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Ciência Veterinária nos Trópicos, Recife-PE, v. 18, n. 1 p. 26-31 - janeiro/abril, 2015

Ocorrência espontânea de linfoma maligno em ovelha: Relato de casoRafael Otaviano do REGO¹, José Claudio de Almeida SOUZA², Carla Lopes de MENDONÇA³, Rafael José da SILVA³, Nivan Antônio Alves da SILVA³, Franklin RIET-CORREA4, José Augusto Bastos AFONSO³.

RESUMO

Os relatos na literatura de linfoma em ovinos são escassos, logo o objetivo deste trabalho é relatar a ocorrência dessa doença em uma ovelha atendida na Clínica de Bovinos, Campus-Ga-ranhuns/UFRPE. Os achados foram obtidos de uma ovelha mestiça de quatro anos, pesando 40 kg, criada em sistema semi-intensivo. O proprietário relatou que adquiriu esse animal há três meses de outro rebanho e que há dois observou que o animal ficou apático, com perda do apeti-te e separado do rebanho, foi medicado na propriedade sem sucesso. Clinicamente apresentou um quadro de apatia, taquicardia, caquexia, anorexia, bem como hipomotilidade ruminal e intestinal. No hemograma evidenciou-se leucocitose por neutrofilia, com presença de leucóci-tos degenerados no esfregaço sanguíneo. A sorologia (IDGA) para vírus da Leucose Enzoótica Bovina foi negativa. Além desses achados, a ultrassonografia revelou um comprometimento pulmonar grave. O animal veio a óbito após sete dias. Na necropsia observou-se uma massa no tecido subcutâneo, aderida à região torácica caudal esternal, firme com características nodular e de coloração esbranquiçada. Nodulações idênticas e de tamanhos menores foram visualizadas na serosa do retículo e abomaso, com metástases nos rins, omento, linfonodos mesentéricos, diafragma, coração e pulmão. A histopatologia revelou estruturas atípicas disposta na forma de manto, com múltiplos vacúolos, com estroma fibroso entremeado. As células tumorais ca-racterizam-se por serem pequenas e arredondadas, basofílicas, com citoplasma escasso, núcleo grande e redondo, hipercromático, com cromatina densa e com raras mitoses. Estes achados indicam uma forma de linfoma espontâneo em ovelha.

P A L A V R A S - C H A V E Ovino, neoplasia, linfoma, tumor, caquexia

Spontaneous Occurrence of Malignant Lymphoma in Sheep: Case Report

ABSTRACT

There are very few reports of lymphoma in sheep in the literature. Therefore, the aim of the present study was to report the prevalence of this disease among sheep cared for in the Clinic of Cattle in the Campus Garanhuns of the Federal Rural University of Pernambuco (UFRPE). The results were obtained from a four year old sheep (weight 40 kg) that had been reared in a semi-intensive system. The owner reported that he had acquired this animal three months earlier from another herd and that, one month later; he had noticed that the animal was apathetic, no appetite and distanced itself from the herd. The animal was treated unsuc-cessfully on the farm. The animal exhibited clinical signs of apathy, tachycardia, cachexia and anorexia, as well as ruminal and intestinal hypomotility. The hemogram showed evidence of leukocytosis by neutrophilia, with the presence of deteriorated leukocytes in the blood smear. The serology (IDGA) for the enzootic bovine leukosis virus was negative. The ultrasound con-firmed severe lung disease. The animal died after seven days. In the necropsy there was a mass in the subcutaneous tissue adhered to chest sternal there was a notable increase in the volume adhered in the external caudal subcutaneous region, with nodular characteristics and a whitish coloration. Identical, although smaller, nodulations were visualized in the serous membrane of the reticulum and the abomasum, with metastases in the kidneys, omentum, mesenteric lymph

¹ Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco; Av. Dom Manoel de Medeiros, s/n; Dois Irmãos; Recife-PE, Brasil; 52171-900. E-mail: faelvet@yahoo.com.br. Autor para correspondência.

² Unidade Acadêmica de Garanhuns, UFRPE, Garanhuns, PE. 55.292-901.

³ Clínica de Bovinos, Campus Garanhuns da Universidade Federal Rural de Pernambuco. Av. Bom Pastor, s/n. CP 152. Boa Vista. Garanhuns-PE. 55 292-270.

4 Hospital Veterinário, Centro de Saúde e Tecnologia Rural (CSTR), Universidade Federal de Campina Grande, Campus de Patos, 58700-000, Patos, PB, Brasil.

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Ocorrência espontânea de linfoma maligno em ovelha: Relato de caso

INTRODUÇÃO

A ocorrência de neoplasias em animais domésticos é fre-quentemente observada, no entanto estudos sobre as prevalên-cias de tumores em pequenos ruminantes são escassos, princi-palmente por conta do abate desses animais em idade precoce (Ramos et al., 2008; Pawaiya & Pawam, 2011).

Os principais sistemas acometidos por tumores nessas espécies são os sistemas tegumentar e reprodutor, tendo com maior frequência os de origem epitelial. Entre as neoplasias, o linfossarcoma de forma espontânea raramente acometem ovi-nos, apesar desta espécie se mostrar susceptível (Valentine & Mcdonough, 2003; Ramos et al., 2008; Carvalho et al., 2014).

O linfossarcoma faz parte das “neoplasias linfoides” e, é um distúrbio linfoproliferativo onde o tumor se inicia mais frequentemente em órgãos hematopoiéticos sólidos, como os linfonodos, baço ou tecido linfoide associado à mucosa e, me-nos frequentemente, em órgãos não linfoides (Panziera et al., 2014).

A transformação neoplásica de um tipo celular da linha-gem linfocitária ocasiona expansão descontrolada de clones dessa célula. A causa dessa alteração geralmente é desconheci-da, porém pode estar associado à exposição ao vírus da leucose bovina (VLB), como demonstrado experimentalmente em ovi-nos (Olson & Baungartener, 1976; Valentine & Mcdonough, 2003; Pugh, 2004).

Embora não completamente elucidada, a patogênese dessa doença está relacionada a produtos do complexo de histocom-patibilidade principal e glicoproteínas expressas na superfície das células B receptoras em decorrência da ação viral, ligadas a peptídeos presentes em células T apresentadoras de antíge-nos. Demonstrou-se também que ovinos inoculados com VLB apresentam quadros de linfocitose, com alto número de linfó-citos do tipo B e linfossarcomas com este mesmo tipo celular em curtos períodos de tempo, o que viabiliza estudos de pato-gênese dessa doença, tanto em ovinos como bovinos (Olson & Baungartener, 1976).

A importância econômica da ocorrência de linfossarco-mas reside nas perdas acarretadas por vários fatores como: custos com o diagnóstico, o tratamento das complicações se-cundárias, descarte prematuro ou morte dos animais, particu-larmente daqueles com alto potencial genético, e condenação de carcaças em frigoríficos (Silva-Filho et al., 2011).

Devido às poucas descrições de linfossarcoma em ovinos, a finalidade deste trabalho é relatar a ocorrência clínica e ana-tomopatológica dessa enfermidade em uma ovelha no Agreste de Pernambuco.

MATERIAL E MÉTODOS

As descrições dos achados foram obtidas a partir de um ovino, atendido na Clínica de Bovinos, Campus Garanhuns/UFRPE, fêmea, mestiça e com quatro anos de idade, pesando 40 kg, oriunda de uma fazenda no município de São João-PE, compondo um rebanho de 50 animais. Na anamnese, o pro-prietário relatou que há dois dias observou que o animal estava apático, com perda do apetite e separado do rebanho, tendo sido medicado na propriedade sem sucesso. Foi relatado que esse animal juntamente com os demais foi trazido a três meses de outro estado e apenas um animal adoeceu. Os animais eram criados em sistema semi-intensivo, cuja alimentação diária era constituída de capim elefante (Pennisetum purpureum), ca-pim pangola (Digitaria decumbens) e 500g ração - a base de fa-relo de milho e trigo - fornecida duas vezes ao dia e sal mineral ad libitum. O exame clínico foi realizado segundo Radostits et al. (2007).

Para avaliação hematológica o sangue foi coletado em tubos de vidro com anticoagulante EDTA a 10%, no qual se realizou o hemograma, a determinação da proteína plasmática total e o fibrinogênio plasmático seguindo a metodologia pro-posta por Jain (1993).

Foram coletadas amostras de soro do animal em questão e em 20 ovinos (± 20% do rebanho) da propriedade, adultos e de ambos os sexos. As amostras foram submetidas à prova de imunodifusão em Gel de Agar (IDGA), com antígeno glico-proteico para a detecção de anticorpos contra o vírus da Leu-cose Enzoótica Bovina (LEB), conforme técnica descrita por Flores et al. (1988).

O exame ultrassonográfico foi realizado no antímero di-reito com o animal em posição quadrupedal, sem sedação e após ampla tricotomia compreendendo a caudalmente o 11o espaço intercostal (EIC), dorsalmente na altura da cartilagem da escápula, cranialmente o 6o (EIC) e ventralmente a linha mediana caudal ao esterno, segundo a técnica descrita por Flöck (2004) utilizando um transdutor convexo de 3,5 MHz1. Durante o período em que permaneceu internado, nove dias, o quadro clínico agravou-se e foi indicada a eutanásia, conforme Luna & Teixeira (2007). O animal foi encaminhado ao exame necroscópico.

Durante a necropsia foram colhidos fragmentos do rú-men, reticulo, abomaso, linfonodos, rins, coração, pulmão e diafragma, fixados em formol a 10%. Estes fragmentos foram processados rotineiramente e corados pela hematoxilina e eo-sina (HE) para avaliação descritiva da lesão (Barros & Marques, 2003).

1 Ultrassom GE – Logiq 100 pro.

nodes, diaphragm, heart and lungs. The histopathology revealed atypical mantle structures, with multiple vacuoles and interspersed fibrous stroma. The tumoral cells were small, round, basophilic, with scarce cytoplasm and a large, round nucleus, with hyperchromatic qualities, dense chromatin and rare mitosis. The results of the present study confirm that this was a case of atypical lymphosarcoma in the sheep in question.

K E Y W O R D S sheep; neoplasia; lymphoma; tumor, cachexia.

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Rafael Otaviano do Rego¹, José Claudio de Almeida Souza², Carla Lopes de Mendonça³, Rafael José da Silva³, Nivan Antônio Alves da Silva³, Franklin Riet-Correa4, José Augusto Bastos Afonso³. et al.

RESULTADOS

Os principais sinais clínicos observados durante o exame físico foram apatia, escore nutricional regular (II), presença de moderado edema submandibular e grau de desidratação de 8%. Além de anorexia, taquicardia, taquipnéia, hipomotilidade ruminal e abomasal. O animal apresentava dificuldade de ex-pansão pulmonar, com áreas de hipofonese, com a respiração predominantemente abdominal e na auscultação observaram--se sibilos na porção dorsal do pulmão direito. A temperatura se manteve dentro da faixa de normalidade para a espécie.

No hemograma observou-se que não houve alterações na série vermelha, proteína plasmática total e fibrinogênio plas-mático, porém no leucograma foi constatado leucocitose por neutrofilia e a presença de leucócitos degenerados (Tabela 01). A prova de IDGA revelou resultado negativo para o animal

atendido e os demais do rebanho analisados.O exame ultrasonográfico do antímero direito, entre 11º e

6º espaços intercostais, evidenciou presença de grande quanti-dade de conteúdo líquido, com aspecto predominantemente anaecóico, deslocando medialmente os pulmões, aproximada-mente 11 cm, e provocando a distensão caudal do campo to-rácico. No interior do conteúdo anaecóico foram identificados filamentos ecogênicos livres sugestivos de fibrina. No 6º espa-ço intercostal, na altura da linha do cotovelo, foi evidenciado saco pericárdico deslocado medialmente, aproximadamente 5 cm, por conteúdo anaecóico similar ao observado nas outras janelas acústicas. Foram observados depósitos e filamentos eco-gênicos aderidos à superfície do saco pericárdico sugestivos de aderências e fibrina.

Ao exame anatomopatológico, observou-se uma massa no tecido subcutâneo, aderida a região torácica caudal esternal, de consistência firme com características nodular e de coloração esbranquiçada. Nodulações com as mesmas características e de tamanhos menores foram visualizadas de forma focal na serosa do reticulo, do rúmen e multifocal infiltrada com expansão mural na serosa do abomaso (Figura 01-A).

Além desses órgãos, foi observada, ainda, uma massa de aproximadamente cinco centímetros, com mesmas caracterís-ticas, no omento (Figura 01-B) e esta lesão também foi eviden-ciada nos linfonodos mesentéricos (Figuras 02-A). Constata-ram-se ainda no córtex renal áreas esbranquiçadas circulares, irregulares multifocais que se aprofundavam ao parênquima (Figura 02-B). Na cavidade torácica além da pleuropneumonia exsudativa e a grande quantidade de derrame cavitário sero--sanguinolento, massas semelhantes foram observadas na face abdominal do diafragma, no epicárdio direito e lobo apical direito do pulmão (Figuras 02-C e D).

Os achados histopatológicos das estruturas nodulares re-velaram massas com estruturas atípicas disposta na forma de manto, com múltiplos vacúolos de diversos tamanho, distri-buídos aleatoriamente e com um discreto estroma fibroso (Figura 3-A). Essas células tumorais caracterizam-se por serem pequenas e arredondadas, basofílicas, com citoplasma escas-so, núcleo grande e redondo, hipercromático, com cromatina densa e basófílica, e nucléolo pouco evidente, além de discreto pleomorfismo. Observaram-se raras mitoses. (Figura 03-B).

Tabela 1 - Resultado hematológico de uma ovelha SRD, atendida na Clínica de Bovinos, Campus-Garanhuns da UFRPE com linfossarcoma atípico.

Avaliação Hematológica

Valores

Hematológicos Referência*

Eritrócitos (x106/μL) 10,1 (9,0-15,0)Hematócrito (%) 41 (27,0-45,0)

Hemoglobina (g/dL) 14,9 (9,0-15,0)VCM (fL) a 40,59 (28,0-40,0)

CHCM (%)b 36,34 (31,0-34,0)Leucócitos (/μL) 14.100 (4,0-12,0)Neutrófilos (/μL) 10.857 (700-6.000)Linfócitos (/μL) 3243 (2.000-9.000)

PPT (g/dL)c 6,4 (6,0-7,5)Fp (mg/dL) d 400 (100-500)

* Fonte: Kramer (2000); a VCM: Volume Corpuscular Médio; b CHCM: Concentração Corpuscular Média, c Proteína plasmática total, d Fibrinogênio

Plasmático.

Figura 1 - Linfossarcoma linfocítico no sistema digestório de uma ovelha adulta na CBG/UFRPE. A. Massas tumorais na serosa e parede do abomaso e retículo. B. Presença de massa tumoral de aproximadamente cinco centímetros de diâmetro no omento (seta).

A B

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Ocorrência espontânea de linfoma maligno em ovelha: Relato de caso

Figura 02: Linfossarcoma linfocítico em diversos órgãos de uma ovelha adulta na CBG/UFRPE. A. Linfonodo mesentérico aumentado de tamanho. B. Massa tumoral na superfície e parênquima da cortical dos rins. C. Massa tumoral focal no diafragma (seta), D. Massa tumoral focal no epicárdio direito (seta)

Figura 03: Achados histológicos do linfossarcoma em ovelha CBG/UFRPE. A. Massa com discreto estroma fibroso entremeado e com múltiplos va-cúolos de tamanhos variados (10x). B. Células tumorais pequenas e arredondadas, basófílicas, com citoplasma escasso, núcleo grande e redondo, com cromatina densa e basófílica e nucléolo pouco evidente (40x).

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Rafael Otaviano do Rego¹, José Claudio de Almeida Souza², Carla Lopes de Mendonça³, Rafael José da Silva³, Nivan Antônio Alves da Silva³, Franklin Riet-Correa4, José Augusto Bastos Afonso³. et al.

DISCUSSÃO

A associação das informações obtidas nos achados clínicos e laboratoriais, principalmente na macroscopia e histopatolo-gia ratificou o diagnóstico de linfossarcoma. A ocorrência de forma espontânea em ovinos é rara, e tem muita similaridade a forma esporádica ou linfossarcoma juvenil em bovinos, na qual nem o vírus da leucemia bovina nem anticorpos contra o VLB estão associados. Tal achado se assemelha como ao en-contrado em cabras acometidas com a forma natural de linfos-sarcoma (Smith & Sherman, 2009). Geralmente o diagnóstico do linfossarcoma, como no animal em estudo, é constatado em animais acima de dois anos de idade (Johnstone & Manktelow 1978, Anjos et al. 2010).

Os achados clínicos desse relato são semelhantes aos en-contrados por DiGrassie et al. (1997) e Anjos et al. (2010), os quais relataram que a rápida deterioração da condição física, ocorre quando os sinais clínicos são notados. Em caprinos aco-metidos com linfossarcoma geralmente podem ter uma varie-dade de sinais clínicos incluindo febre, emaciação, dispneia e diarreia, com a morte ou a eutanásia ocorrendo em uma sema-na a dois meses na maioria dos casos. Achados estes observados no caso em estudo.

Mesmo o animal atendido sendo um adulto, os ovinos apresentam uma prevalência baixa para ocorrência de linfos-sarcoma devido essa espécie ser abatida de forma precoce, ou seja, antes da meia-idade e por isso tem menor probabilidade de desenvolver tumores (Ramos et al., 2008). Apesar da baixa ocorrência, Valli (2007) descreve que cerca de 30-60% dos ovi-nos jovens infectados desenvolvem linfossarcomas de células B. Linfomas em pequenos ruminantes não apresentam predis-posição por sexo nem raça (Jacobs et al., 2002).

A leucocitose por neutrofilia pode ser interpretada como consequência da condição inflamatória que estava acometen-do o pulmão (Jain, 1993; Radostits et al., 2007). Estes achados, associados ao resultado negativo do IDAG, se assemelham a forma esporádica do linfossarcoma juvenil em bovinos, que não está associada ao vírus da LEB em bovinos, na qual pode também ser observado leucocitose persistente por linfocitose, além da presença de linfócitos atípicos na circulação (Barros, 2007; Radostits et al., 2007).

Geralmente, a distribuição das lesões do linfoma em pe-quenos ruminantes é idêntica às observadas em bovinos, sen-do a forma multicêntrica a mais observada nessas espécies. Nos ovinos os linfonodos ilíacos, cervical e mediastínicos são os frequentemente mais afetados. Outros órgãos comumente afetados em ovinos e caprinos com linfoma são baço, fígado, rim, trato alimentar, músculo esquelético e coração. Ocasional-mente as lesões macroscópicas em ovinos são encontradas nos rins e trato alimentar, como foi constatado no caso em estudo (Parodi, 1987; Southwood et al., 1996; Jacobs et al., 2002)

As alterações renais observadas nesse estudo são mais des-critas em casos espontâneos de ovelhas com linfossarcomas conforme os casos descritos por Johnstone & Manktelow (1978) e Anjos et al. (2010), do que nos casos experimentais como relatado por Olson & Baumgartener (1976), onde a tu-moração geralmente ocorre de forma bilateral na forma de

nódulos que podem ser salientes ou não, frequentemente múl-tiplos, acometendo mais o córtex do que a região medular e que segundo Jacobs et al. (2002) muitas vezes é o único achado macroscópico de linfomas em ovinos.

A apresentação multicêntrica observada no animal em questão é a forma predominantemente no ovino, conforme re-lato de Anjos et. al. (2010). Outras formas como a cutânea e tí-mica também podem ocorrer como as descritas por Johnstone & Manktelow (1978). A forma multicêntrica nesse caso afetou a serosa do rúmen e do abomaso e parênquima renal, causan-do linfoadenomegalia simétrica e envolvendo outros órgãos, assim como observado nos ovários em caprinos (Digrassie et. al., 1997), além do fígado, rins, linfonodos, baço, trato alimen-tar, músculos esqueléticos e coração (Johnstone & Manktelow, 1978; Valentine & Mcdonough, 2003).

As alterações microscópicas encontradas na ovelha de proliferação de células neoplásicas arranjadas em mantos, sustentada por um fino estroma fibrovascular, são descritas comumente nos casos espontâneos em pequenos ruminantes (Digrassie et al., 1997; Anjos et al., 2010) e nos casos experi-mentais (Olson & Baumgartener, 1976; Djilali & Parodi et al., 1989).

Com base nos achados clínicos-patológicos confirmou-se o diagnóstico de linfossarcoma multicêntrico, aumentando a casuística conjuntamente aos casos encontrado no Sul do Bra-sil por Anjos et. al. (2010), e fora do país por Jacobs et al. (2002).

CONCLUSÃO

Os achados encontrados contextualizam os relatos da lite-ratura, que são poucos, sobre o comprometimento da vida pro-dutiva dos animais quando acometidos com esta enfermidade. A constatação de casos espontâneos, como o em estudo, na for-ma multicêntrica, devem ser analisados quanto a sua origem e os riscos que possam representar para a sanidade do rebanho.

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