CONTROLE DE POPULAÇÕES

MICROBIANAS

Prof. Ary Fernandes Junior

Departamento de Microbiologia e Imunologia

Instituto de Biociências - UNESP

Distrito de Rubião Júnior s/n

CEP 18618-000/ Botucatu/ SP /Brasil

Tel. 14 3811. 6240/6058 - fax 14 3815 3744

ary@ibb.unesp.br

Dessecação e Salga

Egípcios: Embalsamento

Persas: Recipientes de prata e cobre para água

Ignaz Phillip Semmelweis (1818-1865)

Joseph Lister: Técnicas anti-séptica em operações cirúrgicas (uso de fenol para reduzir

incidência de infecção)

Controle de Populações Microbianas: ????

Alguns princípios importantes

Levar em conta o número e natureza dos microrganismos presentes no material.

O efeito normalmente não é instantâneo (tempo de exposição);

O agente deve afetar diretamente o microrganismo;

Destruir, inibir ou

remover

microrganismos

Microrganismos em números aceitáveis ou

ausência

dos mesmos

Controle da

população

microbiana

Agentes físicos Agentes químicos

Escolha de um método ??

Material

Objetivos

Algumas Definições

Esterilização: Destruição de toda e qualquer

forma de vida (formas vegetativas, esporos,

fungos, vírus, etc) de um material

Desinfecção: Destruição de microrganismos

patogênicos presentes num material inanimado

(Desinfetantes)

Anti-sepsia: Destruição de microrganismos

patogênicos num tecido vivo (Antissépticos)

(Caracteristicas ??)

Assepsia: Conjunto de medidas para prevenir a

entrada de microrganismos num material (vivo

ou não) ou reduzir o número dos já presentes

(Profilaxia)

AGENTES FÍSICOS

Calor (Seco e Úmido)

-Tempo de Redução Decimal (TRD ou D): Tempo

(minutos) em que 90 % de uma população microbiana

em uma determinada temperatura será morta

-Ponto de Morte Térmica (PMT): Menor temperatura em

que todos os microrganismos em uma suspensão líquida

serão mortos por calor em 10 minutos

-Tempo de Morte Térmica (TMT): Período mínimo de

tempo em que todos os microrganismos serão mortos

D é o tempo, em minutos, em uma determinada temperatura, capaz de

causar uma redução em 90% no número de células ou esporos

presentes numa suspensão, ou, número de minutos necessários para a

curva de sobreviventes atravessar 1 ciclo log.

D = 5 min

101

102

103

Calor Seco: Oxidação do Protoplasma

Flambagem (Bico de Bunsen)

Fornos (Forno Pasteur)

Incineração

Bico de Bunsen

Forno Pasteur

Incineração

Calor Úmido Desnaturação de Proteínas

Dissolve lipídeos

Maior poder de penetração Mais eficiente

Fervura: (100C/15 min.)

(Não destroe Esporos e alguns Vírus

(Hepatite A).

Autoclavação: Vapor

d’água sob pressão

(121C/15’)

(Autoclave) Uso

para esterilização de

materiais

(Meios de cultura,

instrumento

cirúrgicos, vidrarias,

etc).

Pasteurização:

Eliminar microrganismos patogênicos de

substâncias que não suportam temperaturas

elevadas.

Tipos Lenta (62,8C/30 min) 5C.

Rápida (71,7C/15 seg.) 5C

(Reduz contagem entre 97 e 99%)

UHT – Ultra High Temperature

ESQUEMA DE PASTEURIZAÇÃO DO LEITE

(1)-Leite Crú; (2)-Bomba; (3)-Água Fria; (4)-Água Quente; (5)-Homogeneizador; (6)-Serpentina de Controle; (7)-Água Superaquecida; (8)-Vapor de Aquecimento; (9)-Leite

Pasteurizado

Pasteurização: O leite é aquecido a 65ºC e depois

resfriado a 0ºC em banho-maria, para eliminar os

microorganismos

Tindalização (= Esterilização fracionada)

(Uso para meios nutritivos)

70 a 100C/30 min. Incubação

100oC/30 min – 1º dia

Incubar 37oC/24 h

100oC/30 min – 2º dia

Incubar 37oC/24 h

100oC/30 min – 3º dia

Baixas Temperaturas (-70 a –196oC) ????

Preserva Nitrogênio líquido

-196o C

Freezer

-70o C

Filtração: Separa microrganismos de materiais

fluídos (Remoção mecânica).

Eficiência - Depende da malha do filtro

( 1 m)

Ex. : Tampão de algodão até tipos especiais

(Berkefeld , Seitz , Ésteres de celulose, etc.)

Câmara de Fluxo Laminar (Filtração e Ultra Violeta)

Radiações Não Ionizantes (Ultra-Violeta)

Ionizantes (Beta, Gama, Raio X)

Baixo Poder de Penetração Usos ???

UV = 210 a 328 nm (240 a 280 nm)

(Absorvida pelo DNA e proteínas)

Efeitos Indiretos Formação de O3 no ar e

H2O2 na água.

Efeitos Diretos Mutação,

Formação de Dímeros de

Timina e Inibição de Enzimas;

Aparelhagem dispendiosa

(Uso para substâncias e materiais sensíveis

ao calor)

Radiações Ionizantes (X, e Gama)

(Elevado poder de penetração Alimentos

embalados)

Ioniza macromoléculas Altera composição

química da célula

Na fonte de cobalto tipo panorâmica, os materiais, já em

sua embalagem final, são submetidos à radiação gama

Vibrações Sônicas: 200.000 Hz

Mecanismo: Gases em solução na célula

Microbolhas Choques com a parede

Lise da célula bacteriana (Cavitação)

Microondas

Pressão Osmótica

Dessecação

AGENTES QUÍMICOS

Agem sobre estruturas da célula. Dificilmente

as bactérias tornam-se resistentes.

Agem sobre rotas metabólicas e estruturas da

célula bacteriana. São os antibióticos e

quimioterápicos.

Antissépticos, Desinfetantes e Detergentes

Drogas Antimicrobianas

Síntese de

lipídeos

Streptomyces platensis

Platensimicina

Azitromicina

Claritromicina

Estreptograminas

(Quinopristina/

Dalfopristina)

Tigeciclina

Mecanismos de Ação

Álcoois: Etanol (Desinfetante e/ou Antisséptico),

Isopropílico (+ eficiente)

DESNATURAÇÃO DE PROTEÍNAS

Soluções aquosas (50 a 70%) são mais eficientes.

Espectro de Ação: Gram (+) e (-), BAAR (Fungos,

Vírus) (Pouco ativo contra esporos)

Tempo de exposição: 10 a 15 min.

Antisséptico : Uso limitado (Hexaclorofeno)

Fenóis e Derivados

Desinfetante: (5%) (Duplofen)

Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - ), BAAR.

Tempo de exposição: Efeito é imediato.

Coeficiente fenólico

ALTERAÇÃO NA PERMEABILIDADE

DA MEMBRANA CELULAR

Catiônicos: Carga positiva (Quaternários de Amônio)

Aniônicos: Carga negativa ( Elevadas concentrações)

Não iônicos: Sem cargas (Só capacidade limpadora)

Detergentes (Surfactantes)

Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - )

Tempo de exposição: 10 a 30 min.

Produto com atividade

antimicrobiana e de

detergência. É formulado a

partir do princípio ativo

Cloreto de Alquil

Dimetil Benzil Amônio,

que lhe confere a ação

antimicrobiana e o Nonil

Fenol Etoxilado (Tensoativo

não iônico), que lhe confere

a ação de detergência.

INATIVAÇÃO DE ENZIMAS

R-SH -2H

R-S-S-R

R-SH

H2O2 (Ação Antisséptica), Iodo (Antisséptico (PVPI),

Iodoforos, Cloro (Antisséptico - Clorohexidina),

Sanitizador (Hipoclorito), KMnO4 (Antisséptico (1:1000)

Oxidam Grupamentos Sulfidrilas:

Agem sobre grupamentos sulfidrilas livres (R-SH)

Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - ), BAAR

(Pouco ativos sobre esporos)

Tempo de exposição: Efeito imediato

O princípio ativo do PVPI

(polivinilpirrolidona-iodo) é o iodo

que com suas propriedades

germicidas amplamente

conhecidas, reduz a flora

bacteriana em curto espaço de

tempo

Substituem Grupamentos Sulfidrilas:

Metais Pesados: Mertiolate, Mercúrio Cromo, Prata -

Prata coloidal, Nitrato de prata (AgNO3) (oftalmia

gonocócica) (1%), Argirol (Proteinato de prata)

Cl

R-SH R-S

+ Hg Hg + 2 HCl

R-SH R-S

Cl

Espectro de Ação: Gram ( + ) e ( - )

Tempo de exposição: Só agem enquanto em contato

Óxido de Etileno Gás Tóxico e Explosivo.

AGENTES ALQUILANTES Substituem átomos de hidrogênio em radicais

(R-NH2, OH, R-SH, R-COOH)

Formaldeído Usado na forma gasosa (Fumegação)

Glutaraldeído Solução Aquosa (Glutarex)

Espectro de Ação: Gram (+) e (-), BAAR e esporos.

Tempo de exposição: Curto sobre formas vegetativas

Prolongado sobre esporos

UM BOM DESINFETANTE.

Não provocar danos ao homem e animais durante aplicação,

Econômico.

Fácil aplicação,

Tolerado por materiais,

Estabilidade em sua composição química,

Perda mínima de potência por ação do ambiente,

Ação rápida e irreversível

Espectro de ação amplo,

Lavar as mãos

ainda continua

sendo uma das

soluções para

os problemas

enfrentados

pela

Microbiologia

Clínica

MUITO OBRIGADO