PERFIS GENÉTICOS DE AMOSTRAS DE DNA DEGRADADO EM GENÉTICA FORENSE

Autores: Abel de Castro Vieira, Diego Ramos Azevedo, Lídia Alexandre Rosa, Poliana Mendonça de Sousa

PRINCÍPIO DA GENÉTICA FORENSE

INDENTIFICAÇÃO HUMANA POR VARIAÇÕES EM DNA;

Uso de variação genética em casos forenses;

1902 -> Uso da mancha de sangue para análise;

1960 -> Análise de variação molecular através de proteínas sanguíneas;

1980 -> Método de paternidade (Apogeu);

PRINCÍPIO DA GENÉTICA FORENSE

PCR (grande importância para genética, em especial para a forense);

http://bitesizebio.com/articles/the-invention-of-pcr/

PRINCÍPIO DA GENÉTICA FORENSE Regiões hipervariáveis para análise;

*Muito informativos;

VNTR (Vareible number tandem repeats); STR (short tandem repeats)

Encontrados em locos específicos, porém, com grande polimorfismo entre cada indivíduo.

http://statistics.arizona.edu/courses/EEB208-2008/Lecture08/Lecture08.html

PRINCÍPIOS DA GENÉTICA FORENSE

VNTR; Desvantagens:

1. Regiões variáveis de 6pb-100pb (muito grande);2. Grande volume de amostra;3. Interpretação muito complexa;

STR; Vantagens:

1. Regiões variávei de geralmente 4pb (tetranucleotídeos);

2. Presente em locos em todos cromossomos;3. Custo-benefício alto (Relativamente baratos e

eficientes em um número baixo de amostra);

PRINCÍPIOS DA GENÉTICA FORENSE

Em amostras preservadas a análise de microssatélites (STR’s) são eficientes, mas:

As amostras geralmente em cenas de crimes não estão intactas (sofrem DEGRADAÇÃO);

Por fatores:

Químicos;

Ambientais;

Físicos;

Tempo;

DNA DEGRADADO

Situação muito comum em desastres e grandes catástrofes;

1ª alternativa Análise de microssatélites

DNA DEGRADADO

E AGORA?

Quando a técnica de PCR+STR não é possível, usa-se outras saídas;

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

DNA mitocondrial:

Maior número de cópias nas células;

Características moleculares que garante maior estabilidade;

Mais utilizada quando há forte degradação;

Porém da apenas linhagem matrilínea;

http://en.wikipedia.org/wiki/File:Mitochondrial_DNA_and_diseases.png

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

Mini-STR’s

Marcadores adicionais usados em amostras degradadas;

Primeiramente desenvolvidos pelo laboratório Bode (USA);

26 Locos de mini-STR’s (outros não foram recomendados por conta de “ALELO NULO”)

*Não amplificação da região específica devido a mutações pontuais na região de ligação com os primer’s.

ELETROFEROGRAMA EM ALELO NULO

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

PCR multiplex:

Fragmentos detectáveis não são superiores a 150pb;

Amplificação de regiões em que kit’s comerciais de STR’s não são adequados

http://www.cstl.nist.gov/strbase/miniSTR.htm

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

SNP’;

Mutações pontuais

Alternância mínima de 1% da população;

Mais frequentes que os microssatélites (cada 300pb);

*presente em regiões codificantes e não-codificantes;

Marcadores para individualização genética;

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

http://www.broadinstitute.org/education/glossary/snp

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

90% da variabilidade humana vem dos SNP’s;

Gera produtos de amplificação muitos menores; Cerca de 50pb;

Permitindo estudo de material degradado (casos de cadáveres em estágio avançado de decompo- sição e/ou carbnizados)

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

São marcadores bi-alélicos;

Possíveis genótipos: Ex.: Se alelos de um Loco é A ou B, seus possíveis genótipos seriam: A/B ; A/A ou B/B * Porém, é dificil a identificação de um possível heterozigoto de uma mistura de homozigotos

DNA DEGRADADO (SOLUÇÕES)

Desvantagem:

Incapacidade de amplificar simultaneamente, de pequenas quantidades de DNA, SNP’s suficientes de forma multiplex;

Produz menos informação que um marcador STR;

Número maior de SNP para um razoável poder de definição de um único perfil genético.

O QUE TEMOS? (KIT’S)

PowerPlex® S5

São mini-STR’s;

Amplificação simultanea;

Co-amplificação e detecção de cinco locus (quatro locus STR e amelogenina), incluindo D8S1179, D18S51, amelogenina, FGA e TH01;

http://www.promega.com/products/pm/genetic-identity/powerplex-s5/

ELETROFEROGRAMA POWERPLEX S5

http://www.promega.com/products/genetic-identity/str-analysis/powerplex-s5-system/

O QUE TEMOS? (KIT’S)

AmpFlSTR® MiniFiler™;

Amplifica oito locus autossômicos além da amelogenina;

(D13S317, D7S820, D2S1338, D21S11, D16S539, D18S51, CSF1PO e FGA)

http://marketing.appliedbiosystems.com/mk/get/FORENSIC0907_WEB_PAGE

MINIFILER™

https://products.appliedbiosystems.com/ab/en/US/adirect/ab?cmd=catNavigate2&catID=603805&tab=Literature

REFERÊNCIAS APPLIED BIOSYSTEMS. AmpFlSTR® MiniFiler™PCR Amplification Kit. USA, 2011. Disponível em

https://products.appliedbiosystems.com/ab/en/US/adirect/ab?cmd=catNavigate2&catID=603805&tab=Literature . Acessado em 05 de junho de 2011.

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