Cultura de SecreçõesCultura de Secreções

CONSIDERAÇÕES GERAISCONSIDERAÇÕES GERAISTodo resultado liberado pelo laboratório de Microbiologia é Todo resultado liberado pelo laboratório de Microbiologia é conseqüência da qualidade da amostra recebida. conseqüência da qualidade da amostra recebida. O material colhido deve ser representativo do processo O material colhido deve ser representativo do processo infeccioso investigado, devendo ser eleito o melhor sítio da infeccioso investigado, devendo ser eleito o melhor sítio da lesão, evitando contaminação com as áreas adjacentes.lesão, evitando contaminação com as áreas adjacentes.A coleta ou transporte inadequados podem ocasionar falhas no A coleta ou transporte inadequados podem ocasionar falhas no isolamento do agente etiológico e favorecer o desenvolvimento isolamento do agente etiológico e favorecer o desenvolvimento da flora contaminante, induzindo a um tratamento inapropriado.da flora contaminante, induzindo a um tratamento inapropriado.Portanto, procedimentos adequados de coleta devem ser Portanto, procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um "falso" agente adotados para evitar o isolamento de um "falso" agente etiológico, resultando numa orientação terapêutica inadequada.etiológico, resultando numa orientação terapêutica inadequada.

Cultura de SecreçõesCultura de SecreçõesCuidados coletaCuidados coletaa) Colher antes da antibioticoterapiaa) Colher antes da antibioticoterapia

b) Instruir claramente o paciente sobre o procedimento;b) Instruir claramente o paciente sobre o procedimento;

c) Observar a anti-sepsia na coleta c) Observar a anti-sepsia na coleta

d) Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha maior d) Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha maior probabilidade de ser isoladoprobabilidade de ser isolado

e) Considerar o estágio da doença na escolha do material. e) Considerar o estágio da doença na escolha do material. Patógenos entéricos, causadores de diarréia, estão presentes Patógenos entéricos, causadores de diarréia, estão presentes em maior quantidade e são mais facilmente isolados durante em maior quantidade e são mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarréica do processo infeccioso intestinal. a fase aguda ou diarréica do processo infeccioso intestinal.

f) Quantidade suficiente de material deve ser coletado para f) Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa análise microbiológica. permitir uma completa análise microbiológica.

g) O pedido do exame deve conter dados como idade, doença de g) O pedido do exame deve conter dados como idade, doença de base e indicação do uso de antibióticos.base e indicação do uso de antibióticos.

Cultura de SecreçõesCultura de SecreçõesSECREÇÃO DE OROFARINGE: SECREÇÃO DE OROFARINGE:

1. Solicitar ao paciente que abra bem a boca;1. Solicitar ao paciente que abra bem a boca;

2. Usando abaixador de língua e swab estéril, fazer esfregaços sobre as 2. Usando abaixador de língua e swab estéril, fazer esfregaços sobre as amígdalas e faringe posterior, evitando tocar na língua e mucosa bucal;amígdalas e faringe posterior, evitando tocar na língua e mucosa bucal;

3. Procurar o material nas áreas com hiperemia, próximas aos pontos de 3. Procurar o material nas áreas com hiperemia, próximas aos pontos de supuração ou remover o pus ou a placa, colhendo o material abaixo da supuração ou remover o pus ou a placa, colhendo o material abaixo da mucosa;mucosa;

4. Colher dois swabs;4. Colher dois swabs;

5. Enviar imediatamente ao laboratório para evitar a e secagem do material.5. Enviar imediatamente ao laboratório para evitar a e secagem do material.

Coletar a amostra exatamente na área inflamada, evitando outros sítios na Coletar a amostra exatamente na área inflamada, evitando outros sítios na cavidade oral.cavidade oral.

A contaminação com saliva, que contém uma flora bacteriana variada, pode A contaminação com saliva, que contém uma flora bacteriana variada, pode dificultar o isolamento do verdadeiro agente infeccioso. dificultar o isolamento do verdadeiro agente infeccioso.

Cultura de SecreçõesCultura de Secreções

Orofaringe:Orofaringe:Diferenciar microbiota local dos Diferenciar microbiota local dos

possíveis patógenos possíveis patógenos (principalmente Streptococcus)(principalmente Streptococcus)

Cocos Gram-positivos

Os cocos Gram positivos (CG+) compõem um grupo de grande importância clínica. São responsáveis por inúmeras e variadas afecções e síndromes.

Os CG+ anaeróbios facultativos de importância clínica pertencem a uma das famílias:

Micrococcaceae (Staphylococcus e Micrococcus) ou Streptococcaceae (Streptococcus, Enterococcus e Aerococcus)

Pesquisa de catalase produzida pela bactéria

Cultura de SecreçõesCultura de Secreções

A partir da caracterização da amostra como CG+ através da coloração de Gram, a determinação da família é feita pela prova da catalase.

A prova da catalase consiste em colocar uma amostra de bactéria em contato com o peróxido de hidrogênio, e pesquisar a formação de bolhas de oxigênio.

2H2O2 2H2O + O2 catalase

Cocos Gram-positivos

Micrococcaceae+

As bactérias desta família são catalase POSITIVAS

Streptococcaceae-

As bactérias desta família são catalase NEGATIVAS

Cocos Gram-positivos

Esta estrutura característica lembra cachos de uva.

Características do Gênero Staphylococcus

As espécies mais importantes na clínica

S. lugundensis

S. schleiferiS. sciuri

S. lentusS. caseolyticus

S. hyicusS. chromogenes

S. intermediusS. delphini

S. carnosus

S. simulansS. cohnii

S. xylosusS. saprophyticus

S. gallinariumS. kloosii

S. equorumS. arlettae

S. epidermidisS. capitisS. warneiS.saccharolyt.S. capraeS. hominis

S. haemolyticusS. auricularisS. aureus

Características do Gênero Staphylococcus

Staphylococcus aureus

De todas as espécies do gênero, o S. aureus é o mais importante. É responsável pelo segundo maior número de infecções em seres humanos.

O S. aureus está presente no trato respiratório superior, especialmente nas narinas, de aproximadamente 60% da população em geral, e assim permanece sem causar doença em condições normais.

O nome “aureus” significa “dourado” em latim, qualidade atribuída ao pigmento amarelado característico produzido pela bactéria.

Staphylococcus aureus

Enzimas Extracelulares

A enzima extracelular mais importante é a coagulase. A produção de coagulase é um critério para a identificação de uma amostra como S. aureus

coagulase

protrombinaFibrinogênio Fibrina

EstafilotrombinaProvoca a coagulação

Fatores de Virulência do Staphylococcus não é o único que produz coagulase

Detecção da coagulase, com plasma de coelho. A bactéria é inoculada num tubo com plasma de coelho e incubada a 37ºC . Se o plasma coagular, a espécie é S. aureus.

Staphylococcus aureus

Testes de aglutinação rápida para coagulase

• Presença de proteína A e fator de coagulação (clamping factor)

• Fornece resultado + em 5 a 20 seg.• Mostra correlação de 80% com método

clássico• preço embalagem com 150un.

U$116.00

Testes de aglutinação rápida para coagulase

Teste de aglutinação latex azul p/ detecção clumping factor e proteína A associado à S. aureus

Resultado em 60 seg Sensibilidade/especificidade:

99/92% Inclui controles positivo e negativo Preço: embalagem de 105 testes-

U$ 105.62 Validade 18 meses

Padrões de Hemólise

esverdeado

A segunda espécie mais importante do gênero Staphylococcus é o Staphylococcus epidermidis.

O Staphylococcus epidermidis faz parte da flora normal da pele e da mucosa de seres humanos e animais superiores.

Staphylococcus epidermidis

Importante na infecção hospitalar

O Staphylococcus epidermidis é uma espécie bem menos virulenta do que S. aureus. Não apresentam a produção de coagulase e algumas cepas apresentam a produção muito tímida de certas enzimas proteolíticas.

Isto não significa que S. epidermidis não possa ser patogênico. Esta espécie tem muitos fatores de adesão e forma muito biofilme, sendo perigosa para pacientes que fazem uso de material invasivo de plástico (cateter, próteses, stents, etc.).

Staphylococcus epidermidis

O Staphylococcus epidermidis é um risco para pacientes imunocomprometidos e para usuários de drogas intravenosas, podendo causar endocardite e infecções generalizadas não-piogênicas.

Staphylococcus epidermidis pode causar septicemia, endocardite, peritonite, ventriculite e infecções em locais com prótese.

Staphylococcus epidermidis

Outras espécies de Staphylococcus

No laboratório clínico, usualmente se faz a diferenciação entre Staphylococcus coagulase positiva (S. aureus) e Staphylococcus coagulase negativa (não aureus).

Os Staphylococcus coagulase negativa de interesse são subdivididos em dois grupos: saprophyticus e não saprophyticus, baseado na sua suscetibilidade à novobiocina.

•Gênero Catal. Motilidade NaCl 5% Oxidase Aeróbio Tétrade

Estrito •Staphylococcus + neg + neg não não

•Planococcus + + + neg + variável

•Micrococcus + neg + + variável variável

•Enterococcus neg variável + neg não não

•Streptococcus neg neg variável neg não não

•Aerococcus neg neg + neg não +

•Stomatococcus * variável neg neg neg não variável

•* aderente ao meio

Identificação simplificada dos cocos Gram positivo de

importância clínica

Chave Geral para a Identificação de Staphylococcus

Cocos GRAM +

Micrococcaceae

catalase +Streptococcaceae -

+

Staphylococcus sp.

Sensível à novobiocina? -

Coagulase/DNAse

- Staphylococcus aureus

+

+

Staphylococcusnão saprophyticus

Staphylococcus grupo saprophyticus

Chave Geral para a Identificação de Staphylococcus

Espécies de Staphylococcus do grupo não saprophyticus(Grupo epidermidis)

Espécies de Staphylococcus do grupo saprophyticus

S. saprophyticusS. cohnii

S. xylosus

S. epidermidis S. haemolyticusS. hominisS. capitisS. warneri

Chave Geral para a Chave Geral para a Identificação de Identificação de StreptococcusStreptococcus

PADRÃO DE HEMÓLISE: PADRÃO DE HEMÓLISE: αα, , ββ, , γγ

GRUPOS SOROLÓGICOS: A, B, C, D, F, G (1984 GRUPOS SOROLÓGICOS: A, B, C, D, F, G (1984 Enterococos)Enterococos)

PROPRIEDADES BIOQUÍMICASPROPRIEDADES BIOQUÍMICAS

GRUPO A: GRUPO A: Streptococcus Streptococcus pyogenespyogenes

IMPORTÂNCIA CLÍNICA:IMPORTÂNCIA CLÍNICA:

FARINGITE, OTITE, SINUSITEFARINGITE, OTITE, SINUSITE

ERISIPELA (infecção da pele causada que se propaga pelos ERISIPELA (infecção da pele causada que se propaga pelos vasos linfáticos. vasos linfáticos.

IMPETIGO (afeta a camada mais superficial da pele),IMPETIGO (afeta a camada mais superficial da pele),

PIODERMITE (processos infecciosos de pele produzidos, em PIODERMITE (processos infecciosos de pele produzidos, em geral, pelos cocos piogênicos: geral, pelos cocos piogênicos: Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus e e Streptococcus pyogenes)Streptococcus pyogenes)

FEBRE PUERPERAL,FEBRE PUERPERAL,

FASCITE NECROTIZANTEFASCITE NECROTIZANTE

GRUPO B: GRUPO B: S. agalactiaeS. agalactiae

MASTITE EM BOVINOSMASTITE EM BOVINOS

SEPSE e PNEUMONIA do NEONATOSEPSE e PNEUMONIA do NEONATO

MICROBIOTA (TGI e GENITAL)MICROBIOTA (TGI e GENITAL)

MENINGITEMENINGITE

ENDOMETRITE e ITUENDOMETRITE e ITU

ESTREPTOCOCOS ESTREPTOCOCOS αα--HEMOLÍTICOS (VIRIDANS)HEMOLÍTICOS (VIRIDANS)

Grupo mutans: Grupo mutans: Strep. mutans Strep. mutans (placa dentária)(placa dentária)

Grupo Salivarius: Grupo Salivarius: Strep. salivariusStrep. salivarius

Grupo Mitis: Grupo Mitis: Strep. mitis, Strep. sanguis, Strep. mitis, Strep. sanguis, Strep.pneumoniaeStrep.pneumoniae

Grupo Anginosus: Grupo Anginosus: Strep. anginosus e Strepto Strep. anginosus e Strepto intermediusintermedius

Grupo Bovis: Grupo Bovis: Strep.bovis e Strep. equinumStrep.bovis e Strep. equinum

Streptococcus pneumoniaeStreptococcus pneumoniae PNEUMONIAPNEUMONIA

BACTEREMIA e SEPSEBACTEREMIA e SEPSE

MENINGITE, SINUSITE e OTITEMENINGITE, SINUSITE e OTITE

EMPIEMA (armazenamento de pus em alguma EMPIEMA (armazenamento de pus em alguma cavidade corpora, principalmente espaço pleuralcavidade corpora, principalmente espaço pleural) )

PERICARDITE e ENDOCARDITEPERICARDITE e ENDOCARDITE

PERITONITE PRIMÁRIAPERITONITE PRIMÁRIA

Streptococcus pneumoniaeStreptococcus pneumoniae

DETERMINANTES DA PATOGENIA:DETERMINANTES DA PATOGENIA:

ANTÍGENO DA CÁPSULA(polissacarídeo)ANTÍGENO DA CÁPSULA(polissacarídeo) ÁCIDO TEICÓICO(polissacarídeo)ÁCIDO TEICÓICO(polissacarídeo) PROTEÍNA A DE SUPERFÍCIEPROTEÍNA A DE SUPERFÍCIE PROTEASE IgA2PROTEASE IgA2 NEURAMINIDASENEURAMINIDASE PNEUMOLISINAPNEUMOLISINA

ENTEROCOCOS (antigos ENTEROCOCOS (antigos Strepto. grupo G)Strepto. grupo G)

INFECÇÃO DO TRATO URINÁRIOINFECÇÃO DO TRATO URINÁRIO

BACTEREMIA e SEPSEBACTEREMIA e SEPSE

FERIMENTOSFERIMENTOS

ENDOCARDITEENDOCARDITE

ENTEROCOCOSENTEROCOCOS

PRINCIPAIS REPRESENTANTES (17):PRINCIPAIS REPRESENTANTES (17):

Enterococcus faecalisEnterococcus faecalis

Enterococcus faeciumEnterococcus faecium

Enterococcus duransEnterococcus durans

DIAGNÓSTICO DIAGNÓSTICO LABORATORIAL dos LABORATORIAL dos

ENTEROCOCOSENTEROCOCOS HEMÓLISEHEMÓLISE

BACTERIOSCOPIABACTERIOSCOPIA

CULTIVOCULTIVO

PROVAS DE IDENTIFICAÇÃOPROVAS DE IDENTIFICAÇÃO

SOROLOGIASOROLOGIA