biologia molecular 2.a

INFORME Nº 2BIOLOGIA MOLECULARProf: MSc. Liliana Yaneth Suárez Contreras

MEDICIONES CON MICROPIPETA

1 de Abril

A. Dayana Vásquez* B. Pedro Acero*, C. Diana Tarazona *

A Dayana Andrea Vásquez Barajas (1610457) E-mail: [email protected] Pedro Luis Acero Arroyave (1610434) E-mail: [email protected] Diana Milena Tarazona Serrano (1610315) E-mail: [email protected]

INTRODUCCION Y OBJETIVOS

La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para medir absorber pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas. Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales, denominados p20, p50 y p100, admiten un máximo de 20, 50 y 100 μl, respectivamente. En los laboratorios de Biología Molecular, el manejo del equipo básico es fundamental. Además, se requiere del conocimiento de las distintas unidades de medición y su correcta conversión, ya que dichos procedimientos se utilizan a diario en distintas labores relacionadas con el trabajo. [1]

En las de volumen variable, se puede seleccionar un volumen dentro de un rango de valores determinado. La micropipeta más comúnmente usada en los laboratorios de análisis fue introducida por la compañía Eppendorf y este nombre se adoptó de forma genérica para estos dispositivos, aunque hoy en día existen una gran cantidad de

compañías y modelos similares que funcionan bajo un mismo principio de pistones para operar.[2]

Figura 1. Esquema general de las micropipetas marca BioRad a utilizar durante el curso. A1: botón pulsador, A2: tornillo del botón pulsador, B: rueda dentada de graduación del volumen, C: cono de la pipeta, D: expulsor de punta y E: punta o “tip” descartable. Tomado del manual de manejo de micropipetas Biorad, BR/06/05

*Estudiantes de Ingeniería Biotecnológica. Facultad de ciencias Agrarias y del Ambiente. Universidad Francisco de Paula Santander. I semestre del 2011. San José de Cúcuta.Página 1

ACERO, VASQUEZ Y TARAZONA

Mediante su conocimiento se busca identificar las partes, describir las recomendaciones básicas y técnicas para el uso y manejo de micropipetas digitales y la determinación de la precisión de sus medidas.

MATERIALES Y METODOS

Los rangos de pipetas a manejar son los siguientes y sus respectivas puntas; y diversas soluciones jabonosas con diversos colores que simulen diferentes sustancias, reactivos entre otras

Micropipetas de rango 05-10 µlMicropipetas de rango 10-100 µlMicropipetas de rango 100-1000 µlPuntas transparentesPuntas amarillasPuntas azules

OBSERVACION Y RECONOCIMIENTO

Reconocer las partes de las micropipetas, su debido manejo y los diferentes rangos volumétricos caracterizados con un color determinado

y de igual forma las puntas que le corresponde a cada una.

MICROPIPETEADO DE VOLÚMENES PEQUEÑOS < 20µL

Simulamos una mezcla de reacción para digestión con enzimas de restricción, utilizando micropipeta de 0.5 -10 µL.

Marcar tres tubos de 1.5 ml. (figura A)

Haga una matriz de distribución y adicione a cada tubo lo establecido teniendo en cuenta las puntas a utilizar y el no contaminarlas, debe diferenciarlas y al mismo tiempo tener cuidado en el pase de una a otra solución deben descartarse la punta utilizada anteriormente.

Cuadre el volumen deseado en la micropipeta para la toma de la solución y sin tocar las puntas correspondientes adicione una de ellas en la micropipeta.(Figura B)

*Estudiantes de Ingeniería Biotecnológica. Facultad de ciencias Agrarias y del Ambiente. Universidad Francisco de Paula Santander. I semestre del 2011. San José de Cúcuta. Página 2

A

TUBO Sln A Sln B Sln C Sln D1 4 µL 5 µL 1µL -----2 4 µL 5 µL ------ 1 µL3 4 µL 4 µL 1µL 1 µL

ACERO, VASQUEZ Y TARAZONA

Introduzca la micropipeta hasta el primer tope y tome la solución soltando dicho tope, (figura c) correspondiente respetando el orden de adición sin contaminar las puntas o el mezclar soluciones.

Agregué o adicione cuidadosamente la solución sin tocar los bordes presionado el embolo hasta el segundo tope. (figura D)

Por ultimo descarte la punta utilizada en hipoclorito.

Verifique si obtuvo un volumen de reacción final de 10 µL. Tenga en cuenta lo siguiente: Permaneció algún residuo en el tubo?, desocupo el tubo pero se formó burbuja de aire en la punta? Mida

el volumen con el cual lleno completamente la punta?.

Micropipeteado de volúmenes de 20- 1000µL

Simulamos que es la extracción de ADN plasmidico, utilizando micropipeta de 20-1000 µL.

Marcar tres tubos de 1.5 ml. (figura E)

Haga una matriz de distribución y adicione a cada tubo lo establecido teniendo en cuenta las puntas a utilizar y el no contaminarlas, debe diferenciarlas y al mismo tiempo tener cuidado en el pase de una a otra solución deben descartarse la punta utilizada anteriormente

TUBO Sln A

Sln B

Sln C Sln D

Sln F

1 100 µL

50 µL

150 µL

180 µL

520 µL

2 150 µL

150 µL

150 µL

------ 550 µL

3 50 µL

----- ------ 200 µL

750 µL

Cuadre el volumen deseado en la micropipeta para la toma de la solución y sin tocar las puntas correspondientes y ponga una de ellas en la micropipeta.


B

C

D

E

ACERO, VASQUEZ Y TARAZONA Repita los pasos del punto

anterior los cales se basan en el mismo principio y los mismos cuidados. Tenga en cuenta el orden de las adiciones a cada tubo y el manejo de los topes.

RESULTADOS

OBSERVACION Y RECONOCIMIENTO

La micropipeta observada es la de menor rango trabajado en laboaratorio que es de 0.5-10µl, identificado en la parte superior de la micropipeta la escala volumétrica y su color característico es el gris, las puntas son las transparentes.

En este caso la pipeta es del siguiente rango 10-100µl el cual está indicado en la parte inferior de la micropipeta y su color característico es el amarillo, de este mismo color son las puntas

Las Pipetas que tiene el color característico azul y de igual color son las puntas son aquellas que manejan la siguiente escala volumétrica de 100-1000µl como viene indicada en la parte superior de la micropipeta


ACERO, VASQUEZ Y TARAZONA El reconocimiento de los topes, el primero para tomar la muestra y para depositarla se lleva a hasta el segundo tope y además el punto de seguridad de cada escala volumétrica la cual impide manejar el volumen deseado y estándar.

MICROPIPETEADO DE VOLÚMENES PEQUEÑOS < 20µL

Mediante la comprobación de los volúmenes en cada tubo que fueron exactos, en los cuales cada uno había 10µl.

TUBOS

Sln Final

1 10 µL2 10 µL3 10 µL

Micropipeteado de volúmenes de 20- 1000µL

Al observar los tubos en la escala volumétrica que traen el 2 y 3 presentan 1000µl y el primero no por lo cual empleamos la comprobación al extraer el volumen de cada tubo y finalmente al tubo numero 1 le falta volumen para completar los 1000µl.

TUBOS

Sln Final

1 <1000µL2 1000 µL3 1000 µL

DISCUSIONES Y CONCLUSIONES

En los laboratorios de Biología Molecular, el manejo del equipo básico es fundamental. Además, se requiere del conocimiento de las distintas unidades de medición y su correcta conversión, ya que dichos procedimientos se utilizan a diario en distintas labores relacionadas con el trabajo o prácticas de laboratorio.

Debido a que la micropipeta tiene un rango de volumen ajustable, es necesario seleccionar el volumen a


ACERO, VASQUEZ Y TARAZONAmedir. Para ello se debe localizar el indicador de volumen, compuesto de tres dígitos que se deben leer de arriba hacia abajo. En la parte más baja del indicador hay una escala que permite el ajuste del volumen al último dígito o decimal permitido según el caso. En las micropipetas de 2 hasta 200 μl, los dígitos negros indican microlitros y los dígitos rojos representan décimas de microlitro. [2]

Las micropipetas son instrumentos de gran ayuda, utilidad por su precisión en la biología molecular, pero para obtener con éxito los resultados de diferentes protocolos o pruebas a desarrollar en esta área se debe tener claro los rangos volumétricos y el manejo de conversiones, pero es indispensable reconocer las partes de la micropipeta y su forma de acción para tener un mejor desempeño a la hora de emplearlas.

Para selección de la punta hay que tener en cuenta que debe ajustarse al cono de la micropipeta. Al insertar la punta en el cuerpo de la pipeta hay que aplicar una fuerte presión con movimiento giratorio para asegurar la hermeticidad. Nunca usar la pipeta con líquidos sin la punta colocada. Es posible que la punta plástica se encuentre en una caja también plástica que facilita su uso. [3]

Al igual que las pipetas sus rangos volumétricos están identificados por un color característicos de esta misma forma la as puntas que utiliza cada una, estas puntas son estériles al trabajar por lo cual no se deben tocar, si no hacer una leve presión para ponerlas en la micropipeta.

A la hora de tomar el volumen deseado y con la escala volumétrica cuadrada en él,

se introduce la punta en la solución pero previamente oprimido el embolo hasta el primer tope, al tomar la muestra este se suelta lentamente y cuidadosamente para evitar alguna burbuja que altere la medición como pudo haber ocurrido en el tubo 1 donde no habían 1000µl ó puede ser alguna falla e imperfección de la micropipeta, y en volúmenes grandes evitar hacer muy rápido la toma por qué parte de la solución puede tocar el filtro de la pipeta y dañarla, se lleva al tubo y se expulsa la solución llevando el embolo hasta el segundo tope.

En conclusión las micropipetas son indispensables para la biología molecular ya que está en su mayoría trabaja con microvolumenes, pero para obtener los resultados deseados es bueno tener un conocimiento de estas, un desempeño adecuado y cuidadoso en su manejo, para evitar alteraciones en las practicas o la perdida de materiales empleados en estas como las soluciones y muchas veces el tiempo empleado

BIBLIOGRAFIA

[1]. YOHN JAIRO GUEVARA BOHÓRQUEZ, RICARDO DANIEL ORTIZ HOYOS. Manejo de micropipetas automáticas y precisión de sus medidas. [en línea] [Citado en 2011-03-31]. Disponible en internet: < http://www.invivored.co.cc/wp-content/uploads/2010/09/Uso-de-micropipetas-Lab-II.pdf

[2]. PRÁCTICA 1. Principios básicos de laboratorio, uso de pipetas y cálculos de utilidad en Bioquímica. [en línea] [Citado en 2011-03-31]. Disponible en internet: <


ACERO, VASQUEZ Y TARAZONAhttp://www.medvet.una.ac.cr/carrera/mva505_Practica1.pdf

[3]. JORGE AZOFEIFA. Mediciones y micropipeteo. [Citado en 2011-03-31]. Disponible en internet: < http://biologia.ucr.ac.cr/profesores/Laboratorio/Practica%201.pdf

[4]. CLAUDIO GARIBAY ORIJEL. Materiales y operaciones frecuentes en el Laboratorio. [Citado en 2011-03-31]. Disponible en internet: < http://personal.us.es/jmorillo/exquimica2/materiales.pdf


http://www.medvet.una.ac.cr/carrera/mva505_Practica1.pdf

http://www.medvet.una.ac.cr/carrera/mva505_Practica1.pdf

biologia molecular 2.a

Documents