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Resumo: 07.001

Insuficiência renal crônica, restrição de sono e sildenafil: consequências renais, cardíacas e sexuais em um modelo animal

Autores 1HIROTSU, C.

1, ALVARENGA, T. A.

1, TUFIK, S.

1, ANDERSEN, M. L.

1 Psicobiologia -

UNIFESP

Apoio Financeiro: Fapesp (#50129-1) e AFIP

Resumo Objetivos A insuficiência renal crônica (IRC) é uma doença que vem crescendo paralelamente ao aumento na incidência de hipertensão arterial sistêmica, e apresenta-se frequentemente acompanhada de alta prevalência de disfunção sexual e distúrbios de sono, fatores que contribuem com a piora da qualidade de vida. Embora a falta de sono seja um fator inerente na vida de indivíduos com IRC, seus efeitos na evolução da doença são desconhecidos. Somado a isso, pouco se sabe sobre os possíveis efeitos renoprotetores e cardiovasculares do sildenafil na IRC. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos do tratamento crônico de sildenafil em ratos com insuficiência renal crônica submetidos à restrição de sono com relação aos parâmetros de: evolução corporal, função renal e sistema cardivascular; perfil metabólico, inflamatório e hormonal; comportamento sexual e sobrevida; morfologia testicular e renal. Métodos Código de Experimentação Animal: 1972/2009. Foram utilizados 140 ratos machos e 60 fêmeas Wistar Hannover com 3 meses de idade. Inicialmente, os animais foram distribuídos em 4 grupos: controle tratado com veículo (CTRL+V), controle tratado com sildenafil (CTRL+S), nefrectomizado tratado com veículo (IRC+V) e nefrectomizado tratado com sildenafil (IRC+S), os quais após 46 dias foram subdistribuídos em: restritos de sono (RS, restrição de sono por 10 dias) ou gaiola-moradia (GM, não restritos de sono). Após o período experimental, foi realizada a avaliação do comportamento sexual, da função renal e cardiovascular, do perfil lipídico e hormonal, bem como análises de concentrações de citocinas pró-inflamatórias. Resultados Os resultados mostram que o sildenafil foi eficaz em reduzir a perda da função renal (F(1,128)=9,04, p < 0,01 – IRC+V+GM (1,41 ± 0,19 mg/dL) possui aumento de creatinina sérica comparado ao CTRL+V+GM (0,38 ± 0,01 mg/dL), IRC+V+RS (0,92 ± 0,09 mg/dL) e IRC+S+GM (0,38 ± 0,03 mg/dL); IRC+V+RS (0,92 ± 0,09 mg/dL) difere de CTRL+V+RS (0,32 ± 0,01 mg/dL); IRC+S+RS (0,38 ± 0,11 mg/dL) difere de CTRL+S+RS (0,34 ± 0,01 mg/dL), desenvolvimento da hipertensão arterial sistêmica (F(1,73)=1,47, p < 0,05), a perda de peso excessiva (F(1,102)=139,5, p < 0,0001), o déficit de ferro circulante (F(1,132)=4,2, p < 0,05), a dislipidemia (F(1,138)=3,2, p < 0,05), a diminuição de testosterona (F(1, 127)=1,63, p < 0,05) e LH (F(1,37)=23,3, p < 0,000) e o aumento de citocinas pró-inflamatórias IL-1α (F(1,65)=5,8, p < 0,05), TNFα (F(1,68)=6,00, p < 0,05) e IL-17 (F(1,64)=2,94, p < 0,05), embora diante da restrição de sono esses efeitos tenham sido atenuados ou abolidos. Com relação ao comportamento sexual, os dados revelam que houve melhora na função sexual nos grupos com IRC tratados com sildenafil [F(1,109)=6,87, p < 0,01 – IRC+V+GM (-9742 ± 450) apresenta índice de atividade sexual (IAS) menor que CTRL+V+GM (-5438 ± 596) e IRC+S+GM (-6741 ± 789); IRC+V+RS (-9359 ± 671) possui IAS menor que CTRL+V+RS (-6069 ± 568); IRC+S+RS (-8179 ± 503) apresenta IAS inferior ao grupo CTRL+S+RS (-4326 ± 921)], independente da condição de sono. Somado a isso, a restrição de sono trouxe benefícios para o comportamento sexual dos animais, provavelmente devido ao aumento de progesterona (F(1,131)=5,87, p < 0,05) e FSH (F(1,41)=10,53, p < 0,01). A sobrevida também foi significativamente aumentada pelo tratamento, reduzindo em 73% o risco de mortalidade (B=-1,32, gl=1, p < 0,05, OR=0,27 IC95%: 0,08 - 0,85). Conclusão O tratamento crônico e precoce com sildenafil apresenta um possível papel como adjuvante na terapêutica das principais comorbidades relacionadas à progressão da IRC. Todavia, sua efetividade depende de uma maior atenção ao estilo de

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vida e à qualidade de sono.

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Resumo: 07.002

AÇÃO DIRETA DA ANGIOTENSINA-(1-7) SOBRE O TROCADOR NA+/H+ (ISOFORMA NHE3) E NA CONCENTRAÇÃO CITOSÓLICA DE CÁLCIO ([Ca2+]i): ESTUDO POR MICROPERFUSÃO TUBULAR PROXIMAL IN VIVO (SEGMENTO S2) E MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA (SEGMENTO S3).

Autores 1CASTELO-BRANCO, R. C.

2, Leite-Dellova D. C. A.

1, AIRES, M. M.

1 Fisiologia e Biofísica - ICB,

2 Zootecnia da Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos - USP

Apoio Financeiro: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPQ

Resumo Objetivos O presente estudo objetiva avaliar os efeitos agudos de diferentes doses de Ang-(1-7) na reabsorção de bicarbonato via trocador Na+/H+ (isoforma NHE3) e na concentração citosólica de cálcio ([Ca2+]i), em túbulo proximal convoluto (segmento S2), in vivo. Métodos Microperfusão tubular estacionária, medindo o pH intratubular através do microeletródio duplo sensível a H+. Durante o experimento, os animais receberam, por via endovenosa, solução fisiológica com manitol 3% a 0,05 ml/min. O pH intratubular foi registrado por microeletrodo duplo, contendo resina sensível a H+ e solução de referência (KCl 1M), na vigência de solução intratubular com 25 mM de bicarbonato de sódio. A reabsorção resultante de HCO3- (JHCO3-) foi calculada pela equação {k ([(HCO3-)i – (HCO3-)s] r/2)}, em que k é a constante da redução de bicarbonato luminal [k = ln2/(t/2)], r é o raio do túbulo e (HCO3-)i e (HCO3-)s são as concentrações do HCO3- injetado e no nível estacionário, respectivamente. Adicionalmente, monitoramos fluorimétricamente a concentração de cálcio citosólico ([Ca2+]i) em túbulos proximais isolados, por meio do probe sensivél a cálcio FURA-2-AM. CEUA n: 017 nas fls. 83 do livro 02 Resultados Os experimentos foram feitos na vigência intratubular de Ang-(1-7) e/ou do antagonista específico do receptor de Ang-(1-7) Mas (A779; 10-6 M), ou do inibidor da isoforma NHE3 do trocador (S3226; 10-6 M). Os dados indicam que o JHCO3- controle é 2,84 ± 0,08 nmol. cm-2. s-1 [49/19 (no. de medidas/n°. de túbulos)], a Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M) o reduz (respectivamente, de 35 % ou 61 %) e a Ang-(1-7; 10-6 M) o eleva (56 %). A inibição do receptor Mas eleva o JHCO3- (30 %), indicando que na situação controle há Ang-(1-7) intratubular, inibindo o JHCO3-. Adicionalmente, a inibição do Mas abole o efeito inibidor da Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M) sobre o JHCO3-, mas não afeta o efeito estimulador da Ang-(1-7; 10-6 M) sobre esse parâmetro. A inibição da isoforma NHE3 diminui o JHCO3- (45 %), não altera o efeito inibidor da Ang-(1-7; 10-9 M), mas transforma o efeito estimulador da Ang-(1-7; 10-6 M) em inibidor do JHCO3-. Nossos dados indicam que a [Ca2+]i controle é 100 ± 2,47 nM [35 (n° de túbulos; cada túbulo é a média de 10 células)] e que a Ang-(1-7; 10-12, 10-9 ou 10-6 M) aumenta esse valor (respectivamente, para 152 %, 103 % ou 53 %), transientemente (3 min). A inibição do receptor Mas aumenta a [Ca2+]i (26 %), mais inibe o efeito estimulador de todas as doses de Ang-(1-7). Os resultados sugerem um papel do cálcio citosólico na regulação do NHE3 e são compatíveis com a estimulação do trocador por moderado aumento da [Ca2+]i na vigência de Ang-(1-7; 10-6 M) e sua inibição por pronunciado aumento da [Ca2+]i na presença de Ang-(1-7; 10-12 ou 10-9 M). Nossos presentes achados são o oposto dos encontrados para o efeito bifásico da Ang II, descrito em vários trabalhos, que indicam estimulação do trocador com baixas doses de Ang II (10-12 ou 10-9 M), por pequeno aumento da [Ca2+]i, e sua inibição na vigência de alta dose de Ang II (10-6 M), por grande aumento da [Ca2+]i. Conclusão Portanto, nossos resultados indicam que o efeito bifásico dose-dependente da Ang-(1-7) sobre a reabsorção resultante de bicarbonato no túbulo proximal S2 in vivo é mediado pelo receptor Mas e se dá via isoforma NHE3. Assim, é razoável admitir que, no animal intacto, a interação dos efeitos da Ang II e da Ang-(1-7) sobre o trocador Na+/H+ e a [Ca2+]i possa

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representar uma relevante regulação fisiológica em condições de modificação do volume e/ou do pH extracelular.

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Resumo: 07.003

EFEITOS DA EXPOSIÇÃO AGUDA AO ACETATO DE CHUMBO SOBRE A FUNÇÃO RENAL.

Autores

1,2ARAUJO, G.

1,2, FREITAS, F. F. C. T.

2, BALARINI, C. M.

2, FREITAS, F. P. S.

2,3, VASQUEZ, E.

C. 1,2

, MEYRELLES, S. S. 2, PADILHA, A. S.

2,3, VASSALLO, D. V.

1,2, GAVA, A. L.

1 Programa de

Pós Graduação em Biotecnologia - UFES, 2 Programa de Pós Graduação em Ciências Fisiológicas -

UFES, 3 Escola Superior de Ciências da Santa Casa de Misericórdia - EMESCAM

Apoio Financeiro: CNPq, Capes, FAPES

Resumo Objetivos O chumbo é um metal pesado largamente encontrado no meio ambiente como resultado de sua ocorrência natural e sua utilização industrial. Os efeitos do chumbo na saúde humana dependem dos níveis plasmáticos deste metal e atualmente considera-se segura uma concentração sanguínea de aproximadamente 60μg/dL. Entretanto, estudos têm demonstrado que valores plasmáticos inferiores a este índice de tolerância biológico geram efeitos deletérios sobre o sistema cardiovascular. Considerando que o eixo cardio-renal desempenha um papel de extrema importância na homeostasia corporal o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da exposição aguda do chumbo sobre a função renal de ratos. Métodos Foram utilizados ratos Wistar machos com 3 meses de idade, divididos em dois grupos experimentais: Controle (CT, n=5) e Tratado (TT, n=5). Os animais foram anestesiados e tiveram sua traquéia, bexiga, veia e artéria femoral cateterizadas e receberam intravenosa de salina 0,9% (CT) ou acetato de chumbo (TT, 320μg/kg) uma hora antes da realização do clearance de inulina e para-aminohipurato (PAH). A função renal foi avaliada através da determinação do ritmo de filtração glomerular (RFG), fluxo plasmático renal (FPR), o fluxo sanguíneo renal (FSR) e fração de filtração (FF). Todos os dados estão expressos como média ± EPM. Para análise estatística foi utilizado teste t de Student para amostras independentes.

∗ p < 0,05, ∗∗ p < 0,01. CEUA – UFES: 02/2012 Resultados O ritmo de filtração glomerular (mL/min/Kg) não foi modificado pelo tratamento com chumbo (CT: 6,75 ± 0,48; TT: 7,2 ± 0,44), entretanto o fluxo plasmático renal (mL/min/Kg) e o fluxo sanguíneo renal (mL/min) encontraram-se aumentados no

grupo TT (24,3 ± 1,3∗∗ e 42,7 ± 5,3∗∗; respectivamente) em comparação ao grupo CT (16,5 ± 1,56 e 28,8 ± 3,7; respectivamente) Em consequência, os animais TT apresentaram redução na fração de filtração (30 ± 2 %) quando comparados ao grupo CT (42 ± 5 %). Conclusão O tratamento com acetato de chumbo ocasiona alterações significativas na função renal, como aumento do fluxo plasmático renal, fluxo sanguíneo renal e redução na fração de filtração. Estes dados demonstram o potencial nefrotóxico do chumbo, mesmo diante de uma exposição aguda e em baixas doses.

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Resumo: 07.004

A HIPERLEPTINEMIA EXPERIMENTAL POR 7 DIAS ALTERA A FUNÇÃO RENAL DE RATOS.

Autores 1THIEME, K.

1, OLIVEIRA-SOUZA, M.

1 Departamento de Fisiologia e Biofísica - ICB-USP

Apoio Financeiro: Fapesp e CNPq

Resumo Objetivos Inicialmente acreditava-se que a leptina era um hormônio anti-obesidade, porém diversos estudos apontam para sua participação no processo de hipertensão arterial associada à obesidade. A leptina exerce seus efeitos no rim de maneira direta e indireta. Sendo assim, o objetivo deste estudo é avaliar os efeitos da hiperleptinemia induzida sobre a pressão arterial e a função renal. Esses parâmetros serão avaliados também em animais tratados com Losartan, para que possamos avaliar a participação do Sistema Renina-Angiotensina II (SRA). Métodos Ratos machos Wistar, com idade de 60 dias foram submetidos à implantação de mini-bombas osmóticas (Alzet, 2ML1) para liberação de leptina (0.5 mg/kg/dia) por 7 dias. O grupo controle foi submetido à cirurgia fictícia e o grupo Losartan receberá a droga por injeção subcutânea diária (10 mg/kg/dia). A pressão arterial foi avaliada através de pletismografia de cauda, antes e após os 7 dias de tratamento. Para avaliação da função renal, os animais foram submetidos ao clearance, através da canulação da artéria carótida para coleta de amostras de sangue, da veia jugular para infusão de inulina e para-aminohipurato de sódio (PAH) e da bexiga para coleta de urina. O ritmo de filtração glomerular (RFG, em ml/min/kg) e o fluxo plasmático renal (FPR, em ml/min/kg) foram avaliados por análises das concentrações plasmáticas e urinárias de inulina e PAH, respectivamente. Foram avaliadas também a carga excretada de amônio (CENH4) por método de ELISA e concentrações plasmáticas e urinárias de Na+ e K+, por fotometria de chama. A expressão protéica será realizada através de Western Blot. CEUA no. 150 nas fls 78 do livro 02. Resultados O tratamento por 7 dias com leptina induziu um aumento de 11,8 % na pressão arterial (Controle: 105,5 ± 0,66 vs Leptina: 118,0 ± 1,5*). O grupo tratado com leptina apresentou uma queda no FPR (Controle: 20,99 ± 1,47 vs Leptina: 15,52 ± 1,00*) e um aumento no RFG (Controle: 7,53 ± 0,55 vs Leptina: 9,19 ± 0,59*). Consequentemente, houve um aumento significante na fração de filtração (Controle: 36,21 ± 1,28 % vs Leptina: 59,09 ± 2,46 % *). O fluxo urinário também foi significantemente maior no grupo tratado com leptina (Controle: 0,15 ± 0,01 vs Leptina: 0,22 ± 0,01*), e, concomitantemente, houve aumento de 337% na fração de excreção de Na+. Não houve alteração na CENH4+, bem como na fração de excreção de K+ entre os grupos. As osmolaridades plasmáticas e urinárias também não foram diferentes entre os grupos estudados. Conclusão O tratamento com leptina deslocou a pressão arterial, porém não induziu hipertensão nos animais tratados por 7 dias. O tratamento com leptina também alterou a função renal, levando a uma queda no FPR e aumento no RFG. Esses dados indicam que a leptina tem ação sobre a hemodinâmica renal. Além disso, o hormônio teve um efeito natriurético, aumentando o fluxo urinário e a fração de excreção de Na+, provavelmente por ação tubular. Assim, os estudos de Western Blot são essenciais para elucidar os transportadores de íons envolvidos neste efeito.

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Resumo: 07.005

AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO RENAL EM RATOS COM DESNERVAÇÃO SINO-AÓRTICA

Autores

1,2FREITAS, F. F. C. T.

1,2, ARAÚJO, G.

2, BALARINI, C. M.

2, FREITAS, F. P. S.

2,3, VASQUEZ, E.

C. 1,2

, MEYRELLES, S. S. 1,2

, GAVA, A. L. 1 Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia - UFES,

2 Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas - UFES,

3 Escola Superior de Ciências da

Santa Casa de Misericórdia - EMESCAM

Apoio Financeiro: CNPq, Capes, FAPES

Resumo Objetivos Sabe-se que o barorreflexo é um dos principais mecanismos envolvidos na regulação neural da circulação. Apesar do grande conhecimento sobre sua importância para a manutenção da pressão arterial em níveis estáveis, estudos têm demonstrado que a desnervação sinoaórtica em ratos pode provocar danos estruturais em órgãos alvo como rins e coração, trazendo uma nova perspectiva sobre a função do barorreflexo na homeostasia corporal. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho é avaliar a influência da desnervação sinoaórtica na função renal de ratos. Métodos Foram realizados em ratos Wistar machos (250-300g), com 8-10 semanas de idade. Os animais foram anestesiados e submetidos a desnervação sinoaórtica (SAD, n=4) ou cirurgia fictícia (Sham; n= 4). Seis semanas após a desnervação, os animais foram novamente anestesiados e tiveram a sua artéria e veia femural cateterizadas para teste do barorreflexo e confirmação da desnervação sinoaórtica após 24 horas. A função renal foi avaliada no dia posterior a análise do barorreflexo. Para tanto, os animais foram anestesiados para inserção de uma cânula na bexiga e traqueostomia. Na análise da função renal foram avaliados os parâmetros de fluxo sanguíneo renal, fluxo plasmático renal, resistência vascular renal, ritmo de filtração glomerular e fração de filtração através da determinação do hematócrito e clearance de inulina e para-aminohipurato (PAH). Todos os dados estão expressos como média ± EPM. Para análise estatística foi

utilizado teste t de Student para amostras independentes. ∗ p < 0,05. CEUA ⁄ UFES: 03⁄2012. Resultados

O ritmo de filtração glomerular (mL/min/Kg) foi menor nos animais submetidos a desnervação sinoaórtica (5,5±0,3∗) em comparação aos animais sham (7,3±0,4). O clearance de PAH (mL/min/Kg) não foi alterado pela desnervação sinoaórtica

(Sham: 34,8±1,3; SAD: 29,4±2,7) e os animais SAD apresentaram um hematócrito (%) menor (35±1∗) que os animais

sham (42±1). Em consequência o fluxo sanguíneo renal (mL/min/Kg) foi diminuído nos animais SAD (45,5±3,3∗) em

comparação com o grupo sham (60,1±2). Adicionalmente, os animais SAD apresentaram aumento na RVR (2,2±0,1∗ u.r.r.) quando comparados ao grupo sham (1,7±0,1 u.r.r.), e não houve alterações na fração de filtração (Sham: 21±2; SAD:21±2 %). Conclusão A desnervação sinoaórtica ocasiona alterações significativas na função renal, como redução no ritmo de filtração glomerular, fluxo sanguíneo renal e aumento da resistência vascular renal. Estes dados reforçam a hipótese de que o barorreflexo desempenha outras funções além de regulação da pressão arterial para manutenção da homeostasia.

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Resumo: 07.006

Função renal de animais com hipertensão arterial induzida pelo tratamento crônico com Ang II.

Autores 1CASARE, F. A. M.

1,1, OLIVEIRA-SOUZA, M.

1 Instituto de Ciências Biomédicas I - USP

Apoio Financeiro: FAPESP, CAPES e CNPq

Resumo Objetivos Avaliar as alterações hemodinâmicas e tubulares renais em animais com hipertensão arterial induzida pelo tratamento crônico com Ang II. Métodos Ratos Wistar, com idade de 35 dias foram divididos nos seguintes grupos: Sham (cirurgia fictícia) e tratados com Ang II 12 μg/kg/h diluída em salina (modelo de hipertensão arterial). Para a injeção do peptídeo via subcutânea, foi utilizado mini bomba osmótica (Alzet- Mod. 2006) implantada cirurgicamente no dorso do animal. Sete dias após o procedimento cirúrgico todos os animais, Sham e tratados, foram submetidos à avaliação indireta da pressão arterial por meio de pletismografia de cauda, processo repetido semanalmente, por um período de 42 dias. Para avaliação da função renal os animais foram submetidos ao clearance, através da canulação da artéria carótida para a coleta de amostras de sangue, da veia jugular para a infusão de ácido paraamino-hipúrico (PAH) e inulina, e da bexiga para a coleta de urina. O fluxo plasmático renal (FPR) e o ritmo de filtração glomerular (RFG) foram avaliados por determinação das concentrações plasmática e urinária de PAH e inulina respectivamente. Também foi avaliada a fração de excreção (FE) de Na + e K + por fotometria de chama e a expressão proteica dos transportadores e receptores renais será realizada através de Western Blot. CEUA: 139. Resultados Os resultados preliminares demonstraram que o tratamento com Ang II induziu aumento da pressão arterial, (Sham: 108 ± 2 vs Ang II: 194 ± 10 mmHg, n = 4, p < 0,05). Em animais tratados com Ang II houve aumento tanto do FPR (Sham: 22,65 ± 2,19 n = 4 vs Ang II: 41,88 ± 1,31 ml/min/kg; n = 4, p≤0,05), quanto do RFG (Sham: 8,18 ± 0,60; n = 4 vs Ang II: 16,50 ± 1,10 ml/min/kg, n = 4; p≤0,05), consequentemente, a fração de filtração (FF) também aumentou (Sham: 35,12 ± 2.46; n = 4 vs Ang II: 42,11 ± 2,42 % n = 4; p≤0,05), enquanto a FE de Na + e de K + diminuiu, (Sham: 0,51 ± 0,14, n = 4; vs Ang II: 0,13 ± 0,06, n = 4; p≤0,05 para Na + e (Sham: 35,98 ± 5,64, n = 4 vs Ang II: 24,96 ± 6,88, n = 4 p≤0,05) para K + . Conclusão Nossos resultados preliminares indicaram que em animais tratados com Ang II por um período de 42 dias, houve alterações na hemodinâmica e na função renal. O aumento do FPR e do RFG sugere lesões na parede das arteríolas e na barreira de ultrafiltração glomerular. A queda na FE de Na + e K + pode está associada às alterações na expressão de proteínas como a isoforma 3 do trocador Na + /H + (NHE3), co-transportador Na + /K + /2Cl - e o canal epitelial de Na + (ENaC), que serão futuramente quantificadas.

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Resumo: 07.007

A SIMPLIFIED CAPILLARY ELECTROPHORESIS DETERMINATION OF PLASMA CREATININE IN RATS.

Autores 1PASSOS, M. T.

1, NISHIDA, S. K.

1, PEREIRA, A. B.

1,2, CÂMARA, N. O. S.

1, KIRSZTAJN, G. M.

1 MEDICINA - UNIFESP,

2 IMUNOLOGIA - USP

Apoio Financeiro: CNPq

Resumo Objetivos Plasma creatinine is the routinely used marker for the assessment of renal function and it is most commonly measured via a colorimetric reaction (Jaffé method). However, this method is subject to interferences, which can give falsely raised or lowered results. Many studies show that the chromogens in colorimetric method (C) can overestimate the creatinine concentration. While the alkaline picrate analysis of creatinine is adequate for human samples, it is necessary to use high performance liquid chromatography (HPLC) to accurately measure rodent creatinine. However, this method has the drawback of being complex and expensive. In the search for a simple and fast method, we propose to (i) standardize and validate plasma creatinine determination by capillary electrophoresis (EC) in rats; (ii) compare the concentrations obtained by both CE and C methods in rats with different degrees of renal function. Métodos Twenty-six male Wistar rats, weighing 200 to 300g were used; all the experimental procedures were performed in accordance with guidelines of the Research Ethics Committee of UNIFESP nº 0028/11. Plasma creatinine was measured by CE after deproteinization of the samples with acetonitrile. The method uses only 50µL of plasma, is semi-automated and can be completed in 8 minutes. The C method used was a commercial kit (LabTest – Creatinine K, ref. 96-300). Resultados The CE method showed a detection limit of 0,03 mg creatinine/dL and linearity from 0,03 to 8,0 mg/dL (r2= 0,9998). Precision tests indicate a good reproducibility of the method (intra-assay CV < 3,2%). The correlation of inverse serum creatinine with inulin clearance (CE method r = 0,7759, C method r = 0,4113) showed that the slope of the regression line in CE method was better showing greater functional sensitivity to the detection of variation in glomerular filtration rate. Conclusão The capillary electrophoresis method for determination of creatinine is sensitive, simple, reproducible, fast and of low cost. The small-volume samples (50 µL) allow multiple determinations in small animals and repeated determinations in the same animal, enabling the detection of little changes in the renal function. Moreover, preliminary results showed viability of plasma creatinine measurement in mice by CE method. The CE method fulfills the requirements for a creatinine measurement over a large concentration range and is significant for a precise assessment of impaired renal function.

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Resumo: 07.008

AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DOS HORMÔNIOS SEXUAIS NA FUNÇÃO RENAL DE CAMUNDONGOS HIPERCOLESTEROLÊMICOS

Autores

1CARNEIRO, S. S.

1, CARMINATI, R. Z.

1, FREITAS, F. P. S.

1,3, VASQUEZ, E. C.

1,2,

MEYRELLES, S. S. 1,2

, GAVA, A. L. 1 Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas - UFES,

2 Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia - UFES,

3 Escola Superior de Ciências da Santa Casa

de Misericórdia de Vitória - EMESCAM

Apoio Financeiro: CNPQ, Capes, FAPES

Resumo Objetivos Avaliar os efeitos dos hormônios sexuais femininos e masculinos sobre a função renal de camundongos hipercolesterolêmicos, uma vez que estas substâncias podem modular a função renal contribuindo para ou protegendo contra o desenvolvimento de doenças renais. Métodos Camundongos C57 fêmeas (n=5-10) e machos (n=11-13) e apoE fêmeas (n=6-8) e machos (n=3-4) com 3 meses de idade foram alocados em gaiolas metabólicas por 24 horas para determinação do volume urinário, excreção de creatinina e proteinúria. Após este procedimento, os animais foram anestesiados e tiveram o sangue coletado para realização das análises de uréia e creatinina plasmáticas. A função renal foi determinada através do cálculo do clearance de creatinina, uremia e proteinúria. Média ± EPM; ANOVA 2 vias, seguida pelo teste post hoc de Fisher. * p < 0,05 e ** p < 0,01. Número do protocolo de aprovação pelo CEUA- EMESCAM: 006/2010. Resultados Os valores de creatinina plasmática (mg/dL) mostraram-se aumentados nos animais ApoE macho (1,34 + 0,11**) quando comparados com os grupos C57 macho (0,67 + 0,11), C57 Fêmea (0,49 + 0,03) e ApoE fêmea (0,41 + 0,09). Os valores de creatinina urinária (mg/dL) foram maiores nos animais C57 Fêmea (65,1 + 5,3) quando comparados com os demais grupos: ApoE Fêmea (44,6 + 5,2**), C57 macho (42,4 + 3,7*), e ApoE macho (47,1 + 1,4**). Não houve diferença significativa no volume urinário (mL) entre os grupos. O clearance de creatinina (µL/min) foi menor nos animais machos: C57 (102 + 13), ApoE (55 + 4 quando comparados com suas respectivas fêmeas C57 (171 + 17**), ApoE (160 + 29**), sendo que o grupo ApoE macho apresentou uma maior redução deste parâmetro. Os valores plasmáticos de uréia (mg/dL) mostraram-se aumentados nos animais machos quando comparados com as respectivas fêmeas ApoE machos (95+ 6**) e ApoE fêmea (60 + 4); C57 macho (58 + 3*) e C57 Fêmea (49 + 3 ). A proteinúria (mg/24h) mostrou-se aumentada nos animais ApoE macho (28,8 + 3,1**) quando comparados com os grupos C57 fêmea (6,09 + 0,94), ApoE Fêmea (17,8 + 0,8) e C57 macho (17,2 + 3,2). Conclusão Os dados obtidos indicam que a função renal apresenta-se comprometida em camundongos machos, quando comparada às fêmeas de mesma idade e que este processo está agravado em animais hipercoleterolêmicos provavelmente devido ao efeito deletério da testosterona e protetor do estrogênio sobre o rim.

FeSBE 2012

Resumo: 07.009

ESTUDO DO RITMO DE FILTRAÇÃO GLOMERULAR EM UM MODELO EXPERIMENTAL DE DISLIPIDEMIA.

Autores 1MULLER, C. R. *

2,1, LEITE, A. P. **

2, YOKOTA, R. **

1, FONTELES, M. C.

1, FARAH, V.

1,

FIORINO, P. 1 Centro de Ciencias Biológicas e da Saúde - UPM,

2 Nefrologia - UNIFESP

Apoio Financeiro: mackpesquisa (#1430)/ PIBIC/Mackenzie

Resumo Objetivos A influência da quantidade e da composição de lipídeos das dietas são importantes fatores para o desenvolvimento dos altos índices de obesidade associados com o aumento da incidência de doença renal crônica (DRC), nesta população. A literatura descreve o ritmo de filtração glomerular (baseado na depuração de substâncias exógenas, como a creatinina) como o melhor marcador de função renal em indivíduos saudáveis ou doentes. Em nosso laboratório, ratos submetidos à dieta rica em lipídios (30%) apresentam aumento da adiposidade corporal, hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi estudar o ritmo de filtração glomerular, em ratos submetidos a uma dieta hiperlipídica desde o desmame até a fase adulta, durante oito semanas. Métodos Ratos Wistar (n=6/grupo) machos foram divididos em grupo dieta padrão (GDP), alimentados com ração comercial (3% de lipídeos), e grupo dieta hiperlipídica (GHL), alimentados com uma dieta hiperlipídica (30% de lipídeos). A avaliação do ritmo de filtração glomerular (RFG) foi calculada através do clearance de creatinina, RFG=creatinina na urina X volume urina/ creatinina no soro. O RFG foi avaliado na oitava semana de protocolo através de 2 procedimentos: 1) Coleta urina de 24 horas coletada em gaiola metabólica (GM); 2) Durante a perfusão extracorpórea (PE). Ao final do protocolo, os animais foram anestesiados com pentobarbital sódico (50mg/kg) para coleta de sangue (cálculo do clearance) e retirada do rim direito, que foi acoplado ao sistema de perfusão renal(PE) extracorpóreo contendo uma solução de perfusão (Krebs-Henseleit com adição de albumina bovina (6%) e creatinina, 0,4 mg/ml), com coletas da solução de perfusão e da urina a cada 10 minutos durante 60 minutos, para a determinação do clearance de creatinina e do fluxo urinário, corrigido para volume/minuto. Os procedimentos realizados com os animais obedeceram às normas estabelecidas pela Comissão de Pesquisa e Ética da UPM (CEUA N0 063/02/2010). Os resultados foram analisados por teste t de students para amostras não pareadas, e apresentados como média ± erro padrão da média (EPM). Consideramos os resultados significativamente diferentes somente quando p < 0,05. Resultados O RFG apresentou-se reduzido tanto na avaliação pela GM (GDP: 0,57±0,11 vs GHL: 0,14±0,08 ml/g/min), quanto na PE (GDP:22±3 vs GHL:19±1.4,mL/g/min). Além disso, a avaliação do fluxo urinário mostrou um significativo aumento na PE (GDP: 0.13±0.02 vs GHL:0.21±0.04,mL.g-1.min-1), sem diferença significativa na GM (GDP: 0.006 ± 0.0008 vs GHL: 0.005 ± 0.0017, ml/min). Conclusão As análises do RFG através da gaiola metabólica e no sistema de perfusão extracorpórea sugerem que a dislipidemia, induzida pela ingestão de uma dieta hiperlipídica, levou a ajustes renais muito precoces, durante a fase de crescimento do indivíduo, que culminaram em importante redução do RFG do indivíduo adulto, sugerindo aumento na susceptibilidade para o desenvolvimento do DRC.

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Resumo: 07.010

IMPORTÂNCIA DA ANGIOTENSINA II NA SÍNTESE DE ENDOTELINAS 1 E 3 EM CÉLULAS RENAIS

Autores 1BRAGA, T. S.

1, OLIVEIRA-SOUZA, M.

1 Fisiologia e biofísica - USP

Apoio Financeiro: FAPESP e CNPq

Resumo Objetivos O sistema renina-angiotensina (RAS) intra-renal contribui para a ação da angiotensina II (Ang II) nas diferentes porções do néfron e para a excreção renal do hormônio. Sabe-se que nas células endoteliais e mesangiais, a Ang II via receptores AT1, modula a síntese de endotelina 1 (ET1). No entanto, não se conhece a ação combinada da Ang II e das endotelinas 1 e 3 nos diferentes segmentos do néfron. Assim, o objetivo do atual estudo foi avaliar o efeito da Ang II sobre a síntese de ET-1 e ET-3 em células MDCK (Mardin Darby Canine Kidney), derivadas do néfron distal de rim de cão. Métodos Todos os experimentos receberam isenção da Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA), protocolo 492/11. Células MDCK foram cultivadas em meio Dulbecos Modified Eagle (DMEM) e quando em confluência de aproximadamente 80%, as células foram tratadas com Ang II (10 -12 M ou 10 -6 M) e/ou losartan (antagonista do receptor AT1, 10 -4 M), por um período de 24 horas. Em seguida, as amostras de células controle ou tratadas foram submetidas às análises por Western Blot, utilizando anticorpos específicos para investigar a expressão de AT1, ET1 e ET3. Os valores das bandas obtidas de 3 a 5 experimentos são expressos como razão (proteína experimental/actina) e considerados estatisticamente significantes quando p < 0,05 (*). Resultados O tratamento crônico com Ang II (10 -12 e 10 -6 M) reduziu a expressão total do receptor AT1 quando comparado ao grupo controle (Controle =1,06 ± 0,05 vs Ang II = 0,52 ± 0,03* e 0,82 ± 0,07*, respectivamente). Este efeito da Ang II foi abolido por losartan (Ang II 10 -12 M + Los = 1,10 ± 0,13 e Ang II 10 -6 M + Los = 1,04 ± 0,15). O tratamento crônico com Ang II (10 -12 e 10 -6 M) reduziu em 23 e 26 % respectivamente, a expressão de ET-1 e losartan aboliu o efeito inibidor da Ang II sobre este parâmetro. O tratamento crônico com Ang II (10 -12 ou 10 -6 M) e/ou losartan não alterou estatisticamente a expressão de ET-3. Conclusão Os resultados preliminares indicam que, nas células MDCK, o tratamento crônico com Ang II, induziu via receptores AT1, uma acentuada queda na expressão do próprio receptor AT1, indicando reciclagem e degradação do mesmo. Além disso, foi observado que as células MDCK expressam ET1 e ET3 e que a Ang II via AT1 reduz a expressão de ET1, sugerindo que no néfron distal, a Ang II atua sobre a síntese e possivelmente a secreção de ET1.

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Resumo: 07.011

BLOCKADE OF RENIN-ANGIOTENSIN SYSTEM PREVENTS BLADDER DYSFUNCTION IN TWO-KIDNEY ONE-CLIP HYPERTENSIVE RATS

Autores

1RAMOS-FILHO, A.C.S.

1, DE ALMEIDA FARIA, J.

2, TEIXEIRA, S.A.

1, MÓNICA, F.Z.T.

1,

MOSCOSO, J. A. R. 1,2

, NUCCI, G. D. 2, MUSCARÁ, M. N.

1, ANHÊ, G. F.

1, ANTUNES, E.

1

Department of Pharmacology - UNICAMP/FCM, 2 Department of Pharmacology - USP/ICB-I

Apoio Financeiro: Fapesp and CAPES.

Resumo Objetivos Since it was previously observed that cholinergic and adrenergic pathways are altered in isolated detrusor from 2K-1C rats (RamosFilho, 2011), the aims of the present study were 1) to elucidate whether bladder dysfunction seen in 2K-1C rats is secondary to arterial hypertension and 2) the role of angiotensin converting enzyme (ECA)-angiotensinII-AT receptor in lower urinary tract in 2K1C and control animals. Métodos The experimental procedures were approved by Ethical Committee of UNICAMP (CEEA/UNICAMP- protocolo n°1683-1). Hypertension was produced in wistar male and female rats with 250-300g weight by placing 0.2 mm silver clips on the left renal artery for eight weeks. Sham operated animals were used as control. Systolic blood pressure (SBP) was determined weekly in conscious rats. Immediately after clipping, sham and 2K-1C rats were randomly grouped to receive losartan (30 mg/kg/ day; n=10), captopril (50 mg/kg/day; n=10), atenolol (80 mg/kg/day; n=10) or tap water alone (control group; n=10) for 8 weeks. Contraction induced by electrical field stimulation (EFS) and concentration response curves to the muscarinic agonist carbachol (0.001-100µM), beta-adrenergic agonist isoprenaline (0.001-100µM) and angiotensin II (Ang II, 0.001-1nM) were carried out in isolated DSM or urethra. Cystometry was performed in anaesthetized animals and the number of non-voiding contractions (NVCs) and frequency of micturition (ICs) were determined. The levels of cAMP, the activity of angiotensin converting enzyme (ACE) and the expression of angiotensin II receptors were also carried out in urinary bladder and urethra homogenates. Resultados Long term treatment with losartan, captopril or atenolol reduced the SBP by 56.1%, 59.3% and 28.6% respectively ( p < 0.05) only in hypertensive rats. The maximal response (Emax) values of carbachol and the amplitude of contraction to EFS were significantly reduced in losartan and captopril treated-2K1C rats, whereas the relaxation of isoprenaline was increased in these groups ( p < 0.05). The cystometric study showed that treatments with losartan and captopril prevent bladder overactivity present in 2K1C rats by reducing NVC and bladder capacity, besides increase ICs. The basal levels of cAMP were not alter in all studied groups. After stimulation with isoprenaline (10μM) the levels of cAMP was lower in 2K1C than in control rats while chronic treatment with losartan restored these values to those of controls (32.2±6.7 vs 35.6±4.0, respectively). Angiotensin II concentration dependent contracted urethra and this response was greater in 2K1C (pEC50: 7,49±0,11;Emax: 0.89±0.04, n=4, P < 0.05) when compared to the control group (pEC50: 7,22±0,07;Emax: 0.34±0.02). It was observed an ACE activity in isolated bladder (3023,0±302,5nmol/min/mg) and urethra (4785,0±412,9nmol/min/mg) and these values did not differ between control and 2K1C groups. The finding that Ang II did not contract the bladder is corroborated to the western blot analysis, where the expression of the AT1 receptor was only observed in urethra. The expression of both AT1 and AT2 were greater in urethra from 2K1C rats than in controls. Conclusão Our results show that chronic blockade of the renin-angiotensin system improved bladder function. Since the contraction induced by angiotensin II was greater in 2K1C than in control due to the increase expression of AT1 in urethra, it is plausible to suggest that chronic increase levels of plasmatic Ang II triggers a persistent contraction of the urethra leading in turn to

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DSM overactive.

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Resumo: 07.012

MDMA (ECSTASY) INCREASES THE AQUAPORIN 2 EXPRESSION IN LITHIUM DIABETES INSIPIDUS

Autores 1BRAGANÇA, A. C.

1, MOREAU, R. L. M.

1, SEGURO, A. C.

1, SHIMIZU, M. H

1, MAGALDI, A.

J. 1 NEFROLOGIA LIM 12 - HCFMUSP

Apoio Financeiro: HCFMUSP, LIM, FMUSP,FFM, FAPESP, CNPq, ICFTUSP

Resumo Objetivos Background- 3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA or Ecstasy-Ec) is an amphetamine derivative used popularly as a recreational drug of abuse mainly among young people, due its psychotropic properties. However, Ec also produces tachycardia, hyperthermia, high blood pressure, strong sudoresis, intense thirst, multisystemic toxicity, oxidative stress and also an inappropriate antidiuretic hormone secretion. The intense thirst, together with the vasopressin effect, induces a high ingestion of free water, leading to acute hyponatremia, which frequently causes frequent death. Taking into consideration that the known diuretic hydrochlorothiazide, and substances used in neurotherapy, like carbamazepine and fluoxetine, were able to increase the Aquaporin 2 (AQP2) water channel “per se” in the inner medullary collecting duct (IMCD), this work was carried out to investigate a possible effect of the Ec on the water transporter in the rat IMCD. Métodos Methods- Group 1 – AQP2 expression - rats were maintained on lithium (Li) diet to block the Vp action and in association with Ec. AQP2 expression was determined by Western Blot techniques and measured by densitometric analysis. Group 2- Oxidative Stress (OS)- OS study in rats injected with Ec, by determining the thiobarbituric acid reactive substances (T BARS) in the urine. Ethic Committee authorization # CAPPesq-nº 5519. Resultados Results- Group 1 - The AQP2 expression analyzed by optical densitometry of the Western Blot bands revealed that Ec was able to increase the water transporter expression decreased by Li therapy(absence of Vp action): control- 100.00±5.084, Li- 68.28±23.96, Li+Ec- 122.1±9.679 % p < 0.05(n=12) . Group 2- Oxidative Stress - In 4 rats injected i.p. with 10mg/kg during four days, the OS in urine showed an increased from control- 18.0±2 to Ec- 59.5±4.4 nmoles/24hs p < 0.02. Conclusão Conclusion-These results showed that the AQP2 abundance was decreased in the presence of lithium. The increase of the TBARS showed that there was Ec-mediated oxidative stress. The increase of the water transporter expression in the IMCD of about 40% showed, for the first time, that there was another mechanism contributing to the rapid hyponatremia that occurs in the Ec intoxication. These results showed that the two effects can contribute, at least in part, to this rapid hyponatremia which in turn can lead to a lethal outcome, if not treated correctly and as soon as possible.

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Resumo: 07.013

EFEITOS DA EXPOSIÇÃO AGUDA AO CLORETO DE MERCÚRIO SOBRE A FUNÇÃO RENAL DE RATOS.

Autores

1,2MARIM, L.

1,2, ALMEIDA, L. S.

1,3, ARAUJO, G.

1,3, FREITAS, F. F. C. T.

1,2, VASQUEZ, E. C.

1,3, MEYRELLES, S. S.

1, PADILHA, A. S.

1,2, VASSALLO, D. V.

1,3, GAVA, A. L.

1 Programa de

Pós Graduação em Ciências Fisiológicas - UFES, 2 Escola Superior de Ciências da Santa Casa de

Misericórdia - EMESCAM, 3 Programa de Pós Graduação em Biotecnologia - UFES

Apoio Financeiro: CNPq, Capes, FAPES

Resumo Objetivos O mercúrio é considerado um poluente ambiental de alto risco a saúde humana, uma vez que esta substância possui elevada toxicidade e mobilidade nos ecossistemas. A sua alta toxicidade decorre da exposição por diversas formas químicas (compostos orgânicos e inorgânicos), e elevada solubilidade em água e lipídios, o que facilita a passagem deste metal pesado através de diversos tecidos, ocasionando efeitos adversos no organismo. Dentre os órgãos que são afetados pelo mercúrio podemos destacar os rins sendo a extensão do dano renal dependente da dose, via da administração e duração da exposição ao metal, sendo que tanto exposições agudas quanto crônicas são capazes de levar ao desenvolvimento de nefropatias. A Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos considera segura as concentrações sanguíneas de até 5,8 ng/mL (21 nM), entretanto, estudos realizados em ratos demonstraram que a exposição a concentrações aproximadas, como 20 e 29 nM é capaz de ocasionar danos celulares. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da exposição aguda a baixas doses de cloreto de mercúrio sobre a função renal de ratos. Métodos Foram utilizados ratos Wistar machos com 3 meses de idade, divididos em dois grupos experimentais: Controle (CT, n=4) e Tratado (TT, n=3). Os animais foram anestesiados e tiveram sua traquéia, bexiga, veia e artéria femoral cateterizadas e receberam intravenosa de salina 0,9% (CT) ou cloreto de mercúrio (TT, 680ng/kg) uma hora antes da realização do clearance de inulina e para-aminohipurato (PAH). A função renal foi avaliada através da determinação do ritmo de filtração glomerular (RFG), fluxo plasmático renal (FPR), o fluxo sanguíneo renal (FSR) e fração de filtração (FF). Todos os dados estão expressos como média ± EPM. Para análise estatística foi utilizado teste t de Student para amostras independentes. * p < 0,05, ** p < 0,01. CEUA - UFES: 040/2012. Resultados O ritmo de filtração glomerular (mL/min/Kg) não foi modificado pelo tratamento com mercúrio (CT: 6,89 ± 0,15; TT: 6,82 ± 0,40), bem como o fluxo plasmático renal (CT: 18,2 ± 2,3; TT: 23,2 ± 2,3 mL/min/Kg) e o fluxo sanguíneo renal (CT: 31,5 ± 4,3; TT: 37,7 ± 4,3 mL/min/Kg). A fração de filtração do grupo TT (38 ± 3 %) não apresentou alterações significativas quando comparada ao grupo CT (42 ± 2 %). Conclusão A administração aguda de cloreto de mercúrio, em baixas doses, não ocasiona alterações significativas na função renal.

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Resumo: 07.014

Possível papel do receptor B2 de cininas em modelo de rabdomiólise induzida por glicerol

Autores

1GATTAI, P. P.**

1, ESTRELA, G. R.**

1, MAFRA, F. F. P.**

1, ALMEIDA, S. S.**

1, WASINSKI,

F.** 1, PEREIRA, F. E. G.**

1, MORAIS, R. L.**

1, BARROS, C. C.

4, BACURAU, R. F.

2,3,

CÂMARA, N. O. S. 1, ARAÚJO, R. C.

1 Departamento de Biofísica - UNIFESP,

2 Departamento de

Imunologia - USP, 3 Nefrologia - UNIFESP,

4 EACH-USP - USP

Apoio Financeiro: CNPQ

Resumo Objetivos Avaliar o papel do receptor B2 de cininas na rabdomiólise (rompimento do sarcolema) induzida por glicerol, utilizando animais deficientes para esse receptor. Métodos O projeto foi aprovado no comitê de ética e pesquisa da Unifesp ( < i>nº0300/11). Foram utilizados 6 camundongos machos C57Bl/6 (WT) e 6 nocaute para o receptor B2 de cininas (B2KO), com 12 semanas de idade. Os animais foram divididos em 4 grupos: grupo salina WT (SWT), grupo salina B2KO (SB2KO), grupo glicerol WT (GWT) e grupo glicerol B2KO (GB2KO). Os animais foram pesados, passaram por privação de água por 16 horas, foram novamente pesados e sedados com injeção intraperitoneal de xilasina e ketamina (10mL/Kg). Foram feitas 4 injeções intramusculares de glicerol (50% v/v, 14 mL/Kg) nos músculos posteriores da coxa e nos músculos gastrocnêmios. Os grupos salina (cloreto de sódio 0,9%) receberam injeções de mesmo volume que o grupo anterior. Após 24 horas, os animais foram pesados e colocados em gaiolas metabólicas para coleta de urina. Ao final de 48 horas os animais foram pesados e anestesiados com xilazina e ketamina para coleta de sangue, por punção no coração, sendo sacrificados em seguida. Os tecidos musculares e renais foram retirados, pesados e amostras desses tecidos foram preservadas em formol tamponado para análise histológica, e outras foram destinadas para análise de expressão gênica por PCR em tempo real (qRT-PCR). A urina e soro foram utilizados para análise de creatinina e uréia. Uma vez que muitos animais não resistiram ao tratamento, outros dois grupos foram utilizados (WT n=7, B2KO n=9) para a avaliação da curva de sobrevida. Para a análise estatística dos dados foram utilizados: o teste T de Student (creatinina e uréia) e teste de Mantel-Cox (curva de sobrevida). Resultados A dose de glicerol utilizada se mostrou letal para ambos os grupos tratados, sendo que os animais B2KO se mostraram mais sensíveis às injeções de glicerol com menor tempo de sobrevida ( < i> p < 0,01). Também foi observado que os animais B2KO, após aplicação de salina, apresentaram maiores valores séricos de uréia (140,00±9,29 SB2KO; 77,43±17,00 mg/dL SWT, média ± E.P.M. p < 0,05) e creatinina (1,86±0,19 SB2KO; 0,52±0,06 mg/dL SWT, p < 0,0001). Foi observado ainda menor função renal nos animais SB2KO mediante a avaliação dos parâmetros urinário de uréia (4407±295 SB2KO; 2545±1187 mg/dL SWT, p < 0,05) e creatinina (0,88±0,41 SB2KO; 0,29±0,16 mg/dL SWT, p < 0,05). Esses dados sugerem uma perda de função renal no SB2KO, enquanto a mesma se manteve inalterada no SWT. Análises histológicas do tecido muscular mostraram uma maior quantidade de infiltrados leucocitários nos SB2KO se comparado ao SWT. Conclusão Estes dados sugerem que os receptores B2 de cininas tem um efeito protetor na rabdomiólise. Análises de real-time PCR, níveis séricos de mioglobina e imunohistoquímica dos tecidos coletados serão realizados na próxima fase deste estudo.

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Resumo: 07.015

AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO RENAL DE CAMUNDONGOS HIPERCOLESTEROLÊMICOS TRATADOS COM SILDENAFIL

Autores

1CARMINATI, R. Z.

1, CARNEIRO, S. S.

1, BALARINI, C. M.

1,2, MEYRELLES, S. S.

1,3,

VASQUEZ, E. C. 1,2

, GAVA, A. L. 1 Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas - UFES,

2

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia - UFES, 3 Escola Superior de Ciências da Santa Casa de

Misericórdia - EMESCAM

Apoio Financeiro: CNPq, Capes, FAPES

Resumo Objetivos A hipercolesterolemia, juntamente com a disfunção endotelial, é capaz de ocasionar redução na biodisponibilidade de óxido nítrico, levando ao prejuízo da função renal. Drogas que podem diminuir a degradação do GMPc, mimetizando uma maior disponibilidade de NO, como o sildenafil, podem constituir uma estratégia favorável para a proteção contra injúria renal sofrida nessa patologia. Para tanto, avaliamos a função renal e a deposição lipídica em animais tratados com sildenafil. Métodos Foram utilizados camundongos C57 (n=4 a 9) e ApoE knockout machos de 8 semanas de idade com aproximadamente 23g. Os animais ApoE receberam dieta hipercolesterolêmica por 7 semanas e tratamento com sildenafil (40mg/Kg/dia, n=7 a 15) ou com veículo (n=6 a 9), via oral, nas 2 últimas semanas. Em seguida os animais foram alocados em gaiolas metabólicas por um período de 24hrs para retirada de amostras de urina para as análises de proteinúria e creatinina urinária. No sangue realizaram-se as análises de creatinina e uréia plasmática. Após perfusão, os rins foram retirados para a análise histológica de deposição lipídica (ApoE TT n=3 e ApoE VC n=2). Os dados estão expressos como média ± EPM. Para análise estatística foi utilizada ANOVA 1 via, seguida do teste post hoc de Tukey * p < 0,05 e ** p < 0,01. O presente protocolo experimental foi aprovado pelo comitê de ética no uso de animais (007/2010). Resultados A hipercolesterolemia promoveu uma redução na filtração glomerular dos animais ApoE (Veículo: 38,7&plusmn7,7** µL/min; Tratado: 45,1&plusmn6,3** µL/min) quando comparados aos controles (154,9 ± 22,6 µL/min). O tratamento com sildenafil não provocou alteração nos parâmetros de uréia (C57: 77&plusmn4; ApoE Veículo: 65&plusmn13; ApoE Tratado: 45&plusmn4 mg/dL) e proteinúria(C57: 57&plusmn8; ApoE Veículo: 32&plusmn8; ApoE Tratado: 34&plusmn7 mg/24hrs). Porém o tratamento com sildenafil se mostrou eficiente em reduzir a deposição lipídica nos rins dos animais tratados (5977,90&plusmn1373,23** µm 2 ) quando comparados com os animais ApoE tratados com veículo(18202,58&plusmn7049,32 µm 2 ). Conclusão Concluímos que o tratamento com sildenafil não foi capaz de modificar os parâmetros de função renal avaliados, contudo o tratamento foi eficiente para reduzir a área de deposição lipídica nos rins dos animais hipercolesterolêmicos tratados, fato este que pode retardar a progressão da insuficiência renal.

FeSBE 2012

Resumo: 07.016

Expression of Na+/K+ ATPase in Aedes aegypti Mosquitoes after blood feeding.

Autores 1ARAÚJO, N. G.

1, VITAL, W.

1, MORAES, J.

1, FONSECA, R. N.

1, SILVA, J. R.

1, Souza-Menezes,

J 1 Laboratório Integrado de Bioquímica Hatisaburo Masuda - UFRJ

Apoio Financeiro: PIBIC / CNPq, FAPERJ, INCTEM and FUNEMAC

Resumo Objetivos Analysis of ɑ Na+/K+ ATPase subunit mRNA expression in mosquitoes Aedes aegypti abdomens during fasting and after blood feeding. Métodos A. aegypti mosquitoes were fed as in the following experimental conditions: Sucrose Point (SC): Mosquitoes fed with sucrose for one week. Mosquitoes starved for 24h (NA); Point 3: 3h after blood feeding; Point 6: 6 h after the blood feeding; Point 24: 24h after blood feeding; Point 48: 48h after blood feeding; Point 72: 72h after blood feeding. These mosquitoes were dissected and abdomens were separated with fine-tipped forceps. The weight of the abdomens were measure in each experimental point. Total RNA was extracted from 15 mosquitoes abdomens with Trizol reagent (Invitrogen) following manufacturer`s instructions. After this, the total RNA was quantified by spectrophotometry with absorbance at 260nm wavelength. The ratio of 260nm/280nm absorbance was approximately 1.8. 2μg of total RNA was separate by electrophoresis using agarose matrix (1.5%) and was possible observed two bands of 18S and 28S ribosomal RNAs. Reverse transcription was performed with High-Performance cDNA Reverse Transcriptase (Applied Biosystems) using 2μg of total RNA following manufacturer’s instructions. 3μL of cDNA was used for amplification usinf the following pair of primers: ɑ Na+/K+ ATPase subunit (F - GCTCGGAACCGTCACCATT / R - TCGTTTCATGATGTCGGACTCT) and ɑ actin subunit (F - TGGCAAGGATAAACAAGGAGACA / R - GAAGTCAAGGAACGCGTCAAA). Quantitative real time PCR analyses were done on StepOne plus plataform (Applied Biosystems) using SYBR Green method following manufacturer’s instructions and the relative expression was determined by using the Ct values from each run on StepOne v2.1 software (Applied Biosystems), using A. aegypti ɑ actin subunit mRNA as housekeeping gene. The PCR products was observed by electrophoresis on agarose matrix (1.5%). Resultados It was observed that the weight of abdomens is significantly higher until 24h after blood feeding or in mosquitoes fed with sucrose (SC – 1013±107μg, 3h – 1797±177μg, 6h – 1485±303ug, 12h – 1611±237μg, 24h – 1364±278μg) compared to NA group (NA – 635.0±81.3μg, n = 4, p < 0.05). In preliminary dates, it was observed that 6 hours after blood feeding, the activity of ɑ Na+/K+ ATPase subunit increases considerably (NA – 1±0, 3h – 1.85±0.20, 6h – 2.005±0.455, 24h – 1.26±0.07, 48h – 1.19±0,01, 72h – 1.115±0.015). After this time the activity decreases approaching the point NA. In the agarose matrix (1.5%) it was observed bands of the respective sizes: ɑ Na+/K+ ATPase subunit, 115pb and ɑ actin subunit: 113pb. Conclusão The preliminary results, shows apparently that this enzyme is also related to the regulation of body volume in female mosquitoes A. aegypti, as well, occurs in mammalian which Na+/K + ATPase is the major factor in the regulation of body volume.

FeSBE 2012

Resumo: 07.017

ANÁLISE DA FUNÇÃO RENAL EM UM MODELO DE REPROGRAMAÇÃO FETAL SEGUIDO DE INSUFICIÊNCIA RENAL EXPERIMENTAL

Autores

1PUCCI, K. R. M.

1, ROCHA, L. P.

1, JÚNIOR, C. D. P.

1, GUIMARÃES, C. S. O.

1, REIS, M. A.

1,

ROCHA, L. B. 2, CÂMARA, N. O. S.

1, CORRÊA, R. R. M.

1 Disciplina de Patologia Geral, Instituto

de Ciências Biológicas e Naturais - UFTM, 2 Disciplina de Nefrologia, Escola Paulista de Medicina -

UNIFESP

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FAPEMIG, FUNEPU e UFTM

Resumo Objetivos Avaliar o impacto da reprogramação fetal na progressão da insuficiência renal experimental. Métodos Estudo aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa em Experimentação Animal em 09/12/2011, parecer No 168. Para reprogramação fetal foi utilizado um modelo de diabetes mellitus durante a gestação, induzido em quatro fêmeas Wistar, 4 meses, com peso entre 250-330g, com dose intraperitoneal de estreptozotocina (50 mg/Kg). Quatro fêmeas Wistar controles, com a mesma idade e peso, receberam a mesma dose de veículo (citrato). O cruzamento foi feito após a confirmação do estado diabético (glicemia acima de 250 mg/dL). A indução da insuficiência renal foi realizada nos filhotes com uma única dose intraperitoneal de ácido fólico (250 mg/kg). O grupo controle recebeu o mesmo volume de veículo (NaHCO3). Em dois momentos distintos (2 e 5 meses) foram estabelecidos os seguintes grupos: Filhotes de matriz controle (MC) que receberam veículo (MCFV), filhotes de MC que receberam ácido fólico (MCFAF), filhotes de matriz diabética (MD) que receberam veículo (MDFV) e filhotes de MD que receberam ácido fólico (MDFAF). O grupo de 2 meses apresentava peso médio de 300g, e o grupo de 5 meses apresentava peso médio de 380g. Os animais foram submetidos à avaliação da pressão arterial sistêmica (PA) e frequencia cardíaca (FC) pelo método pletismográfico 24 horas após a administração de ácido fólico, e à eutanásia 48 horas após. Durante a eutanásia foi realizada punção intracardíaca para coleta de sangue e análise da função renal. Resultados Os filhotes de MC apresentaram PA significativamente maior que os filhotes de MD no grupo com 2 meses de idade (125,34 ± 4,91 vs 110,86 ± 9,69 mmHg). No grupo de 5 meses não houve diferença significativa. A FC foi significativamente menor nos filhotes de MC, em relação aos filhotes de MD no grupo de 5 meses (369,27 ± 25,69 vs 408,30 ± 27,04 bpm), não havendo diferença significativa em relação a este parâmetro no grupo de 2 meses. Comparando-se os filhotes de MC e MD após a indução da insuficiência renal, não houve diferença significativa em relação a PA e FC nos grupos de 2 e 5 meses. Os níveis de creatinina e uréia foram maiores no grupo MCFAF quando comparados ao MDFAF no grupo de 2 meses [MCFAF vs MDFAF - creatinina: 2,47 (1,89 - 3,63 mg/dL) vs 1,79 (0,60 - 4,90 mg/dL); uréia: 307,12 (210,90 - 382,91 mg/dL) vs 173,03 (48,17 - 304,36 mg/dL),] e no grupo de 5 meses [creatinina: 3,39 ± 1,98 vs 2,78 ± 2,03 mg/dL; uréia: 408,82 (68,23 - 561,98 mg/dL) vs 251,91 (65,46 - 418,82 mg/dL)]. Conclusão O rim dos animais expostos a intercorrências gestacionais apresentam mecanismos adaptativos mais eficazes para responder a lesões da vida adulta, se mostrando mais adaptados frente a uma insuficiência renal.

FeSBE 2012

Resumo: 07.018

Efeito do Losartan sobre a Excreção Urinária de Albumina em Ratos Espontaneamente Hipertensos

Autores 1ARRUDA-JUNIOR, D. F.

1, INOUE, B. H.

1, GIRARDI, A. C. C.

1, GIRARDI, A. C. C.

1 Instituto do

Coração - Faculdade de Medicina - USP

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Objetivos Demonstramos previamente que a expressão da megalina encontra-se diminuída em túbulo proximal renal de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e que esta redução correlaciona-se significativamente com o aumento da excreção urinária de albumina (coeficiente de correlação = 0,8418, P < 0,001) . Adicionalmente, estudos realizados em células de túbulo proximal em cultura demonstraram que a ativação do receptor AT1 por angiotensina II inibe a expressão (gênica e protéica) da megalina. Diante do exposto, este trabalho pretende testar a hipótese que o antagonista do receptor AT1 de angiotensina II losartan exerce efeitos benéficos sobre a albuminúria em SHR que são independentes da redução da pressão arterial. Métodos SHR com 14 semanas de idade foram divididos, aleatoriamente, em três grupos experimentais e submetidos aos seguintes tratamentos, via oral, durante sete semanas: (1) Losartan (30 mg/kg/dia), SHR-L; (2) Hidralazina (30 mg/kg/dia), SHR-H e (3) Veículo (água), SHR. Os ratos foram alojados em gaiolas metabólicas para coleta de urina e avaliação da função renal e a pressão arterial foi avaliada por meio de pletismografia de cauda. A albumina urinária foi dosada por ELISA. Estas análises foram realizadas antes e após o tratamento. CEA: 6315. Resultados O tratamento com losartan e hidralazina por sete semanas reduziu significativamente os níveis de pressão arterial (SHR-L: 143 ± 5 vs. 180 ± 2 mmHg e SHR-H: 182 ± 2 vs. 146 ± 5 mmHg). Em SHR tratados com veículo a pressão arterial aumentou de 182 ± 4 para 207 ± 10 mmHg. A razão albumina/creatinina urinária antes do tratamento era semelhante entre os grupos: (SHR-L: 0,70 ± 0,03; SHR-H: 0,68 ± 0,02 e SHR: 0,67 ± 0,06). Após o tratamento, a albuminúria em SHR-L foi reduzida em cerca de 50% (0,33 ±0,01) enquanto que em SHR-H esta redução foi aproximadamente 20% (0,55 ± 0,01). Em SHR tratados com veículo, a razão albumina/creatinina aumentou para 0,99 ± 0,13. Conclusão Conclui-se que o tratamento da hipertensão, independentemente do agente utilizado, apresenta efeito benéfico sobre a albuminúria. Entretanto, o losartan confere benefício adicional sobre a função renal, uma vez que exibe maior capacidade de reduzir a albuminúria do que a hidralazina. Investigaremos futuramente se o efeito anti-proteinúrico dos antagonistas do sistema renina-angiotensina é mediado, ao menos em parte, pelo aumento da expressão de proteínas implicadas na endocitose mediada por receptor em túbulo proximal renal, especialmente da megalina.

FeSBE 2012

Resumo: 07.019

CLC-5, TNR-CFTR, CFTR AND PROTEINURIA IN DIABETES: WHAT THE RELATIONSHIP?

Autores

1FIGUEIRA, M. F.

1, JÚDICE, M.

1, CASTIGLIONE, R. C.

1, BARBOSA, C. M. D. L.

3, FONSECA,

R. N. D. 3, MORAES, J. L. D. C.

3, SILVA, J. R.

3, FELTRAN, G.

1, MORALES, M. M.

3, MENEZES,

J. D. S. 1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ,

3 Nupem - UFRJ-Macaé

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, CAPES, INCTEN, FUNEMAC

Resumo Objetivos Proteinuria is one of the main characteristic of diabetic nephropathy. ClC-5, TNR-CFTR and CFTR are important proteins involved in the mechanism of endocytosis of low molecular weight proteins in the kidney proximal tubule. In the present study, we investigated the renal function, the protein excretion profile and the ClC-5, TNR-CFTR and CFTR protein expression in rats subjected to diabetic nephropathy. Métodos This study was approved by the Ethics Committee of Animal Use in the Health Sciences Center of UFRJ (CEUA-CCS, IBCCF 074). 8 weeks-old male Wistar rats (170-210 g) were divided into control (CTRL; minimal n=4) and diabetic (DM; minimal n=4) groups. Diabetes was induced intraperitoneally by a single injection of streptozotocin (45 mg/Kg). The presence and maintenance of hyperglycemia was monitored in blood tail using a glucometer. Urine samples (24h urine) were collected 4 weeks (CTRL4, DM4) after diabetes induction and the rats were sacrificed. Glomerular filtration rate (GFR) and protein excretion was determined. Urine samples were dialyzed against water using dialyze bags (cut off 10000) and then lyophilized. Protein concentration was determined by Bradford assay. Proteins were submitted to standard SDS-PAGE loading equal amounts of protein per lane (30ug) using 10% SDS-polyacrylamide gel. The proteins in the gels were stained by comassie blue and analyzed by the program Image J. Then the expression of ClC-5, CFTR and TNR-CFTR in kidney of diabetic rats and controls were analyzed by Western Blot. Statistical analysis was performed by One-Way ANOVA (Newman-Keuls post-test). Differences were considered significant when p < 0.05. Resultados DM4 showed higher blood glucose (mg/dL) (357±31, p < 0.05) compared to controls (90±6, p < 0.05). They also showed higher GFR (mL/min/cm2) (0.0055±0.0007, p < 0.05) compared to controls (0.0031±0.0003, p < 0.05). The Clearance of proteins (ml/min/cm2) was higher in DM4 (6.27 x 10-7±1.342 x 10-7, p < 0.05) compared to CTRL group (2.95 x 10-7±3.26 x 10-8, p < 0.05). DM4 showed different pattern in the urinary proteins of low molecular weight compared to CTRL. Moreover, the diabetic animals showed an expression of ClC-5 about 50% lower when compared to CTRL group. TNR-CFTR and CFTR have also a lower expression in diabetic animals. The expression is lower about 30%. Conclusão The GFR and the protein clearance were higher in DM group. Diabetic Wistar male rats showed a different pattern in the urinary proteins of low molecular weight and a lower expression of ClC-5, TNR-CFTR and CFTR compared to controls rats. Therefore, this reduction in the expression of this proteins may be a factor involved in the genesis of the changing in protein profile of low molecular weight observed in the urine of diabetic animals.

FeSBE 2012

Resumo: 07.020

REGULATION OF THE EXPRESSION OF GLUT-2 TRANSPORTER BY THE HORMONE INSULIN IN PORCINE PROXIMAL TUBULE CELL LINE LLC-PK1

Autores 1,1,1,1

MAISSNER, F. 1,1,1,1

, MENEZES, J. D. S. 1, MARTINS, A. B.

1, FONSECA, R. N. D.

1, SILVA,

J. R. D. 1, MORAES, J. L. C.

1 Laboratório Integrado de Bioquímica Hatisaburo Masuda - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, INCTEM and FUNEMAC

Resumo Objetivos Some previous works have suggested that insulin is able to regulate glucose transport in renal proximal tubule cells. Our objective is to evaluate if insulin is able to modulate the expression of basolateral glucose transporter GLUT2 (expressed in renal proximal tubule cells) in porcine proximal tubule cell line (LLC-PK1 cells). Métodos The LLC-PK1 cells were maintained in DMEM medium (Cultilab) supplemented with 5% FBS (Fetal Bovine Serum) and penicillin and streptomycin (100 U/ml and 100µg/ml, respectively) at 37oC in 5% CO2 atmosphere. After cell split procedure, 1 x 105 cells were grew in 6 wells plate culture until confluence. The cells were washed with starved medium (DMEM medium without FBS supplemented with 100 U/ml of penicillin and 100µg/ml ofstreptomycin 3 times for 10 min each at 37oC. Following washing procedure the cells were treated 24h with starved medium (Control) or starved medium supplemented with the following insulin concentrations: 0.005 µg/ml; 0.05 µg/ml; 0.5 µg/ml; 5µg/ml; 500 µg/ml. Protein was extracted using PBS containing 0.1% Triton X-100 and protease inhibitors. The concentrations of the proteins were determined using Bradford assay. 50µg of protein were submitted to standard SDS-PAGE followed by Western Blot technique using antibodies specific for GLUT2 (Chemicon) and β-Actin (Santa Cruz Biotechnology). Statistical analysis were performed by t-Teste. Differences were considered significant when p < 0.05. Resultados It was observed that after insulin treatment the expression of GLUT2 protein was reduced in cells treated with 0.05 µg/ml; 0.5 µg/ml; 5µg/ml; 500 µg/ml of insulin (80.5±4.9%; 71.4±7.2%, 79.3±10.5% and 86.2±0.3%, respectively) compared to control (n = 4, p < 0.05). No significant changes in GLUT2 protein expression was observed in cells treated with 0.005 µg/ml of insulin compared to control. Conclusão From experiments carried out, it is possible suggest that insulin is able to downregulate GLUT2 protein expression in proximal tubules cells.

FeSBE 2012

Resumo: 07.021

EFEITO DO CAROTENÓIDE BIXINA SOBRE PARAMÊTROS BIOQUÍMICOS URINÁRIOS EM RATOS DIABÉTICOS.

Autores

5ZANCHI, M.

4, ROEHRS, M.

5, FIGUEIREDO, C.

5, RUVIARO, A. R.

4, QUATRIN, A.

4,

SOMACAL, S. 1, MORESCO, R. N.

3, BAUERMANN, L.

2, EMANUELLI, T.

1 Departamento de

Análises Clínicas e Toxicológias - UFSM, 2 Departamento de Tecnologia e Ciências dos Alimentos -

UFSM, 3 Departamento de Fisiologia e Farmacologia - UFSM,

4 Programa de Pós Graduação em

Farmacologia - UFSM, 5 Centro de Ciências da Saúde - UFSM

Apoio Financeiro: FAPERGS e CNPq.

Resumo Objetivos O diabetes mellitus tipo 1 é uma doença inflamatória autoimune caracterizada pela ausência da secreção de insulina, com consequente hiperglicemia. As principais causas de morbimortalidade em pacientes com diabetes são as patologias macro e microvasculares, principalmente a nefropatia. Dentre os fatores que podem contribuir para o estado inflamatório no diabetes estão o estresse oxidativo, a hiperglicemia e os produtos de glicação avançados (AGEs). O objetivo deste trabalho foi verificar o dano renal em modelo experimental de diabetes induzido por estreptozotocina em ratos e verificar o possível potencial nefroprotetor do carotenóide bixina. Métodos O projeto foi aprovado pelo comitê de ética de uso de animais da UFSM sob o nº 089/2011. Foram utilizados 24 ratos machos Wister, com 2 meses (200 a 250 g de peso corporal), divididos em seis grupos: grupo 1 (controle – C), grupo 2 (diabetes controle – DC), grupo 3 (diabetes tratado com bixina 10mg/kg – DB10), grupo 4 (diabetes tratado com bixina 30mg/kg – DB30), grupo 5 (diabetes tratado com bixina 100mg/kg – DB100), grupo 6 (diabetes tratado com metformina 100mg/kg – DM). A droga antidiabética, normoglicemiante, metformina, foi utilizada como um controle para o tratamento. O diabetes foi previamente induzido com uma dose de estreptozotocina (65mg/kg). Todas as soluções foram administradas por gavagem diariamente por 30 dias. As dosagens de creatinina, glicose e proteínas foram realizadas em amostras de urina utilizando kits comerciais (Doles®). Resultados A dosagem de creatinina mostrou-se reduzida em todos os grupos de diabéticos DC, DB10, DB30, DB100, DM (0,21±0,001; 0,21±0,010; 0,23±0,001; 0,21±0,080 e 0,20±0,070 g/L) em relação ao grupo controle (0,81±0,050 g/L) ( p < 0.05). Esta redução pode ser devido a uma grande perda de massa muscular que estes animais sofreram durante os 30 dias de tratamento. Já, a glicose urinária apresentou uma redução significativa nos grupos DB10, DB100 E DM (303±53; 353±62 e 353±59 mg/dL) em relação ao grupo DC (491±76 mg/dL). Esta redução pode estar ocorrendo por um possível papel protetor renal ou também pela diminuição da glicemia causada pelo carotenóide. A proteinúria reduziu nos grupos DB10, DB30 e DB100 (1,23±0,32; 1,70±0,12 e 1,10±0,19 g/g de creatinina) em relação ao grupo DC (2,81±0,25 g/g de creatinina) ( p < 0,05), também devido a um possível papel nefroprotetor deste carotenóide. A metformina, apesar de agir aumentando a sensibilidade periférica à insulina e também aumentando a utilização celular da glicose (mecanismo de ação semelhante da bixina), apresentou resultados de nefroproteção inferiores aos da bixina. Conclusão A avaliação geral dos resultados para os grupos de diabéticos indica um papel protetor renal do carotenóide bixina, que foi mais efetivo que a metformina, uma droga normoglicemiante usada no tratamento do diabetes.

FeSBE 2012

Resumo: 07.022

Deleção do receptor B1 de cininas protege da insuficiência renal aguda induzida pela cisplatina.

Autores

1ESTRELA, G. R.

1, WASINSKI, F.

1, MAFRA, F. F. P.

1, ALMEIDA, S. S. D.

1, GATTAI, P. P.

1,

MORAIS, R. L. 1, PESQUERO, J. B.

2, CÂMARA, N. O. S.

1, ARAÚJO, R. C.

1 Biofísica - UNIFESP,

2 Imunologia - USP

Apoio Financeiro: FAPESP CAPES

Resumo Objetivos A cisplatina é um dos agentes antitumorais mais usados em quimioterapia, entretanto a nefrotoxicidade é freqüente e é uma das limitações para o seu uso. Há vários mecanismos que contribuem para a disfunção renal após a exposição à cisplatina: toxicidade tubular direta na forma de apoptose, necrose e inflamação. Vários trabalhos mostram que as cininas podem afetar a resposta inflamatória. Os efeitos fisiológicos das cininas são mediados por 2 receptores transmembrânicos acoplados a proteína G. O receptor B2 é expresso constitutivamente sob condições fisiológicas e é responsável pela maioria dos efeitos das cininas. Ao contrário, o receptor B1 é normalmente pouco expresso, sendo altamente regulado na presença de estímulos inflamatórios. Vários estudos têm mostrado que o receptor B1 pode influenciar a resposta imune modulando os linfócitos T, a migração de leucócitos, induzindo a liberação de prostaglandinas, citocinas e produção de quimiocinas. Alguns artigos demonstram que a deleção gênica do receptor B1 de cininas bem como o tratamento com antagonistas desse receptor induzem uma resistência a insultos inflamatórios em vários tecidos como adipócitos, coração, fígado, rim entre outros. A partir desses dados investigamos se esses animais deficientes para o receptor B1 de cininas são protegidos contra a insuficiência renal aguda induzida por cisplatina. Métodos Esse projeto envolvendo experimentação animal foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da UNIFESP, CEP 0743/11. Animais machos C57BL/6 B1KO e animais C57BL/6 B1WT de 3 meses, pesando de 25-30g foram divididos em 4 grupos, sendo que 2 grupos foram tratados com 20ml/kg i.p. de salina e outros 2 grupos foram tratados com 20ml/kg (0,1%) i.p. de cisplatina. Após 96 horas os animais foram sacrificados e o soro juntamente com os tecidos coletados para análises. Resultados Os animais B1KO tratados com cisplatina apresentaram menor perda de peso com o tratamento (18.7±0.8 B1KO; 26.5±0.7 % WT, média ± E.P.M. p < 0,0001) e um maior consumo de ração (4dias), comparados aos animais selvagens (8.6±1.6 B1KO; 4.5±0.7 g WT, p < 0,03). Encontramos melhora na função renal dos animais B1KO em comparação com os selvagens com uma diminuição da creatinina (0.9±0.06 B1KO; 2.4±0.12 mg/dL WT, p < 0,0001) e uréia sérica (248.4±59.2 B1KO; 448.6±15.2 mg/dL WT, p < 0,0001). Conclusão Foi observado que a deleção do receptor B1 de cininas demonstrou ser benéfica em animais tratados com cisplatina, sugerindo um papel importante desse receptor na insuficiência renal aguda induzida por esse fármaco.

FeSBE 2012

Resumo: 07.023

Título: THE IMPACT OF STEM CELLS ON ELECTRON CURRENTS, PROTON TRANSLOCATION AND ATP SYNTHESIS IN KIDNEY MITOCHONDRIA AFTER ISCHEMIA/REPERFUSION (I/R).

Autores

1,3BEIRAL, H. J. V.

2, FERREIRA, C. R.

1,3, MORTARI, N. C.

1,3, TAKIYA, C. M.

2, SORENSON,

M. M. 2, FREITAS, C. F.

2, GALINA, A.

1,3, VIEYRA, A.

1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho

- UFRJ, 2 Instituto de Bioquímica Médica - UFRJ,

3 Instituto Nacional de Ciências e Tecnologia em

Biologia Estrutural e Bioimagem - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ, National Institutes of Science and Technology

Resumo Objetivos Objectives: Tissue damage by I/R results from a temporary cessation of blood flow followed by restoration of circulation. Ischemia depresses mitochondrial respiration and leads to cell death. Reperfusion increases the production of reactive oxygen species (ROS), decreases the mitochondrial transmembrane potential and stimulates invasion by inflammatory cells. The primary objective of this work was to address the potential use of bone marrow stem cells (BMSC) for the preservation/restoration of mitochondrial function in the kidney. Métodos Methods: Mitochondria from renal proximal tubule cells were isolated by differential centrifugation from rat (male, Wistar, 180 g) kidneys submitted to I/R (clamping of renal arteries followed by release of circulation after 30 min), without or with subcapsular administration of BMSC. Oxygen consumption was measured using high-resolution respirometry. Mitochondrial membrane potential was monitored by measuring the fluorescence quenching of safranine O and ROS production was evaluated by following the oxidation of Amplex Red using a fluorimeter. Analysis of S-nitrosothiol formation in lysates of LLC-PK1 cells was conducted using the Griess-Saville method. Structural parameters as cell proliferation, apoptosis and macrophage surface density were quantified using the antibodies and the procedures described elsewhere [1, 2]. All experimental procedures were approved by the Committee for Ethics in Animal Experimentation (Federal University of Rio de Janeiro, protocol 104), and were carried out in accordance with the Committee’s guidelines, which follows the requirements for manuscripts submitted to biomedical journals. Resultados Results: Respiration starting from mitochondrial complex II was strongly affected following I/R. However, when BMSC were injected before ischemia or together with reperfusion, normal electron fluxes, electrochemical gradient for H+ and ATP synthesis were almost completely preserved. Mitochondria protected from I/R by BMSC produced ROS at a much lower rate and cultured kidney cells showed a remarkable increase in protein S-nitrosylation, demonstrating that BMSC protected against the combined deleterious actions of anion superoxide and peroxinitrite. Structural correlates included stimulus of tubule cells proliferation, inhibition of apoptosis and decreased inflammatory response. Conclusão Conclusions: The key findings of the work shed light on the mechanisms that, at subcellular levels, explain the action of stem cells in preventing damage by I/R. The action of BMSC on mitochondrial functions open the possibility that autologous BMSC may help prevent I/R injuries associated with transplantation and acute diseases. References: 1) Cell. Physiol. Biochem. 24: 585, 2009; 2) Cell. Physiol. Biochem. 28: 267, 2011.

FeSBE 2012

Resumo: 07.024

The molecular, cellular and physiological aspects of renal function during aging

Autores

1NOGUEIRA, L. C.

1, FELTRAN, G.S.

1, OLIVEIRA, I. S. C. D.

2, OLIVEIRA, H. D.

2, SANTOS, B.

T. D. 2, CASTIGLIONE, R. C.

2, BARBOSA, C. M. L.

2, MORALES, M. M.

1, FONSECA, R. N. D.

1,

MORAES, J. L. D. C. 1, SILVA, J. R. D.

1,1, MENEZES, J. D. S.

1 Hatisaburo Masuda Biochemistry

Integrated Laboratory–NUPEM–UFRJ/Macaé Campus. - UFRJ, 2 2Cellular and Molecular Physiology

Laboratory–IBCCF–UFRJ/Rio de Janeiro Campus. - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, CAPES, FUNEMAC

Resumo Objetivos In this work it was investigate the changes in renal function and blood pressure in Wistar male rats subject to aging. Métodos CEUA: IBCCF 074. 7 weeks-old male Wistar rats (170-210 g) were divided into Young (Y; n=8), Adult (A; n=7) and Old (O; n=7). The rats were kept into the cages until 8 (Y), 24 (A) and 40 (O) weeks of age with free access of water and food. One day before de sacrifice the systolic, diastolic and mean blood pressure were measured. Urine samples (24h urine) were collected in all experimental groups. Food and water intake and urinary flow were measured. After urine collection (in metabolic cages) the animals were sacrificed and the kidneys were excised where their weight were determined. Glomerular filtration rate and clearance of sodium, potassium, chloride, urea, glucose and protein were calculated. Statistical analysis was performed by One-Way ANOVA (Newman-Keuls post-test). Resultados Differences were considered significant when p < 0.05. The body weight (g) was significant higher in A and O groups (390.3±17.1 and 500.1±20.4) compared to Y group (241.3±7.1). As the rats became older the food intake (g/h) was lower in A and O groups (0.6±0.02 and 0.3±0.05) compared to Y group (0.8±0.06). Also, the water intake (ml/h) was lower in A and O groups (0.8±0.07 and 0.7±0.06) compared to Y group (1.5±0.2). The systolic, diastolic and mean blood pressure (mmHg) were higher in O group (157.3±8.9, 111.8±7.1 and 126.1±8.1, respectively) compared to Y and A groups (Y=134.3±3.2, A=139.2±.4.7, Y=90.5±4.5; A=99.9±4.7, Y=104.6±3.8; A=111.6±4.2, respectively). During the aging it was observed that the kidneys weight was higher in O group (Left=2.1±0.09, right=2.0±0.2) compared to Y group (Left=1.5±0.07; right=1.4±0,04). GFR (ml/min/cm²) was lower in A and O groups (1.8x10-3±1.4x10-4 and 1.5x10-3±1.7x10-4) compared to Y group (2.8x10-3±2.8x10-4). Urinary flow (ml/min) was lower in A and O (6.4x10-3±7.7x10-4 and 4.5x10-3±3.6x10-4) compared to Y group (8.4x10-3±1.2x10-3). The sodium clearance (ml/min/cm2) was lower in A and O groups (9.9x10-6±9.9x10-7 and 5.2x10-6±7.3x10-7) compared to Y group (1.8x10-5±7.3x10-6). Chloride and potassium clearance were lower only in O group (3,6x10-6±8,1x10-7 and 3.6x10-4±4.5x10-5) compared to Y and A groups (1.24x10-5±2.4x10-6, 8.8x10-4±1.4x10-4.and 9.8x10-6±1.5x10-6, 7.2x10-4±5.5x10-5). The protein and glucose clearance (ml/min/cm²) was lower in A and O groups (2.0x10-4±1.7x10-5, 2.5x10-6±2.7x10-7 and 2.1x10-4±3.5x10-5, 1.1x10-6±6.4x10-8) compared to Y group (3.4x10-4±4.4x10-5 and 3.4x10-6±6.2x10-7). It was not observed changes in urea clearance. Oxidative stress was analyzed by means of the experimental groups of SOD (Superoxide Dismutase) and CAT (Catalase) in the renal cortex, where the CAT (Δ Abs/min/ugPtn) was observed a significant among the groups A and O (3.29 ± 1 and 12.4 ± 1.7 when compared to the Y group (14.7 ± 2). The SOD (% of Y group) was significantly reduced in groups A and O (59.87± 10.04 and 47.07± 11.93). Conclusão The renal function of Wistar male rats changes significantly during the aging. Also it was observed a reduction in GFR and a rising in blood pressure. The last one can be associated with the increasing in sodium and chloride reabsortion observed in 40 weeks old Wistar rats.

FeSBE 2012

Resumo: 07.025

CFTR MODULATION BY AVP CAN BE REGULATED BY POLYCYSTIN-1

Autores 1BARBOSA, C. M. L.

3, GUGGINO, W. B.

2, MENEZES, J. D. S.

1, MORALES, M. M.

1 Instituto de

Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ, 2 Nupem - UFRJ,

3 Department of Physiology - JHU

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, CAPES, INCTEN, FUNEMAC

Resumo Objetivos The autossomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) is characterized by the formation of multiple, progressive, fluid-filled renal cysts that distorts the renal parenchyma. This lost of the kidney architecture leads the patients to end-stage renal failure, mainly after the fifth decade of life. ADPKD is caused by genetic mutations in one of two genes: PKD-1 and PKD-2 that encode, respectively, polycystin-1 (PC-1) and polycystin-2 (PC-2). PC-1 is thought to have several functions such as fluid flow sensing, interaction with other proteins and it can regulate several signaling pathways. The CFTR chloride channel is responsible for driving fluid secretion into the cysts, promoting cyst growth. It is already known that arginine vasopressin (AVP) has a major role in the development of ADPKD increasing intracellular cAMP. In cyst cells, when PC-1 is disrupted, the levels of cAMP are higher than in normal cells. The aim of this study is to assess if AVP can modulate CFTR and the influence of PC-1 in this modulation. Métodos It was utilized M1 cells, derived from mouse collecting duct which do not express PC-1, and they were treated with AVP hormone (10-7 M). The cells were divided in two big groups: cells transfected (Tr) with PC-1 and cells not transfected (NTr). After 24 hours of hormone treatment, it was assessed in both groups: CFTR protein levels by Western Blot, CFTR mRNA levels by a quantitative RT-PCR and CFTR net ion transport by Ussing chamber. CFTR protein expression was also checked after IBMX (100 µM), forskolin (5 µM) and 8-Br-cAMP (100 µM) treatment to increase intracellular cAMP. Statistical analysis was performed by One-Way ANOVA with Newman-Keuls post-test or t test ( p < 0,05). Resultados CFTR protein expression was increased 49% with AVP treatment in NTr cells compared to control (n=6, p < 0.05), the CFTR expression in Tr cells was not altered with the treatment (n=4, p > 0.05). CFTR mRNA levels were increased after 8 and 24 hours of treatment (42% and 21%, respectively) (n=6, p < 0.01 for 8h and p < 0.05 for 24h). In cells not expressing PC-1 (NTR group), mRNA levels did not differ from the control for Tr group (n=4, p > 0.05). When intracellular cAMP is stimulated, CFTR is increased in IBMX group (47%), forskolin group (37%) and 8-Br-cAMP (36%) compared to control (n=7, p,0.05 for all of them). Again, the modulation of CFTR was abolished with the presence of PC-1 (Tr group) (n=6, p < 0.05). The CFTR transepithelial conductance was 54% increased in AVP treated and NTr cells compared to the control ones(n=8, p < 0.05). There was no significant difference in the conductance for Tr cells (n=6, p < 0.05). Conclusão CFTR chloride channel expression is modulated by AVP. PC-1 is capable of regulating this modulation. When PC-1 is disrupted in ADPKD, some signaling pathways are thought to be deregulated, increasing cAMP and increasing CFTR activity. In this work, we show data that corroborates that PC-1 can regulate CFTR modulation by AVP.

FeSBE 2012

Resumo: 07.026

BONE MARROW-DERIVED MONONUCLEAR CELLS UTILIZATION IN RATS SUBMITTED TO DIABETIC NEPHROPATHY

Autores

1CASTIGLIONE, R. C.

1, MARON-GUTIERREZ, T.

1, BARBOSA, C. M. L.

3, BARREIRA, A. L.

1,

ORNELLAS, F. M. 1, DIBARROS, C. B. A.

4, PASCARELLI, B. M.

1, ROSSI-BERGMANN, B.

1,

ROCCO, P. R. M. 3, TAKIYA, C. M.

2, MENEZES, J. D. S.

1, MORALES, M. M.

1 Instituto de

Biofisica Carlos Chagas Filho - UFRJ, 2 Núcleo em Ecologia e Desenvolvimento Sócio-Ambiental de

Macaé - UFRJ - Macae, 3 Instituto de Ciencias Biomedicas - UFRJ,

4 Instituto Oswaldo Cruz -

FIOCRUZ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, CAPES, MS, FUNEMAC

Resumo Objetivos INTRODUCTION AND AIMS: Diabetic nephropathy is one of the main causes of end-stage renal diseases. We investigated the effect of mononuclear bone marrow-derived cells (MC) therapy in morphofunctional renal parameters and TGF-beta1 expression in rats subjected to diabetic nephropathy. Métodos METHODS: This study was approved by the Ethics Committee of the Carlos Chagas Filho Institute of Biophysics, Health Sciences Centre, Federal University of Rio de Janeiro protocol number IBCCF 074). Eight weeks-old male Wistar rats were divided into control (CTRL; minimal n=6), diabetic (DM; minimal n=7), CTRL+MC (minimal n=6) and DM+MC (minimal n=7) groups. Diabetes was induced by a single injection of streptozotocin (45 mg/Kg, i.p.). Four weeks after diabetes induction, 2x10 7 MC were injected via jugular vein. Urine samples (24h urine) were collected 16 weeks after diabetes induction, when the animals were sacrificed. For localization of MC in diabetic kidneys, MC were incubated with CellTrace™ Far Red DDAO-SE and visualized by confocal microscopy 24 hours and 6 days after infusion. Glomerular filtration rate, fractional excretion of electrolytes and protein were calculated. TGF-beta1 protein was examined by ELISA method. Paraffin-embedded kidneys were stained for PAS for morphological analysis. macrophage infiltration in the glomeruli were analyzed by immunohistochemistry. Statistical analysis was performed by One-Way ANOVA (Newman-Keuls post-test, p < 0,05). Resultados RESULTS: DM and DM+MC groups showed an increase in blood glucose (mg/dL) (317±93 and 298±143, respectively) compared to CTRL (78±21) and CTRL+MC (66±16) groups. Labeled MC were seen in renal tissue after 24 hours and six days in the group DM+MC. GFR (mL/min/g) was higher in DM group (0.01±0.01) compared to CTRL, CTRL+MC and DM+MC (0.004±0.001, 0.004±0.001 and 0.006±0.001, respectively). Glomerular tuff area (µm2) was higher in DM group (7539±835) compared to CTRL (5325±983), CTRL+MC (5895±824) and DM+MC (6443±663). Fractional excretion (%) of sodium, chloride, potassium, glucose and protein were higher in DM and DM+MC groups compared to CTRL and CTRL+MC groups. TGF-beta1 levels (% CTRL) in DM group (135.6±8.9) were significantly increased compared to CTRL, CTRL+MC (77.78±6.4) and DM+MC (89.44±17.2) groups. An increase of aproximately 3.4 fold in ED1+/arginase I+ macrophages was observed in the DM+MC group versus control groups and the DM group. Conclusão CONCLUSIONS: MC migrate to the kidneys and remain there at least up to six days. MC therapy is able to prevent glomerular alterations in rats submitted to early diabetic nephropathy, probably through a decrease in the renal content of TGF-beta1 and M2 macrophage accumulation in the glomeruli.

FeSBE 2012

Resumo: 07.027

ALTERAÇÕES NA ATIVIDADE E EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS FOSFATASE 1 (PP1) CONTRIBUEM, AO MENOS EM PARTE, PARA A REGULAÇÃO DIFERENCIAL DO NHE3 ANTES E APÓS O DESENVOLVIMENTO DA HIPERTENSÃO ARTERIAL EM SHR

Autores 1CRAJOINAS, R. O.

2, PESSOA, T. D.

2, MALNIC, G.

1, GIRARDI, A. C. C.

1 Ciências Médicas -

USP, 2 Fisiologia e Biofísica - USP

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Objetivos Por meio de estudos de microperfusão estacionária in vivo observamos que a atividade do NHE3 encontra-se aumentada em túbulo proximal de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) antes do desenvolvimento da hipertensão arterial e diminuído após o desenvolvimento desta doença em comparação aos ratos Wistar Kyoto (WKY) com idade correspondente. Esta regulação diferencial do NHE3 é acompanhada por alterações nos níveis de fosforilação da serina 552, sítio consenso para proteína cinase A (PKA), localizado na região carboxi-terminal do transportador. Neste trabalho, testou-se a hipótese de que os níveis de fosforilação do NHE3 estariam aumentados em túbulo proximal de SHR adulto devido ao aumento da atividade da PKA e/ou à diminuição na atividade de proteínas fosfatase-1 (PP1). Métodos Ratos WKY e SHR jovens (J) pré-hipertensos (132 ± 5 g e 98 ± 3 g) e adultos (A) hipertensos (301 ± 8 g e 272 ± 5 g) foram infundidos e perfundidos com salina ou com 6MB-cAMP (análogo ao cAMP que ativa especificamente a PKA) para avaliar, respectivamente, os níveis de fosforilação e a atividade do NHE3 (protocolo de pesquisa nº 080/11). Proteínas de membrana do córtex renal de WKY e SHR (J) e (A) foram também isoladas para a realização de ensaios de immunoblotting, visando determinar a expressão das subunidades de PKA e das isoformas da PP1; bem como para a realização de ensaios de ELISA, visando determinar a atividade da PP1. Resultados O J-SHR apresentou um aumento tanto na porcentagem de aumento dos níveis de fosforilação da serina 552 (179 ± 14%, P < 0,001) quanto da inibição da atividade (65 ± 10%, P < 0,001) do NHE3 em relação ao J-SHR infundido ou perfundido com salina. Já no A-SHR, a fosforilação da serina 552 aumentou pouco (36 ± 4%, P < 0,01) em resposta ao 6MB-cAMP e não houve variação da função do NHE3 entre os A-SHRs perfundidos com salina ou 6MB-cAMP. Adicionalmente, verificou-se que a expressão das subunidades catalítica e regulatória não variava significativamente entre o J-SHR e o A-SHR. Por sua vez, o J-SHR apresentou maior atividade da PP1 que o A-SHR (1640 ± 107 pM vs. 940 ± 119 pM, P < 0,01). Além disso, houve uma diminuição na expressão da PP1α no A-SHR (35 ± 8%, P < 0,01) quando comparado ao J-SHR. Conclusão Os dados sugerem que a fosfatase (PP1) é, possivelmente, a responsável por manter o NHE3 menos fosforilado no resíduo 552 em SHR de 5 semanas e mais fosforilado no SHR de 14 semanas. A identificação de componentes da via de sinalização que regula a fosforilação do NHE3 pode elucidar mecanismos importantes relacionados com a fisiopatologia da hipertensão arterial.