genesestructurales.

Exones: secuencias de ADN especficas de geneque codifican secuencias de aminocidos en laprotenas.

Expresin del gen: producto proteico resultado dconjunto de mecanismos que efectan decodificacin de la informacin contenida en un geprocesada mediante transcripcin y traduccin.

Fenotipo:conjunto de todas los caracteres aparenteexpresados por un organismo, sean o no hereditarias

Gen: unidad fsica y funcional del material hereditarque determina un carcter del individuo y que stransmite de generacin en generacin. Su bas

material la constituye una porcin de cromosom(locus) que codifica la informacin mediansecuencias de ADN.

Gen estructural: el que regula la formacin de uenzima o de una protena estructural.

Gen hbrido: el formado por recombinacin in vitro ddos o ms fragmentos de ADN.

Gen operador: el que pone en funcionamiento el geestructural.

Gen regulador: el que modifica la accin doperador.

Gen recesivo: el que necesita doble "dosis" parexpresarse.

Gen represor: el que reprime el operador.

Gentica: ciencia que trata de la reproducciherencia, variacin y el conjunto de fenmenos problemas relativos a la descendencia.

Genoma: conjunto de todos los genes de uorganismo, de todo el patrimonio genticalmacenado en el conjunto de su ADN o de sucromosomas.

Genotipo: constitucin gentica, de uno o mgenes, de un organismo en relacin a un rasghereditario especfico o a un conjunto de ellos.


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Hereditario: que se transmite de generacin engeneracin.

Hibridacin: proceso de generacin de unamolcula, clula u organismo combinado con materialgentico procedente de organismos diferentes. En las

tcnicas tradicionales, los hbridos se producanmediante el cruzamiento de variedades distintas deanimales y plantas por alineacin o apareamiento debases de dos molculas de ADN de cadena sencillaque son homlogas o complementarias. La tecnologade fusin celular y la manipulacin transgnica sonlas nuevas modalidades de hibridacin introducidaspor la manipulacin gentica.

Hidratos de Carbono: biomolculas orgnicasformadas por polialcoholes con un grupo aldehdo ocetona. Debe su nombre, y el de carbohidratos, a que

su frmula emprica es Cn(H2O)m aunque algunoscompuestos pueden tener frmulas ligeramentediferentes de esta proporcin general. Tambin se lesllama glcidos (dulces), glcidos, glicoles y azcares.Realizan funciones energticas, plsticas oestructurales formando parte de las estructurascelulares, y almacenan informacin como seales dela identidad celular.

Huella gnica: representacin grfica dedeterminadas secuencias del genoma que funcionancomo un cdigo de barras de la identidad de un

individuo.

Ingeniera gentica: conjunto de tcnicas utilizadaspara introducir un gen extrao (heterlogo) en unorganismo con el fin de modificar su material genticoy los productos de expresin.

Intrones:secuencias de ADN que no codifican genesy cuya funcin es desconocida. El 90% del genomahumano no es codificante.

In situ: referido a conservacin de recursos

genticos, la que se realiza en su medio natural, yque para las especies domesticadas se verifica en elmedio donde desarrollaron sus propiedadesdistintivas

In vitro: literalmente en el vidrio, en el tubo deensayos del laboratorio, investigado y manipuladofuera del organismo vivo.

Kilobase (Kb): unidad empleada para medir longitud de los fragmentos de ADN constituidos pouna serie de bases. 1 Kb = 1.000 bases.

Lpidos: grupo de biomolculas orgnicaqumicamente muy diverso con las caracterstica

comunes de la insolubilidad en agua, la solubilidad edisolventes orgnicos polares y de poco densidaSinnimo del trmino comn "grasas".

Loci:en latn, plural de locus.

Locus: en gentica, punto de un cromosomocupado por un gen.

Manipulacin gentica: formacin de nuevacombinaciones de material hereditario por insercide molculas de cido nucleico, obtenidas fuera de clula, en el interior de cualquier virus, plsmidbacteriano u otro sistema vector fuera de la clula. Desta forma se permite su incorporacin a uorganismo husped en el que no aparecen de formnatural pero en el que dichas molculas son capacede reproducirse de forma continuada. Al referirse proceso en s, puede hablarse de manipulacigentica, ingeniera gentica o tecnologa de ADrecombinante. Tambin admite la denominacin dclonacin molecular o clonacin de genes, dado qula formacin de material heredable puede propagarso crecer mediante el cultivo de una lnea d

organismos genticamente idnticos.

Mapa gentico: diagrama descriptivo de los genes ecada cromosoma

Material gentico: todo material de origen vegetaanimal, microbiano o de otro tipo que contengunidades funcionales de la herencia.

Microinyeccin: tcnica que permite introducir euna clula un gen en solucin, gracias a unmicropipeta y bajo microscopio.

Microorganismo: organismos microscpicopertenecientes por regla general a virus, bacteriaalgas, hongos o protozoos.

Monmero: compuesto de bajo peso moleculacuyas molculas son capaces de reaccionar entre o con otras para dar lugar a un polmero


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Mutacin: cambio del material gentico. Puedeafectar a cambios en un par de bases del ADN, en ungen especfico o en la estructura cromosmica. Lamutacin en la lnea germinal o relativa a las clulassexuales, puede conducir a patologas genticas o acambios substanciales de la evolucin biolgica. En

relacin a las clulas somticas la mutacinconstituye el origen de algunos cnceres y de ciertosaspectos del envejecimiento.

Nucletido: monmero de los cidos nucleicos,integrado por la combinacin de una basenitrogenada (purina o pirimidina), un azcar (ribosa odesoxirribosa) y un grupo fosfato. Se obtiene comoproducto de la hidrlisis de cidos nucleicos poraccin de nucleasas.

Operador:segmento especial del DNA adyacente al

promotor que forma parte de la regin controladorade la transcripcin de un opern. El operadorinteracciona con la protena represora regulando deesta manera el proceso de la transcripcinsincronizada del opern correspondiente.

Opern: conjunto del gen operador con los genesestructurales que controla.

Organismo: entidad biolgica capaz de reproducirseo de transferir material gentico, incluyndose dentrode este concepto a las entidades microbiolgicas,

sean o no celulares. Casi todo organismo estformado por clulas, que pueden agruparse enrganos, y stos a su vez en sistemas, cada uno delos cuales realizan funciones especficas.

Palndromos: fragmento de dos cadenas de ADN enque las bases complementarias de la doble hliceestn ordenadas segn una simetra rotacional.Constituyen el sustrato de las endonucleasas derestriccin que rompen la molcula en el entorno deleje de simetra y en ambas cadenas. Son segmentoscapicas que resultan iguales vistos en uno u otro

sentido. Como el capica alfabtico anilina, anitina.

Pptido: polmero o cadena de aminocidos.

Plsmido: forma no celular de vida, fragmentocircular de ADN bicatenario que contienen unoscuantos genes y se encuentran en el interior deciertas bacterias. Actan y se replican de forma

independiente al ADN bacteriano y pueden pasar dunas bacterias a otras. Igual que los provirus nproducen enfermedades pero inducen pequeamutaciones en las clulas. Se utilizan como vectoreen manipulacin gentica.

Polmero: compuesto qumico formado por combinacin de unidades estructurales repetida(monmero) o cadenas lineales de la mismmolcula.

PRINCIPIO CENTRAL DE LA BIOLOGMOLECULAR: formulado por Crick, postula que informacin gentica contenida en los cromosomadetermina la sntesis de las protenas mediante traduccin de un molde intermediario de ARNformado anteriormente por la transcripcin del ADNTambin satisface la hiptesis formulad

anteriormente por Beadle, Tatum y Horowitz de ugen = un enzima. Tiene dos casos que escapan a regla: la transcripcin inversa como reaccicomplementaria de doble sentido y, aparentementlos priones.

Protena: biomolculas formadas pomacropolmeros de aminocidos, macropolipptidos. Actan como enzimas, hormonay estructuras contrctiles que atribuyen a loorganismos sus propias caractersticas de tamaopotencial metablico, color y capacidades fsicas.

Proyecto Genoma Humano: Programa dInvestigacin consistente en determinar la secuenccompleta de nucletidos de los cromosomas de especie humana y de organismos modelo utilizadoen experimentacin de laboratorio (la bacterEscherichia coli, la levadura Bacillus subtilis, nematodo Caenorhabditis elegans o la mosca dvinagre Drosofila melanogaster), para conocer todoy cada uno de los genes humanos, su localizacin funcin. Liderado por James D. Watson dependiente del Departamento de Energa y de lo

Institutos Nacionales de Salud de Estados Unidocuenta con un presupuesto anual de 200 millones ddlares, desde 1990 hasta 2005. Entre 1981 y 199se han concedido en todo el mundo 1.175 patentesobre material gentico humano.


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PCR Reaccin en cadena de polimerasa: tcnica deanlisis del genoma mediante la amplificacinilimitada de porciones especficas del ADN, aunquesean minsculas. Es un mtodo revolucionario deamplificacin exponencial del ADN por la intervencinde una enzima termoestable, la Taq polimerasa,

inventado por el americano Kary Mullis en 1985 por loque se le concedi en 1993 el premio Nobel. Es elproceso fundamental para la secuenciacin delProyecto Genoma Humano.

Recombinacin gentica:redisposicin gentica. Invitro entre fragmentos de ADN de orgenes diferenteso no contiguos. In vivo entre copias homlogas de unmismo gen (manipulacin cromosmica), o comoresultado de la integracin en el genoma de unelemento gentico (trasposn, profago o transgn).

Replicacin: proceso por el que una molcula deADN o ARN origina otra idntica a la preexistente. Engeneral, duplicacin del cido nucleico.

Replicn: estructura de cido nucleico concapacidad de autoduplicacin. Son replicones loscromosomas de las clulas eucariotas, el ADNnuclear de los procariotas, los plsmidos y los cidosnucleicos de los virus.

Ribosomas: pequeas partculas donde se realiza lasntesis de protenas en todos los organismos vivos.

Secuencia de ADN: orden de encadenamiento de lasbases nitrogenadas de los nucletidos queconstituyen el ADN y que cifra toda la informacingentica. Cuando es codificante (exn), define elorden de los aminocidos que forman la protenacorrespondiente.

Sonda de ADN: fragmento de ADN conocido que seutiliza para averiguar si los cromosomas investigadoscontienen la secuencia complementaria. La FDAamericana ha autorizado 60 productos diagnsticos

basados en sondas de ADN que determinan lapredisposicin a padecer enfermedades.

Tcnica de recombinacin del ADN: conjunto detcnicas de manipulacin gentica que emplea larecombinacin in vitro asociada a la insercin, rplicay expresin del AADN recombinado dentro de clulasvivas.

Terapia gnica: conjunto de los procesos destinadoa la introduccin in vitro o in vivo de un gen normal eclulas, germinales o somticas, en las que el mismgen, anormal, provoca una deficiencia funcionaorigen de una enfermedad, o la de un gen codificadode una protena, por ejemplo, con una acci

antitumoral en las clulas cancerosas, o antivrica eclulas infectadas por un virus patgeno.

Traduccin gentica: cambio de la informacicontenida en la secuencia de los cuatro nucletidodel ARNm por la debida al ordenamiento de los 2aminocidos en la estructura de las cadenapolipeptdicas. Cada aminocido se une a unpequea molcula especfica de ARN que sirve parsu identificacin, denominado ARN de transferenciEsta molcula transfiere los aminocidos libres de solucin al punto de formacin de las cadena

polipeptdicas cuando est indicado por lainstrucciones contenidas en la molcula de ARmensajero. El proceso tiene lugar en la interaccin dlos codones del ARNm con la regin del anticodon dlos aminoacil-ARNt. Se distinguen en ella las etapade iniciacin, elongacin y terminacin en la quparticipan diferentes factores proteicos.

Transcripcin gentica: biosntesis de una molcude ARN por polimerizacin de nucletidocomplementarios a un ADN patrn. Esta molcula dARN es un precursor de ARNm y representa un

copia fiel de la secuencia complementaria de ADN dla que ha sido transcrita. Una secuencia especficsituada por delante del gen (promotor) actidentificando el sitio de inicio de la transcripcin. En ARN, el uracilo (U) ocupa las posiciones que timidina (T) tiene en el ADN. Es la copia de trabajo ddeterminados segmentos de ADN.

Transcripcin inversa: proceso de sntesis de ADcomplementario a partir del ARN genmico de loretrovirus efectuado por la enzima transcriptasinversa.

Transduccin: proceso natural de transferencia dmaterial gentico, originalmente entre bacteriacomo la conjugacin y la transformacin, que sefecta por medio de un bacterifago que transportun fragmento cromosmico del husped a otrbacteria.


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Transfeccin de ADN: introduccin en una clula encultivo convertida en permeable al ADN, demolculas de molculas de ADN extraas(heterlogas) insertadas en un vector. Renecaractersticas comunes a la transformacin y a lainfeccin por bacterifagos. La transformacin

requiere la integracin del ADN exgeno en elcromosoma bacteriano mientras que la transfeccinusualmente no la requiere. El ADN extrao se asociacon el del cromosoma del husped y se expresacomo un fenotipo identificable.

Transformacin bacteriana: uno de los procesosnaturales de transferencia de material gentico deuna bacteria a otra, junto con la conjugacin y latransduccin, que es una integracin directa del ADN.Experimentalmente consiste en hacer penetrar unfragmento de ADN en una bacteria para provocar en

ella una recombinacin gentica. Por extensin(abusiva) se habla a veces de transformacin paradesignar un proceso idntico que afecta a las clulaseucariticas (levaduras, clulas animales yvegetales).

Transformacin celular: en una clula, adquisicide ciertas propiedades de una clula tumoral bajo accin de virus o de genes causantes de tumore(oncgenos).

Vector: portador, que transfiere un agente de u

husped a otro. Sistema que permite la transferenciala expresin y la replicacin de un ADN extrao eclulas husped para una posterior clonacin transgnesis. Se trata de una molcula de AD(plsmido bacteriano, microsoma artificial de levaduro de bacteria) o de un virus defectuoso. Poextensin, un vector designa todo sistema dtransferencia del gen, por ejemplo, un sistemsinttico como el de los liposomas.

Virus: entidad acelular infecciosa que, aunque puedsobrevivir extracelularmente, es un parsito absolu

porque solamente es capaz de replicarse en el sende clulas vivas especficas, pero sin generar energni ninguna actividad metablica. Los componentepermanentes de los virus son cido nucleico (ADN ARN, de una o de dos cadenas) envuelto por uncubierta proteica llamada cpside.


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APNCIDE B

Escenarios alternativos de la tcnica de identificacin de ADN

Tipificacin de ADN, perfil de ADN, e impresin de huella gentica son nombrespara el mismo proceso, un proceso que utiliza el ADN para demostrar la relacin oidentidad de cada uno de los seres humanos, plantas, o animales. La tipificacinde ADN se ha convertido en tema inters por su uso del anlisis forense en loscasos penales importantes, como el de OJ Simpson. Las aplicaciones de latipificacin de ADN sin embargo, son mucho ms amplios que solamente laciencia forense y estn teniendo un profundo impacto en nuestra sociedad.

Esta tcnica se utiliza en la medicina forense, en la antropologa y la biologa deconservacin no slo para determinar la identidad de los individuos sino tambinpara determinar su relacin. Este proceso ha sido utilizado para liberar asospechosos inocentes, reunir a nios con sus familiares, identificar animalesrobados y demostrar que la carne de ballena ha sido sustituida por el pescado enel sushi. Se usa en tiempos de guerra para ayudar identificar los restos desoldados muertos en combate. Tambin se est utilizando para encontrar losvnculos genticos de enfermedades hereditarias. Adems, los cientficos estnaprendiendo mucho acerca de nuestra historia evolutiva gracias a los anlisis deADN.

Cada uno de los siguientes prrafos describe un escenario en el que el ADN hasido utilizado para mostrar cmo las personas estn relacionadas entre s o parademostrar que una persona es (o no) el autor de un delito. Estos escenariosproporcionan un contexto para el uso de la tipificacin de ADN, para su uso en laenseanza de biologa molecular, biologa de conservacin, y la biotecnologa.

Consideramos importante difundir los usos mltiples de la tcnica que hemosdesarrollado como parte de nuestra investigacin por lo que describiremos acontinuacin algunas posibilidades de aplicacin en diversos mbitos cientficos yde salud.

1. Identificacin de alimentos (identificacin de especies en peligro deextincin).

La pureza (o impureza) de la carne molida ha sido demostrada utilizando laidentificacin del ADN. La hamburguesa ha demostrado ser una mezcla de carne


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de cerdo y otras carnes que no sean de origen vacuno. Usando equipos deprueba porttiles las autoridades han utilizado este mtodo para determinar si elpescado servido en el sushi era realmente carne de ballenas y delfines. Estos sonespecies en peligro que estn protegidas por ley internacional.

2.

Delincuentes acusados y condenados dejados en libertad a causa de laidentificacin de su ADN

Un hombre encarcelado durante 10 aos fue puesto en libertad cuando laspruebas de ADN, las cuales no estaban disponibles en el momento de suencarcelamiento, fueron usadas para demostrar que l no poda haber sido elviolador. Estadsticas demuestran que aproximadamente 1/3 de todos lossospechosos de asalto sexual son liberados como resultado de las pruebas deADN.

3.

La identificacin de restos humanos.

Los cientficos han utilizado la tipificacin del ADN para confirmar que el cuerpoen una tumba fue (o no) de la persona que se supona que deba estar all. Secree que huesos encontrados en Rusia son de los Romanov, la ltima familiaimperial de Rusia. El Zar Nicholas II y su familia fueron ejecutados por losbolcheviques en 1918. Expertos de todo el mundo han estado estudiando loshuesos para ver que coincidan con los crneos, dientes, y otras caractersticascon fotografas. El ADN de los huesos se compar con el de los descendientesconocidos y se determin que los huesos pertenecan al zar y su familia

("Identificacin de los restos de la Familia Romanov por los anlisis de ADN"Nature Genetics vol 6, 130, 1994.)

4.

Determinando la relacin de los seres humanos.

LA tipificacin de ADN ha demostrado que el hombre de hielo de 5000 aos deantigedad encontrado en un glaciar derretido est estrechamente relacionadocon los europeos modernos. ("Hombre de Hielo se vuelve real." Ciencia, vol.264:1669. 17 de junio de 1994.) Las pruebas de ADN tambin "eliminan todas lassospechas de que el cuerpo era un fraude y que haba sido colocado en el hielo ",dice Svante Paabo de la Universidad de Munich. (Science, vol. 264:1775. 17 de

junio de 1994).

5. Estudiando la relacin entre los pueblos antiguos.


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ADN encontrado en sitios arqueolgicos al oeste de Montana se est utilizandopara ayudar determinar cuntos grupos de personas (familias) relacionadas habaen ese sitio particular. (Morell, Virginia. "Jalando pelo de la tierra." Science, vol.265:741-745 de agosto de 1994.)

6.

Pruebas de ADN de familias.

Las pruebas de ADN de familias se han utilizado en la Argentina y El Salvadorpara identificar los nios de al menos 9.000 ciudadanos de estos pases quedesaparecieron entre 1975 y 1983, secuestrados por las unidades especiales dela milicia y la polica. Muchos de los nios nacidos de los desaparecidos adultosfueron secuestrados y adoptados por "padres" militares que afirman ser suspadres biolgicos. Despus de las pruebas genticas de una familia ampliada se

revel la verdadera identidad de un nio, el nio fue colocado en la casa de susfamiliares biolgicos. Se tema que el traslado de un nio de sus "padres" militaresquienes eran secuestradores, pero que haban criado al nio durante aos, fueraagonizante. En la prctica, los nios transferidos se logran integrar en sus familiasbiolgicas con el mnimo trauma.

7.

Identificando organismos que causan enfermedades.

Eva Harris, cientfico de la UCSF, ha ayudado a los cientficos en Nicaragua yEcuador, para aprender a utilizar tecnologa de ADN para detectar la tuberculosis,e identificar el virus del dengue y diversas cepas de Leishmania. Otras pruebasdisponibles causan la espera de varias semanas, mientras los organismos queprovocan la enfermedad son cultivados y enviados a laboratorios extranjeros paraser identificados. (Marcia Barinaga, "Una Tecnologa Personal del Esfuerzo deTransferencia en diagnsticos de ADN. "Ciencia, vol. 266:1317-1318. Nov. 25,1994.)

8. Identificando a los padres biolgicos (pruebas de paternidad)

Nias en Florida fueron descubiertas despus de haber sido cambiadas al nacercuando una nia muri de una enfermedad hereditaria. La enfermedad no era desu familia, pero se saba que esa enfermedad estaba en la familia de otra nia,nacida en el mismo hospital y aproximadamente a la misma hora que naci.

9. Demostrar la paternidad


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Una mujer violada por su jefe el 7 de enero de 1943, a sus 18 aos, quedembarazada. El nio saba quin era su padre, pero mientras l vivi, se neg aadmitir que fuera su padre. Despus de que el hombre muri, las pruebas de ADNdemostraron que era su hija y ella fue concedida la mitad de su patrimonio. (Unnio de Violacin Gana Premio de Estado de Su Padre. "New York Times, 10 de

julio de 1994.)

10.Determinar la eficacia de los trasplantes de mdula sea

"Huellas dactilares de ADN pueden ayudar a los mdicos a supervisar lostrasplantes de mdula sea. La leucemia es un cncer de la mdula sea y lamedula enferma debe ser eliminada. La medula sea crea nuevas clulassanguneas, por lo que la persona que sufre de leucemia morir sin un trasplantede una mdula sea sana. Los mdicos pueden saber rpidamente si el trasplanteha tenido xito tipificando el ADN del paciente y del donante. Si el trasplante ha

funcionado, una huella dactilar de la sangre del paciente muestra las bandas deldonante. Pero si el cncer de mdula sea no ha sido destruido entonces lasclulas cancergenas se multiplican rpidamente y las bandas del propio pacientepredominan. ("Nuestra mejor tarjeta de identidad en salud y en la enfermedad "en" Dentro de la ciencia ", New Scientist, 16 de noviembre, 1991.)

11.

Demostrando la relacin de los inmigrantes.

Las huellas dactilares de ADN se han utilizado como prueba de paternidad parafines de inmigracin. En 1986, la Oficina de Gran Bretaa recibi 12.000

solicitudes de inmigracin de las esposas y los nios de hombres de Bangladesh yde Pakistn que residen en el Reino Unido. La carga de la prueba recae sobre elsolicitante, pero estableciendo la identidad de la familia puede ser difcil debido alas pruebas documentales incompletas. Las pruebas de sangre tambin puedenser inconclusas, pero los resultados de la toma de huellas de ADN son aceptadoscomo prueba de la paternidad por la Oficina de Gran Bretaa. (Huellas de ADN,fuente desconocida: Basado en Jeffreys AJ et al., "identificacin positiva de unaprueba-caso de inmigracin usando huellas de ADN" Nature, vol. 317:818-819,1985.)

12.

Confirmando la relacin entre los animales.

Los cientficos que extrajeron ADN a travs de los cabellos de chimpancs entoda frica ahora tienen pruebas de que podra haber una tercera especie dechimpanc. Al mismo tiempo han aprendido cosas sobre el comportamiento del


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chimpanc y patrones de parentesco que podran haber tomado aos parateorizar. Descubrieron un grupo de chimpancs viviendo en el oeste de frica,que son genticamente distintos de los chimpancs que viven en otras partes defrica, lo que sugiere que el grupo puede ser una especie en peligro de extincin.Los cientficos han descubierto que los chimpancs machos que viven en una

zona determinada son a menudo tan estrechamente relacionados como medio-hermanos, y muchos de los as llamados sub-especies pueden ser parte de unasola especie. El parentesco de los chimpancs machos puede explicar por qu, adiferencia de otros primates, los machos son muy amigables el uno al otro.

13.

Las pruebas de ADN de material vegetal ubica al asesino en la escena delcrimen.

Dos vainas de semillas pequeas atrapadas en la cama de su camioneta pick-upubica a un asesino acusado en la escena del crimen. Las pruebas genticasdemostraron que el ADN en la vaina de semillas corresponde exactamente al ADNde una planta encontrada en la escena del crimen. El acusado haba admitido quele haba dado a la vctima un paseo, pero neg haber estado cerca de la escenadel crimen.


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APENDICE C

FOTOGRAFAS

e)

d)c)

b)a)

Serie 1. Condiciones de experimentacin y digestin de ADN

a)La estacin de trabajo cuenta con una cmara horizontal de electroforesis para geles de ADN,micropipetas, puntas y los reactivos empleados b)En la estacin de trabajo se observa la fuentede poder con la que se hace pasar una corriente elctrica a la cmara de electroforesis c) La

digestin enzimtica se logra aadiendo las enzimas de restriccin EcoR1/Pst1 a las diferentesmuestras de ADN e d)incubando durante 45 minutos a 37C.

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f)e)

d)c)

b)a)

Serie 3. Tincin y desteido de geles

a)Una vez terminado el tiempo de corrida, se retira con cuidado de la cmara de electroforesis yse observa de color blanco excepto en los sitios sonde quedan los colorantes. b)Se procede a sutincin depositando el gel en una cubeta con solucin de teido 100x (200 ml aprox.) durante 2

minutos c) Despus de transcurridos los dos minutos, se transfieren los geles a una cubeta con

agua a 45C durante 10 segundos d)se realizan dos lavados ms y e)y f)se muestra los gelescon las tinciones en las distintas fracciones de las muestras de ADN.

perfil del adn humano en la identificacion forense

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