Coprocultura, Urinocultura e Cultura de secreções

Prof. Dr. Renato Motta Neto

UNIVERSIDADE FEDERALDO RIO GANDE DO NORTECENTRO DE BIOCIÊNCIAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA E PARASITOLOGIA

TÉCNICA DE CULTURA PARA SECREÇÕES

• INTRODUÇÃO:

• O exame bacteriológico de secreções

envolve o exudato amigdaliano, secreções

de orofaringe, conjuntival, nasal, ouvido

médio, escarro e outras provenientes de

lesões abertas ou fechadas; já as lesões

superficiais envolvem furúnculo,

abscessos e feridas cirúrgicas.

CULTURA DE OROFARINGE

• MICROBIOTA:

• Diversificada(Estreptocos alfa-hemolíticos,Beta-hemolíticos nãopertencentes ao Gr. A,Neisserias saprófitas,Estafilococos , difteróides, algumasenterobactérias e bactérias anaerobias, etc..);

• FOCO: Pesquisa de Streptococcus pyogens Gr.A, N.meningitidis (portadores), S.aureus eCorynebacterium diphtheriae (mét. Especiais).

CULTURA DE OROFARINGE

• MÉTODO:

• 1) Coleta do material (não realizar asseio bucal);

• 2) Bacterioscopia;

• 3) Cultura.

COLETA

2 SwabsNo caso de semeioNão imediato,acondiciona-lo em meioPara tranporte

BACTERIOSCOPIA

• PRIMEIRO PASSO:

• Faz-se um esfregaço em lâmina (GRAM);

• Informações importantes:

• Presença de PMN (>25 PMN e < 10 cél);

• Descrição da microbiota (Gram positiva e ou Gram negativa – relatar o predomínio);

• Arranjos celulares.

CULTURA

• Semeio (técnica: em quadrantes);

• MEIOS:

• ASA (cortes com a alça -padrão hemolítico) ;

• Mc. Conkey;

• Ágar sal manitol (melhor isolamento de estafilococos).

ENTENDENDO O GÊNEROESTREPTOCOCOS

• CLASSIFICAÇÃO SEGUNDO LANCEFIELD• Grupo A (beta-hemolíticos):(impetigo,

f.escarlatina,f.reumática e GNDA);• Grupo B (beta-hemolítico):septicemia puerperal,

infecções recém-nascidos, hidrólise do hipurato eCAMP;

• Grupo D(alpha ou beta): enterococos,CAMP (+), bileesculina (+), caldo hiper (+);

• Grupo viridans (Alpha);

• Steptococcus pneumoniae (alpha):pneumonia, otite emeningite, optoquina (sensível), bile (solúvel).

Streptococcus pyogens(Beta-hemolítico Gr. A)

BETA-HEMÓLISE Sensível a Bacitracina

ENTENDENDO O GÊNEROESTAFILOCOCO

• ESPÉCIES INTERESSE MÉDICO:

• Staphylococcus aureus (abcessos, intoxicaçãoalimentar, síndrome do ch. Tóxico);

• Staphylococcus epidermidis (infecções de próteses, encontrado na pele);

• Staphylococcus saprophyticus (infecção tr.urinário)

PROVA DA CATALASE

• INTRODUÇÃO:

• Diferencia as espécies de estafilocos (+), dos estreptococos(- ).

PROVA COAGULASE

• INTRODUÇÃO:

• Diferencia a espécie S.aureus

Fator clumpingCoagulase ligada a célula

Coagulase livre

S. epidermidis x S.saprophyticcus

S.epidermidisSensível -Novobiocina

S.SaprophyticcusResistente -Novobiocina

ESCARRO

• INTRODUÇÃO:

• O exame microbiológico do escarro é realizadona identificação de patógenos que podemestar associados a infecções pulmonaresconsiderando-se que o escarro refletequalquer infecção que possa estar ativa naárvore brônquica e pulmões.

ESCARRO

• MICROBIOTA PATOGENICA:

• Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, bacilos Gram-negativos não fermentadores, Legionella spp, Micoplasma pneumoniae e outros.

ESCARRO

• OBJETIVO:

• 1) Diagnóstico de pneumonias bacterianas;

• 2) Diagnóstico de casos suspeitos de tuberculose.

• MÉTODO:

• Bacterioscopia;

• Cultura.

Diagnóstico das pneumonias bacterianas

• FOCO: Streptococcus pneumoniae

• Método: amostra realizar asseio bucal, escolher a porção mais purulenta do escarro e semear em:

• ASA;

• ÁGAR CHOCOLATE (fastidiosos);

• ÁGAR MAC.CONKEY.

Diagnóstico das pneumonias bacterianas

• BACTERIOSCOPIA: (GRAM)

Amostra adequada: < 10 células epiteliais/campo e > 25 PMN/campo

Amostra inadequada: > 10 células epitelilais/campo e <25 PMN/campo

Streptococcus pneumoniae(Alpha-hemolítico)

SENSÍVEL A OPTOQUINA REAÇÃO DE QUELLUNG POSITIVOSOLÚVEL À BILE

COPROCULTURA

• INTRODUÇÃO:

• As culturas de fezes são largamente utilizadas no diagnóstico de gastroenterites inespecíficas e demais infecções do trato intestinal.

• FOCO:

• Salmonella sp (febre tifóide, febres entéricas...invasividade é seu principal f. Virulência);

COPROCULTURA

• FOCO:

• Shigella sp: menor freqüência (disiteria bacilar);

• E.Coli: enterites (crianças-principal)- tipos: EPEC,ETEC, EIEC e EHEC(útil classificação sorológica-epidemiologia);

• Y. Enterocolitica/C.jejuni: não é pesq na rotina.

COPROCULTURA

• Dose Infectante:

• Shigella – 10-100 UFC/mL

• C.jejuni – 100-1.000 UFC/mL

• Salmonella – 100.000 UFC/mL

• E. Coli – 100.000.000 UFC/mL

COPROCULTURA

• AMOSTRA:

• Obtenção na fase aguda (se possível coletar antes da quimioterapia);

• Remeter ao laboratório (2h);

• Meio transporte : Cary-Blair ou Stuart.

COPROCULTURA

• ISOLAMENTO PRIMÁRIO:

• Ágar MacConkey, EMB:não seletivos entre os G(-) entéricos;

• SS: bom para salmonella, podendo inibir Shigella• XLD:salmonella e shigella• HE: salmonella e shigella• Ágar sulfito de bismuto: seletivo para S.typhi• VB:seletivo para Salmonella spp, não indicativo

para S.typhi e S.paratyphi

COPROCULTURA

Lac (-):incolor; Lac (+): rosaLac(+): laranja Lac (-):incolor c/s

pigmento

ENTENDENDO AS PROVAS BIOQUÍMICAS

ENTENDENDO AS PROVAS BIOQUÍMICAS

Pseudomonas spp

Fenil alanina

Citrato

Uréia

Descarboxilaçãoaa

Vm &Vp

Parafenilenodiamina

URINOCULTURA

• INTRODUÇÃO:

• A urinocultura é um dos exames microbiológicos,no qual é indispensável à quantificação dos MO,para que o resultado tenha valor diagnósticodefinitivo.

• MÉTODO:

• 1)Alça calibrada;

• 2) Cultivo em lâmina (semi-quantitativo);

• 3) Método das diluições (mais exato).

URINOCULTURA

FATOR DILUIÇÃO:1µL:nº col x 1.000UFC/mL10µL:nºcol x 100 UFC/mL

ALÇA CALIBRADA

SEMEIO: CLED; MAC.CONKEY

HEMOCULTURA

• INTRODUÇÃO:

• O sangue é normalmente isento de qualquertipo de MO, e uma vez que bactériaspenetram na corrente circulatória,desenvolve-se necessariamente umabacteremia.

HEMOCULTURA

• AMOSTRA:

• Coletar 2-3 amostras antes do acesso febril (24h);

• Volume: 10mL (ADULTO), 1-5 mL (CRIANÇA);

• MEIO:

• Caldo BHI + SPS (inativa leucócitos).

HEMOCULTURA

• ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO:

• Incubação (35-37C)..INSPEÇÃO DIÁRIA;

• EVIDÊNCIAS DE CRESCIMENTO:

• Turvação do meio;

• Colôniascrescendo na camada de sangue sedimentada;

• Evidência de hemólise;

• Produção de gás.

HEMOCULTURA

• SUBCULTIVOS:

• Realizar após 48 h (frasco inicial);

• A cada 48h (permanecerem negativas);

• Período máximo: 7 dias

AÇÕES AULA PRÁTICA

• Urinocultura

• 1) Semeio com alça calibrada no meio cled

• Coprocultura

• 1) Semeio Mac.Conkey, SS

• Secreções

• 1) Semeio ASA, BHI, Gram