Coprocultura Cultura de fezes

Instrues para coleta de fezes Coletadas no incio ou fase aguda da doena

Patgenos presentes em maior nmero

Antes da antibioticoterapia.

Coletar as fezes e colocar em um frasco contendo o meio para transporte em quantidade equivalente a uma colher de sobremesa.

Preferir sempre as pores mucosas e sanguinolentas.

Fechar bem o frasco e agitar o material.

Se a amostra no for entregue no laboratrio em uma hora, conservar em geladeira a 4C, no mximo por um perodo de 12 horas.

Marcar o horrio da coleta

Swab retal

Usar swab de algodo, certificando-se de que a ponta da haste que suporta o algodo est bem revestida.

Umedecer o swab em salina estril (no usar gel lubrificante) e inserir no esfncter retal, fazendo movimentos rotatrios.

Ao retirar, certifique-se que existe colorao fecal no algodo.

O nmero de swabs depende das investigaes solicitadas.

Quando solicitado

Em uma cultura de fezes pesquisada a presena de agentes bacterianos mais comuns:

Salmonella spp., Shigella spp., alguns sorotipos de Escherichia coli, Campylobacter spp e Staphylococcus aureus.

Outros agentes podem tambm ser pesquisados, mas importante que sejam mencionados na solicitao mdica, como, por exemplo, Yersinia spp. e Vibrio spp.

Semeadura em:

MacConkey

SS

gar Sangue

Incubadas por 24 horas a 35-37C

Avaliadas e so feitas provas bioqumicas das colnias suspeitas

Quando necessrio proceder a soroaglutinao para confirmao do resultado.

MacConkey

SS

Urocultura

Instrues para coleta de urina

A coleta deve ser feita pela manh, preferencialmente da primeira mico do dia, ou ento aps reteno vesical de duas a trs horas.

Pacientes com urgncia urinria podem ser dispensados dessa reteno, anotando-se o fato na requisio.

Coleta de urina de mulheres Para se obter melhores resultados, a coleta de amostras das

mulheres deve ser supervisionada e realizada por profissionais treinados

Orientar clara e objetivamente todos os passos do procedimento e alertar quanto s conseqncias de m coleta (necessidade de retornar para nova amostra, dificuldade do mdico interpretar, etc.)

Coleta de urina para crianas que no tm controle da mico No caso das crianas, fazer uso de saco coletor,

masculino ou feminino. Deve-se fazer higienizao prvia do perneo, coxas e

ndegas com gua e sabo neutro. Caso no haja mico, o saco coletor deve ser trocado a

cada 30 minutos, repetindo-se a higienizao da rea perineal e genital.

Coleta de urina para homens Fazer a higienizao cuidadosa da genitlia externa,

com gua e sabo e enxugar. Colher o jato mdio, preferencialmente da primeira

mico do dia, ou ento com uma reteno urinria de 2 a 3 horas.

Espalhamento da amostra

Microbiota da Uretra

Cocos Gram-positivos:

Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Streptococcus spp.

Bacilos Gram-positivos: Corynebacterium spp.

Bacilos Gram-negativos: Escherichia coli Proteus mirabilis

Microbiota da Vagina

Cocos Gram-positivos:

Staphylococcus spp. Streptococcus spp. Enterococcus spp.

Bacilos Gram-positivos:

Lactobacilos pH cido

Bacilos Gram-negativos:

Escherichia coli, Klebsiella spp., Corynebacterium spp., Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa

Microrganismos mais freqentemente

encontrados

Escherichia coli 80-95% de ITU primria 70-80% de episdios de recorrncia

Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas e Proteus Associada com ITU recorrente, em crianas ou procedimentos cirrgicos

Enterococcus, Streptococcus grupos D e B So os Gram positivos mais encontrados

Staphylococcus saprophyticus Freqncia aumentada em meninas adolescentes e em idade escolar

1) A amostra deve ser semeada com ala calibrada de 0,01ml ou 0,001ml em dois meios:

gar-sangue Meio no seletivo, visa o isolamento de bactrias em

geral

MacConkey Meio seletivo e diferencial

2) Incubao dos meios 37C (18-24 hs)

3) Observao da morfologia colonial Resultado da urocultura: Crescimento apenas em gar-sangue

Crescimento em gar-sangue e MacConkey

4) Identificao

Resultado

O resultado da urocultura deve ser sempre quantitativo

Unidades Formadoras de Colnias p/ mililitro (UFC/ml)

Deve-se liberar o resultado da contagem de leuccitos

Informar ao mdico o mtodo de coleta da urina Dvidas na interpretao (repetir a urocultura) Quantificao:

Crescimento com ala de 0,001ml ou 1l (1:1000) 1 colnia = 1.000 ou 103 UFC/ml

Contagem

Utilizar o fator de correo

volume: 1 L multiplicar por 1000

10L multiplicar por 100

100L multiplicar por 10

diluio: diluio 1:10 multiplicar por 10

diluio 1:100 multiplicar por 100

diluio 1:1000 multiplicar por 1000

Tcnica para preparo do esfregao

Identificar a lmina de maneira segura, usando lminas com extremidade fosca.

Rolar toda a superfcie do swab sobre o centro da lmina procurando fazer um esfregao fino e uniforme e no destruindo as clulas.

Fixar rapidamente na chama. Quando material escasso, demarcar a rea do

esfregao. Proceder o mtodo de colorao mais

apropriado.

Fixao do Esfregao

Calor Todo o esfregao, antes de ser submetido colorao, dever

estar seco (exposto ao ar), sendo fixado com calor brando (50C). A fixao excessiva e o superaquecimento iro distorcer a

morfologia celular e a fixao insuficiente permitir a sada do material durante o processo de colorao.

Deixar a lmina esfriar antes de iniciar a colorao. Metanol ou Etanol

A fixao pelo metanol ou etanol tambm pode ser utilizada. Alm de prevenir a lise das hemcias, evita que os esfregaos,

principalmente os de urina, desprendam-se no momento da colorao.

Deixar o esfregao secar numa superfcie plana; aps, colocar uma a duas gotas de lcool (1 minuto), drenando o excesso, sem lavar.

No aquecer a lmina antes da colorao.

AC = gar chocolate;

AS = gar sangue;

MC = gar Mac Conkey;

TIO = caldo tioglicolato;

LJ = gar Lowenstein Jensen;

SAB = gar Sabouraud;

MYC = Mycosel;

SS = gar Salmonella-

Shigella;

TM = gar Thayer Martin

(opcional);

CLED = gar CLED

Caractersticas macroscpicas das

colnias - Tamanho

O tamanho das colnias dever ser considerado na placa como um todo, uma mesma cepa pode formar colnias de tamanhos variados em diferentes pontos da placa.

Puntiforme (

Cor

A colorao depender do meio de cultura utilizado.

Meios no diferenciais pode-se identificar a colorao caracterstica de

alguns microrganismos

S. aureus amarelo Micrococcus amarelo Serratia marcescens ou rubidae avermelhado Roseomonas rseo Pseudomonas diferentes tons de verde e

castanho Enterococcus casseliflavus amarelo

Cor

Meios diferenciais a colorao da colnia sofre interferncia das reaes que

ocorrem com substratos dos meios de cultura:

Utilizao da lactose no MacConkey vermelho

Utilizao da lactose no CLED amarelo

Utilizao do manitol em gar manitol salgado amarelo

Produo de H2S no TSI, Hecktoen Enteric e Salmonella-Shigella negro

Hemlise Baseada na lise de hemcias contidas no gar Sangue

(5%).

Lise total denominada beta-hemlise, ocorre a formao de halo de

transparncia ao redor e/ou sob a colnia

S. pyogenes, S. agalactiae, Listeria,

S. aureus, S. haemolyticcus,

Enterococcus.

Lise parcial alfa-hemlise

Formao de halo com colorao esverdeada:

S. viridans, S. pneumoniae.

Ausncia de lise definida como gama-hemlise, meio de cultura

inalterado

Enterococcus, Estafilococos coagulase negativo.

Forma da colnia

Redonda E. coli, Klebsiella, Serratia, Stenotrophomonas, Acinetobacter, Estafilococos, Estreptococos

Irregular Pseudomonas, Proteus, Providencia, Morganella, Bacillus

Produo de vu Proteus, Comamonas, Pseudomonas

Filamentosas fungos filamentosos Formando pontas, como estrelas Candida albicans Com depresso no centro Pneumococo Cerebriforme Pseudomonas stutzeri Elevada Klebsiella, Bacillus Chata Enterobacter, Pseudomonas

Cheiro

Cheiro de cloro: Eikenella corrodens

Perfume ordinrio: Pseudomonas aeruginosa

Cheiro ftido: Anaerbios

Caramelo alguns Streptococcus viridans

Fermento Candida spp

Queijo S. aureus

Terra Nocardia e Streptomyces

Peixe Acinetobacter em gar sangue

Provas Bioqumicas

Prova da Catalase

Permite separar os estreptococos catalase negativa de outros cocos Gram-positivos produtores de catalase, por exemplo, estafilococos.

Converte o perxido de hidrognio em oxignio e gua A liberao do oxignio se observa pela formao de bolhas.

Procedimento:

Colocar sobre uma placa de Petri, ou uma lmina, uma poro do isolado de uma cultura 18 - 24 horas, evitando tocar no meio de cultura

Repetir o procedimento com cepas controle positivo e negativo; Adicionar uma gota de perxido de hidrognio a 3%; Observar a formao de bolhas de ar, indicativo de teste positivo para

catalase. Interpretao:

No havendo formao de bolhas, o teste negativo e indicativo de Streptococcus.

Oxidase (indofenoloxidase)

Produo de oxidase Papel filtro com N-Tetrametil-p-fenileno Procedimento

Colocar uma colnia suspeita no papel Aguardar 20s Negativo: sem modificao na cor Positivo mudana da cor para rosa forte podendo

alterar para preto Oxidase positiva

Pseudomonas, Neisseria, Plesiomonas Oxidase negativa

Staphylococcus e Enterobactrias

Aula Prtica

Contagem

Alteraes no meio de cultura

TSI, Uria, Fenilalanina, Lisina, Citrato, Glicose, Lactose.

Gnero Gs em

glicose Lactose Manita Mobilidade Indol Citrato H2O Urease DA LDC

Escherichia +/- +/- + +/- + - - - - +

Aerobacter + +/- + + - + - - - +

Klebsiella + +/- + - - + - + - +

Citrobacter + +/- + + - + + - - -

Salmonella + - + + - + +/- - - +

Shigella - - +/- - +/- - - - - -

Providence +/- - +/- + + + - - + -

Proteus +/- - - + + - + + + -