DOCENTE: Dr Edison Suarez BuitrónINTEGRANTES: Chagua Romero Gabriela Paucar Ayllon Guliana Ayzanoa Condori Soly quino Sinche Rolando

DESCALCIFICACIÓN La descalcificacion

elimina las sales calcicas insolubles conservando la estructura y la afinidad tintorial.

Las soluciones descalcificantes son sustancia acidas que al ponerse al contacto los huesos, dientes, quitina, etc. posen la propiedad de formar con ellas la combinación solubles e n agua y fácilmente descartables mediante el lavado.

DESCALCIFICACIÓN

Los tejidos óseos o cartilaginosos los descalcificaremos tratándolos con un ácido fuerte,

naturalmente según sea su tamaño. Si se trata de calcificaciones de reducido tamaño, basta

con añadir un ácido (Acético, Tricloracético) al liquido fijador, quedando así fijadas y

descalcificadas.

ESPECÍMENES ÓSEOS

CURETAJES

BIOPSIAS

AMPUTACIONES

A diferencia del procesamiento de otro tipo de tejido, las muestras

que contienen componentes óseos requieren procedimientos

especiales que usualmente no son requeridos por otro tipo de

especímenes, con el fin de poder obtener muestras

representativas que se puedan evaluar al microscopio.

pueden clasificarse en muestras obtenidas por

DESCALCIFICACION QUIMICALos principales agentes decalcificadores están formados por ácidos

fuertes o débiles empleados solos o en conjunción a distintos líquidos fijadores.

ACIDOS FUERTES

ACIDOS DEBILES

ACIDO NÍTRICO ACIDO

CLORHÍDRICO

ACIDOS INORGÁNICOS

ACIDO SULFUROSO

ACIDOS ORGÁNICOS

ACIDO FÓRMICO ACIDO ACETICO TRICLOROACÉTICO

DESCALCIFICANTES QUÍMICOS POR QUELACION

ACIDO ETILEN – DIAMINO- TETRACETICO (EDTA)

UN LÍQUIDO DESCALCIFICANTE IDEAL DEBE REUNIR UNA SERIE DE CUALIDADES. ESTAS CUALIDADES SON LAS SIGUIENTES:

1. Debe producir una eliminación completa de los depósitos cálcicos.

2. No debe provocar efectos indeseables o artefactos sobre los tejidos tratados.

3. No interferir con los procedimientos de tinción que se emplean posteriormente..

NORMAS QUE DEBEN OBSERVARSE DURANTE EL PROCESO DE DESCALCIFICACION

Para disminuir las alteraciones que pueden producir los

descalcificaciones , la fijación debe haberse completado antes de iniciar

el proceso.

Las concentraciones del descalcificante debe ser optima , de

manera que se alcance equilibrio entre la mayor rapidez de las

disoluciones mas concentradas y el menor efecto de alteración tisular a

consecuencia de las soluciones muy diluidas.

Se usara un volumen óptimo de liquido descalcificadora (1:20) y será renovado con frecuencia.

La temperatura ideal es de 25ºC.

Para acelerar el proceso se utilizara la agitación

Tras el proceso de descalcificación química se realizara lavados en soluciones neutralizantes ( agua corriente).

Es necesario un pre tratamiento de los cortes con solución acuosa de carbonato de litio al 1%, para asegurar la neutralización de los ácidos empleados en la descalcificación.

SOLUCIONES DESCALCIFICANTES DE ÁCIDOS FUERTES

ACIDO NITRICO

1. Provoca rápida decalcificaciónVentajas:

2. Causa baja retracción tisular.

3. Mejor coloración de los núcleos.

INCONVENIENTES:

La prolongación excesiva del tiempo de decalcificación suele anular la fijación previa y alterar progresivamente el tejido

PROCEDIMIENTO:

Esta preparación es para 1000 mil de reactivo.

• Agua destilada ……………………………………………………………700ml• Acido nítrico……………………………………………………………….100ml• Alcohol absoluto ……..…………………………………………………..200ml

1. En una probeta medir 700 ml de agua destilada, agregar el acido nítrico y los 200 ml de alcohol absoluto.

2. Homogenizar bien y agregar a una botella color ámbar.3. No olvidar rotular el día de la preparación.

• Formalina…………………………………………………….………………100 mL

• Ác. Nítrico concentrado………………………………………………………100 mL

• Agua destilada………………………………………………………………...800 mL

Tiempo medio de calcificación para un bloque de tejido óseo de 5 mm de espesor

es de 1 a 3 días.

FORMULINA – ACIDO NÍTRICO

1. Es de acción relativamente rápida.

2. Provoca menos alteraciones titulares

que la solución acuosa de acido nítrico.

3. Por su facilidad de manejo es la

solución decalcificante más utilizada

para técnicas histológicas de rutina.

1. Dificulta la tinción nuclear

2. Antes de su procesamiento

los tejidos requieren

neutralización en sulfato sódico

al 5% y un lavado posterior en

agua corriente al menos

durante 2 horas.

Ventajas: Inconvenientes:

ÁCIDOS DÉBILES.

Acido fórmico

1. Acción muy lenta.2. Requiere neutralización previa a la inclusión en sulfato sódico al 5%3. Lavado en agua posteriormente durante 18 horas.

1. Fija y descalcifica simultáneamente.2. No dificulta demasiado la coloración nuclear.3. esta especialmente recomendado para decalcificar bien

Ventajas: Inconvenientes:

DESCALCIFICANTES QUIMICOS POR QUELACION

Los quelantes químicos son sustancias capaces de combinarse con iones metálicos en solución o estabilizados en forma de sales o constituir nuevos compuestos generalmente solubles en agua.

El quelante que se utiliza normalmente es el acido etilén-dianinotetracético.

El EDTA se combina con los iones metálicos formando compuestos solubles en agua.

El EDTA sustrae calcio de una forma muy lenta y son necesarios varios días incluso semanas dependiendo del tamaño de la muestra, si la muestra ya ha sido fijada no se altera el resto de los componentes celulares y tisulares. PREPARACIÓN• Acido EDTA trisódico

………………………………………………………………………..100gr.• Tris ………………

…………………………………………………………………………………33,3gr

• Agua destilada …………………………………………………………………………………1000ml

TAMBIÉN SE PUEDE UTILIZAR ASOCIADO AL FORMOL O AL CITRATO SÓDICO, SEGÚN LAS SIGUIENTESFÓRMULAS.

Solución de Schmorl.· Ácido Fórmico (90%) 500 ml· Formaldehido (35-40%) 50 ml· Agua destilada 450 ml

- Solución de Krajlan.· Ácido Fórmico (90%) 25 ml· Citrato de Na cristalizado 10 g· Agua destilada 75 ml

La descalcificación podríamos acelerarla utilizando la descalcificación electrolítica, queconsiste en hacer pasar una corriente continúa por la solución (mezcla de Ácido Fórmico yNítrico) en la que se introducen dos electrodos inatacables por los ácidos.La descalcificación electrolítica presenta la ventaja de la ganancia de tiempo pero lacalidad de sus resultados se presenta a discusión.

DESCALCIFICACIÓN POR ELECTROFORESIS

RECORDAR

Debemos mantener el detalle celular y la antigenicidad de lasBiopsias usando un reactivo descalcificador con un pH optimo , para no tener excesiva pérdida de la antigenicidad en la inmunohistoquímica

RECOMENDACIONES

Debemos utilizar un volumen óptimo en relación con el tejido por descalcificar (mínimo 1:20).

Realizamos una agitación suave del recipiente que contiene el tejido con el descalcificante, por cuanto está comprobado que hacerlo acelera el proceso

Finalizado el proceso de descalcificación, barremos

el exceso de ácido con agua corriente como

solución neutralizante.

GRACIAS