PRACTICA NO 4 COLORACIONES ESPECIALES

I. INTRODUCCIÓN

Algunas especies de bacterias Gram positivas : principalmente de los géneros Bacillus, Clostridium, Sporosarcina y Thermoactinomyces, disponen de una serie de estrategias adaptativas cuando se ven sometidas a privación de nutrientes en su medio ambiente. Una de ellas es induciendo un proceso de diferenciación celular que conduce a la producción de una estructura especial: endospora, que es una forma de reposo, durmiente (criptobiótica : metabolismo prácticamente detenido), y que es capaz de resistir una amplia gama de agentes agresivos ambientales, físicos y químicos.

Estas observaciones más detalladas de las estructuras de los microorganismos, tales como las esporas, capsulas, flagelos, y corpúsculos metacromaticos, requieren de métodos especiales en la utilización de tintes básicos, como por ejemplo en la utilización de esporas los métodos de tinción son más complejos a diferencia de una tinción bacteriana simple.

II. OBJETIVOS

Observa y diferenciar las estructuras microbianas tales como esporas, capsulas y otras cubiertas.

Evidenciar las diferencias de los diversos tipos de coloración.

III. MARCO TEORICO

TINCIÓN DE CÁPSULAS

Algunas bacterias presentan una capa externa a la pared, más o menos gruesa que envuelve la pared celular o de algunas bacterias, denominada cápsula. Está compuesta de polisacáridos, mucopolisacáridos o polipéptidos. No es una estructura vital para la bacteria, de modo que es posible que bajo determinadas condiciones ambientales o del propio desarrollo genere cápsula y bajo otras no lo haga. Se ha comprobado que la presencia de cápsula dificulta de algún modo la fagocitosis de las bacterias, es decir las cápsulas constituyen un factor de virulencia de los microorganismos.

A consecuencia de su elevado contenido en agua, se tiñen débilmente por los colorantes. Hay dos técnicas Hiss y tinta china.

Metodo de Hiss

Como reactivos se emplean solución acuosa de cristal violeta 1% y solución acuosa de sulfato de cobre 2%.Las cápsulas se observación objetivo de inmersión y las cápsulas se visualizaran de azul pálido y las bacterias de color púrpura y el fondo claro.

Tinción Negativa

Es el reverso del procedimiento de tinción usual: la cápsula se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea.

Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua).

La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.

Metodo de Tinta China

Como reactivos tenemos, solución de fucsina diluida y nigrosina o tinta china. Se observa al microscopio con objetivo de inmersión y se visualizan las bacterias teñidas de rojo por la fucsina y la cápsula será un halo blanco que las envuelve.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Materiales:

Microscopio óptico Mechero Asa de siembra Pizeta Portaobjetos y cubreobjetos Aceite de inmersión Colorantes para tinción: cristal violeta, Lugol, alcohol cetona,

safranina, tinta china. Muestra de esputo

Procedimiento:a. Coloración de Capsulas :Método de Hiss

La muestra de esputo de persona resfriada, proceder a extender con un asa de siembra sobre el portaobjetos, calentando previamente el asa de siembra; fijar en la llama.

Colorear con fucsina básica o con Safranina, con suaves calentamientos hasta la salida de vapores blancos por 1 minuto.

Lavar con solución de sulfato de cobre al 20% a chorro continuo. Secar y observar al microscopio.

b. Coloración de capsulas: Método de tinta china (no se realizó)

Sin fijar el frotis, se cubre con fucsina diluida durante dos minutos.

Lavar con agua destilada y secar al aire Se colocan en un extremo del porta objeto dos gotas de nigrosina

o de tinta china y se hace una extensión por el método de los dos portaobjetos. Se deja secar y se observa al microscopio con objetivo de inmersión

V. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

Muestra de esputo con coloración Hiss

Aumento: 1000x

Se observan bacterias en forma cocos.Las bacterias se tiñen de rosado.

ANALISIS DE RESULTADOS:

o La muestra de esputo se tiño de rosado lo que nos indica que es una bacteria Gram negativa.

VI. CONCLUSIONES Las bacterias que se encuentran en una muestra de esputo son

bacterias en forma de cocos, que tienen una tinción Gram negativa. Lo que nos indica que la bacteria tiene una capa delgada de peptidoglucano y se tiñe de rosado debido a la safranina (colorante de contraste).

NO SE REALIZO LA TINCION CON TINTA CHINA pero es necesario usar este tipo de coloración para la observación de las capsulas de los microorganismos, ya que debido a su elevado contenido en agua, se tiñen débilmente por los colorantes.

VII. BIBLIOGRAFIA http://www.educa2.madrid.org/web/educamadrid/principal/files/0e8a6919-7eeb-

423f-9fa8-b9c866aab3ff/T%C3%89CNICAS%20DE%20VISUALLIZACI%C3%93N%20MICROSC%C3%93PICA%20DE%20MICROORGANISMOS.pdf

http://www.danival.org/600%20microbio/5000micro_dvf/micro_dvf_222b.html

PRACTICA N0 7: CULTIVO EN MICROORGANISMOS

I. INTRODUCCION

El cultivo en vitro de los microorganismos requiere necesariamente del uso de un sustrato y un ambiente artificial ajustado a las condiciones mínimas de crecimiento con en este fin se han desarrollado diferentes medios de cultivos que proveen como mínimo de una fuente de carbono, nitrógeno factores especiales de crecimiento.

El procedimiento general para lograr el aislamiento de un microorganismo en un cultivo puro, consiste en usar un medio de cultivo y condiciones de incubación que estimulen el crecimiento y que inhiban el crecimiento de otros microorganismos acompañantes

II. OBJETIVOS

Aislamiento de bacterias aerobias en placas Petri por los métodos de estriado y diseminación.

Manejar los procedimientos de la recolección, el procesamiento de las muestras y los métodos de aislamiento

III. MARCO TEORICO

CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las características del medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de nutrientes en el medio.

MEDIOS DE CULTIVO

Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energía y elementos químicos para la síntesis de sus constituyentes celulares. De pendiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en autótrofos si es el CO2 atmosférico (microorganismos que fotosintetizan) y heterótrofos si utilizan carbono orgánico.

Los medios de cultivo se pueden clasificar en definidos cuando su composición química se conoce totalmente y complejos cuando no es el caso porque están compuestos por mezclas de extractos de material es complejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.).Por otra parte, los medios de cultivo pueden ser líquidos o sólidos si se añade algún agente solidificante que no sea consumible por los microorganismos (normalmente agar).

En función de los microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser generales, selectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras suprimen el de otros (por ejemplo, el medio SPS para clostridios), diferenciales cuando alguno de sus componentes permite identificar las colonias de un tipo de microorganismos (por ejemplo medios con hematíes para identificar colonias de microorganismos hemolíticos), selectivo-diferenciales cuando combinan las dos características anteriores (por ejemplo, el agar de MacConkey para identificar Escherichia coli), y medios de enriquecimiento que permiten aislar un tipo determinado de microorganismo a partir de una mezcla una población mixta de gran tamaño.

MÉTODOS DE AISLAMIENTO

El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayoría de los casos, mediante la producción de colonias aisladas en cultivos sólidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran número de ellas a partir de una única célula inicial de forma que, tras un periodo de incubación en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).

Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las muestras ambientales son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es debido a dificultades intrínsecas en el cultivo (microorganismos parásitos de otros), al es conocimiento de los requerimientos específicos de cultivo, y a la existencia de grupos de microorganismos que deben mantenerse en equilibrio para poder sobrevivir (casos de sintrofía por ejemplo). Se estima que en sólo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1 - 0,01 % de las bacterias marinas son cultivables.

CULTIVO EN TUBO: CALDOS Y SÓLIDOS

Los medios en tubo pueden presentarse sólidos en forma inclinada, caldo o bien como medios semisólidos. De acuerdo al procedimiento de inoculación puede emplearse el asa o la aguja para inoculación. Generalmente se emplea el asa para inocular especímenes en placa y la aguja de inoculación para la transferencia de cultivos puros de placas a tubos con medio sólido.Existen muchas fórmulas de caldos, dependiendo de la bacteria que se desee crecer. En los tubos con medio sólido, el tubo se pone a enfriar en posición inclinada, de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los tubos inclinados son útiles para el cultivo de aerobios y anaerobios facultativos. Las características del cultivo tales como pigmento son fáciles de observar en este

tipo de cultivo. Los procedimientos para inocular caldos, tubos inclinados y por picadura serán demostrados antes de que se lleven a cabo.

CULTIVO EN PLACA

Si las bacterias se pueden separar por dilución y después se ponen en un medio sólido para que den lugar a colonias, estas tendrán una medida, forma, color y textura dependiendo de cada microorganismo lo cual proporcionará una valiosa ayuda en su identificación.El método de estría cruzada consiste en la dilución de un cultivo mediante el estriado en la superficie de un medio sólido, en una caja Petri. Los microorganismos se van quedando al hacer las estrías en diferentes partes de la superficie del medio de tal forma que en un momento dado quedarán células individuales o bien unidades formadoras de colonias, que al multiplicarse darán lugar a una colonia. Las placas estriadas se usan fundamentalmente para aislar cultivos puros en muestras que contienen flora mixta, también es útil para el estudio de la morfología colonial y propiedades hemolíticas de las bacterias.

MÉTODO DE ESTRÍA CRUZADA

1. Flamee el asa hasta el rojo en toda su longitud empezando por la parte cercana al mango.2. Tome una asa del cultivo que va a inocular y haga una serie de estrías en un lado de la caja con movimientos rápidos de la mano. Dé la vuelta a su caja y flamee nuevamente su asa, tocando sólo las últimas estrías una o dos veces, haga nuevas estrías en ángulo recto a las primeras (pero sin volverlas a tocar). Otra vez dé la vuelta a la caja, flamee su asa y repita el procedimiento. Después de flamear su asa en cada serie de estrías asegúrese de que esté fría antes de continuar estriando. Un buen aislamiento depende de hacer el mayor número posible de estrías en cada lado de la caja. Sin embargo tenga cuidado de no rasgar el agar al hacer sus estrías.3. Proceda de igual manera con todas las cepas proporcionadas.4. Incube todas las placas a 35°C por 24 horas. 5. Marcar todas las cajas y tubos con:Nombre o número de equipoFecha y hora de sembradoMicroorganismo (género y especie bien claros)Grupo.

Colonias aisladas al final de la siembra por estría

Se esteriliza el asa y luego se toma una muestra del tubo

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

MATERIALES

Placas Petri Asa de siembra Papel craft EQUIPOS Estufa Mechero de bunsen Autoclave

PROCEDIMIENTO:

Antes de realizar la siembra, se debe plaquear los medios de cultivos, preparados durante el desarrollo de las prácticas anteriores. El procedimiento se realizara en asepsia, para evitar la contaminación.o Primero se calentaran los medios de cultivo y esperar a que se

vuelvan a estado líquido, en el Baño María a 90ºC.o Se tomara cada placa Petri estéril y delante del mechero se le

adicionara un volumen aprox. de 15 ml del medio de cultivo enfriado a 55ºC.

o Se sellara la placa y se esperara a que se solidifique el medio para proceder a invertir la placa e incubar.

Aislamiento por el método de estriado por planoso Quemar el asa de siembra al rojo, y destapar el frasco en el cual se

encuentra la muestra con el dedo meñique y margen cubital de la mano derecha.

o Cargar el asa en aro con el inoculo del cultivo. Flamear previamente la boca del tubo antes y después de extraída la muestra.

o Tomar con la mano izquierda la placa Petri con agar, el dedo índice actúa como bisagra y levantar con el dedo pulgar, la tapa de la placa. Realizar todo ello a la altura del mechero.

o Descargar el inoculo en un punto de la capa superficial de la placa Petri y con el asa misma, describir las estrías en el primer plano, hacer un cuarto de giro a la placa y describir las estrías en segundo plano y así hasta completar un tercer plano, cuidando de no romper el medio.

o Dejar caer suavemente la tapa de la placa con el control de los dedos pulgar e índice.

o Rotular los datos sobre el dorso de la placa Petri, escribiendo: nombre del grupo, tipo de siembra y fecha.

o Incubar a 37º C durante 24 a 48 horas, colocando las placas en la estufa en posición invertida.

Aislamiento por el método de diseminación o Depositar una gota del inoculo sobre la superficie del medio. Cerrar la

placa a la llama del mechero.o Colocar la placa sobre la mesa y mediante movimientos circulares

sobre la mesa lograremos que el cultivo se esparza sobre todo el medio.

o Rotular el dorso de la placa Petri, escribiendo: nombre del grupo, tipo de siembra y fecha.

o Incubar a 37ºC durante 24 a 48 horas, colocando las placas en la estufa en posición invertida.

V. RESULTADOS:

En el siguiente cuadro se muestra el orden en el cual se cultivó cada muestra en cada medio de cultivo:

Placa nº Medio de cultivo

Método de aislamiento

Muestra

1. MAC CONKEY DISEMINADO LECHUGA2. MAC CONKEY ESTRIADO QUESO3. STANDARD ESTRIADO HUEVO4. STANDARD ESTRIADO LECHUGA5. STANDARD DISEMINADO AGUA RESIDUAL6. BAIRD

PARKERESTRIADO VESTIBULO

NASAL7. BAIRD

PARKERESTRIADO MUCOSIDAD

NASAL8. AGAR EMB ESTRIADO QUESO9. AGAR EMB ESTRIADO MAYONESA

VI. CONCLUSIONES

Se debe realizar un correcto método de aislamiento siguiendo las pautas dadas por el profesor

Al momento de inocular la muestra en el medio de cultivo evitar romper o quebrar el medio, ya que esto malograría muestro trabajo en el medio de cultivo al momento de sembrar y no obtendríamos los resultados deseados.

VII. CUESTIONARIO

1. Explique las recomendaciones generales que se debe tener en cuenta para realizar un adecuado aislamiento de microorganismos.Esterilizar el área y los materiales de trabajo con alcohol y en la autoclave respectivamente.

Se flamea los instrumentos a utilizar, para crear alrededor de ellos un área esterilizada, principalmente la boquilla de los tubos de ensayo o alrededor de las placas.

2. ¿Cuáles son las muestras problemas que pueden tomarse y cuáles son las normas específicas para recolectarlas?Las muestras problemas pueden ser de tres tipos:

Muestras de aire, agua y sedimentos

Estos se rigen por los protocolos para la toma de muestra según el tipo de muestra y el tipo de estudio que se realizara en dichas muestras

3. ¿Cuál es la finalidad del aislamiento de microorganismos?Para poder obtener una muestra pura, sin que esta contenga otro tipo de microorganismos no deseados.

4. ¿Qué es un clon?Conjunto de individuos genéticamente idénticos que desciende de un mismo individuo.

5. Explique los métodos para el aislamiento y cultivo de bacterias anaerobiasMedios enriquecidos, no selectivos, selectivos y diferenciales

Agar Brucella, Agar Schaedler, Agar Bacteroides, Agar Alcohol Fenil – Etilico, Agar con yema de huevo.

Sistema de incubación en anaerobiosis.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf

http://microdonto.files.wordpress.com/2010/03/cultivo-de-microorganismos2.pdf

PRACTICA NO8 MORFOLOGIA DE COLONIAS

I. INTRODUCCION:Cuando tienes un cultivo en agar (caja petri)  siempre es relevante    anotar la morfología colonial (colonias aisladas) de la cepa bacteriana para facilitar la identificación.

Generalmente se reporta la morfología colonial tal como uno la percibe, por ejemplo si se ves que las colonias bacterianas son como puntitos, pues reportan que son puntiformes, si son lisas pues reportan que son lisas, si observas que están como moco, pues reportan que están mucosas, si su color es amarillento pues reportan que son de color amarillento,  y así sucesivamente., también se puede agregar características que se consideren importantes para identificarlas.

II. OBJETIVOS: Reconocer los principales caracteres para la descripción de colonias

bacterianas Relacionar la morfología colonial con la capacidad tintorial.

III. MARCO TEORICO

MORFOLOGIA DE COLONIAS BACTERIANAS

Las colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células. El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico. El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo. La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria. La identificación presuntiva o preliminar de una bacteria se basa en la morfología colonial, para ello se forma en cuenta las siguientes características:

1. TAMAÑO: 

o Tamaño pequeño: colonias puntiformes con aproximadamente 0,5 mm de diámetro o inferiores.

o Tamaño mediano: de 1 a 2 mm de diámetro.

o Tamaño grande: de 4 a 6 mm de diámetro.

o Tamaño muy grande: colonias extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie del medio de cultivo.

2. FORMA DE COLONIAS

3. BORDES o Enteroo Onduladoo Lobuladoo Erosionadoo Filamentosoo Rizado

4. ELEVACION

5. SUPERFICIE o Lisa o Rugosa o Plegada

6. CONSISTENCIA (probarla con el asa) o Cremosa

o Membranosa

7. COLOR Se usan términos comunes para definirlo y se especifica si el pigmento producido difusible o no.

Depende de las especies Depende del medio de cultivo Depende de nutrientes Muy variado

8. CARACTERÍSTICAS ÓPTICAS

o LUZ TRANSMITIDA (observar a través de la colonia) o Opaca: no permite el paso de luz o Traslúcida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad de los

objetos observados a través de la colonia. o Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramente los

objetos observados a través de la colonia.

o LUZ REFLEJADA (observar la superficie de la colonia) o Opaca o Brillante

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Materiales

Cubreobjetos y portaobjetos Asa de siembra Mechero de bunsen Microscopio óptico Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO:

o Seleccionar 5 colonias bacterianas y marcarlaso Con los cuidados indicados por el profesor, proceder a la descripción de

cada colonia, considerando los principales caracteres como forma, tamaño, borde, elevación , textura de la superficie, consistencia, grado de adherencia al medio, cromogénesis.

o Realizar la coloración Gram de cada colonia descrita y observar al microscopio.

V. RESULTADOS:

De las colonias seleccionadas, se hizo la descripción en el siguiente cuadro, según las características indicadas:

Característica COLONIA 1

Medio de cultivo: Mac Conkey

Método: diseminado

Muestra: lechuga

COLONIA 2

Medio de cultivo: Baird Parker

Método: estriado

Muestra: pliegue nasal

COLONIA 3

Medio de cultivo: Baird Parker

Método: estriado

Muestra: vestíbulo nasal

COLONIA 4

Medio de cultivo: Agar EMB

Método: estriado

Muestra: queso

COLONIA 5

Medio de cultivo: standard

Método: estriado

Muestra: huevo

Forma Circular Circular Circular Irregular FusiformeTamaño Puntiformes

pequeñosPuntiformes pequeños

Puntiformes pequeños

Mediano Puntiforme pequeños

Borde Entero Entero Entero Entero Dentado Elevación Convexo Plano Plano Convexo Plano Textura Lisa Lisa Lisa Rugosa Rugosa Consistencia Viscosa Seco Viscosa Viscosa Seco Transparencia Translucido Translucido Translucido Opaca Transparente Cromogénesis Rojo fucsia Crema Crema Lila Amarillo Gram Gram - Gram + Gram +

VI. CUESTIONARIO1. ¿En qué consiste el movimiento post fisión?

Es el movimiento que se realiza luego de producido la fisión bacteriana esta determinara la formación de agrupaciones celulares así como el aislamiento de las células hijas.

2. ¿Qué importancia tiene la producción de pigmentos microbianos en la naturaleza?

Estos cumplen diversas funciones tanto desde un punto de vista ecológico como metabólico ya que puede funcionar como aséptico de otros microorganismos para evitar su crecimiento y por otro lado sirven muchas veces como pigmentos fotosintéticos para la producción de energía.

VII. CONCLUSIONES Se debe tener en cuenta las indicaciones dadas por el profesor

encargado del laboratorio para realizar una correcta práctica de visualización de morfología de colonias.

La morfología de las colonias va a depender del medio de cultivo en el cual se encuentra, del tipo de bacteria que se va a desarrollar en el medio y las condiciones a la cual está expuesta.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS http://microdonto.files.wordpress.com/2009/03/morfologia-de-las-

colonias-bacterianas.pdf http://dentizta.ccadet.unam.mx/Instrumenta/contenido/practicas/

bacteriologia/morfo.htm http://www.docstoc.com/docs/121382370/Morfolog%EF%BF%BDa-de-

la-colonial http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp6.pdf

PRACTICA NO 10 METODO DE ESTUDIO DE LOS HONGOS

I. INTRODUCCION

El estudio de los hongos se realiza a nivel macroscópico y microscópico. El estudio macroscópico se realiza a partir del cultivo puro, describiéndose el detalle sus características más importantes: aspecto, superficie, color, difusión del pigmento en el medio y velocidad de crecimiento.

En el estudio microscópico se realiza; un examen directo con azul de Lactofenol y/o utilizando al método de la cinta adhesiva, y la técnica de micro cultivó para estudiar las estructuras de reproducción de los hongos.

II. OBJETIVOS

Realizar preparaciones en fresco de distintas especies de mohos Observar e identificar la morfología de los hongos

III. MARCO TEORICO

METODOS DE ESTUDIOS DE HONGOS

LOS HONGOS MICROSCOPICOS

Son organismos pertenecientes al reino Fungi, con nutrición heterótrofa. Poseen una pared celular de quitina (carecen de celulosa) y pueden ser parásitos, que causan enfermedades al hombre y otros animales y a vegetales, o saprófitos, que se desarrollan sobre materia orgánica en descomposición.

Hay hongos unicelulares (levaduras) y pluricelulares, con organización tipo talo, formadospor filamentos ramificados y tabicados llamados hifas cuyo conjunto constituye el micelio.

Los mohos son hongos filamentosos microscópicos, por ejemplo, el género Mucor. Pueden reproducirse asexualmente (por gemación, esporulación o fragmentación) o sexualmente.

METODOS DE MONTAJES:a) MÉTODO DE MONTAJE HÚMEDO

El procedimiento se lleva a cabo con el ansa de gancho o con una aguja montada sobre un trozo de varilla, se procede tomando una pequeña porción de la colonia a estudiar (a veces es necesario ayudarse con otra ansa). La muestra debe tomarse de un sitio intermedio entre el centro y la periferia de la colonia. Este pequeño fragmento de colonia se transfiere a una gota de

lactofenol azul de algodón en un portaobjeto y se cubre con un cubreobjeto. Se presiona suavemente directamente sobre el fragmento de la colonia para deprimir las hifas y otras estructuras y permitir un mejor examen microscópico.

b) PREPARACIÓN EN FRESCO DE MOHOS

      TÉCNICA

Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa. Realizar la misma operación en otro portaobjetos que se usará para lavar la muestra.

Tomar el material a observar en una mínima cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa, los conidióforos.

Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que será ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidióforos), se aplastarán éstos ligeramente sobre la gota o se seccionarán con un bisturí.

Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado.

Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios.

c) MÉTODO DE MONTAJE CON CINTA ADHESIVA

Se aconseja usar cinta adhesiva de alta transparencia. Se hace un doblez de una tira de 4 cm, con el lado adhesivo hacia afuera, y se sostiene entre los dedos pulgar e índice. El lado adhesivo se presiona firmemente contra la superficie de la colonia del hongo. El micelio aéreo se adhiere a la superficie y puede separarse del resto.

Las tiras de cinta inoculadas se colocan en una gotita de lactofenol-azul de algodón en un portaobjeto.

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

MATERIAL:

o Microscopioo Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y

desengrasados con alcoholo Aguja enmangada o lancetao Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongoso Solución de Lugol

1. EXAMEN DIRECTO

Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de Lugol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparación quede demasiado gruesa.

Tomar la muestra a observar en una mínima cantidad con agujas finas o lancetas arrancando la base y disponerlo con cuidado sobre la gota colocada previamente en el portaobjetos.

Colocar el cubreobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas.

Llevar al microscopio para su observación.

V. RESULTADOS

Luego de llevar a l microscopio para su observación tenemos lo siguiente:

MUESTRA DE TOMATE MUESTRA DE MOHO DE PAN

Se lograron observar hifas y esporangioforo

Se observa que hay hifas y esporangios

VI. CONCLUSIONES

Pudimos observar que en las frutas enmohecidas se lograron observar hongos al hacerle un montaje y llevarlo al microscopio.

Podemos diferenciar en cada muestra se logró encontrar dos tipos diferentes de hifas que los caracterizan.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

http://www.biologia.edu.ar/micologia/13_micologia.htm http://www.joseacortes.com/practicas/hongos.htm

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