pesquisa de anticorpos irregulares%5b1%5d

Pesquisa e Identificação de Anticorpos

Regina Cardosorcardoso@uol.com.br

Pós Graduação em Hemoterapia SENAC - 2012

Detecção de anticorpos

Séricos:

� Pesquisa de anticorpos

Ligados à membrana eritrocitária

Teste de anticorpos irregulares

� Prova cruzada

� Tipagem reversa

� Teste de antiglobulina direto

� Auto-controle

� Controle de Rh

Revisão dos Anticorpos!!!

� Imunes ou Naturais

� Completos/aglutinantes ou Incompletos/Completos/aglutinantes ou Incompletos/

não aglutinantes

� Regulares ou Irregulares

Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) ou Teste Indireto da Antiglobulina

�� SoroSoro dodo paciente/paciente/ doadordoador

�� HemáciasHemácias comerciaiscomerciais (kits(kits comcom

duasduas ouou trêstrês hemácias)hemácias)

�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores

(Meio(Meio dede ForçaForça IônicaIônica Normal)Normal)

�� ComCom adiçãoadição dede PotencializadoresPotencializadores

(PEG,(PEG, LISS,LISS, PolibrenoPolibreno ee outros)outros)

TempoTempo dede incubaçãoincubação variavaria conformeconforme oo

potencializadorpotencializador utilizadoutilizado

DetecçãoDetecção dede AnticorposAnticorpos livreslivres nono sorosoro

Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) em gel teste

Pesquisa de Autoanticorpos

�� SoroSoro dodo pacientepaciente

�� HemáciasHemácias dodo pacientepaciente

�� MesmaMesma técnicatécnica escolhidaescolhida parapara PAIPAI

VerificarVerificar sese oo pacientepaciente temtem

anticorposanticorpos contracontra asas própriaspróprias

hemáciashemácias..

Prova Cruzada ou Provas de Compatibilidade

�� SoroSoro dodo pacientepaciente

�� HemáciasHemácias dodo doadordoador (segmento(segmento dada

unidadeunidade dede glóbulos)glóbulos)

�� MesmaMesma técnicatécnica escolhidaescolhida parapara PAIPAI

VerificarVerificar aa compatibilidadecompatibilidade entreentre oo

sorosoro dodo receptorreceptor ee asas hemáciashemácias dodo

doadordoador

Jka

D

S

Fya

K DK

Fya

Pacientes com PAI positiva, além da Prova de Compatibilidade, é necessário fenotipar a unidade para o antígeno correspondente ao anticorpo.

Anti-Jka

Créditos: Dr. Claudio Brandão, HEMOBA

Tipagem Reversa Detecta anticorpos naturais

�� SoroSoro dodo paciente/paciente/ doadordoador

�� HemáciasHemácias comerciaiscomerciais AA ee BB

VerificarVerificar aa presençapresença dede anticorposanticorpos

naturaisnaturais antianti--AA ee AntiAnti--BBTipagem Direta

Tipagem Reversa

Tipagem Reversa (Detecta anticorpos naturais)

Utilização do soro do paciente e/ou doador x

hemácias A e B

Pesquisa de Anticorpos Irregulares (Detecta anticorpos irregulares)

Utilização do soro do paciente e/ou doador x

hemácias O

Teste Direto da Antiglobulina

�� HemáciasHemácias dodo pacientepaciente

�� AntiglobulinaAntiglobulina humanahumana (AGH)(AGH)

NãoNão necessitanecessita incubaçãoincubaçãoNãoNão necessitanecessita incubaçãoincubação

DetecçãoDetecção dede AnticorposAnticorpos

ligadosligados nasnas hemáciashemácias

Perguntas!!!!!

�� QualQual aa importânciaimportância dada utilizaçãoutilização dodo ControleControle

RhRh nasnas tipagenstipagens dodo antígenoantígeno D?D?

�� OO queque significasignifica quandoquando oo ControleControle�� OO queque significasignifica quandoquando oo ControleControle

RhRh apresentaapresenta reatividade?reatividade?

�� QualQual éé aa relaçãorelação dede reatividadereatividade nono ControleControle

RhRh ee presençapresença dede TADTAD e/oue/ou autocontroleautocontrole

positivos?positivos?

Identificação de Anticorpos Irregulares ou Painel de Hemácias

�� SoroSoro dodo paciente/paciente/ doadordoador

�� HemáciasHemácias comerciaiscomerciais (kits(kits comcom

onzeonze ouou maismais hemácias)hemácias)

�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores�� SemSem adicionaradicionar PotencializadoresPotencializadores

(Meio(Meio dede ForçaForça IônicaIônica Normal)Normal)

�� ComCom adiçãoadição dede PotencilaizadoresPotencilaizadores

(PEG,(PEG, LISS,LISS, PolibrenoPolibreno ee outros)outros)

TempoTempo dede incubaçãoincubação variavaria conformeconforme oo

potencializadorpotencializador utilizadoutilizado

IdentificaçãoIdentificação dede AnticorposAnticorpos livreslivres nono sorosoro

Identificação de Anticorpos Irregulares

Mais Perguntas!!!!!

�� PorPor queque sãosão formadosformados osos anticorposanticorpos

irregulares?irregulares?

�� QualQual aa importânciaimportância emem detectádetectá--los?los?

�� OO queque aconteceacontece sese nãonão foremforem

detectados?detectados?

� A identificação de anticorpos no soro de pacientes/ doadores

depende do painel de células que está sendo utilizado.

� A especificidade do anticorpo deve ser determinada:

� Duas hemácias reagentes que tenham o antígeno.

� Não reativo com pelo menos duas hemácias sem o

Identificação de Anticorpos Irregulares

� Não reativo com pelo menos duas hemácias sem o

antígeno.

� Após definir a especificidade do anticorpo deve ser afastada

a presença de anticorpos adicionais:

� Selecionar células antígeno negativo para a especificidade

já identificada e antígeno positiva para os outros

antígenos cuja presença dos anticorpos ainda não foi

afastada.

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb

P1 M N S s LISS PAP

I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+

II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 0 0

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub

P1 M N S s LISS PAP

1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 0 0

2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 0 0

3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + o + + + o + 0 0

4 Ror + o + o + o o + o o + o + o + + + + o 0 0

Rh-Hr Kell

MNS

Kidd Lutheran MNS

Rh-Hr Kell Duffy Kidd

PAI

Resultados

Duffy

Lewis

GEL

Exemplo 1: Identificação de Acs no Soro

5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 0 0

6 r"r o o + + + o o + + o o + o o o + o + + 0 0

7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+

8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 0 0

9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+

10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 0 0

11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 0 0

12 r'r' o + o o + o o + o o + + o o + + + o o 0 0

13 rr o o + o + o o + o o + o + o + + + o + 0 0

14 r''r o o + + + o o + + + + + + o + + + o + 0 0

15 rr o o + o + o o + o o + o o o + + o o + 0 0

16 rr o o + o + o o + o + + + o o + + + o + 0 0

Auto 0 0

Resultado Painel: Anti-K

� No painel anterior, a especificidade do anticorpo foi

determinada com três células positivas (K+) e várias

negativas.

� Como no painel há várias células não reativas (K-), é

possível afastar a presença da maioria dos outros

Identificação de Anticorpos Irregulares

possível afastar a presença da maioria dos outros

anticorpos.

� O próximo passo é a confirmação do aloanticorpo,

utilizando a fenotipagem do paciente. Como ele

desenvolveu anti-K, é esperado que as hemácias dele

não apresentem o antígeno K (KEL1). Provável fenótipo

K-.

� Incidência do antígeno

� Seleção ao acaso para antígenos

isolados

Cuidados na seleção de glóbulos para pacientes com Anticorpos Irregulares

� Ex. Paciente com anti-K com solicitação

de 3 unidades de glóbulos.

� Incidência do antígeno K1 (9%).

4 unidades ao acaso ABO compatível 4 unidades ao acaso ABO compatível

forneceria as 3 unidades necessáriasforneceria as 3 unidades necessárias

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb

P1 M N S s LISS PAP

I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+

II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 2+ 2+

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub

P1 M N S s LISS PAP

1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 2+ 2+

2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 2+ 2+

3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + o + + + o + 0 0

4 Ror + o + o + o o + o o + o + o + + + + o 2+ 2+

5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+

PAI

Resultados

Duffy

Lewis

GEL

Rh-Hr Kell

MNS

Kidd Lutheran MNS

Rh-Hr Kell Duffy Kidd

Exemplo 2: Identificação de Acs no Soro

5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+

6 r"r o o + + + o o + + o o + o o o + o + + 0 0

7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+

8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 2+ 2+

9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+

10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 0 0

11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 0 0

12 r'r' o + o o + o o + o o + + o o + + + o o 2+ 2+

13 rr o o + o + o o + o o + o + o + + + o + 2+ 2+

14 r''r o o + + + o o + + + + + + o + + + o + 2+ 2+

15 rr o o + o + o o + o o + o o o + + o o + 2+ 2+

16 rr o o + o + o o + o + + + o o + + + o + 2+ 2+

Auto 0 0

Resultado Painel: Anti-Jka

� Incidência do antígeno

� Seleção ao acaso para antígenos isolados

� Ex. Paciente com anti-Jka com solicitação de 3

Cuidados na seleção de glóbulos para pacientes com Anticorpos Irregulares

� Ex. Paciente com anti-Jk com solicitação de 3

unidades de glóbulos.

� Incidência do antígeno Jka (77%).

10 unidades ao acaso ABO compatível forneceria 10 unidades ao acaso ABO compatível forneceria

as 3 unidades necessáriasas 3 unidades necessárias

Paciente com

anti-

Incidência

Antígeno

Doadores

Compatíveis

K 0,09 (ou 9%) 1-0,09= 0,91 (91%)

Jka 0,77 (ou 77%) 1-0,77= 0,23 (23%)

Anticorpos Múltiplos (frequência combinada para realizar o cálculo)

Jk 0,77 (ou 77%) 1-0,77= 0,23 (23%)

Fya 0,66 (ou 66%) 1-0,66= 0,34 (34%)

Considerando ABO do paciente (A Rh+)

0,4 x 0,85 x 0,91 x 0,23 x 0,34 = 0,024 (ou 2%) =

1 em aproximadamente 50 doadores

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb

P1 M N S s LISS PAP

I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+

II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 2+ 2+

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub

P1 M N S s LISS PAP

1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 2+ 2+

2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 2+ 2+

3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + + + + + o + 2+ 2+

4 Ror + o + o + o o + o o + o o + + + + + o 2+ 2+

5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+

Rh-Hr Kell

MNS

Kidd Lutheran MNS

Rh-Hr Kell Duffy Kidd

PAI

Resultados

Duffy

Lewis

GEL

Exemplo 3: Identificação de Acs no Soro

5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+

6 r"r o o + + + o o + + o o + o + o + o + + 2+ 2+

7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+

8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 2+ 2+

9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+

10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 2+ 2+

11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 2+ 2+

12 r'r' o + o o + o o + o o + + o + + + + o o 2+ 2+

13 rr o o + o + o o + o o + o o + + + + o + 2+ 2+

14 r''r o o + + + o o + + + + + o + + + + o + 2+ 2+

15 rr o o + o + o o + o o + o o + + + o o + 2+ 2+

16 rr o o + o + o o + o + + + o + + + + o + 2+ 2+

Auto 2+ 2+

Provável autoanticorpo

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb

P1 M N S s LISS PAP

I R1R1 + + o o + o + + + o + o o + + + o + + 2+ 2+

II R2R2 + o + + o o o + + + + + + o + + + + + 2+ 2+

P

Cels Donor D C c E e CwK k Fya Fyb Jka Jkb Lua Lub

P1 M N S s LISS PAP

1 RzR1 + + o + + o o + + o + + o + + + + o + 2+ 2+

2 R1wR1 + + o o + + o + o + + + o + + + o o + 2+ 2+

3 R2R2 + o + + o o o + o + o + + + + + + o + 2+ 2+

4 Ror + o + o + o o + o o + o o + + + + + o 2+ 2+

5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+

PAI

Resultados

Duffy

Lewis

GEL

Rh-Hr Kell

MNS

Kidd Lutheran MNS

Rh-Hr Kell Duffy Kidd

Exemplo 3: Identificação de Acs no Soro

5 r´r o + + o + o o + o + + + o + o o + o + 2+ 2+

6 r"r o o + + + o o + + o o + o + o + o + + 2+ 2+

7 rr o o + o + o + + o + + o o + + + o + + 2+ 2+

8 rr o o + o + o o + + o + o o + o o + + + 2+ 2+

9 R1R1 + + o o + o + + o + + + o + + + + o + 2+ 2+

10 R2R2 + o + + o o o + + o o + o + + + o o + 2+ 2+

11 R2r + o + + + o o + + o o + o + + o + o + 2+ 2+

12 r'r' o + o o + o o + o o + + o + + + + o o 2+ 2+

13 rr o o + o + o o + o o + o o + + + + o + 2+ 2+

14 r''r o o + + + o o + + + + + o + + + + o + 2+ 2+

15 rr o o + o + o o + o o + o o + + + o o + 2+ 2+

16 rr o o + o + o o + o + + + o + + + + o + 2+ 2+

Auto 0 0

Provável anticorpo dirigido contra antígeno alta frequência

� Um antígeno presente na superfície de células,usualmente em mais de 99% da populaçãohumana.

Anticorpos dirigidos contra antígenos eritrocitários Anticorpos dirigidos contra antígenos eritrocitários de alta frequência populacional (público)de alta frequência populacional (público)

� Reações uniformes com todas as células do painel, uma vez que os antígenos estão presentes na maioria das células

� Autocontrole negativo

AABB: Raro: < 1/5.000. Incomum: < 1/1.000

� Auxílio de centros de referência ou registro de

doadores raros.

Laboratórios de referência

Anticorpos de Alta frequência

Laboratórios de referência

� Soros raros - anticorpos contra Ag alta frequência

� Hemácias raras – ausência dos Ag alta frequência

Importante: Membros familiares são Importante: Membros familiares são

importantes fontes de doadores rarosimportantes fontes de doadores raros

Doença hemolítica do recém nascido ou outros Doença hemolítica do recém nascido ou outros

problemas relacionado a aloanticorpos em crianças: problemas relacionado a aloanticorpos em crianças:

Mãe se ABO compatível é a melhor doadora

Pacientes com dificuldade de encontrar doadores Pacientes com dificuldade de encontrar doadores

compatíveis:compatíveis:compatíveis:compatíveis:

Doação autóloga deve ser considerada

Technical Manual ABBB 2005

Unidades raras (<1 em 5000) Unidades raras (<1 em 5000) Unidades incomuns (<1 em 1000)Unidades incomuns (<1 em 1000)

Programa de Doadores Raros (E.U.A) SCARF

Vamos pensar!!!!!

�� OpçõesOpções parapara atendimentoatendimento dede pacientespacientes comcom

anticorposanticorpos irregularesirregulares nono soro,soro, dede acordoacordo

comcom oo queque jájá estudamosestudamos nono cursocurso dedecomcom oo queque jájá estudamosestudamos nono cursocurso dede

HemoterapiaHemoterapia..