Caracterização Molecular e sorológica do Vírus da mancha amarela do íris, uma nova e distinta espécie de Tospovirus; Apresentador: Jefferson Lucas de A. Silva; Prof. Milton Luiz da Paz Lima

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CORTS, I., LIVIERATOS, I. C., DERKS, A., PETERS, D., AND KORMELINK, R. 1998. Molecular and serological characterization of iris yellow spot virus, a new and distinct tospovirus species. Phytopathology 88:1276-1282.

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  • 1. Instituto Federal Goiano cmpus Uruta. Curso de Agronomia Disciplina de Fitopatologia Caracterizao Molecular e sorolgica do Vrus da mancha amarela do ris, uma nova e distinta espcie de Tospovirus. Apresentador: Jefferson Lucas deA. Silva CORTS, I., LIVIERATOS, I. C., DERKS, A., PETERS, D., AND KORMELINK, R. 1998. Molecular and serological characterization of iris yellow spot virus, a new and distinct tospovirus species. Phytopathology 88:1276-1282. 1

2. 2 3. Introduo iris yellow spot virus (IYSV) Famlia Bunyaviridae gneroTospovirus. tomato spotted wilt virus (TSWV), tomato chlorotic spot virus (TCSV), groundnut ringspot virus (GRSV), impatiens necrotic spot virus (INSV), watermelon silver mottle virus (WSMV), peanut bud necrosis virus (PBNV). 3 4. 4 5. Objetivo Aqui, descrevemos este novo tospovrus isolado do ris hollandica cultivado na Holanda, para o qual o nome da mancha amarela do ris (IYSV), os dados apresentados neste trabalho demonstram que este vrus um tospovrus distinto e novo, pertencente a nenhum dos sorogrupos descritos. 5 6. Materiais e Mtodos IYSV isolado a partir de I. hollandica. Inoculado em Nicotiana benthamiana . Tospovrus isolados:TSWV BR-01,TCSV BR-03, GRSV SA-05, INSV NL-07, eWSMV Tospo-a. Tampo de sulfato de sdio 0,01 M, pH 7,0, contendo sulfito de sdio a 0,1%. N. benthamiana, N. glutinosa, N. rustica, N. clevelandii, Gomphrena globosa, Chenopodium quinoa, Chenopodium amaranticolor, Emilia sonchifolia, Cucurbita sativus,Vigna unguiculata, Phaseolus vulgaris, Pisum sativum, Datura stramonium, Lycopersicum esculentum, Petunia hybrida, e Impatiens spp. Thrips tabaci. Frankliniella occidentalis. Coelhos foram utilizados para a produo de soro anti-soros para o IYSV. 6 7. Resultados e Discusso Fig. 4.Anlise de RNA nucleocapsideo purificada do vrus da mancha amarela do ris em um desnaturante 1% de gel de agarose. Como controle, tomato spotted wilt virus (TSWV) nucleocpside RNA foi includo.As dimenses dos segmentos de RNA deTSWV est indicado no lado direito do gel em quilobases. 7 8. Resultados e Discusso Fig. 5. Clonagem estratgia para o vrus da mancha amarela do ris S RNA.As setas indicam os iniciadores utilizados para a sntese de cDNA e de reao em cadeia da polimerase (PCR). Os clones derivados de PCR so indicados com um P e os clones de cDNA com uma C. Os clones foram sequenciados maiores ou por subclonagem ou por sequenciao directa com iniciadores. Os subclones so designados com o nome de clone original e a designao da enzima utilizada para a digesto ou iniciador utilizado. 8 9. Resultados e Discusso Fig. 7. Expresso do vrus da mancha amarela do ris (IYSV) nucleoprotena em Escherichia coli. Produo de protena de N em E. coli foi induzida com isopropil-b- D-thiogalactopyranoside (IPTG) e o extrato de protena total foi resolvido em um dodecil sulfato de sdio a 15% em gel de poliacrilamida antes de transferir para um polivinilideno- (PVDF) da membrana. OWestern blot foi analisado com 1 ug de um soro policlonal anti-N IYSV por ml. Purificada nucleocapsid IYSV materiais e PET-transformado-11T BL- 21 clulas foram includos como controles. Marcadores de tamanho baixo peso molecular (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sucia) so indicados esquerda. 9 10. Fig. 8. rvore filogentica mostrando a relao do vrus da mancha amarela do ris para as outras espcies dentro do gnero representativosTospovirus, com base na sequncia de aminocidos da protena N.A rvore foi construda usando Engavetamento (gap pena criao = 12; lacuna extenso pena = 4) do pacote GCG. Resultados e Discusso 10 11. Concluses Neste artigo, apresentamos esses dados, bem como alguns dados biolgicos, de um novo tospovrus isolado a partir de culturas de ris na Holanda. Dados sobre transmisso por tripes, sorologia, gama de hospedeiros, e as sequncias de RNA S demonstram inequivocamente que representa um novo tospovrus para que o nome vrus da mancha amarela do ris (IYSV) proposto. Isto traz o total de 11 distintas espcies dentro do gneroTospovrus. 11 12. OBRIGADO 12 13. Literatura Citada17. Kormelink, R., de Haan, P., Meurs, C., Peters, D., and Goldbach, R. 1992. The nucleotide sequence of the M RNA segment of tomato spotted wilt virus, a bunyavirus with two ambisense RNA segments. J. Gen. Virol. 73:2795-2804. 18. Kormelink, R., Kitajima, E. W., De Haan, P., Zuidema, D., Peters, D., and Goldbach, R. 1991. The nonstructural protein (NSS) encoded by the ambisense S RNA segment of tomato spotted wilt virus is associated with fibrous structures in infected plant cells. Virology 181:459-468. 19. Kormelink, R., Storms, M., van Lent, J., Peters, D., and Goldbach, R. W. 1994. Expression and subcellular localization of the NSM protein of tomato spotted wilt virus (TSWV), a putative viral movement protein. Virology 200:56-65. 20. Laemmli, U. K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature (Lond.) 227:680-685. 21. Law, M. D., and Moyer, J. W. 1990. A tomato spotted wilt-like virus with serologically distinct N protein. J. Gen. Virol. 71:933-938. 22. Law, M. D., Speck, J., and Moyer, J. W. 1991. Nucleotide sequence of the 3 non-coding region and the N gene of the S RNA of a serologically distinct tospovirus. J. Gen. Virol. 72:2579-2601. 23. Maiss, E., Ivanova, L., Breyel, E., and Adam, G. 1991. Cloning and sequencing of the S RNA from a Bulgarian isolate of tomato spotted wilt virus. J. Gen. Virol. 72:2597-2601. 24. Maniatis, T., Fritsch, E. F., and Sambrook, K. 1982. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Springs Harbor Laboratory, Cold Springs Harbor, NY. 25. Reddy, D. V. R., Ratna, A. S., Sudarshana, M. R., Poul, F., and Kumar, I. K. 1992. Serological relationships and purification of bud necrosis virus, a tospovirus occurring in peanut (Arachis hypogaea L.) in India. Ann. Appl. Biol. 120:279-286. 26. Sangler, F., Nicklen, S., and Coulson, A. R. 1977. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 74:5463-5467. 27. Satyanarayana, T., Mitchell, S. E., Reddy, D. V. R., Brown, S., Kresovich, S., Jarret, R., Naidu, R. A., and Demski, J. W. 1996. Peanut bud necrosis tospovirus S RNA: Complete nucleotide sequence, genome organization and homology to other tospoviruses. Arch. Virol. 141:85-98. 28. Struthers, J. K., and Swanepoel, R. 1982. Identification of a major nonstructural protein in the nuclei of Rift Valley fever virus-infected cells. J. Gen. Virol. 60:381-384. 29. Swanepoel, R., and Blackburn, N. K. 1977. Demonstration of nuclear immunofluorescence in Rift Valley fever infected cells. J. Gen. Virol. 34:557-561. 30. van Kammen, A., Henstra, S., and Ie, T. S. 1966. Morphology of tomato spotted wilt virus. Virology 30:574-577. 31. Vaira, A. M., Roggero, P., Luisoni, E., Masenga, V., Milne, R. G., and Lisa, V. 1993. Characterization of 2 tospoviruses in ItalyTomato spotted wilt and impatiens necrotic spot. Plant Pathol. 42:530-542. 32. Yeh, S.-D., and Chang, T. F. 1995. Nucleotide sequence of the N gene of watermelon silver mottle virus, a proposed new member of the genus tospovirus. Phytopathology 85:58-64. 33. Yeh, S.-D., Lin, Y.-C., Cheng, Y. H., Jih, C.-L., Chen, M.-L., and Chen, C-C. 1992. Identification of tomato spotted wilt-like virus infecting watermelon in Taiwan. Plant Dis. 76:835-840. 13 14. Literatura Citada1. Bailey, J. M., and Davidson, N. 1976. Methylmercury as a reversible denaturating agent for agarose gel electrophoresis. Anal. Biochem. 70:75-85. 2. Clark, M. F., and Adams, A. N. 1977. Characteristics of the microplate method of enzyme linked immunosorbent assay for the detection of plant viruses. J. Gen. Virol. 34:475-483. 3. De vila, A. C., de Haan, P., Kitajima, E., Kormelink, R., Resende, R. de O., Goldbach, R., and Peters, D. 1992. Characterization of a distinct isolate of tomato spotted wilt virus (TSWV) from Impatiens sp. in the Netherlands. J. Phytopathol. 134:133-151. 4. De vila, A. C., de Haan, P., Kormelink, R., Resende, R. de O., Goldbach, R., and Peters, D. 1993. Classification of tospoviruses based on phylogeny of nucleoprotein gene sequences. J. Gen. Virol. 74:153-159. 5. De vila, A. C., de Haan, P., Kormelink, R., Resende, R. de O., van Poelwijk, F., Wijkamp, I., Goldbach, R., and Peters, D. 1994. Tomato spotted wilt virus: Genome structure, classification, detection and genetically engineered resistance. Pages 95-106 in: Virology in the Tropics. N. Rishi, K. L. Ahuja, and B. P. Singh, eds. Malhotra Publishing House, New Delhi. 6. De vila, A. C., de Haan, P., Smeets, M. L. L., Resende, R. de O., Kormelink, R., Kitajima, E., Goldbach, R., and Peters, D. 1992b. Distinct levels of relationships between tospovirus isolates. Arch. Virol. 128:211-227. 7. De vila, A. C., Huguenot, C., Resende, R. de O., Kitajima, E. W., Goldbach, R. W., and Peters, D. 1990. Serological differentiation of 20 isolates of tomato spotted wilt virus. J. Gen. Virol. 71:2801-2807. 8. De Haan, P., De vila, A. C., Kormelink, R., Westerbroek, A., Gielen, J. J. L., Peters, D., and Goldbach, R. 1992. The nucleotide sequence of the S RNA of impatiens necrotic spot virus, a novel tospovirus. FEBS (Fed. Eur. Biochem. Soc.) Lett. 306:27-32. 9. De Haan, P., Wagemakers, L., Goldbach, R., and Peters, D. 1990. The S RNA segment of tomato spotted wilt virus has an ambisense character. J. Gen. Virol. 71:1001-1007. 10. Deveraux, J., Haeberli, P., and Smithies, O. 1984. A comprehensive set of sequence analysis programs for the VAX. Nucleic Acids Res. 12:387-395. 11. Elliot, R. M. 1990. Molecular biology of the Bunyaviridae. J. Gen. Virol. 73:501-522. 12. Francki, R. I. B., Fauquet, C. M., Knudson, D. D., and Brown, F. 1991. Fifth report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Arch. Virol. Suppl. 2:1-450. 13. Ghanekar, A. M., Reddy, D. V. R., Iizuka, N., Amin, P. W., and Gibbson, R. W. 1979. Bud necrosis of groundnut (Arachis hypogaea) in India caused by tomato spotted wilt virus. Ann. Appl. Biol. 93:173-179. 14. Goldbach, R., and Kuo, G. 1996. Introduction. International symposium on tospoviruses and thrips of floral and vegetable crops. Acta Hortic. 431:21-26. 15. Gubler, V. G., and Hoffman, J. 1983. A simple and very efficient method for generating cDNA libraries. Gene 25:263-269. 16. Heinze, C., Maiss, E., Adam, G., and Casper, R. 1995. The complete nucleotide sequence of the S RNA of a new Tospovirus species, representing serogroup IV. Phytopathology 85:683-690.14

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