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Manual de Exames - Fevereiro 2014

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CARIÓTIPO, Medula Óssea

Mnemônico: CG001MO

Sinônímia: Cariótipo de medula, Cariótipo de aspirado de medula óssea, Cariótipo oncohemato, Cariótipo para cromossomo Philadelphia

Prazo: 15 dias corridos

Informações de uso clínico

Aplicação clínica: Suspeita de LMC, LMA, LLC, LLA, Mielodisplasia, Pancitopenia, Anemia aplásica, Plaquetopenia, Mieloma múltiplo.

Informação adicional:

As anomalias cromossômicas desempenham um papel fundamental na patogênese, diagnóstico e acompanhamento do tratamento de muitas doenças hematológicas. Sempre que possível, é importante realizar o cariótipo para detectar possíveis desordens hematológicas neoplásicas na medula óssea. Certas anomalias cromossômicas podem ajudar na classificação de uma malignidade. Como exemplos, o cromossomo Philadelphia (Ph), também conhecido como t(9;22)(q34;q11.2), é geralmente indicativo de leucemia mielóide crônica (LMC) ou leucemia aguda; t(8;21)(q22;q22) define um subconjunto dos pacientes com leucemia mielóide aguda, M2; e t(8;14)(q24.1;q32) está associado a Leucemia/linfoma de Burkitt. O cariótipo de aspirado de medula óssea, também auxilia no monitoramento do tratamento de pacientes, e pode identificar a progressão da doença, tais como o início da crise blástica na LMC, que muitas vezes é caracterizado por Trissomia 8, isocromossomo 17q e vários cromossomos de Ph.

Valores de referência:

46,XX (sexo feminino)

46,XY (sexo masculino)

Interpretação: Para garantir a interpretação, é importante fornecer ao laboratório as informações clínicas do paciente para realizar o cariótipo. Os seguintes fatores são importantes na interpretação dos resultados: embora a presença de um clone anormal geralmente indique um processo neoplásico maligno, em situações raras, o clone pode refletir uma


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condição benigna. A ausência de um clone anormal pode ser o resultado de uma coleta da amostra de um local que não está envolvido na neoplasia ou pode indicar que a desordem é causada por anormalidades submicroscópicas que não podem ser identificadas pela análise do cromossomo. Em raras ocasiões, a presença de uma anormalidade pode estar associada com uma anomalia congênita e, assim, não relacionada à um processo maligno.

Informações sobre Amostras

Amostra: Aspirado de medula óssea – Heparina sódica

Volume: 3 a 5ml

Transporte: Em tubo de tampa verde com heparina ou na própria seringa de coleta heparinizada com tampa protetora sem a agulha, não passar para tubos não estéreis.

Recebimento da amostra

2ª a 4ª no horário das 08:00 as 17:00hs e as 5ª das 08:00 as 14:00hs (devido aos tempos de cultura)

Instruções de armazenamento:

Manter a amostra refrigerada (8ºC), NÃO CONGELAR

Estabilidade: 24 horas após a coleta mantida refrigerada

Causas de rejeição da amostra:

Amostra hemolisada, coagulada, em tubos com tampas de outra cor (roxa, azul, cinza, vermelha, branca), exposição da amostra a temperaturas extremas (ex. congelada), amostras com heparina lítica

Informações sobre o método laboratorial

Procedimento: Análise do cariótipo, através de cultura de células e Banda G com resolução de 400-550 Bandas

Metodologia:

Cultura temporária de linfócitos sem estimulação de mitógenos para


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investigação de anomalias cromossômicas numéricas e estruturais

Referências:

1. Dewald GW: Modern methods of chromosome analysis and their application in clinical practice. In Clinical Laboratory Annual. Vol. 2. Edited by HA Homburger, JG Batsakis. Appleton-Century-Crofts, 1983, pp 1-29

2. Dewald GW, Ketterling RP, Wyatt WA, Stupca PJ: Cytogenetic studies in neoplastic

hematologic disorders. In Clinical Laboratory Medicine, 2nd edition. Edited by KD McClatchey.

Baltimore, Williams & Wilkens, 2002, pp 658-685

3. Barch MJ, Knutsen T, Spurbeck JL: The AGT Cytogenetics Laboratory Manual. 3rd edition. 1997


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CARIÓTIPO, Sangue Periférico - Hematológico

Mnemônico: CG002SP

Sinônímia: Cariótipo de sangue hematológico, Cariótipo de sangue oncohemato, Cariótipo com banda G para leucemia, Cariótipo para cromossomo Philadelphia



Aplicação clínica: Suspeita de LMC e demais leucemias, ou outras disordens hematológicas malignas. É indicado quando não é possível coletar a medula óssea e o paciente apresenta alta porcentagem de células blásticas em divisão na corrente circulatótia


As anomalias cromossômicas desempenham um papel fundamental na patogênese, diagnóstico e acompanhamento do tratamento de muitas doenças hematológicas. Sempre que possível, é importante realizar o cariótipo para detectar possíveis desordens hematológicas neoplásicas na medula óssea. Estudos de medula óssea são mais sensíveis e as possibilidades de encontrar células em metafase são cerca de 95%, em comparação com apenas uma chance de 60% para estudos de sangue. Quando não é possível coletar a medula óssea, o cariótipo de sangue podem ser útil. Quando células do sangue são cultivadas em meio de cultura sem mitógenos, a observação de qualquer clone cromossomicamente anormal pode ser compatível com um processo neoplásico




Interpretação: A presença de um clone anormal geralmente indica um processo neoplásico maligno. A ausência de um clone anormal aparente no sangue pode resultar de uma falta de circulação de células anormais e não de uma ausência de doença. Em raras ocasiões, a presença de uma anormalidade pode associada com uma anomalia congênita e, assim, não relacionada a um processo maligno.


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Amostra: Sangue periférico – Heparina sódica

Volume: 5 a 10ml



2ª a 4ª no horário das 08:00 as 17:00hs e as 5ª das 08:00 as 14:00hs (devido aos tempos de cultura)








Metodologia: Cultura temporária de linfócitos sem estimulação de mitógenos para investigação de anomalias cromossômicas numéricas e estruturais

Limitações: Células tumorais não dividindo ou não circulante na corrente sanguínea

.

Referências:



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2. Dewald GW, Ketterling RP, Wyatt WA, Stupca PJ: Cytogenetic studies in neoplastic

hematologic disorders. In Clinical Laboratory Medicine, 2nd edition. Edited by KD McClatchey.

Baltimore, Williams & Wilkens, 2002, pp 658-685



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CARIÓTIPO, Cordocentese

Mnemônico: CG004SF

Sinônímia: Cariótipo de sangue fetal, Cariótipo de sangue de cordão umbilical, Cariótipo de cordão



Aplicação clínica: Malformações ao ultrassom de segundo ou terceiro trimestre, confirmação de resultados de mosaicismo cromossômico no líquido amniótico, infecção fetal, entre outras.


Em geral, realizada em gestantes com anomalias fetais detectadas ao ultrassom no segundo ou terceiro trimestre da gestação.




Interpretação: O resultado citogenético de cordocentese depende da avaliação conjunta com os dados da paciente, uma vez que pode haver a contaminação de células sanguíneas maternas na amostra coletada. Um cariótipo normal não exclui a possibilidade de defeitos congênitos, tais como aqueles causados por anomalias cromossômicas submicroscópicas, mutações moleculares, e outros fatores ambientais (exposição a agentes teratogênicos). Por estas razões os médicos devem informar os pacientes sobre as limitações técnicas do exame.


Amostra: Sangue fetal – Heparina sódica

Volume: 1 a 3 ml

Transporte: Na própria seringa de coleta com tampa protetora sem a agulha, não


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passar para tubos não estéreis.


2ª a 6ª no horário das 08:00 as 17:00hs e aos sábados das 08:00 as 12:00hs





Amostra hemolisada, coagulada, exposição da amostra a temperaturas extremas (ex. congelada), amostras com heparina lítica



Metodologia: Cultura temporária de linfócitos para investigação de anomalias cromossômicas numéricas e estruturais

Limitações: Amostras com contaminação de sangue materno, linfócitos T que não respondem ao mitógeno utilizado para estimular as células em mitose e a não detecção de microalterações cromossômicas.

Referências:



3. Moorehead PS, Nowell PC, Mellman WJ, Battips DM, Hungerford DA. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood. Exp Cell Res 1960;20: 613-6

4. Moraes AC, Hashimoto EM, Dovigo JRD. Princípios básicos de citogenética e biologia molecular. In: Moron AF. Medicina Fetal na Prática Obstétrica. Editora Santos; 2003b. p.75-82

5. Trent RJ, “Manual de Diagnóstico Pré-Natal”, 1997, Livraria Santos Editora


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CARIÓTIPO, Líquido Amniótico

Mnemônico: CG005LA

Sinônímia: Cariótipo de âmnio, Cariótipo de amniocentese, Cariótipo de LA, Citogenética de líquido amniótico, Análise cromossômica de líquido amniótico



Aplicação clínica: Alterações morfológicas ao ultrassom, antecedentes familiares de cromossomopatias, idade materna avançada (> 35 anos), abortos de repetição, risco aumentado para de anomalia cromossômica na triagem bioquímica


No diagnóstico pré-natal é possível detectar mais de 1000 doenças hereditárias. A maioria delas são herdadas de forma autossômica recessiva. O diagnóstico pré-natal utilizando sondas genéticas tornou-se disponível para fibrose cística, distrofia muscular, anemia falciforme, hemofilia e muitas outras anomalias genéticas.Isto pode ser realizado tanto em células de cultura do líquido amniótico como em amostragem de vilo corial.

O exame de FISH também pode ser aplicado ao diagnóstico pré-natal como complementar ao estudo citogenético, utilizando as sondas para os cromossomos 21, 13, 18, X e Y.




Interpretação: Os estudos citogenéticos de líquido amniótico são considerados com 99% de acurácia na detecção de grandes anomalias cromossômicas fetais. Alterações envolvendo microalterações podem ser detectadas por técnicas de citogenética molecular, como FISH, MLPA, CGH array.

Aproximadamente 3% das amostras de líquido amniótico analisadas apresentam anomalias cromossômicas.


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Um cariótipo normal não exclui a possibilidade de defeitos congênitos, tais como aqueles causados por anomalias cromossômicas submicroscópicas, mutações moleculares, e outros fatores ambientais (exposição a agentes teratogênicos). Por estas razões os médicos devem informar os pacientes sobre as limitações técnicas do exame.


Amostra: Líquido amniótico, Líquido do higroma cístico, Líquido pleural

Volume: 15 a 20ml

Transporte: Na própria seringa de coleta com tampa protetora sem a agulha, não passar para tubos não estéreis.




Manter a amostra refrigerada (8ºC) na própria seringa, NÃO CONGELAR



Alta contaminação do líquido amniótico com células sanguíneas; amostra congelada; amostra transportada em recipiente com tampa de borracha (borracha é tóxica para amniócitos)


Procedimento: Análise do cariótipo fetal, através de cultura de células e Banda G com resolução de 400-550 Bandas

Metodologia: Cultura de células de amniócitos para investigação de anomalias cromossômicas numéricas e estruturais

Limitações: Embora a taxa de sucesso seja de 99%, as causas para as limitações são: insucesso de cultura devido a coleta de amostras de células em degeneração, amostra inadequada, contaminação do líquido com células sanguíneas, bactérias, leveduras. Não detecção de microalterações


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cromossômicas.

Referências:

1. Nicolaides K, Brizot M de L, Patel F, et al, “Comparison of Chorionic Villus Sampling and Amniocentesis for Fetal Karyotyping at 10-13 Weeks' Gestation,” Lancet, 1994, 334(8920):435-9 [published erratum: Lancet, 1994, 344(8925):830]. PubMed 7914564

2. Ledbetter DH, Zachary JM, Simpson JL, et al, “Cytogenetic Results From the U.S. Collaborative Study on CVS,” Prenat Diagn, 1992, 12(5):317-45. PubMed 1523201

3. Desnick RJ, Schuette JL, Golbus MS, et al, “First-Trimester Biochemical and Molecular Diagnoses Using Chorionic Villi: High Accuracy in the U.S. Collaborative Study,” Prenat Diagn, 1992, 12(5):357-72. PubMed 1523203

4. DiLiberti JH, Greenstein MA, Rosengren SS, “Prenatal Diagnosis,” Pediatr Rev, 1992, 13(9):334-42. PubMed 1409163

5. Chueh J, Golbus MS, “Prenatal Diagnosis Using Fetal Cells in the Maternal Circulation,” Semin Perinatol, 1990, 14(6):471-82.PubMed 2077667

6. Moraes AC. Aplicação dos métodos de hibridização in situ fluorescente e reação de cadeia em polimerase como auxílio à citogenética em matéria fetal e de perda gestacional: correlação com os achados anatomopatológicos [Tese de Doutorado], UNIFESP, 2003



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CARIÓTIPO, Produto de Concepção

Mnemônico: CG006PC

Sinônímia: Cariótipo de material de placenta, Cariótipo de material fetal, Cariótipo de aborto, Cariótipo placentário



Aplicação clínica: Abortos de repetição ou habitual (acima da 2ª perda gestacional), antecedentes familiares de cromossomopatias, FIV, gestação anembrionada, mola hidatiforme


Dentre as anomalias cromossomopatias encontradas (cerca de 50% dos casos) as trissomias dos cromossomos 16, 22, 15, 21, 13 e 18 são as mais frequentes, além da monossomia do cromossomo X e as triploidias.

15 a 40% dos abortamentos retidos ou óbito fetal podem não haver crescimento celular devido à degeneração da vilosidade coriônica ou autólise da pele fetal. Para estes casos o exame de FISH pode ser aplicado como complementar ao estudo citogenético, utilizando as sondas para os cromossomos 21, 13, 18, X e Y e as sondas dos cromossomos 16, 22, 15.




Interpretação: O achado de uma anomalia cromossômica pode explicar a causa de um aborto ou natimorto, particularmente quando os resultados mostram aneuploidia do cromossomo ou um rearranjo estrutural desequilibrada. Para rearranjos cromossômicos equilibrados, às vezes é difícil determinar se a anormalidade cromossômica é a causa direta de um aborto ou natimorto. Nestas situações, o estudo do cariótipo de sangue periférico dos pais pode ser útil para determinar se uma anormalidade é familiar ou de novo. Outra situação para solicitar o cariótipo dos pais é quando não


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há crescimento celular em um 2º ou mais abortamento retido.

Um cariótipo normal não exclui a possibilidade de defeitos congênitos, tais como aqueles causados por anomalias cromossômicas submicroscópicas, mutações moleculares, e outros fatores ambientais (exposição a agentes teratogênicos). Por estas razões os médicos devem informar os pacientes sobre as limitações técnicas do exame.


Amostra: Vilo corial, pele fetal – solicitar ao laboratório meio de transporte

Volume: 30 a 50 mg ou 2 a 4 mm3

Transporte: No próprio frasco fornecido pelo laboratório ou em soro fisiológico estéril, não passar para tubos não estéreis.


2ª a 6ª no horário das 08:00 as 17:00h e aos sábados das 08:00 as 12:00h


Manter a amostra refrigerada (8ºC) no próprio frasco, NÃO CONGELAR



Amostra inadequada (coágulos, decídua), interferências de temperatura no trasnporte, embalagens inadequadas que podem resultar em contaminações durante o transporte, amostras em álcool ou formol



Metodologia: Cultura de células de vilosidade coriônica ou de fibroblastos para investigação de anomalias cromossômicas numéricas e estruturais

Limitações: Contaminação com células maternas, abortamento retido por mais de 7 a 10 dias e entrega da amostra com mais de 48 horas da coleta possuem


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15 a 40% de chance de não haver crescimento das células fetais para a análise do cariótipo. Presença de anormalidades cromossômicas em células da placenta que não ocorrem nas células do feto (mosaicismo confinado à placenta). Não detecção de microalterações cromossômicas.

Referências:

1. Breed AS, Mantingh A, Beekhuis JR, et al: The predictive value of cytogenetic diagnosis after CVS: 1,500 cases. Prenat Diagn 1990;10:101-110

2. Kalousek DK. Clinical significance of morphologic and genetic examination of spontaneously aborted embryos. Am J Reprod Immunol. 1998;39(2):108-19

3. Kalousek DK. Anatomic and chromosome anomalies in specimens of early spontaneous abortions: seven-year experience. Birth Defects Orig Artic Ser. 1987;23(1):153-68

4. Kalousek DK, Dimmick JE. Pathology of spontaneous abortions and chromosomal abnormalities in stillbirth and neonatal death. In: Dimmick JE, Kalousek DK, editors. Developmental pathology of the embryo and fetus. Philadelphia: JB Lippincott; 1992. p. 55-110


6. Moraes AC, Hashimoto EM. Estudo cromossômico de restos ovulares. In: Moron AF. Medicina Fetal na Prática Obstétrica. Editora Santos; 2003a. p.117-122

7. Moraes AC et al. Abordagem citogenética e molecular em material de abortos espontâneos. Ver Brás Ginecol Obstet. 2005;27(9):554-60

8. Ledbetter DH, Martin AO, Verlinsky Y, et al: Cytogenetic results of chorionic villus sampling: high success rate and diagnostic accuracy in the United States collaborative study. Am J Obstet Gynecol 1990;162:495-501



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CARIÓTIPO, Sangue Periférico - Constitucional

Mnemônico: CG007SP

Sinônímia: Cariótipo de sangue, Cariótipo Banda G, Cariótipo constitucional



Aplicação clínica: Casais com aborto de repetição, infertilidade, atraso de desenvolvimento, retardo mental, recém-nascidos com genitália ambígua, anomalias cromossômicas, baixa estatura, Síndrome de Down


Anomalias cromossômicas causam uma vasta gama de distúrbios relacionados com doenças congênitas e defeitos de nascimento. O estudo do cariótipo é realizado no sangue para uma variedade de indicações incluindo retardo mental, possível síndrome de Down, baixa estatura ou amenorréia primária (síndrome de Turner), abortos de repetição, infertilidade, várias anomalias congênitas, determinação do sexo e muitos outros




Interpretação: Ao interpretar os resultados, os seguintes fatores devem ser considerados: algumas anomalias cromossômicas são equilibradas (sem aparente ganho ou perda de material genético) e não pode estar associadas com defeitos de nascimento. No entanto, anormalidades equilibradas muitas vezes causam infertilidade e, quando herdado de forma desequilibrada, podem resultar em defeitos de nascimento na sua descendência.

Um cariótipo normal não exclui a possibilidade de defeitos congênitos, tais como aqueles causados por anomalias cromossômicas submicroscópicas, mutações moleculares, e outros fatores ambientais (exposição a agentes teratogênicos). Por estas razões os médicos devem informar os pacientes


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sobre as limitações técnicas do exame.



Volume: 5 a 10ml (adulto), 2 a 5ml (recém-nascido)












Limitações: Linfócitos T que não respondem ao mitógeno utilizado para estimular as células em mitose, mosaicismo cromossômico pode ser perdido devido a um erro de amostragem estatística (raro) e na não detecção de microalterações cromossômicas.


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Referências:






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CARIÓTIPO, Vilo Corial

Mnemônico: CG008VC

Sinônímia: Cariótipo de vilosidade coriônica, Cariótipo de biópsia de vilo corial (BVC), Cariótipo de placenta

Prazo: 10 dias corridos (cultura semi-direta) e 30 dias corridos (cultura prolongada)


Aplicação clínica: Translucência nucal alterada, marcadores ultrassonográficos, antecedentes familiares de cromossomopatias, idade materna avançada (>35 anos), abortos de repetição


No diagnóstico pré-natal é possível detectar mais de 1000 doenças hereditárias. A maioria delas são herdadas de forma autossômica recessiva. O diagnóstico pré-natal utilizando sondas genéticas tornou-se disponível para fibrose cística, distrofia muscular, anemia falciforme, hemofilia e muitas outras anomalias genéticas. Isto pode ser realizado tanto em células de cultura do líquido amniótico como em amostragem de vilo corial.

O exame de FISH também pode ser aplicado ao diagnóstico pré-natal como complementar ao estudo citogenético, utilizando as sondas para os cromossomos 21, 13, 18, X e Y.




Interpretação: Os estudos citogenéticos de vilo corial são considerados com 99% de acurácia na detecção da maioria das anomalias cromossômicas fetais. Alterações envolvendo microdeleções podem ser detectadas por técnicas de citogenética molecular, como FISH, MLPA, CGH array.

Aproximadamente 3% das amostras de líquido amniótico analisadas apresentam anomalias cromossômicas.

Um cariótipo normal não exclui a possibilidade de defeitos congênitos, tais


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como aqueles causados por anomalias cromossômicas submicroscópicas, mutações moleculares, e outros fatores ambientais (exposição a agentes teratogênicos). Por estas razões os médicos devem informar os pacientes sobre as limitações técnicas do exame.


Amostra: Vilo corial – solicitar ao laboratório meio de transporte ou colocar em soro fisiológico estéril

Volume: 10 a 30 mg

Transporte: Na própria seringa de coleta com tampa protetora sem a agulha, não passar para tubos não estéreis.




Manter a amostra refrigerada (8ºC) na própria seringa, NÃO CONGELAR



Quantidade inadequada da amostra, interferências de temperatura no trasnporte, embalagens inadequadas que podem resultar em contaminações durante o transporte



Metodologia: Cultura de células de vilosidade coriônica para investigação de anomalias cromossômicas numéricas e estruturais

Limitações: Embora a taxa de sucesso seja de 99%, as causas para as limitações são: insucesso de cultura devido a coleta de amostras de células em degeneração, amostra inadequada, contaminação com células maternas. Falso-mosaicismo cromossômico pode ocorrer devido a artefato da


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cultura e presença de anormalidades cromossômicas em células da placenta que não ocorrem nas células do feto (mosaicismo confinado à placenta). Não detecção de microalterações cromossômicas.

Referências:


2. Canadian Collaborative CVS-Amniocentesis Clinical Trial Group: Multicentre randomized clinical trial of chorionic villus sampling and amniocentesis. Lancet 1989;1:1-6

3. Ledbetter DH, Martin AO, Verlinsky Y, et al: Cytogenetic results of chorionic villus sampling: high success rate and diagnostic accuracy in the United States collaborative study. Am J Obstet Gynecol 1990;162:495-501



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CARIÓTIPO, Sangue Periférico – Contagem ampliada

Mnemônico: CG010SP

Sinônímia: Cariótipo de sangue para mosaicismo, Cariótipo de mosaico de Turner



Aplicação clínica: Realizado para confirmação ou exclusão de mosaicismo


A presença de duas linhagens ou mais de células cromossomicamente diferentes em um mesmo indivíduo é considerada um mosaicismo cromossômico. Para identificar estes mosaicismos é necessário a análise do cariótipo de 50 a 100 células.




Interpretação: Um cariótipo normal não exclui a possibilidade de defeitos congênitos, tais como aqueles causados por anomalias cromossômicas submicroscópicas, mutações moleculares, e outros fatores ambientais (exposição a agentes teratogênicos). Por estas razões os médicos devem informar os pacientes sobre as limitações técnicas do exame.



Volume: 5 a 10ml (adulto), 2 a 5ml (recém-nascido)


Recebimento da 2ª a 6ª no horário das 08:00 as 17:00hs e aos sábados das 08:00 as


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amostra 12:00hs









Limitações: Linfócitos T que não respondem ao mitógeno utilizado para estimular as células em mitose, mosaicismo cromossômico pode ser perdido devido a um erro de amostragem estatística (raro) e na não detecção de microalterações cromossômicas.

Referências:






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CARIÓTIPO, Pele

Mnemônico: CG0011PE

Sinônímia: Cariótipo de pele



Aplicação clínica: Mosaicismos cromossômicos de baixa frequencia, doenças genéticas visualizadas em outro tecido (exemplo: Síndrome Palister-Killer)


Cariótipo realizado em fibroblastos, cultivados a partir de material obtido por biopsia de pele. Também pode ser realizado quando o cariótipo no sangue é normal e há clinica para a alteração cromossômica, nos casos sugestivos de mosaicismos teciduais e nos casos de fetos abortados ou RN que tenham vindo a óbito




Interpretação: Um cariótipo normal não exclui a possibilidade de defeitos congênitos, tais como aqueles causados por anomalias cromossômicas submicroscópicas, mutações moleculares, e outros fatores ambientais (exposição a agentes teratogênicos). Por estas razões os médicos devem informar os pacientes sobre as limitações técnicas do exame


Amostra: Pele (região sem pelos) – solicitar ao laboratório meio de transporte

Volume: 30 a 50 mg ou 2 a 4 mm3

Transporte: No próprio frasco fornecido pelo laboratório ou em soro fisiológico estéril, não passar para tubos não estéreis.


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Manter a amostra refrigerada (8ºC) no próprio frasco, NÃO CONGELAR

Estabilidade: Até 48 horas após a coleta mantida refrigerada no meio fornecido pelo laboratório. No soro fisiológico até 24 horas após a coleta.


Amostra inadequada (necrose), interferências de temperatura no trasnporte, embalagens inadequadas que podem resultar em contaminações durante o transporte, amostras em álcool ou formol


Procedimento: Análise do cariótipo , através de cultura de células de fibroblastos e Banda G com resolução de 400-550 Bandas

Metodologia: Cultura de células de fibroblastos para investigação de anomalias cromossômicas numéricas e estruturais

Limitações: Não detecção de microalterações cromossômicas.

Referências:


2. Kalousek DK. Clinical significance of morphologic and genetic examination of spontaneously aborted embryos. Am J Reprod Immunol. 1998;39(2):108-19

3. Kalousek DK. Anatomic and chromosome anomalies in specimens of early spontaneous abortions: seven-year experience. Birth Defects Orig Artic Ser. 1987;23(1):153-68

4. Kalousek DK, Dimmick JE. Pathology of spontaneous abortions and chromosomal abnormalities in stillbirth and neonatal death. In: Dimmick JE, Kalousek DK, editors. Developmental pathology of the embryo and fetus. Philadelphia: JB Lippincott; 1992. p. 55-110



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FISH, Pré-Natal

Mnemônico: FH016LA

Sinônímia: FISH para trissomia 21/Síndrome de Down, FISH para os cromossomos 13, 18, 21, X e Y



Aplicação clínica: Alterações morfológicas ao ultrassom, antecedentes familiares de cromossomopatias, exclusão de mosaicismo cromossômico, Suspeita de Síndrome de Down, Síndrome de Edwards, Síndrome de Patau, Síndrome de Turner, Síndrome de Klinefelter, Triploidias


A técnica de FISH utiliza sondas de DNA e podem ser realizadas em células cultivadas ou sem cultivo celular (vilosidade coriônica ou líquido amniótico) para detectar as aneuploidias dos cromossomos 13, 18, 21, X e Y.




Interpretação: É fornecido um relatório interpretativo descrito de acordo com as normas ISCN 2009


Amostra: liquido amniótico

Volume: 10 ml de líquido amniótico

Transporte: na própria seringa de coleta, não passar para tubos não estéreis.


2ª a 5ª no horário das 08:00 as 17:00


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Amostra congelada, quantidade insuficiente


Procedimento: Análise de sinais fluorescentes em amnióticos para os cromossomos 13, 18, 21, X e Y

Metodologia: Hibridização in situ fluorescente em lâminas com amostra fixada, utilizando as sondas para os cromossomos 13, 18, 21, X e Y

Limitações: Detecta apenas as aneuploidias mais comuns envolvendo os cromossomos X, Y, 13, 18 e 21.

É necessário Consentimento Informado assinado pela paciente ou

responsável

Referências:

1. Maeda T, Ohno M, Matsunobu A, et al: A cytogenetic survey of 14,835 consecutive liveborns. Jap J Hum Genet 1991;36:117-129

2. Whiteman DAH, Klinger K: Efficiency of rapid in situ hybridization methods for Prenatal diagnosis of chromosome abnormalities causing birth defects. Am J Hum Genet 1991;49:A1279

3. Ward BE, Gersen SL, Carelli MP, et al: Rapid prenatal diagnosis of chromosomal aneuploidies by fluorescence in situ hybridization: Clinical experience with 4,500 specimens. Am J Hum Genet 1993;52:854-865


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FISH, Pré-Natal

Mnemônico: FH017VC

Sinônímia: FISH para trissomia 21/Síndrome de Down, FISH para os cromossomos 13, 18, 21, X e Y





A técnica de FISH utiliza sondas de DNA e podem ser realizadas em células cultivadas ou sem cultivo celular (vilosidade coriônica ou líquido amniótico) para detectar as aneuploidias dos cromossomos 13, 18, 21, X e Y.






Amostra: vilo corial

Volume: 10mg de vilo corial

Transporte: na própria seringa de coleta, não passar para tubos não estéreis.




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responsável

Referências:





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FISH, Produto de Concepção

Mnemônico: FH016PC

Sinônímia: FISH para material de abortamento retido que não houve crescimento celular, FISH para os cromossomos 13, 18, 21, X e Y





A técnica de FISH utiliza sondas de DNA e podem ser realizadas em células cultivadas ou sem cultivo celular (produto de concepção) para detectar as aneuploidias dos cromossomos 13, 18, 21, X e Y. Também pode ser realizado em material blocado em parafina.






Amostra: Vilo corial do produto de concepção ou bloco de parafina

Volume: 10mg de vilo corial ou bloco de parafina com material fetal

Transporte: no próprio frasco de coleta, não passar para tubos não estéreis.




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responsável

Referências:





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FISH, BCR/ABL

Mnemônico: FH001MO

Sinônímia: FISH para LMC, LLA, FISH para t(9;22), FISH para cromossomo Philadelphia, FISH para rearranjo BCR/ABL



Aplicação clínica: Identificação do rearranjo BCR/ABL, t(9;22), normalmente associada à leucemia mieloide crônica. Também pode estar associada à leucemia linfoblástica aguda e a leucemia mieloide aguda


A técnica de FISH utiliza sondas de DNA e podem ser realizadas em células cultivadas ou sem cultivo celular (aspirado de medula óssea) para detectar os rearranjos BCR/ABL(translocação 9 e 22). O cromossomo anormal 22 derivado da translocação envolvendo os cromossomos 9 e 22

é chamado de cromossomo Filadélfia (Ph). Uma proliferação de células com uma t(9;22)(q34;q11.2) ocorre na medula óssea e sangue periférico de mais de 90% dos pacientes com leucemia mielóide crônica (LMC); em aproximadamente 6% das crianças e 17% dos adultos com leucemia linfoblástica aguda (LLA); e cerca de 1% dos pacientes com leucemia mielóide aguda (LMA) com granulócitos imaturos.


Positivo quando mostrar translocação 9;22

Interpretação: É fornecido um relatório interpretativo descrito de acordo com as normas ISCN 2009.


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Amostra: Aspirado de medula óssea, sangue periférico

Volume: 3ml

Transporte: na própria seringa de coleta heparinizada, não passar para tubos não estéreis.







Material coagulado, hemolisado ou contaminado;

Uso incorreto de anticoagulante


Procedimento: Análise de sinais fluorescentes em núcleos interfásicos

Metodologia: Hibridização In Situ por Fluorescência (Citogenética Molecular)

Referências:

1. Dewald GW, Wyatt WA, Silver RT: Atypical BCR and ABL D-FISH patterns in

chronic myeloid leukemia and their possible role in therapy. Leuk Lymphoma 1999;34(5-

6):481-491

2. Dewald GW, Juneau AL, Schad CR, Tefferi A: Cytogenetic and molecular genetic

methods for diagnosis and treatment response in chronic granulocytic leukemia. Cancer

Genet Cytogenet 1997;94:59-66

3. The Italian Cooperative Study Group on Chronic Myeloid Leukemia: Interferon


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alpha-2a as compared with conventional chemotherapy for the treatment of

chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 1994;330:820-825

4. Dewald GW: Interphase FISH studies for chronic myeloid leukemia. In Methods in

Molecular Biology. Vol. 204. Molecular Cytogenetics: Protocols and Applications. Edited by

YS Fan. Totowa, NJ, Humana Press, USA, 2002 pp 311-342


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FISH, LLC

Mnemônico: FH002MO

Sinônímia: FISH Deleção, D13S319, del(13q14) LLC



Aplicação clínica: Leucemia Linfocítica Crônica mostra deleção do cromossomo 13q. Outras

lesões linfo-proliferativas que apresentam a deleção 13q incluem CLL

atípica, linfoma esplênico com linfócitos vilosos (linfoma célula B zona

marginal esplênico) e linfoma de células do manto em fase leucêmica).

Mieloma, Leucemia linfóide aguda (LLA), Linfoma Não Hodgkin.


Presença ou ausência del(13q14)




Volume: 3 a 5 ml

Transporte: na própria seringa de coleta heparinizada, não passar para tubos não estéreis (tubo vacutainer tampa verde, não usar heparina lítica)


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FISH, PML-RARA

Mnemônico: FH003MO

Sinônímia: FISH t(15;17) (q22;q21) PML-RARA para LMA- M3



Aplicação clínica: Translocação encontrada em 98% das Leucemias Promielocíticas Agudas

(AML M3), FAB tipo M3.


Presença / Ausência de translocação 15:17 que envolve o gene PML no

cromossomo 15q22 e o gene RARA no cromossomo 17q21.1




Volume: 3 a 5ml






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FISH, X/Y

Mnemônico: FH004MO

Sinônímia: FISH para exclusão de mosaicismo, FISH para detecção de sexo, FISH para controle de transplante



Aplicação clínica: Transplantes de medula realizados entre indivíduos de sexos diferentes.

Determinação de quimerismo: permite identificar a proporção de

células XX ou XY do doador no receptor.

Determinação dos cromossomos sexuais e investigação de aneuploidia.


Identificação de cromossomos sexuais


Amostra: Sangue periférico ou Aspirado de medula óssea

Volume: 3ml a 5 ml





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FISH, Painel LLC Trissomia 12, Del 13q14.3, p53, ATM, MYB

Mnemônico: FH007MO

Sinônímia: FISH para Painel LLC Trissomia 12, deleção 13q14.3, p53, ATM, MYB



Aplicação clínica: Na Leucemia Linfocítica Crônica o conhecimento dos deleções e trissomias

envolvidos na alteração molecular tem importantes implicações para

prognóstico do paciente e fornece importantes implicações para diagnóstico

e terapia do paciente. O painel dá informações de células em interfase e é

capaz de detectar mutações indetectáveis em citogenética padrão.


Presença ou Ausência de: a. deleção de 6q23.3 (MYB) b. deleção de 11q22.3 (ATM); c. trissomia do cromossomo 12; d. deleção de 13q ; e. deleção de del17p13.1 (TP53) que ocorrem em linhagem de LLC




Volume: 3 a 5ml

Transporte: na própria seringa de coleta heparinizada, não passar para tubos não


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estéreis (tubo vacutainer tampa verde, não usar heparina lítica)













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manual de exames 2012 v2-2.pdf - citogenix.com.br · um cariótipo normal não exclui a...

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