Universidade do Estado do Rio de Janeiro

Departamento de Bioquímica – lia-bppn

Aluno: Thiago Martino Martins

Orientador (a): Katia Costa de Carvalho Sabino

O que são isoprenóides?

• Classe de lipídeos.

• São produzidos por todos os animais superiores e bactérias.

• Via do mevalonato (Acetil-CoA).

• Via alternativa (piruvato e 3-fosfato de gliceraldeído).

• Foram caracterizados 23.000 isoprenóides.• Alguns produtos secundários derivados do mevalonato são

“puros”.

• Isoprenóides “misturados”: Flavonas, flavonóides, quinonas e cumarinas preniladas.

• Propriedades: Germinação, diferenciação,Crescimento, senescência, efeito anti-oxidante

Introdução

Monoterpeno (2x) sesquiterpeno (3x) diterpeno (4x) triterpeno (6x)

Quercetina

Via do mevalonato

Regulação da via do mevalonato

Prenilação de proteínas• Adição de moléculas hidrofóbicas às proteínas.- Geralmente grupo farnesil (C15) ou geranilgeranil (C20).

• Farnesilação:- Enzima: Proteína Farnesil Transferase (PFT).- Sítio: Resíduo de cisteína na porção CAAX box, no C-terminal.- Função: Interação transiente com membranas celulares.- Proteínas: pequenas proteínas G (Ras).

• Geranilgeranilação:Enzima: Geranilgeranil pirofosfato transferase (GGT). isoformas: Tipo I: Reconhece a sequência CAAX box, no C-

terminal. Tipo II: Reconhece terminação CC ou CXC. (Rab). (X-Leu, Ile)

Palmitoilação de proteínas

• Adição de palmitato (C16) à resíduos de cisteína – ligação N-amida ou tioéster (S-acetilação).

• É um mecanismo reversível.• Mediado pela Palmitoil transferase (PAT) ou por

acetilase.• Em condições apropriadas pode ocorrer

espontaneamente. (Bano et al, 1998; Bizzozero et al, 2001)

Ex: H e N- Ras

Solúvel

Regulação da superfamíla Ras-GTPases

Câncer: Ras continuamente associada a GTP

Proliferação celular acentuada

Proliferação Celular e câncerIsoprenóides Fase Mecanismo

D-limoneno c-Myc, ciclina D1, E, cdk2 e cdk4

Perilil álcool G1

Geraniol P21, p27

Indução da ApoptoseIsoprenóides Mecanismo

Farnesol Bcl-2 e Bcl-x

Perilil álcool Bad, Bak e BaxAnexina 1

Geraniol

Inibidores da via do mevalonato

Estatinas• Inibe competitivamente a HMGR.

• ↑ expressão de receptores LDL e ↓ LDL circulante.

• Efeitos pleitrópicos: - melhora função endotelial- estabiliza a placa de ateroma- efeito antiinflamatório e imunomodulador- induz apoptose e ação anti-proliferativa.

Bisfosfonados nitrogenados

Prevenção do câncer

• População hipercolesterolemica tratada com lovastatina apresenta menor incidência de câncer

• De 179 monoterpernos e sesquiterpenos encontrados em plantas e frutas, 41 são potentes supressores de tumor, dentre eles perilil álcool, d-limoneno e farnesol.

Objetivos do Trabalho• Verificar a sensibilidade de diferentes linhagens

tumorais ao efeito citotóxico da SF5

• Avaliar o efeito dos componentes farnesol e geranilgeraniol purificados, ambos presentes na SF5, na linhagem leucêmica linfocítica Jurkat

• Verificar o efeito da associação do farnesol e geranilgeraniol na linhagem Jurkat.

Resultados• SF5 (Pterodon pubescens) X Células tumorais- Ensaio de citotoxicidade MTT:

Linhagens celulares tumorais

2,5x105 céls/mL na ausência e presença de SF5.

22 h

MTT (5mg/mL)

2 h

SDS 10% + 0,01 N HCl

Overnight

Leitor de Elisa 570nm

SF5 X A549

SF5 X Jurkat

*

**

**

SF5 X K562

SF5 X MCF-7

SF5 X PC-3

Resultados

**

**

**

**

**

***

* *

Resultados

IC50= 17,6 µg/mL

IC50= 7,2 µg/mLFarnesol 96%Gernilgeraniol 97%

Células mononucleares de sangue periférico humano

Conclusões

• Dentre as linhagens tumorais, a Jurkat foi a que apresentou maior sensibilidade aos efeito citotóxicos da SF5;

• O efeito citotóxico da SF5 pode estar sendo parcialmente mediado pela presença nesta subfração do isoprenóide farnesol;

• O efeito citotóxico do farnesol foi inibido pela associação com o geranilgeraniol;

• O efeito citotóxico da SF5 se deve ao efeito aditivo ou sinérgico do farnesol com outra molécula diferente do geranilgeraniol.

• A SF5 não mostrou citotoxicidade às CMN humanas normais