Mtodos de estudo: Noes sobre tcnicas de microscopia de luz (ML) e Microscopia eletrnica (ME);

e cultivo celular

UFJF Prof Heder J. Ribeiro

Histomorfologia e

histofisiologia dos tecidos

animais

Bases do

desenvolvimento

embrionrio

Contedo programtico: dois mdulos

UFJF

Termo de Responsabilidade: O aluno responsvel pelo material didtico que utiliza nas aulas prticas da disciplina (bancada, caixa de lminas, microscpio). Todo

aluno dever assinar um termo de responsabilidade comprometendo-se

a zelar pelo material didtico de sua bancada e escaninho durante o

curso. A reposio do material danificado ser de responsabilidade do

aluno, conforme orientao do professor. LMINAS QUEBRADAS DEVERO SER TROCADAS IMEDIATAMENTE de modo que alunos de outras turmas no sejam prejudicados.

UFJF

Poder de resoluo distino de detalhes

1) Microscopia de luz

2) Microscopia eletrnica de transmisso

3) Microscopia eletrnica de varredura

4) Microscopia confocal

Limite de resoluo: menor distncia que deve existir entre dois pontos para que eles apaream individualizados.

LR = k x

AN

UFJF

1 - CONCEITOS INICIAIS - LIMITE DE RESOLUO

UFJF

2 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO

2.1 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO - INCLUSO

Desidratao lcool 70% - 30 minutos* lcool 80% - 30 minutos lcool 90% - 30 minutos lcool 95% - 30 minutos lcool Absoluto I 30 minutos lcool Absoluto II 30 minutos lcool Absoluto III 30 minutos Diafanizao Xilol I - 30 minutos Xilol II - 30 minutos Xilol III 30 minutos Infiltrao Parafina I - 30 minutos Parafina II - 30 minutos

UFJF

UFJF

2.2 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO MICROTOMIA - Obteno de fita com cortes - Banho Maria 37 oC -Secagem em estufa

- Colorao

UFJF

2.3 - MICROSCOPIA DE LUZ PROCESSAMENTO COLORAO Hidratao Xilol I - 15 minutos Xilol II - 15 minutos lcool Absoluto - 5 minutos lcool 90% - 5 minutos lcool 80% - 5 minutos lcool 70% - 5 minutos gua corrente - 10 minutos Colorao Hematoxilina - 1 minuto gua corrente - 15 minutos Eosina - 30 minutos Passar na gua Desidratao lcool 70% - 5 minutos lcool 80% - 5 minutos lcool 90% - 5 minutos lcool Absoluto I - 5 minutos lcool Absoluto II - 5 minutos lcool Absoluto III - 5 minutos Xilol I - 15 minutos Xilol II - 15 minutos

Aumento 40x

Aumento 10x

UFJF

1.1 ORIENTAO DE CORTES

1.1- Conceito e importncia: basicamente procura associar o carter cido ou bsico do corante com o do tecido a ser corado. A colorao facilita a observao do tecido ao ML.

1.2- Etapas:

3 COLORAO HISTOLGICA

UFJF

1.3 Exemplos H.E.

Tricrmico de Gomori

Hematoxilina bsico Eosina - cido

Hematoxilina Verde Luz Cromotropo 2R

3.1 COLORAO HISTOLGICA

UFJF

Organismo

Sistemas

rgos

Tecidos

Clulas

Organismo

Sistemas

rgos

Tecidos

Clulas

2 - MICROSCOPIA ELETRNICA

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO (MET)

UFJF

2 - MICROSCOPIA ELETRNICA

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO (MET)

UFJF

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO (MET)

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO (MET)

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO (MET)

UFJF

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA CONFOCAL

UFJF

2.1 - MICROSCOPIA CONFOCAL

2.1 Conceito e importncia baseia-se em reaes qumicas especficas, permitindo a localizao de substncias.

2.2 - Exemplos PAS (Periodic Acid-Schiff)

Glicognio,glicoprotenas neutras Glicoprotenas cidas ou sialomucinas

C C H H

OH OH

Oxidao com c. peridico

+ HI04 =

C H H

O

C

O

Tratamento com reativo de Schiff

radicais aldedo reagem

Cor bonina

3.2 COLORAO HISTOLGICA - HISTOQUMICA

UFMG

Feugen (DNA)

Alcian blue

1 etapa - hidrlise com HCl

Radicais aldedos

2 etapa - Tratamento com reativo de Schiff

radicais aldedo reagem

Cor bonina

Soluo a 1% de alcian blue em cido actico a 3%.

pH 0,5

pH 2,5

Soluo de alcian blue a 1% em tampo a pH 0,5

Glicoconjugados sulfatados

Glicoconjugados carboxilados, sulfatados e sialomucinas

3.2 COLORAO HISTOLGICA - HISTOQUMICA

UFMG

Anticorpo primrio

revelador conjugado

Anticorpo secundrio

antgeno

4 IMUNOHISTOQUMICA

UFMG

4 IMUNOHISTOQUMICA

UFMG

4 CULTIVO CELULAR

UFMG

Isolamento de clulas dos tecidos . Tripsina . Colagen ase Incubao com Meio de Cutura . Garrafas . Placas Crescimento celular

LMINA 69: corte de fgado

COLORAO HISTOLGICA: Hematoxilina-Eosina

Hematoxilina: corante bsico (cor arroxeada)

Eosina: corante cido (cor rseo/vermelha)

Aumento 5x Aumento 10x

Detalhe da veia centro lobular (abaixo), ampliada 100x ( direita).

UFMG

LMINA 69: corte de fgado

COLORAO HISTOLGICA: Hematoxilina-eosina

Hematoxilina: corante bsico (cor arroxeada)

Eosina: corante cido (cor rseo/vermelha)

Aumento 40x

Detalhe de uma fileira de hepatcitos, margeada por capilares sinusides

Detalhe do hepatcito, mostrando citoplasma e ncleo.

UFMG

LMINA 33: corte de gnglio nervoso espinhal

COLORAO HISTOLGICA: Tricrmico de Gomori

Hematoxilina: corante bsico (cor arroxeada)

Cromtropo 2R: corante cido (cor rseo/vermelha)

Verde luz: corante cido (cor esverdeada)

Aumento 10x

Aumento 40x

Aumento 4x

Ncleo e Nuclolo Anfcitos Tecido conjuntivo

UFMG

LMINA 3: corte de fgado

COLORAO HISTOQUMICA: PAS

contra-colorao com Hematoxilina

Aumento 10x UFMG

Figura 01 a) hepatcito corado pelo PAS visto microscopia de luz nesta imagem, o glicognio tem uma

cor bonina intensa e est distribudo de forma homognea em todo o citoplasma; b) detalhe de parte do

citoplasma do hepatcito em cujo citoplasma aparecem as rosetas de glicognio (estruturas negras)

distribuidas entre vesculas de retculo endoplasmtico liso (estruturas vesiculares) no citoplasma da clula

heptica. Observe ainda, a presena de duas mitocndrias com suas cristas mitocondriais.

a

b

UFMG